CN105249465A - 一种提高免疫力的保健食品及其制备方法 - Google Patents
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明实施例公开了一种提高免疫力的保健食品，由原料和辅料制成，所述原料按重量份由以下组分组成：女贞子提取物100～200份，桑椹提取物100～200份，蓝莓粉20～80份，黑加仑粉20～80份。本发明实施例还公开了上述保健食品的制备方法，依次包括混料、制软材、制粒、干燥、整粒、混料压片，最后经包衣得成品。本发明提供的保健品，几种有效成分相辅相成，全面补充了人体所需的各种维生素及矿物质，同时，其中有效成分又可以相互配合，共同提高人体免疫机制，提高人体免疫力。本发明所提供的制备方法简单、便捷，可操作性强，效率高，适于工业化推广。
Description
技术领域
本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种提高免疫力的保健食品及其制备方法。
背景技术
所谓免疫力，简单地说就是人体免于各种病原微生物侵害的能力。应该说在人类漫长的进化过程中，人类一直在同自然界中的各种致病微生物，包括病毒、细菌、真菌等作斗争。不管科学技术进步到什么程度，不管人类能发明多么先进的药物，人体自身免疫力仍将会继续发挥着重要作用。
既然人体自身免疫力如此重要，那我们应该怎样来提升免疫力呢？其中之一是透过正常管道补充营养素，平衡饮食，不偏食，这样最有助于提升身体免疫力。
怎样增强免疫力，专家提醒：合理膳食，均衡营养，这样不仅能满足人体对营养物质的需要，而且对预防疾病、增强抵抗力有着重要作用，研究发现，适量的蛋白质、维他命E、维他命C、胡萝卜素、维他命B、锌、硒、钙、镁等物质可增加人体免疫细胞的数量。而这些物质的缺乏，会导致人体多种疾病的发生。因此应注意膳食问题，达到营养均衡。增强免疫力的食物专家提醒蘑菇有香菇、灰树花、平菇、猴头菇等含有抗病毒物质，有助于增强免疫力。吃点大蒜，大蒜能刺激T淋巴细胞和巨噬细胞活性，能提升免疫力。蔬果应多吃菠菜、胡萝卜、花椰菜等富含β胡萝卜素的能促进免疫细胞增多的蔬菜和富含维生素C的、有一定抗病毒感染作用的水果。例如，每天吃两只橙子或橘子等。
而现代人生活节奏快，饮食单一或过于精细，必然会导致饮食中营养物质的缺乏，特别是必须的氨基酸和维生素的缺乏。相信许多人知道，缺乏维生素C会导致坏血病，缺乏维生素A会导致夜盲症，缺乏维生素E可以导致流产，缺乏维生素还可直接导致人体抵抗力的下降。缺乏氨基酸也同样导致人体的瘦弱和免疫力的下降。
氨基酸是人体消化吸收蛋白质的最小单位，常见的氨基酸有20多种，其中有8种是人体必需的，必需的氨基酸是人体不能自我合成的，必须从外界食物中获得，氨基酸吸收后进入人体氨基酸池。人体的氨基酸池好比一个仓库，提供人体合成蛋白质用，其中各种氨基酸有一定的构成比，缺少或缺乏任何一种都会影响蛋白质的合成，最终会造成人体免疫力下降。在最近的第叁次营养调查中发现，我国民众的饮食尚未达到均衡饮食的标准。特别是必需氨基酸和维生素的量达不到人体需求。
由此可见，单纯从饮食当中很难达到真正意义上的均衡饮食，故食物之外适量补充氨基酸和维生素对维持人体免疫力无疑是大有裨益的，尤其在春秋季各种传染病高发时期，在正常饮食的基础上，适当口服一些这一类的营养制剂对提升人体免疫力，防病、抗病确有好处。目前已有不少的氨基酸和维生素的复合制剂可供选择。但目前市面上的产品营养成分补充还不够全面，各营养成分搭配不够合理，药效不能充分发挥，造成营养成分流失、浪费，不能很好地满足消费者需求。
发明内容
本发明实施例提供了一种提高免疫力的保健食品，以解决目前市场上的营养制剂其营养成分不够全面，各营养成分搭配不够合理，药效不能充分发挥以及进而造成的营养成分流失、浪费的问题。
为了解决上述问题，本发明实施例公开了一种提高免疫力的保健食品，由原料和辅料制成，所述原料按重量份由以下组分组成：女贞子提取物100～200份，桑椹提取物100～200份，蓝莓粉20～80份，黑加仑粉20～80份。
可选地，所述辅料按重量份数由以下组分组成：山梨醇200～350份，甘露醇200～350份，硬脂酸镁5～15份，包衣粉10～30份。
可选地，所述保健食品为片剂。
可选地，所述保健食品为咀嚼片。
原料介绍：
