CN104585778A - 一种提高机体免疫力的蛋白粉及其制备方法 - Google Patents

一种提高机体免疫力的蛋白粉及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种提高机体免疫力的蛋白粉及其制备方法，其组成成分及其重量百分比分别为：其组成成分及其重量百分比分别为：大豆分离蛋白75%---89%；浓缩乳清蛋白粉10%---20%；抗结剂0.5%--1%；卵磷脂0.5%--4%，制备方法包括预过筛处理、称配、混合即得。本发明产品蛋白粉营养全面，食用安全可靠，无依赖性，经常食用可增强机体免疫力，提高机体抵御外界病原体感染能力，提高生活质量，可作为现代保健食品，具有广阔的市场前景。

Description

一种提高机体免疫力的蛋白粉及其制备方法
技术领域
本发明属于蛋白粉的制备领域，尤其是一种提高机体免疫力的蛋白粉及其制备方法。
背景技术
现代工业文明飞速发展，从表面上看，人们的生活水平日益提高，但是，人类的生存环境不断恶化、环境污染、食物污染日益严重；加上快节奏、高压力、不规律的生活方式，使现代人营养失衡、毒素不断积累、身体各器官功能失调、免疫力下降、各种慢性病潜伏，严重威胁现代人的健康，肿瘤也日益成为威胁人类生命的一大恶疾。
为了使人体免疫系统处于正常工作状态，使机体免受细菌、病毒等侵入，免疫系统应该处于一个动态的平衡。药物可以治疗免疫缺陷，但药品不可避免的具有毒副作用，在治疗疾病的同时不免伤及正常细胞，在治疗的同时也损伤身体。通过长期的食品免疫，我们可以日常的、稳定的、无害的摄入增强人体抵抗力的物质，通过食品免疫而提高或调节人体免疫力是一条可靠的有效的途径。具有免疫调节作用的功能食品可作为一种免疫调节剂增强人们的体质。
目前关于增强免疫功能食品的科学配伍研究及工艺优化的研究较少，对产品研发投入重视不足，因此，开发具有增强免疫力的功能性食品具有广阔的市场前景。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种营养全面、能提高机体免疫力的蛋白粉及其制备方法。
本发明的目的通过以下技术方案实现的：
一种提高机体免疫力的蛋白粉，其组成成分及其重量百分比分别为：
大豆分离蛋白：    75%---89%
浓缩乳清蛋白粉：  10%---20%
抗结剂：          0.5%--1%
卵磷脂：          0.5%--4%。
而且，所述的大豆分离蛋白和浓缩乳清蛋白粉分别来自植物蛋白和动物蛋白。
而且，所述的大豆分离蛋白的蛋白含量在90%以上。
而且，所述的浓缩乳清蛋白粉的蛋白质含量大于等于60%。
而且，所述抗结剂为磷酸三钙。
而且，所述的卵磷脂是已均质的卵磷脂。
一种提高机体免疫力的蛋白粉的制备方法，制备方法包括以下步骤：
⑴预处理过筛：将所有原料分别过60-80目筛，得细粉；并按配方量分别称取备用；
⑵混合：将卵磷脂细粉与磷酸三钙细粉混合3-5分钟，混合均匀，得混合粉一；用等量递增的方法将混合粉一与浓缩乳清蛋白粉混合3-5分钟，混合均匀，得混合粉二；将混合粉二与大豆分离蛋白细粉混合20-30分钟，混合均匀，得总混粉即为提高机体免疫力的蛋白粉。
而且，在混合步骤结束后获得提高机体免疫力的蛋白粉，再将蛋白粉经过灭菌和包装步骤。
而且，所述灭菌步骤如下：蛋白粉的微生物控制采取的是过程控制，整个生产过程处于30万级的净化车间之中。
而且，所述包装步骤如下：蛋白粉用符合GB4805-1994所制的马口铁涂料罐进行分装，300g/罐，封罐底；或包装成无菌小袋，无菌小袋符合YBB00132002的标准。
本发明的优点和积极效果：
1、本发明研究开发了具有提高机体免疫力的蛋白类保健食品，通过优化其配方与工艺，得到的蛋白粉营养全面，不仅可补充人体所需的蛋白质，维持机体正常的免疫机制，且两种蛋白类原料脂肪含量很低，不会因摄入过多脂肪导致心血管疾病，长期食用能够增强机体免疫力，提高机体抵御外界病原体感染能力，提高生活质量，可作为现代保健食品，具有广阔的市场前景。
2、本发明成分中的卵磷脂具有抗氧化及乳化作用，促进粉剂在水相系统中的润湿，使蛋白粉溶解更快更好，不易形成胶块。
3、本发明产品以大豆分离蛋白粉为主，乳清蛋白粉为辅，各原料间无配伍禁忌，且剂量在安全食用剂量内，食用安全可靠，无依赖性。
4、本发明的功能实验表明本蛋白粉能显著提高免疫低下小鼠的单核-巨噬细胞的碳廓清功能，对免疫低下小鼠抗体生成细胞含量的降低具有恢复作用，对体液免疫及细胞免疫都有很好的调节作用和改善作用。
具体实施方式
为了理解本发明，下面结合实施例对本发明作进一步说明；下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
