CN104982928A - 一种红豆杉果保健酵素及其制备方法 - Google Patents
一种红豆杉果保健酵素及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种红豆杉果保健酵素及其制备方法。红豆杉果保健酵素的制备方法包括：一次发酵：将麦芽糖加入水中溶解，再加入红豆杉果原浆、山竹果壳和桑葚原料混合均匀，静置，在20℃-28℃发酵3天-6天得到发酵体系；二次发酵：取混合益生菌种子液接种至发酵体系中，搅拌均匀后密闭，30℃-38℃下避光发酵60天-90天得到后熟液，虹吸抽取上清液，依次进行袋式粗滤、0.45μm中空纤维素膜过滤，得到红豆杉果保健酵素。本发明红豆杉果保健酵素利用红豆杉果、山竹果壳、桑葚、混合益生菌及麦芽糖的协同增效作用，具有更好的增强免疫力功能的作用以及降血脂功能；可制备用于降血脂和/或增加免疫力的保健品。
Description
技术领域
本发明涉及保健食品技术领域，具体涉及一种红豆杉果保健酵素及其制备方法。
背景技术
高血脂、高胆固醇、高血压、高血糖、脂肪肝是现在的流行病。近年来，高血脂症的发病率越来越高，其主要危害是导致动脉粥样硬化，进而导致众多的相关疾病，其中最常见的一种致命性疾病就是冠心病。此外，高血脂症也是促进高血压、糖耐量异常、糖尿病的一个重要危险因素。目前在国内治疗高血脂症的药物，大多数都是合成药物，服用后都会产生一定的副作用，并且极易复发。从根本上若消除病症，可采用绿色的药食两用保健品，但市场上针对降血脂的保健品效果较差。
酵素又称为“酶”，是一种带有生物催化作用的特殊蛋白质。它通过自身的物质代谢，使发酵原料产生很多复杂的中间代谢或交叉代谢，实现代谢产物之间的转化，产生新的具有生理活性的物质和新的生物酶。它不仅保持原有的营养成分，而且通过发酵代谢产生新的生物活性成分，包括多酚类、有机酸、糖类及香豆素类等化合物。它承担人体内新陈代谢中各种生化变化的媒介体，凡细胞的代谢、新生、分解、消化等等，都少不了它。酵素几乎负责调理生物体内所有用以维持生命的生理活动，催化机体的系列反应，催动着生命现象的进行，让免疫细胞快速地繁殖，从而增强人体的免疫力，帮助体内毒素排出，实现净化血液功效，达到降血脂的作用。
桑葚(Fructus Mori)，又名桑椹，桑果。其为桑科落叶乔木桑树Morus albaLinn.的果实，为聚花果，每年4-6月份成熟，不同生长环境下的果实与品种之间存在差异。中国地大物博，桑葚资源丰富。主要含有粗纤维、蛋白质、转化糖、游离酸、维生素、胡萝卜素、杨梅酮、桑色素、芸香苷、鞣质、花青素、挥发油、矿物质及微量元素、磷脂、白藜芦醇等成分。桑葚对降低动物动脉硬化及预防由巨噬细胞引起的腹部炎症有很好的效果。特别是桑果中含有一种叫“白黎芦醇”的物质，能刺激人体内某些基因抑制癌细胞生长，并能阻止血液细胞中栓塞的形成。
中国专利申请CN201210406996.7公开了一种桑葚酵素及其制备方法，桑葚酵素以质量份数计，其组成为：桑葚100-200份，砂糖80-160份，蜂蜜20-70份。所述蜂蜜为龙眼蜜。桑葚酵素中还含有花粉5-10份。该酵素是以桑葚为主要原料经自然发酵得到的，桑葚中含有丰富的褪黑激素，能淡化或去除皮肤上的斑点，其红色素更是比何首乌更胜一筹，让白发变黑等。
中国专利ZL201310405540.3公开了一种桑葚酵素饮料，包括如下重量百分比的组分：桑葚酵素原液20％-50％，麦芽糖醇0.5％-1.0％，低聚半乳糖0.1％-0.2％，安赛蜜0.01％-0.02％，水48.78％-79.39％。该桑葚酵素饮料的制备工艺流程是：桑葚酵素原液→调配→膜过滤→灭菌→灌装→桑葚酵素饮料成品。该桑葚酵素饮料，不仅口感好，香气回味长久，并且长期饮用可平衡内分泌系统，维持酸碱性体质，增强人体免疫力。
现有的酵素产品多针对单一成分开发或采用低值加工方式，产品营养价值不全面，生物吸收利用率差，产生的附加经济价值较低，还存在少量致敏成分。