女贞子，别名女贞实、冬青子、蜡树、鼠梓子，女贞子含有多种化学成分，最先发现的是女贞子含有较高含量的齐墩果酸，后又发现了乙酰齐墩果酸、熊果酸等。张兴辉等对女贞子化学成分进行了系统的分离后，得到了7种化合物分别是齐墩果酸、木犀草素-葡萄糖苷、槲皮苷、胡萝卜苷、羟基苯乙醇-葡萄糖苷、甘露醇、己六醇。丁安伟等报道齐墩果酸具有促进淋巴细胞增殖、巨噬细胞的吞噬、迟发性超敏反应的功能，并与IL-2有协同作用。临床观察发现，服用齐墩果酸对肝肿瘤患者的T淋巴细胞及巨噬细胞的吞噬功能均有一定的促进作用，有免疫调节作用。女贞子多糖对小鼠的免疫作用与机体的免疫状态有关，对非特异性细胞免疫有增强作用，对正常小鼠的特异性细胞免疫无明显影响，对免疫抑制状态小鼠的细胞免疫有增强作用。女贞子长期坚持服用能够很好的提高身体免疫力，令身体越来越强壮。据悉，女贞子中所含有的某些物质能够很好的提高身体中的T淋巴细胞功能，令这些淋巴细胞获得大量的繁殖，对于局部的病菌有一定的抵抗作用。
桑椹，其提取物是从桑科桑属植物(MorusalbaL.)的成熟果实中提取的天然产物(也称桑椹红色素)，主要成分为花色苷。桑椹含糖、蛋白质、脂肪、糅酸、苹果酸及维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C、铁、钠、钙、镁、磷、钾、胡萝卜素和花青素。桑椹油的脂肪酸主要由亚油酸和少量的硬脂酸、油酸等组成。桑椹的一大功效便是能够增强人体的免疫功能，帮助维持人体的营养均衡，减少细菌侵袭。根据不同地区的气候特点，每年桑椹有两到三个季节的丰收期，通常在春秋季。春秋季节的气候多变容易导致风寒感冒，多吃桑椹有助于增强免疫力，减少感冒。
蓝莓是一种营养价值非常高的水果，果肉富含丰富的维生素、蛋白质和矿物质等营养元素，其中蓝莓中独特的、珍贵的、花青素在众水果中比重是非常的高，还有蓝莓中富含丰富的蛋白质、膳食纤维、脂肪、维生素等营养元素，蓝莓中这些富含的营养元素都高于其他水果。蓝莓中还包含着丰富的钙、铁、磷、钾、锌等微量矿物元素，这些矿物元素的存在比例明显高于其他水果。所以蓝莓是一种高营养的水果。花青素是一种非常重要的植物水溶性色素，属于纯天然的抗衰老营养补充剂，是目前人类发现的最有效的抗氧化生物活性剂。蓝莓中花青素含量非常高，同时花青素种类也十分丰富，研究发现高丛蓝莓果中含花青素成分竟高达15种之多，虽然不同品种蓝莓中花青素的含量并不相同，但普遍含量都相对较高。研究发现，蓝莓中含有的抗氧化剂远远多于其他新鲜蔬菜水果。抗氧化剂可中和体内自由基，增强免疫系统。
黑加仑(blackcurrant)，又名黑穗醋栗、黑豆果。为灌木，株高lm左右，果实为黑色浆，黑加仑含有非常丰富的维生素C、磷、镁、钾、钙、花青素、酚类物质。花青素能增强免疫功能，可提高喂酒精的小白鼠和感染逆转录病毒的小白鼠细胞介素2的免疫应答能力。花青素为人体带来多种益处。从根本上讲，花青素是一种强有力的抗氧化剂，它能够保护人体免受一种叫做自由基的有害物质的损伤，从而增强免疫力。
本发明采用女贞子、桑椹、蓝莓、黑加仑四种有效成分相互配合。其中女贞子提取物中富含齐墩果酸、乙酰齐墩果酸、熊果酸、木犀草素-葡萄糖苷、槲皮苷、胡萝卜苷、羟基苯乙醇-葡萄糖苷、甘露醇、己六醇等，并且齐墩果酸具有促进淋巴细胞增殖、巨噬细胞的吞噬、迟发性超敏反应的功能，并与IL-2具有协同作用。女贞子中所含有的其他物质能够很好的提高身体中的T淋巴细胞功能，令这些淋巴细胞获得大量的繁殖，对于局部的病菌有一定的抵抗作用。而桑椹和蓝莓提取物中，均含有多种维生素及矿物质，同时，桑椹提取物中富含花色苷，而蓝莓和黑加仑中又同时富含花青素，桑椹和女贞子帮助维持人体的营养均衡，减少细菌侵袭，提高病菌抵抗能力，而蓝莓和黑加仑中富含的花青素作为一种天然抗衰老营养补充剂可中和体内自由基，增强免疫系统。
本发明提供的保健品，几种有效成分相辅相成，全面补充了人体所需的各种维生素及矿物质，同时，其中有效成分又可以相互配合，共同提高人体免疫机制，提高人体免疫力。
为了解决上述问题，本发明实施例还公开了上述提高免疫力的保健食品的制备方法，包括以下步骤：
(1)混料：蓝莓粉和黑加仑粉混合得混合粉A，将混合粉A与女贞子提取物、桑椹提取物混合得混合粉B，再将混合粉B与山梨醇和甘露醇混合，得总混合粉；
(2)制软材：将总混合粉与乙醇混合，得软材；
(3)制粒：将软材过筛制粒，得湿颗粒；
(4)干燥：将湿颗粒进行干燥，得干颗粒；
(5)混料压片：将步骤(4)所得干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀，得总混合物，然后将总混合物进行压片，得片芯；