本发明所用的大豆分离蛋白为市售产品，是低温脱脂大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品，其蛋白含量在90%以上，所述全价蛋白粉是经过萃取、凝乳、中和、杀菌、闪蒸、干燥过筛而成的均质蛋白粉，同时此蛋白粉经过的蒸汽灭菌（120℃-150℃，18s），以及热风干燥（180℃-220℃），确保蛋白粉的微生物符合标准。
所述的浓缩乳清蛋白粉的蛋白质含量大于等于60%，为市售产品，原料来自牛奶。 
所述的大豆分离蛋白和浓缩乳清蛋白粉分别来自植物蛋白和动物蛋白，所述蛋白粉为动物蛋白与植物蛋白的混合蛋白，起到相互补充的效果。所述的抗结剂是用来防止食品聚集板结，保持其松散和自由流动，为磷酸三钙。
所述的卵磷脂是市售均质的卵磷脂。
实施例1
一种提高机体免疫力的蛋白粉，其蛋白粉配方如下：（各原料百分含量均为重量百分含量）
大豆分离蛋白粉：  75%
浓缩乳清蛋白粉：  20%
磷酸三钙：        1%
卵磷脂：          4%。
一种提高机体免疫力的蛋白粉的制备方法，步骤如下：
⑴预处理过筛：将大豆分离蛋白粉、浓缩乳清蛋白粉、卵磷脂、磷酸三钙分别过60目筛，得细粉，通过过筛使各原料细度保持一致，有利于产品混合的更加均匀，还可以保证产品的溶解速度；
⑵称配：按配方量分别称取大豆分离蛋白粉、浓缩乳清蛋白粉、卵磷脂、磷酸三钙细粉，备用；
⑶混合：将卵磷脂细粉与磷酸三钙细粉混合3分钟，混合均匀，得混合粉一；用等量递增的方法将混合粉一与浓缩乳清蛋白粉混合3分钟，混合均匀，得混合粉二；将混合粉二与大豆分离蛋白细粉混合20分钟，混合均匀，得总混粉；
⑷灭菌、包装：所述蛋白粉的微生物控制采取的是过程控制，整个生产过程处于30万级的净化车间之中，确保其微生物水平达到合格标准；总混粉用符合GB4805-1994所制的马口铁涂料罐进行分装，300g/罐，封罐底；或包装成无菌小袋，无菌小袋符合YBB00132002的标准。
⑸对产品品质、提高免疫力保健功能的检验验证。
实施例2
一种提高机体免疫力的蛋白粉，其蛋白粉配方如下：（各原料百分含量均为重量百分含量）
大豆分离蛋白粉：85%
浓缩乳清蛋白粉：13%
磷酸三钙：      1%
卵磷脂：        1%
一种提高机体免疫力的蛋白粉的制备方法，步骤如下：
⑴预处理过筛：将大豆分离蛋白粉、浓缩乳清蛋白粉、卵磷脂、磷酸三钙分别过70目筛，得细粉。通过过筛使各原料细度保持一致，有利于产品混合的更加均匀，还可以保证产品的溶解速度；
⑵称配：按配方量分别称取大豆分离蛋白粉、浓缩乳清蛋白粉、卵磷脂、磷酸三钙细粉，备用；
⑶混合：将卵磷脂细粉与磷酸三钙细粉混合4分钟，混合均匀，得混合粉一；用等量递增的方法将混合粉一与浓缩乳清蛋白粉混合4分钟，混合均匀，得混合粉二；将混合粉二与大豆分离蛋白细粉混合25分钟，混合均匀，得总混粉；
⑷灭菌、包装：所述蛋白粉的微生物控制采取的是过程控制，整个生产过程处于30万级的净化车间之中，确保其微生物水平达到合格标准；总混粉用符合GB4805-1994所制的马口铁涂料罐进行分装，300g/罐，封罐底；或包装成无菌小袋，无菌小袋符合YBB00132002的标准；
⑸对产品品质、提高免疫力保健功能的检验验证。
实施例3
一种提高机体免疫力的蛋白粉，其蛋白粉配方如下：（各原料百分含量均为重量百分含量）
大豆分离蛋白粉：89%
浓缩乳清蛋白粉：10%
磷酸三钙：      0.5%
卵磷脂：        0.5%。
一种提高机体免疫力的蛋白粉的制备方法，步骤如下：
⑴预处理过筛：将大豆分离蛋白粉、浓缩乳清蛋白粉、卵磷脂、磷酸三钙分别过80目筛，得细粉。通过过筛使各原料细度保持一致，有利于产品混合的更加均匀，还可以保证产品的溶解速度；
⑵称配：按配方量分别称取大豆分离蛋白粉、浓缩乳清蛋白粉、卵磷脂、磷酸三钙细粉，备用；
⑶混合：将卵磷脂细粉与磷酸三钙细粉混合5分钟，混合均匀，得混合粉一；用等量递增的方法将混合粉一与浓缩乳清蛋白粉混合5分钟，混合均匀，得混合粉二；将混合粉二与大豆分离蛋白细粉混合30分钟，混合均匀，得总混粉；
⑷灭菌、包装：所述蛋白粉的微生物控制采取的是过程控制，整个生产过程处于30万级的净化车间之中，确保其微生物水平达到合格标准；总混粉用符合GB4805-1994所制的马口铁涂料罐进行分装，300g/罐，封罐底；或包装成无菌小袋，无菌小袋符合YBB00132002的标准；
⑸对产品品质、提高免疫力保健功能的检验验证。
本发明的动物实验结果如下：
    经动物实验证实，本发明产品可以明显的提高实验对象的免疫力，其实验步骤及结果如下：