红豆杉(Taxus chinensis(Pilger)Rehd.)，俗称紫杉(yew)，植物分类归于裸子植物亚门，松杉纲，红豆杉目，红豆杉科中红豆杉族下的红豆杉属。红豆杉为世界濒危珍稀植物，是第四纪冰川后的孑遗物种，素有“植物黄金”之称。早在我国医学《本草纲目》就记载有红豆杉治疗霍乱、伤寒、排毒等的疗效；在现代《中药大辞典》、《吉林中草药》、《本草推陈》等医药书中还有进一步的记载。红豆杉果是红豆杉的果实，内含一定量的紫杉碱二萜化合物、紫杉酚、紫杉宁、金松黄酮、坡那留酮A、蜕皮留酮、金松双黄酮、挥发油、糖、微量元素等营养成分，具有良好的保健功能；其中紫杉碱更是对高血脂(肾上腺素或食物性的)有明显的降低作用，防止胆固醇被肠道吸收。
山竹(Garcinia mangostana L.)又称莽吉柿、倒捻子、凤果，其幽香气爽，滑润而不腻滞，与榴莲齐名，号称果中皇后。果实可食部分占29％-45％，果皮占单果鲜重的52％-68％，是少数几种厚皮果实之一。山竹果皮呈黑紫红色，切片晒干后可做药用，现代科学研究发现，山竹果壳中含有多种活性成分，包括双苯吡酮、酚酸、多糖、色素等，具有抗炎、抗菌、截疟、降血脂、抗氧化、抗HIV、免疫调节等多方面的药理活性。其中α-倒捻子素(α-mangostin)是最主要的双苯吡酮衍生物之一，具有抗氧化、抗炎、抑菌等多种药理活性。果皮中黄酮化合物对食品加工、储存中常见腐败菌种(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、四联球菌、沙门氏菌、志贺球菌)具有较显著的抑菌特性。
目前国内尚无以红豆杉果为主要原料制备的红豆杉果保健酵素产品，也没有红豆杉果保健酵素制备技术的相关报道。
发明内容
本发明旨在提供一种具有降血脂、提高免疫力等保健功能的红豆杉果保健酵素，该红豆杉果保健酵素以科学配伍植物红豆杉果实、山竹果壳和桑葚为原料，通过多种益生菌发酵而成。
本发明还提供了一种红豆杉果保健酵素的制备方法，以科学配伍植物红豆杉果实、山竹果壳和桑葚为原料，在麦芽糖水溶液环境中通过多种益生菌发酵，使原料在发酵过程中产生活性高且更容易吸收的代谢产物，大大提高产品功效与食用安全性，制得具有显著降血脂并提高机体免疫能力的红豆杉果保健酵素。该方法操作简单，适于工业化生产。
一种红豆杉果保健酵素的制备方法，包括步骤：
(1)一次发酵：将红豆杉果经打浆处理制成红豆杉果原浆，将山竹果壳和桑葚切片或打碎，得到山竹果壳和桑葚原料；将麦芽糖加入水中溶解，然后加入红豆杉果原浆、山竹果壳和桑葚原料混合均匀，静置，在20℃-28℃发酵3天-6天，得到发酵体系；
(2)二次发酵：取混合益生菌种子液接种至步骤(1)的发酵体系中，搅拌均匀后密闭，30℃-38℃下避光发酵60天-90天得到后熟液；
(3)将步骤(2)中的后熟液虹吸抽取上清液，依次进行袋式粗滤、0.45μm中空纤维素膜过滤，得到红豆杉果保健酵素。
为达到更好的发明效果，进行以下优选：
步骤(1)中，所述的发酵体系由以下重量百分比的原料制成：
红豆杉果40％-50％、山竹果壳20％-30％、桑葚10％-25％、麦芽糖5％-15％和余量的水。
进一步优选的，所述的发酵体系由以下重量百分比的原料制成：
红豆杉果40％-50％、山竹果壳20％-30％、桑葚10％-16％、麦芽糖5％-10％和余量的水。
所述的红豆杉果经打浆处理制成红豆杉果原浆的具体步骤包括：选新鲜成熟无腐无裂的红豆杉果，洗净去杂，切成小块，控干水分，经打浆处理制备原浆，经100℃水浴加热5min后，冷却静置至常温，得到红豆杉果原浆。
所述的山竹果壳和桑葚预先分类清洗干净后晾干，切片成1cm-3cm细条或打碎，得到山竹果壳和桑葚原料。
步骤(2)中，所述的混合益生菌为I类菌种中的至少一种和II类菌种中的至少一种，其中I类菌种选用植物乳杆菌、发酵乳杆菌、醋化醋杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌中的一种或两种以上；II类菌种选用酿酒酵母、芽孢杆菌中的一种或两种。
所述的混合益生菌种子液的接种量优选为0.1％-0.5％。
所述的混合益生菌种子液可采用本领域常用的种子液制备方法制备，例如，将混合益生菌接种至麦芽糖水溶液中，调节pH至6.0，在28℃培养12小时-24小时，制备种子液；