(6)将包衣粉用乙醇溶解，得包衣液，用包衣液对片芯进行包衣，得成品。
可选的，步骤(1)中所述混料前，将女贞子提取物、桑椹提取物、蓝莓粉、黑加仑粉、甘露醇和山梨醇过70-80目筛，硬脂酸镁过80-100目筛，得各原辅料细粉。
可选的，步骤(5)中将所述干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀前，将所述干颗粒进行整粒，所述整粒为将干颗粒过14-25目筛。
可选的，步骤(3)中所述制粒过程采用14-25目筛。
可选的，步骤(4)中所述干燥温度为50-60℃。
可选的，步骤(2)中所用乙醇为质量分数为95％的乙醇，步骤(6)中所用乙醇为质量分数为70％的乙醇。
所述女贞子提取物的提取方法如下：
(1)提取：将女贞子原药材净制粉碎，过20目筛，加水煎煮3次，每次2h，过滤，合并提取液，每次加水的量为女贞子药材重量的10-15倍；
(2)浓缩：将步骤(1)所得提取液在温度60-75℃，真空度0.07-0.08MPa下浓缩至相对密度1.10-1.20，得浓缩液；
(3)干燥：将步骤(2)所得浓缩液在真空度0.03-0.04MPA、进风温度170-180℃、出风温度75-85℃条件下进行喷雾干燥，得喷干粉；
(4)过筛：将所得喷干粉过80目筛，得细粉。
然后将所得细粉继进行包装，经检验合格后，成品入库备用。
所述桑椹提取物的提取方法如下：
(1)提取：用水将桑椹原料清洗三次，然后用质量分数为70％的乙醇进行提取3次，每次提取1-2小时，过滤，合并提取液，每次提取所用乙醇量为桑椹重量的5-10倍；
(2)浓缩：将步骤(1)所得提取液在温度60-70℃，真空度0.07-0.08MPa下浓缩至相对密度1.10-1.20，冷却，得浓缩液。
(3)干燥：将步骤(2)所得浓缩液在进风温度170-180℃出风温度70-80℃下进行喷雾干燥，得喷干粉。
(4)过筛：将上述喷干粉过80目筛，得细粉。
然后将所得细粉继进行包装，经检验合格后，成品入库备用。
本发明所提供的制备方法简单、便捷，可操作性强，效率高，适于工业化推广。
具体实施方式
下文中将结合实施例来详细说明本发明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
实施例1
本实施例提供了一种提高免疫力的保健食品，按重量计由以下组分制备而成：女贞子提取物100份，桑椹提取物200份，蓝莓粉45份，黑加仑粉80份，山梨醇200份，甘露醇280份，硬脂酸镁10份，包衣粉30份。所述保健食品为片剂。
上述的提高免疫力的保健食品的制备方法，具体如下：
(1)混料：将女贞子提取物、桑椹提取物、蓝莓粉、黑加仑粉、甘露醇和山梨醇过80目筛，硬脂酸镁过100目筛，得各原辅料细粉，然后按照上述重量份称取各组分，将称取好的蓝莓粉和黑加仑粉混合得混合粉A，将混合粉A与女贞子提取物、桑椹提取物混合得混合粉B，将混合粉B与甘露醇和山梨醇混合，得总混合粉；
(2)制软材：将总混合粉与质量分数为95％的乙醇混合，得软材；
(3)制粒：将软材过20目筛制粒，得湿颗粒；
(4)干燥：将湿颗粒在40℃条件下进行干燥，得干颗粒；
(5)混料压片：所述干颗粒进行整粒，所述整粒为将干颗粒过20目筛。将整粒后所得干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀，得总混合物，然后将总混合物进行压片，得片芯；
(6)将包衣粉用质量分数为70％的乙醇溶解，得包衣液，用包衣液对片芯进行包衣，得成品。
实施例2
本实施例提供了一种提高免疫力的保健食品，按重量计由以下组分制备而成：女贞子提取物150份，桑椹提取物100份，蓝莓粉20份，黑加仑粉55份，山梨醇270份，甘露醇350份，硬脂酸镁15份，包衣粉19份。所述保健食品为片剂。
上述的提高免疫力的保健食品的制备方法，具体如下：
(1)混料：将女贞子提取物、桑椹提取物、蓝莓粉、黑加仑粉、甘露醇和山梨醇过70目筛，硬脂酸镁过80目筛，得各原辅料细粉，然后按照上述重量份称取各组分，将称取好的蓝莓粉和黑加仑粉混合得混合粉A，将混合粉A与女贞子提取物、桑椹提取物混合得混合粉B，将混合粉B与甘露醇和山梨醇混合，得总混合粉；
(2)制软材：将总混合粉与质量分数为95％的乙醇混合，得软材；
(3)制粒：将软材过14目筛制粒，得湿颗粒；
(4)干燥：将湿颗粒在60℃条件下进行干燥，得干颗粒；