1．实验材料与试剂
1.1实验材料：本发明-动、植物蛋白混合的蛋白粉
1.2实验试剂：
绵羊红细胞（SRBC）、生理盐水、Hank’s液（pH7.2-7.4）、RPMI1640培养液、小牛血清、青链霉素、ConA、1%冰醋酸，1mol/L的HCL溶液，酸性异丙醇（96mL异丙醇加1mol/L的HCL溶液4mL）、MTT、PBS缓冲液（pH7.2-7.4）、补体（豚鼠血清）、SA缓冲液、琼脂糖、都式试剂、YAC-1细胞、乳酸钠、硝基氯化四氮、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶Ⅰ、0.2mol/L的Tris-HCL缓冲液、1%的NP40、印度墨汁、0.1%的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。
1.3主要仪器：
动物台秤、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、722分光光度计、恒温水浴箱、酶标仪、显微镜等
1.4实验动物：
昆明种雌性小鼠，体重18-22g，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供。每40只为一组。
2．实验方法与结果：
2.1小鼠脏器/体重比值测定
2.1.1小鼠脏器/体重比值测定方法
称重后处死小鼠，取出脾脏和胸腺，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。
2.1.2小鼠脏器/体重比值测定结果
经方差齐性检验，各组小鼠实验初期、试验中期、实验末期体重及试验期间小鼠体重增长方差齐，采用单因素方差分析，结果显示，各组之间两项指标总体比较无显著性差异（p＞0.05）。动、植物蛋白混合的蛋白粉对小鼠体重的影响见表1和表2。
表1 免疫一组小鼠体重（x±s,g） 
组别 剂量（g/kg.bw） 动物数（只） 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照 0.000 10 18.5±0.6 30.1±3.0 34.9±3.0 16.4±2.8
低剂量 0.833 10 18.5±0.7 29.4±2.6 36.4±2.2 17.9±2.5
中剂量 1.667 10 18.5±0.5 29.9±3.1 34.6±2.8 16.2±2.6
高剂量 5.000 10 18.5±0.7 30.5±2.0 35.7±2.4 17.1±2.0
表2 免疫二组小鼠体重（x±s,g）
组别 剂量（g/kg.bw） 动物数（只） 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照 0.000 10 18.9±0.8 30.0±3.3 35.2±3.7 16.3±3.7
低剂量 0.833 10 18.9±0.9 29.4±3.1 36.2±2.2 17.3±2.0
中剂量 1.667 10 18.8±0.7 30.0±3.0 35.9±2.2 17.1±2.1
高剂量 5.000 10 19.1±1.2 29.7±3.0 35.6±2.4 16.5±2.5
动、植物蛋白混合的蛋白粉对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响经方差齐性检验，各组小鼠胸腺/体重、脾脏/体重方差齐，采用单因素方差分析，结果表示，各组之间两项指标总体比较无显著性差异（p＞0.05）。结果见表3。
表3 动、植物蛋白混合的蛋白粉对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响（x±s）
2.2 迟发型变态反应（DTH）(足趾增厚法)
2.2.1迟发型变态反应试验方法：
小鼠腹腔注射2%（v/v）SRBC（0.2ml/每鼠）致敏后4天，测量左后足趾厚度，然后在测量部位皮下注射20%（v/v）SRBC（20ul/每鼠），于注射后24h测量左后足趾部厚度，同一部位测量三次，取平均值，以攻击前后足趾厚度差值（足趾肿胀度）来表示DTH的程度。
2.2.2迟发型变态反应试验结果：
经方差性检验，各组小鼠足趾肿胀度方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有显著性差异（P=0.002）。进一步用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，结果显示中、高剂量小鼠足趾肿胀度显著高于对照组（P＜0.05、P＜0.01），提示样品可提高小鼠迟发型变态反应的能力，结果见表4。