所述的混合益生菌的接种量优选为10％-15％。混合益生菌可预先用麦芽糖水溶液稀释至各菌种的浓度为0.5×107cfu/mL之后再接种至麦芽糖水溶液中。
所述的麦芽糖水溶液的质量百分浓度优选为30％-50％。
本发明调节pH所用的pH调节剂采用本领域常用的酸性pH调节剂，可选用磷酸、乳酸等中的一种。
所述的接种量是指移入的菌种体积或者移入的种子液体积与接种后培养液体积的比例。
本发明所用的原料均可采用市售产品。
所述的红豆杉果保健酵素可制备用于降血脂和/或增加免疫力的保健品。
所述的红豆杉果保健酵素直接或配以药学上和/或保健品中可接受的辅料后可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂等中的任何一种剂型。
本发明红豆杉果保健酵素的用法用量：成人，每天2ml，一个月为一个疗程。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
与现有的果蔬酵素制备方法相比，本发明中红豆杉果保健酵素制备方法具有独特的设计。在发酵初期，主要是利用麦芽糖在混合菌的作用下，分解为酒精、二氧化碳、水和芳香物质；它们在发酵体系中可将红豆杉果本身的紫杉碱、山竹果壳中的α-倒捻子素(α-mangostin)等中等极性物质萃取出来，使体系具有显著的抑菌药理活性，可有效抑制一次发酵初期的菌种(如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、四联球菌、沙门氏菌、志贺球菌)繁殖。在二次发酵阶段，红豆杉果又在微生物的作用下进一步发酵，使发酵液中有机酸浓度增加，pH值降为5左右，酸性环境导致蛋白质水解为氨基酸。与此同时，红豆杉果中丰富而又复杂的大分子酚类物质转化成小分子紫杉酚，山竹果壳中黄酮类化合物分子异构化后产生新的次生代谢产物，还有桑葚中许多生物活性酶的出现，均可增强该红豆杉果保健酵素的降血脂功能、提高氧自由基清除能力等。
与相同剂量的单味红豆杉果酵素、单味山竹果壳酵素及单味桑葚酵素相比，本发明的红豆杉果保健酵素利用红豆杉果、山竹果壳、桑葚及混合菌的协同增效作用，具有更好的增强免疫力功能的作用以及降血脂功能。由于本发明的主要原料都是天然食品，避免了服用所产生的副作用和药物依赖性。
本发明的红豆杉果保健酵素成本较低，且制备工艺简单，适于工业化生产。该酵素除含有大量的蛋白质、氨基酸、多糖、多酚、微量元素和各种生物活性酶等多种营养成分，还具有显著的降血脂并提高机体免疫能力的作用等，使其具有显著的降血脂、提高血清中IgG水平，增加机体淋巴细胞免疫、降低血清MDA含量，防止细胞损伤等营养保健功能，对中老年人具有很好的保健作用和治疗作用，目前国内外尚无该组方的产品，本发明填补了这一空白。
具体实施方式
实施例1
1.选新鲜成熟无腐无裂的红豆杉果400g，洗净去杂，切成小块，控干水分，经打浆处理制备原浆，经100℃水浴加热5min后，冷却静置至常温，得到红豆杉果原浆；其他原料山竹果壳300g，桑葚100g，分类清洗干净后晾干，切片成1cm-3cm细条，得到山竹果壳和桑葚原料；
2.一次发酵：取麦芽糖100g，加入100ml水中溶解，然后加入红豆杉果原浆、山竹果壳和桑葚原料，混合均匀，静置，在22℃发酵6天，得到发酵体系；
3.制备种子液：混合菌种用质量百分浓度为50％的麦芽糖水溶液稀释为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum，保藏编号：11016，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，芽孢杆菌(Bacillus aerophilus，保藏编号：14033，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，保藏编号：20034，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，醋化醋杆菌(Acetobacter aceti，保藏编号：10110，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，得到混合菌种液，将混合菌种液按10％的接种量接种至质量百分浓度为50％的麦芽糖水溶液中，用乳酸调节pH至6.0，搅拌均匀后密闭，在28℃培养24小时，得到100ml混合菌种子液；