(5)混料压片：所述干颗粒进行整粒，所述整粒为将干颗粒过14目筛。将整粒后所得干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀，得总混合物，然后将总混合物进行压片，得片芯；
(6)将包衣粉用质量分数为70％的乙醇溶解，得包衣液，用包衣液对片芯进行包衣，得成品。
实施例3
本实施例提供了一种提高免疫力的保健食品，按重量计由以下组分制备而成：女贞子提取物200份，桑椹提取物150份，蓝莓粉80份，黑加仑粉20份，山梨醇350份，甘露醇200份，硬脂酸镁5份，包衣粉10份。所述保健食品为片剂。
上述的提高免疫力的保健食品的制备方法，具体如下：
(1)混料：将女贞子提取物、桑椹提取物、蓝莓粉、黑加仑粉、甘露醇和山梨醇过70目筛，硬脂酸镁过100目筛，得各原辅料细粉，然后按照上述重量份称取各组分，将称取好的蓝莓粉和黑加仑粉混合得混合粉A，将混合粉A与女贞子提取物、桑椹提取物混合得混合粉B，将混合粉B与甘露醇和山梨醇混合，得总混合粉；
(2)制软材：将总混合粉与质量分数为95％的乙醇混合，得软材；
(3)制粒：将软材过25目筛制粒，得湿颗粒；
(4)干燥：将湿颗粒在50℃条件下进行干燥，得干颗粒；
(5)混料压片：所述干颗粒进行整粒，所述整粒为将干颗粒过25目筛。将整粒后所得干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀，得总混合物，然后将总混合物进行压片，得片芯；
(6)将包衣粉用质量分数为70％的乙醇溶解，得包衣液，用包衣液对片芯进行包衣，得成品。
下面对本发明实施例所得保健品进行检测。
1.毒性试验：
样品：本发明实施例1所得药片为试验样品，规格1.0/片。人口服推荐用量为每人(成人)每日4片，成人体重按60kg计算，折合剂量为66.6mg/kg.BW。
试验动物及环境：SPF级健康昆明种小鼠，由广西医科大学试验动物中心繁殖。SPF级健康SD种大鼠，由广东省医学试验动物中心繁殖。动物实验室为屏障系统，实验动物室温度：22～25℃，相对湿度：55～70％。
小鼠急性经口毒性试验：采用最大耐受试验法，选体重18～22g的昆明种小鼠20只，雌雄各半。试验前动物禁食16小时，不限饮水。称取50.0g样品，加纯水至100mL，混匀、配成500mg/mL浓度溶液，然后给动物灌胃2次(间隔6h)，每次灌胃量为0.4mL/20g.BW，合计剂量为20000mg/kg.BW。灌胃后观察、记录动物的中毒表现。每周称重一次，观察两周时间，试验结束解剖动物进行大体观察。按毒性分级标准评价受试物的急性毒性。
试验结果：
表1.样品对小鼠的急性毒性试验结果
从表1可见，以20000mg/kg.BW剂量的实施例1所得样品给予小鼠灌胃后，动物生长良好，未见体重收到影响。受试小鼠均未见有中毒症状，观察14天无动物死亡。试验结束解剖动物、大体观察，肝、肾、脾、心、肺、胃、肠等主要脏器均未见明显异常改变。结果表明，该样品对小鼠的急性经口毒性剂量大于20000mg/kg.BW，急性经口毒性属无毒。本发明其他实施例所得样品其试验结果与实施例1相同。
2.功能学试验：
2.1样品：本发明实施例1所得药片为试验样品，规格1.0/片。人口服推荐用量为每人(成人)每日4片，成人体重按60kg计算，折合剂量为66.6mg/kg.BW。
2.2实验动物与分组：SPF级健康昆明雄性小鼠200只，体重为18～22克，由广西医科大学实验动物中心繁殖。每40只小鼠为一组，共5组。免疫I组，进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、NK细胞活性测定；免疫II组，进行迟发型变态反应实验；免疫III组，进行脏/体比值测定，血清溶血素测定和抗体生成细胞数测定；免疫IV组，进行碳廓清实验；免疫V组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。
2.3实验动物房环境条件：动物实验室为屏障系统，实验室温度22～25℃，相对湿度55～70％。
2.4剂量选择与受试物给予方式：根据人口服推荐用量，设样品低、中、高剂量组分别为333、666、1332mg/kg.BW(分别相当于人体推荐用量的5、10、20倍)，设一个阴性对照组，每组10只动物。分别称取样品5.0g、10.0g、20.0g加纯水至300mL，分别配成16.67mg/mL、33.33mg/mL、66.66mg/mL浓度溶液，分别给予相应剂量组动物灌胃，灌胃体积为0.2mL/10g.BW，阴性对照组予以等体积的纯水，每天灌胃一次，连续灌胃30天。