表4 动、植物蛋白混合的蛋白粉对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响（x±s）
2.3抗体生成细胞检验
2.3.1 抗体生成细胞检验（Jerne改良拨片法）方法
取羊血，用生理盐水洗涤三次，每次离心（2000r/min）10min，将压积SRBC用生理盐水配成2%（v/v）的细胞悬液，每鼠腹腔注入0.2mL。将免疫后5天的小鼠处死，取脾，轻轻磨碎，用Hank’s液制成细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮在5mL Hank’s液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5*106个/mL。将表层培养基加热溶解后与等量的pH7.4、2倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加SA液配制的10% SRBC 50uL（v/v），20uL脾细胞悬液（5*106个/mL），迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片水平扣在拨片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5小时，然后用SA液稀释的补体（1：10）加入到拨片凹槽内，继续温育1.5小时后计数溶血空斑数。
2.3.2 抗体生成细胞检验结果
经方差性检验，各组小鼠溶血空斑数方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有明显差异（P=0.029）。进一步用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，结果显示中、高剂量小鼠溶血空斑数显著高于对照组（P＜0.05），表明该蛋白粉对免疫低下的小鼠抗体生成细胞含量的降低具有恢复作用，结果见表5。
表5 动、植物蛋白混合的蛋白粉对小鼠抗体生成细胞数的影响（x±s）
2.4 小鼠碳廓清实验
2.4.1 小鼠碳廓清实验方法
小鼠尾静脉注以生理盐水稀释四倍的印度墨汁，每10g体重注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10分钟，分别从内眦静脉丛取血20uL，加入到2mL 0.1% Na2CO3溶液中，摇匀，以0.1% Na2CO3做空白对照，用722型分光光度计在600nm波长处比色测光密度值（OD）。将小鼠处死，取肝、脾称重，计算吞噬指数a。
2.4.2 小鼠碳廓清实验结果
经方差性检验，各组小鼠吞噬指数方差齐，单因素方差显示，各组之间总体比较有显著性差异（P=0.042）。进一步用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，结果显示高剂量组小鼠吞噬指数显著高于对照组（P＜0.05）。提示该蛋白粉能显著提高小鼠碳廓清能力。结果见表6。
表6 动、植物蛋白混合的蛋白粉对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清的影响（x±s） 
组别 剂量（g/kg.bw） 动物数（只） 吞噬指数（a） P 值
对照 0.000 10 5.03±1.14 ……
低剂量 0.833 10 5.46±0.89 0.695
中剂量 1.667 10 5.81±1.07 0.260
高剂量 5.000 10 6.43±1.19 0.017
2.5  NK细胞活性的测定（乳酸脱氢酶测定法）
2.5.1 NK细胞活性的测定试验方法：
加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100ul，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5%Triton各100ul；上述各项均设三个平行孔，于37℃,5%二氧化碳培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100ul置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100ul，根据室温反应3-10min，每孔加入1mol/l的HCL30ul，在酶标仪490nm处测定光密度（OD）。
NK细胞活性=【（反应孔OD-自然释放孔OD）/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)】*100%