4.二次发酵：取混合菌种子液按0.5％的接种量接种至发酵体系中，搅拌均匀后密闭，35℃下避光发酵90天得到后熟液；
5.将后熟液虹吸抽取上清液，依次进行袋式粗滤、0.45μm中空纤维素膜过滤，得到红豆杉果保健酵素；常温、干燥、避光储存。
所得红豆杉果保健酵素产品经分析，感官指标：液体澄清透亮，口感醇厚，酸甜协调；理化指标：pH3.2，TTS(可溶性固形物)55％，总糖50％，总黄酮≥500mg/L；紫杉醇≥1.0mg/L；紫杉碱≥100μg/L；总砷≤0.2mg/L；铅≤0.05mg/L；铜≤5mg/L；α-倒捻子素≥15mg/L；白藜芦醇≥200μg/L。
实施例2
1.选新鲜成熟无腐无裂的红豆杉果450g，洗净去杂，切成小块，控干水分，经打浆处理制备原浆，经100℃水浴加热5min后，冷却静置至常温，得到红豆杉果原浆；其他原料山竹果壳250g，桑葚150g，分类清洗干净后晾干，粉碎，得到山竹果壳和桑葚原料；
2.一次发酵：取麦芽糖87g，加入63ml水中溶解，然后加入红豆杉果原浆、山竹果壳和桑葚原料，混合均匀，静置，在25℃发酵4天，得到发酵体系；
3.制备种子液：混合菌种用质量百分浓度为50％的麦芽糖水溶液稀释为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum，保藏编号：11016，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，芽孢杆菌(Bacillus aerophilus，保藏编号：14033，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，保藏编号：20034，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，醋化醋杆菌(Acetobacter aceti，保藏编号：10110，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，得到混合菌种液，将混合菌种液按10％的接种量接种至质量百分浓度为50％的麦芽糖水溶液中，用乳酸调节pH至6.0，搅拌均匀后密闭，在28℃培养20小时，得到100ml混合菌种子液；
4.二次发酵：取混合菌种子液按0.3％的接种量接种至发酵体系中，搅拌均匀后密闭，37℃下避光发酵75天得到后熟液；
5.将后熟液虹吸抽取上清液，依次进行袋式粗滤、0.45μm中空纤维素膜过滤，得到红豆杉果保健酵素；常温、干燥、避光储存。
所得红豆杉果保健酵素产品经分析，感官指标：液体澄清透亮，口感醇厚，酸甜协调；理化指标：pH3.6，TTS59％，总糖55％，总黄酮≥450mg/L；紫杉醇≥1.0mg/L；紫杉碱≥100μg/L；总砷≤0.2mg/L；铅≤0.05mg/L；铜≤5mg/L；α-倒捻子素≥15mg/L；白藜芦醇≥200μg/L。
实施例3
1.选新鲜成熟无腐无裂的红豆杉果500g，洗净去杂，切成小块，控干水分，经打浆处理制备原浆，经100℃水浴加热5min后，冷却静置至常温，得到红豆杉果原浆；其他原料山竹果壳200g，桑葚150g，分类清洗干净后晾干，粉碎，得到山竹果壳和桑葚原料；
2.一次发酵：取麦芽糖60g，加入90ml水中溶解，然后加入红豆杉果原浆、山竹果壳和桑葚原料，混合均匀，静置，在20℃发酵3天，得到发酵体系；