2.5主要仪器与试剂：动物天平、电子分析天平、离心机、洁净工作台、二氧化碳培养箱、恒温水浴箱、显微镜、半自动生化分析仪、酶标仪等。
无菌手术器械、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、载玻片、试管、200目筛网、计时器、血色素吸管等。
RPMI1640培养液、小牛血清、2-ME、青霉素、链霉素、ConA、1mol/L的HCl溶液、异丙醇、MTT、Hank’s液(pH7.2～7.4)、PBS缓冲液(pH7.2～7.4)、台酚蓝、DNFB(2，4-二硝基氟苯)、丙酮、硫化钡、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、印度墨汁、0.1％得碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Gimsa染液、YAC-1细胞、乳液锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液、1％冰醋酸、1％的NP-40等。
2.6实验方法
2.6.1脏器/体重比值测定：称重后处死小鼠，取出胸腺和脾脏，再电子分析天平上称重，计算脏/体比值。
2.6.2ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的平皿中，制成细胞悬液，经200目筛网过滤。用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL完全培养液中，计数活细胞数，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为3×106个/mL。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，在其中一孔加75μLConA液(相当于7.5μg/mL)，轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，是紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3个平行孔，用酶标仪，以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增值能力用加ConA的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。
2.6.3二硝基氟苯诱导的小鼠DTH实验(耳肿胀法)
实验结束前5天用硫化钡将小鼠腹部皮肤脱毛约3cm×3cm范围，用50μLDNFB溶液均匀涂抹致敏，5天后将10μLDNFB均匀涂抹于小鼠右耳两面进行进攻，24小时后劲椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下8mm直径的耳片、称重，以左右耳重量之差值表示DTH程度。
2.6.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)
实取脱纤维的羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心10min(2000r/min)，用生理盐水将压积SRBC配成2％(v/v)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2mL。将免疫后5天的小鼠处死，取脾脏置盛有Hank’s液的平皿内，轻轻磨碎脾脏，制成细胞悬液，经200目筛网过滤，离心10min(2000r/min)，用Hank’s液洗涤2遍，最后将细胞悬液在8mLHank’s液中。将表层培养基(1g琼脂糖加双蒸水至100mL)加热溶解后，放45～50℃水浴保温，与等量PH7.2～7.4、2倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加入50μL10％SRBC(v/v，用SA缓冲液配制)、25μL脾细胞悬液，迅速混匀后倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，用SA缓冲液稀释的补体(1:8)加入玻片架凹槽内，继续孵育1.5h，计数溶血空斑数。用空斑数/106脾细胞表示抗体生成细胞数。
2.6.5血清溶血素的测定(血凝法)