经方差齐性检验，各组小鼠NK细胞活性平方根反正弦转换值方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有显著性差异（P=0.000）。进一步用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，结果显示三个剂量组小鼠NK细胞活性均显著高于对照组（P＜0.001＝，提示样品可显著提高小鼠的NK细胞活性，结果见表7。
2.5.2  NK细胞活性的测定实验结果：
表 7 动、植物蛋白混合的蛋白粉对小鼠NK细胞活性的影响（x±s）
组别 剂量（g/kg.bw） 动物数（只） NK细胞活性（%） NK细胞活性平方根反正弦转化值 P 值
对照 0.000 10 3.4±1.5 10.3±2.4 ……
低剂量 0.833 10 9.0±2.2 17.4±2.3 0.000
中剂量 1.667 10 18.7±2.4 25.6±1.9 0.000
高剂量 5.000 10 18.9±2.0 25.8±1.5 0.000
结论
经口给予小鼠0.833g/kg.bw、1.667 g/kg.bw、5.000 g/kg.bw剂量的蛋白粉30天，三个剂量组均能显著提高小鼠的NK细胞活性（P＜0.001），1.667 g/kg.bw、5.000 g/kg.bw剂量能显著提高小鼠的迟发型变态反应、抗体生成细胞数(P＜0.05或P＜0.01)，5.000 g/kg.bw剂量能显著提高小鼠的碳廓清能力(P＜0.05)。各剂量对小鼠体重增长、胸腺/体重比值。根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中判定标准，提示在本实验条件下，此蛋白粉具有增强免疫力作用。

Claims (10)

1.一种提高机体免疫力的蛋白粉，其特征在于：其组成成分及其重量百分比分别为：
大豆分离蛋白：    75%---89%
浓缩乳清蛋白粉：  10%---20%
抗结剂：          0.5%--1%
卵磷脂：          0.5%--4%。
2.根据权利要求1所述的提高机体免疫力的蛋白粉，其特征在于：所述的大豆分离蛋白和浓缩乳清蛋白粉分别来自植物蛋白和动物蛋白。
3.根据权利要求1所述的提高机体免疫力的蛋白粉，其特征在于：所述的大豆分离蛋白的蛋白含量在90%以上。
4.根据权利要求1所述的提高机体免疫力的蛋白粉，其特征在于：所述的浓缩乳清蛋白粉的蛋白质含量大于等于60%。
5.根据权利要求1所述的提高机体免疫力的蛋白粉，其特征在于：所述抗结剂为磷酸三钙。
6.根据权利要求1所述的提高机体免疫力的蛋白粉，其特征在于：所述的卵磷脂是已均质的卵磷脂。
7.一种如根据权利要求1所述的提高机体免疫力的蛋白粉的制备方法，其特征在于：制备方法包括以下步骤：
⑴预处理过筛：将所有原料分别过60-80目筛，得细粉；并按配方量分别称取备用；
⑵混合：将卵磷脂细粉与磷酸三钙细粉混合3-5分钟，混合均匀，得混合粉一；用等量递增的方法将混合粉一与浓缩乳清蛋白粉混合3-5分钟，混合均匀，得混合粉二；将混合粉二与大豆分离蛋白细粉混合20-30分钟，混合均匀，得总混粉即为提高机体免疫力的蛋白粉。
8.根据权利要求7所述的提高机体免疫力的蛋白粉的制备方法，其特征在于：在混合步骤结束后获得提高机体免疫力的蛋白粉，再将蛋白粉经过灭菌和包装步骤。
9.根据权利要求8所述的提高机体免疫力的蛋白粉的制备方法，其特征在于：所述灭菌步骤如下：蛋白粉的微生物控制采取的是过程控制，整个生产过程处于30万级的净化车间之中。
10.根据权利要求8所述的提高机体免疫力的蛋白粉的制备方法，其特征在于：所述包装步骤如下：蛋白粉用符合GB4805-1994所制的马口铁涂料罐进行分装，300g/罐，封罐底；或包装成无菌小袋，无菌小袋符合YBB00132002的标准。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105747234A (zh) * 2016-03-04 2016-07-13 广州万康保健品有限公司 一种提高机体免疫力的保健蛋白粉及其制备方法
CN107279456A (zh) * 2017-06-12 2017-10-24 钱凤英 一种发芽黄豆蛋白质粉及其制作方法
CN109043118A (zh) * 2018-08-24 2018-12-21 汤臣倍健股份有限公司 一种速溶蛋白粉及其制备方法

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