3.制备种子液：混合菌种用质量百分浓度为50％的麦芽糖水溶液稀释为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum，保藏编号：11016，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，芽孢杆菌(Bacillus aerophilus，保藏编号：14033，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，保藏编号：20034，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，醋化醋杆菌(Acetobacter aceti，保藏编号：10110，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，得到混合菌种液，将混合菌种液按10％的接种量接种至质量百分浓度为50％的麦芽糖水溶液中，用乳酸调节pH至6.0，搅拌均匀后密闭，在28℃培养16小时，得到100ml混合菌种子液；
4.二次发酵：取混合菌种子液按0.1％的接种量接种至发酵体系中，搅拌均匀后密闭，38℃下避光发酵60天得到后熟液；
5.将后熟液虹吸抽取上清液，依次进行袋式粗滤、0.45μm中空纤维素膜过滤，得到红豆杉果保健酵素；常温、干燥、避光储存。
所得红豆杉果保健酵素产品经分析，感官指标：液体澄清透亮，口感醇厚，酸甜协调；理化指标：pH4.0，TTS60％，总糖56％，总黄酮≥500mg/L；紫杉醇≥1.0mg/L；紫杉碱≥100μg/L；总砷≤0.2mg/L；铅≤0.05mg/L；铜≤5mg/L；α-倒捻子素≥15mg/L；白藜芦醇≥200μg/L。
实施例4
1.选新鲜成熟无腐无裂的红豆杉果480g，洗净去杂，切成小块，控干水分，经打浆处理制备原浆，经100℃水浴加热5min后，冷却静置至常温，得到红豆杉果原浆；其他原料山竹果壳220g，桑葚160g，分类清洗干净后晾干，切片成1cm-3cm细条，得到山竹果壳和桑葚原料；
2.一次发酵：取麦芽糖50g，加入90ml水中溶解，然后加入红豆杉果原浆、山竹果壳和桑葚原料，混合均匀，静置，在28℃发酵3天，得到发酵体系；
3.制备种子液：混合菌种用质量百分浓度为30％的麦芽糖水溶液稀释为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum，保藏编号：11016，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，芽孢杆菌(Bacillus aerophilus，保藏编号：14033，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，保藏编号：20034，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，醋化醋杆菌(Acetobacter aceti，保藏编号：10110，购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)0.5×107cfu/mL，得到混合菌种液，将混合菌种液按10％的接种量接种至质量百分浓度为30％的麦芽糖水溶液中，用乳酸调节pH至6.0，搅拌均匀后密闭，在28℃培养12小时，得到100ml混合菌种子液；
4.二次发酵：取混合菌种子液按0.2％的接种量接种至发酵体系中，搅拌均匀后密闭，30℃下避光发酵70天得到后熟液；
5.将后熟液虹吸抽取上清液，依次进行袋式粗滤、0.45μm中空纤维素膜过滤，得到红豆杉果保健酵素；常温、干燥、避光储存。
所得红豆杉果保健酵素产品经分析，感官指标：液体澄清透亮，口感醇厚，酸甜协调；理化指标：pH3.5，TTS54％，总糖52％，总黄酮≥500mg/L；紫杉醇≥1.0mg/L；紫杉碱≥100μg/L；总砷≤0.2mg/L；铅≤0.05mg/L；铜≤5mg/L；α-倒捻子素≥15mg/L；白藜芦醇≥200μg/L。
对比例1
除了“1.选新鲜成熟无腐无裂的红豆杉果400g，洗净去杂，切成小块，控干水分，经打浆处理制备原浆，经100℃水浴加热5min后，冷却静置至常温，得到红豆杉果原浆；
2.一次发酵：取麦芽糖100g，加入100ml水中溶解，然后加入红豆杉果原浆，混合均匀，静置，在22℃发酵6天，得到发酵体系；”之外，其余操作同实施例1，制得单味红豆杉果酵素。
对比例2
除了“1.原料山竹果壳300g，清洗干净后晾干，切片成1cm-3cm细条，得到山竹果壳原料；