取脱纤维的羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心10min(2000r/min)，用生理盐水将积压SRBC配成2％(v/v)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2mL。免疫5天后，摘除小鼠的眼球，取血于离心管内，放置约1h，2000r/min离心10min，分离、收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝板内，每孔100μL，再加入100μL0.5％(v/v)的SRBC悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。按下式计算抗体积数：
抗体积数＝(S1+2S2+3S3······nSn)
式中1、2、3······n为对倍稀释的指数，S为凝集程度的级别。
2.6.6小鼠碳廓清实验
经尾静脉给小鼠注射用生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每10g体重注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，加入到2mL0.1％Na2CO3溶液中，摇匀。以Na2CO3溶液作空白对照，以600nm波长测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、脾脏，称重。按下式计算吞噬指数a。
a＝K1/3×体重/(肝重+脾重)
式中K＝(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)
2.6.7小鼠腹腔注射20％(v/v用生理盐水配制)的鸡红细胞悬液，每鼠1mL，间隔30min，颈椎脱臼处死小鼠，正中剪开腹壁皮肤，腹腔注入2mL生理盐水，转动鼠板1min，吸出腹腔洗液1mL，平均滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱巾的搪瓷盒内，置37℃孵箱温育30min。孵毕，取出玻片于生理盐水中漂洗后晾干，用甲醇：丙酮为1:1的溶液固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色，再用纯水漂洗、晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数。
吞噬率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100
吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数
2.6.8NK细胞活性测定(LDH测定法)
将小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清，将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌纯水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL2倍Hank’s液及8mLHank’s液，1000r/min离心10min，用1mL含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1％冰醋酸稀释后计数(活细胞数应在95％以上)，用台酚兰染色计数活细胞数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL，此为效应细胞。取传代后24h生长良好的YAC-1细胞，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL，此为靶细胞。取靶细胞和效应细胞各100μL(效靶比50:1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，效靶比最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL。上述各项各设3个平行孔，置5％CO2、37℃二氧化碳孵箱中培养4h。然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸去上清100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应8分钟，每孔加入1mol/L的HCl30μL，在酶标仪490nm处测定光密度(OD)值。按下式计算NK细胞活性。