2.一次发酵：取麦芽糖100g，加入100ml水中溶解，然后加入山竹果壳原料，混合均匀，静置，在22℃发酵6天，得到发酵体系；”之外，其余操作同实施例1，制得单味山竹果壳酵素。
对比例3
除了“1.原料桑葚100g，清洗干净后晾干，切片成1cm-3cm细条，得到桑葚原料；
2.一次发酵：取麦芽糖100g，加入100ml水中溶解，然后加入桑葚原料，混合均匀，静置，在22℃发酵6天，得到发酵体系；”之外，其余操作同实施例1，制得单味桑葚酵素。
一、红豆杉果保健酵素的检查项目见表1：
表1
二、动物实验显示实施例1-4制备的红豆杉果保健酵素有明显的免疫增加功能和降血脂功能。下面以实施例1制备的红豆杉果保健酵素为例，进行详细的说明。
红豆杉果保健酵素的主要药效学研究
动物的血清血脂实验：
取Wistar大鼠150只，体重160.0±10.2g，雌雄各半，依体重、性别随机分为15组，每组10只，分生理盐水对照组(即空白组)、模型组、阳性对照药血脂康胶囊组(即阳性对照组)、对比例1中的单味红豆杉果酵素三个不同剂量组、对比例2中的单味山竹果壳酵素三个不同剂量组、对比例3中的单味桑葚酵素三个不同剂量组和实施例1制备的红豆杉果保健酵素粉三个不同剂量的降脂产品组：降脂产品低剂量组、降脂产品中剂量组和降脂产品高剂量组；
采用试剂：胆固醇、去氧胆酸钠、丙硫氧嘧啶片，猪油、丙二醇试剂及血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒；造模饲料脂肪乳剂的配制：10％胆固醇、25％猪油、3％胆酸钠、10％吐温-80、20％丙二醇(均为质量百分比)，加蒸馏水至100ml，搅拌均匀使用。
实验结果:
生理盐水对照组：大鼠用普通饲料喂养，并用生理盐水ig；每天一次，连续2周；模型组：大鼠用造模饲料喂养，并用生理盐水ig；每天一次，连续2周；阳性对照药血脂康胶囊组：大鼠用造模饲料喂养，并用血脂康胶囊0.125g/kg(kg为大鼠体重，下同)及生理盐水ig,每天一次，连续2周；
实施例1制备的红豆杉果保健酵素三个不同剂量的降脂产品组：大鼠用造模饲料喂养，并分别用三个不同剂量组喂养大鼠，高、中、低剂量组分别为0.60g/kg及生理盐水ig、0.30g/kg及生理盐水ig、0.15g/kg及生理盐水ig，每天一次，连续2周；
对比例1中的单味红豆杉果酵素、对比例2中的单味山竹果壳酵素和对比例3中的单味桑葚酵素组大鼠用造模饲料喂养，单味红豆杉果酵素、单味山竹果壳酵素和单味桑葚酵素分别分三个不同剂量组喂养大鼠；单味红豆杉果酵素组高、中、低剂量组分别为0.20g/kg及生理盐水ig、0.10g/kg及生理盐水ig、0.05g/kg及生理盐水ig，每天一次，连续2周；单味山竹果壳酵素组高、中、低剂量组分别为0.34g/kg及生理盐水ig、0.17g/kg及生理盐水ig、0.08g/kg及生理盐水ig，每天一次，连续2周；单味桑葚酵素组高、中、低剂量组分别为0.05g/kg及生理盐水ig、0.03g/kg及生理盐水ig、0.01g/kg及生理盐水ig，每天一次，连续2周；
大鼠末次给药后，禁食不禁水10小时，取颈静脉血制备血清，用试剂盒测定验证其结果。见表2。
表2 产品对实验性高脂血症大鼠血清血脂的影响
注：与空白组比较，*表示P<0.05；与模型组比较，+表示P<0.05。
表2结果表明：本发明实施例1制备的红豆杉果保健酵素低剂量组、中剂量组和高剂量组均可明显降低实验性高脂血症大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量，可明显升高实验性高脂血症大鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量，差异均有显著性(P<0.05)，采用本发明实施例2-4制备的红豆杉果保健酵素分别替换实施例1制备的红豆杉果保健酵素进行动物的血清血脂实验，操作同实施例1的血清血脂实验，测试结果与实施例1的血清血脂实验结果基本一致，显示本发明实施例2-4制备的红豆杉果保健酵素低剂量组、中剂量组和高剂量组均可明显降低实验性高脂血症大鼠血清中TG、TC和LDL-C的含量，可明显升高实验性高脂血症大鼠血清中HDL-C的含量，差异均有显著性(P<0.05)。