NK细胞活性(％)＝(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100％
结果判定：在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。
3结果
3.1样品对小鼠体重的影响
表2样品增强免疫力功能实验小鼠体重免疫I组
注：各剂量组实验初始、中期和末期的小鼠体重及增重与对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。
表3样品增强免疫力功能实验小鼠体重免疫II组
表4样品增强免疫力功能实验小鼠体重免疫III组
表5样品增强免疫力功能实验小鼠体重免疫IV组
表6样品增强免疫力功能实验小鼠体重免疫V组
注：各剂量组实验初始、中期和末期的小鼠体重及增重与对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。
由表2-6可见，经口给予小鼠不同剂量的样品30天，实验初、实验中期、实验末期各剂量组的小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与阴性对照组间比较，差异均为显著性(P＞0.05)，表明该样品对小鼠的体重增长无明显影响。
3.2样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响
表7样品增强免疫功能实验小鼠的免疫器官脏器/体重比值
由表7可见，经口给予小鼠不同剂量的样品30天，小鼠的胸腺/体重及脾脏/体重比值与阴性对照组比较，均为显著性差异(P＞0.05)，表明该样品对小鼠的免疫器官重量无明显影响。
3.3样品对小鼠的细胞免疫的影响
3.3.1样品对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化能力的影响
表8样品的小鼠脾淋巴细胞转化实验结果
从表8可见，样品各剂量组小鼠的脾淋巴细胞转化能力均高于阴性对照组，其中的高剂量组与阴性对照组的差异有显著性(P＜0.05)，表明该样品具有促进小鼠的脾淋巴细胞增殖、转化能力的作用。
3.3.2样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
表9样品的小鼠迟发型变态反应(DTH)实验结果
从表9可见，样品各剂量小鼠的左右耳片重量差值均高于阴性对照组，且高、中剂量组与阴性对照组的差异具有显著性(分别P＜0.01和P＜0.05)，表明该样品具有促进小鼠的迟发型变态反应的作用。
3.4样品对小鼠的体液免疫的影响
3.4.1样品对小鼠的抗体生成细胞数的影响
从表10可见，样品各剂量组小鼠的抗体生成细胞数均高于阴性对照组，且高剂量组与阴性对照组的差异具有非常显著性(P＜0.01)，表明该样品具有促进小鼠的抗体生成细胞增殖的作用。
表10样品的抗体生成细胞检测实验结果
3.4.2样品对小鼠血清溶血素的影响
从表11可见，样品各剂量小鼠的抗体积数均高于阴性对照组，且高剂量组与阴性对照组的差异具有非常显著性(P＜0.01)，表明该样品具有提高小鼠的血清溶血素水平的作用。
表11样品的小鼠溶血素测定结果(x±s)
3.5样品对小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能的影响
3.5.1样品对小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清的影响
表12样品的小鼠碳廓清实验结果
从表12可见，样品各剂量小鼠的吞噬指数均高于阴性对照组，但各剂量组与阴性对照组的差异均无显著性(P＞0.05)表明该样品对小鼠的单核-巨噬细胞的碳廓清功能无明显影响。
3.5.2样品对小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
表13样品的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果
从表13可见，样品各剂量组小鼠的腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数均高于阴性对照组，且高剂量组的吞噬率与阴性对照组的差异具有非常显著性(P＜0.01)，各剂量组的吞噬指数与阴性对照组的差异均具有显著性(P＜0.01或P＜0.05)，表明该样品具有促进小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能作用。
3.6样品对小鼠的NK细胞活性的影响
表10样品的小鼠NK细胞活性测定结果
样品的小鼠NK细胞活性均高于阴性对照组，但各剂量组与阴性对照组的差异均为显著性(P＞0.05)，表明该样品对小鼠的NK细胞活性无明显影响。
小结：经口给予小鼠333、666、1332mg/kg.BW(相当于人体推荐用量5、10、20倍)计量的样品30天，能促进小鼠的脾淋巴细胞增殖、转化作用，促进小鼠的迟发型变态反应，促进小鼠的抗体生成细胞增殖，提高小鼠的血清溶血素水平，促进小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能，对小鼠的体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、单核-巨噬细胞的碳廓清功能及NK细胞活性物明显影响，提示该样品具有增强免疫力功能。本发明其他实施例所得样品进行上述试验，其实验结果与实施例1所得结果相同或近似。
需要说明的是，对于前述的方法实施例，为了简单描述，故将其都表述为一系列的动作组合，但是本领域技术人员应该知悉，本发明并不受所描述的动作顺序的限制，因为依据本发明，某些步骤可以采用其他顺序或者同时进行。其次，本领域技术人员也应该知悉，说明书中所描述的实施例均属于优选实施例，所涉及的动作并不一定是本发明所必需的。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种提高免疫力的保健食品，其特征在于，由原料和辅料制成，所述原料按重量份由以下组分组成：女贞子提取物100～200份，桑椹提取物100～200份，蓝莓粉20～80份，黑加仑粉20～80份。
2.根据权利要求1所述的提高免疫力的保健食品，其特征在于，所述辅料按重量份数由以下组分组成：山梨醇200～350份，甘露醇200～350份，硬脂酸镁5～15份，包衣粉10～30份。
3.根据权利要求2所述的提高免疫力的保健食品，其特征在于，所述保健食品为片剂。
4.根据权利要求3所述的提高免疫力的保健食品，其特征在于，所述保健食品为咀嚼片。
5.一种权利要求2、3、4任一所述的提高免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)混料：蓝莓粉和黑加仑粉混合得混合粉A，将混合粉A与女贞子提取物、桑椹提取物混合得混合粉B，再将混合粉B与山梨醇和甘露醇混合，得总混合粉；
(2)制软材：将总混合粉与乙醇混合，得软材；
(3)制粒：将软材过筛制粒，得湿颗粒；
(4)干燥：将湿颗粒进行干燥，得干颗粒；
(5)混料压片：将步骤(4)所得干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀，得总混合物，然后将总混合物进行压片，得片芯；
(6)将包衣粉用乙醇溶解，得包衣液，用包衣液对片芯进行包衣，得成品。
6.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述混料前，将女贞子提取物、桑椹提取物、蓝莓粉、黑加仑粉、甘露醇和山梨醇过70-80目筛，硬脂酸镁过80-100目筛，得各原辅料细粉。
7.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于，步骤(5)中将所述干颗粒和硬脂酸镁粉混合均匀前，将所述干颗粒进行整粒，所述整粒为将干颗粒过14-25目筛。
8.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述制粒过程采用14-25目筛。
9.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述干燥温度为50-60℃。
10.根据权利要求5所述的提高免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所用乙醇为质量分数为95％的乙醇，步骤(6)中所用乙醇为质量分数为70％的乙醇。
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