说明本发明复合产品对降低血脂具有很好的效果。而阳性对照组产品(即血脂康胶囊)仅在降低实验性高脂血症大鼠血清中甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量这二项指标中有良好表现。对比例1中的单味红豆杉果酵素、对比例2中的单味山竹果壳酵素和对比例3中的单味桑葚酵素组降低实验性高脂血症大鼠血清中TG、TC和LDL-C的含量的能力分别显著低于本发明实施例1制备的红豆杉果保健酵素，升高实验性高脂血症大鼠血清中HDL-C的含量的能力分别显著低于本发明实施例1制备的红豆杉果保健酵素，差异有显著性(P<0.05)。实施例2-4中分别对应的单味红豆杉果酵素、单味山竹果壳酵素和单味桑葚酵素组降低实验性高脂血症大鼠血清中TG、TC和LDL-C的含量的能力分别显著低于对应的本发明实施例2-4制备的红豆杉果保健酵素，升高实验性高脂血症大鼠血清中HDL-C的含量的能力分别显著低于对应的本发明实施例2-4制备的红豆杉果保健酵素，差异有显著性(P<0.05)。
Claims (10)
1.一种红豆杉果保健酵素的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(1)一次发酵：将红豆杉果经打浆处理制成红豆杉果原浆，将山竹果壳和桑葚切片或打碎，得到山竹果壳和桑葚原料；将麦芽糖加入水中溶解，然后加入红豆杉果原浆、山竹果壳和桑葚原料，混合均匀，静置，在20℃-28℃发酵3天-6天，得到发酵体系；
(2)二次发酵：取混合益生菌种子液接种至步骤(1)的发酵体系中，搅拌均匀后密闭，30℃-38℃下避光发酵60天-90天得到后熟液；
(3)将步骤(2)中的后熟液虹吸抽取上清液，依次进行袋式粗滤、0.45μm中空纤维素膜过滤，得到红豆杉果保健酵素。
2.根据权利要求1所述的红豆杉果保健酵素的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的发酵体系由以下重量百分比的原料制成：
红豆杉果40％-50％、山竹果壳20％-30％、桑葚10％-25％、麦芽糖5％-15％和余量的水。
3.根据权利要求1所述的红豆杉果保健酵素的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的混合益生菌为I类菌种中的至少一种和II类菌种中的至少一种，其中I类菌种为植物乳杆菌、发酵乳杆菌、醋化醋杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌中的一种或两种以上；II类菌种为酿酒酵母、芽孢杆菌中的一种或两种。
4.根据权利要求1所述的红豆杉果保健酵素的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的混合益生菌种子液的接种量为0.1％-0.5％。
5.根据权利要求1所述的红豆杉果保健酵素的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的混合益生菌种子液的制备方法包括：将混合益生菌接种至麦芽糖水溶液中，调节pH至6.0，在28℃培养12小时-24小时，制备种子液。
6.根据权利要求5所述的红豆杉果保健酵素的制备方法，其特征在于，所述的混合益生菌的接种量为10％-15％。
7.根据权利要求5所述的红豆杉果保健酵素的制备方法，其特征在于，所述的混合益生菌预先用麦芽糖水溶液稀释至各菌种的浓度为0.5×107cfu/mL之后再接种至麦芽糖水溶液中。
8.根据权利要求5所述的红豆杉果保健酵素的制备方法，其特征在于，所述的麦芽糖水溶液的质量百分浓度为30％-50％。
9.一种红豆杉果保健酵素，其特征在于，所述的红豆杉果保健酵素是根据权利要求1-8任一项所述的红豆杉果保健酵素的制备方法制备的。
10.根据权利要求9所述的红豆杉果保健酵素在制备用于降血脂和/或增加免疫力的保健品中的应用。
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