CN107802695A - 一种含肉苁蓉增强免疫力的保健组合物及其制备方法 - Google Patents
一种含肉苁蓉增强免疫力的保健组合物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种含肉苁蓉增强免疫力的保健组合物及其制备方法，该含肉苁蓉增强免疫力的保健组合物由下述重量配比的原料制成：黄芪：3‑10份，党参：3‑10份，肉苁蓉：2‑5份，枸杞子：2‑5份，黑枣：2‑5份，蜂王浆冻干粉：0.5‑2份。本发明多种药食同源的组分组合，能够有效增强机体免疫力，且制备方法简单、环保、经济、高效、无毒，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属食品领域，涉及一种增强免疫力的功能食品及其制备方法。
背景技术
中医认为，体内气、血、阴、阳缺乏不足时，就会出现虚证，即常见的免疫力低下症状，包括反复感冒、精神不振、疲倦无力、呼吸气短、容易出汗、感冒后容易发烧等。而现代医学研究表明，人类99％的疾病都与免疫系统有关，所以增强机体免疫力产品的研制与开发已成为当今社会一个重要的课题，而提升免疫力就是要保证气、血、阴、阳的充足和平衡。
为了解决背景技术中存在的上述技术问题，本发明提供了一种能够有效增强机体免疫力、安全有效以及无毒副作用的增强免疫力的功能食品及其制备方法。
发明内容
本发明旨在开发一种含肉苁蓉增强免疫力的保健组合物，该保健组合物能扶正固本，帮助亚健康人群改善不适症状，并提高其抵抗疾病的能力。
本发明生产的组合物，由下列重量份的组合而成：黄芪：3-10份；党参：3-10份；肉苁蓉：2-5份；枸杞子：2-5份；黑枣：2-5份；蜂王浆冻干粉：0.5-2份。
优选含肉苁蓉增强免疫力的保健组合物由下述重量配比的原料制成：
黄芪：5-10份，党参：3-5份，肉苁蓉：2-3份，枸杞子：2-3份，黑枣：2-3份，蜂王浆冻干粉：0.5-1份。
本发明所述的保健组合物在制备增强免疫力的药物或保健食品中应用。所述的药物的剂型为胶囊剂、片剂或颗粒剂；所述的保健食品为饮料或粉状或颗粒状的营养粉或干性食品。
上述含肉苁蓉、具有增强免疫力的保健组合物的制备方法，包括以下步骤：
1)醇提取：将黄芪、肉苁蓉用质量浓度为50％-80％的乙醇提取1-2次，每次加7-10倍乙醇，每次回流提取1-3小时，过滤，得到醇提液和滤渣；
2)将党参、枸杞子、黑枣及步骤1得到的滤渣加水煎煮1-2次，每次加7-10倍量水煎煮1-3小时，过滤，得水提取液；
3)浓缩干燥：取醇提取液和水提取液分别真空浓缩至60±5℃下相对密度1.05-1.10，混合，干燥，粉碎，得干膏粉；
4)干粉混合：将蜂王浆冻干粉与干膏粉混合。
上述具有增强免疫力的保健组合物的制备方法中原料在醇提和水煎煮前进行预处理：分别将黄芪、党参、肉苁蓉、枸杞子、黑枣清洗，30-50℃低温烘干，使用前分别将黄芪、党参、肉苁蓉进行切制，切制成薄片或小块。
与现有技术比，本发明具有如下特点：
1.本发明根据传统中医食疗调养的理论和临床经验选方，采用纯天然原料加工制成，提供一种能够有效增强机体免疫力的功能食品，方中精选各药均为食品原料或国家允许用于功能食品原料，用量上严格限制在一定范围，所以安全有效，长期服用无毒副作用，可长期食用。
2.本发明所采用的黄芪补气升阳；党参健脾益肺、补血生津；肉苁蓉补肾阳、益精血；枸杞子滋补肝肾、益精明目；黑枣补中益气，养胃健脾；蜂王浆冻干粉多种维生素及氨基酸.。全方配伍使用，不但能刺激骨髓造血，还能刺激淋巴细胞进行有丝分裂，使细胞转化增殖，增强机体细胞免疫功能。多组分结合，协同增强免疫力。
3.本发明的制备方法，操作简单、环保、经济、高效、无毒，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明作更详细的阐述。
实施例一：
本例生产的增强免疫力保健食品茶，按下列重量份的原料及辅料制备而成：黄芪6g，党参5g，肉苁蓉3g，枸杞子3g，黑枣3g，蜂王浆冻干粉0.5g。
本例生产的保健食品，按照下述步骤进行：
1.原料预处理：分别黄芪、党参、肉苁蓉、枸杞子、黑枣清洗、低温(30-50℃)烘干备用，使用前分别将黄芪、党参、肉苁蓉进行切制，切制成薄片或小块即可；
2.醇提取：黄芪、肉苁蓉用70％乙醇提取2次，每次加8倍乙醇回流提取2小时，过滤，得到醇提液和滤渣；
3.党参、枸杞子、黑枣及2下滤渣加水煎煮2次，每次加10倍量水煎煮2小时，过滤，得水提取液；
4.浓缩干燥：取2、3下醇提取液和水提取液分别真空浓缩至1.05-1.10，混合，干燥，得干膏粉；
5.干粉混合：将检验合格的蜂王浆冻干粉和4下干粉、加入辅料(或为微晶纤维素、或为羟丙基纤维素)混合均匀，备用；
6.制粒：将4下混合均匀的粉末加入适量60％-95％的乙醇制备软材，用18目筛进行制粒，在50-70℃下烘干，用18目筛进行整理，得颗粒，备用。
7.装胶囊：将6下的颗粒填充制得胶囊剂。
实施例二：
一、本例生产的增强免疫力保健食品，按下列重量份的原料及辅料制备而成：
黄芪10g，党参3g，肉苁蓉5g，枸杞子5g，黑枣2g，蜂王浆冻干粉1g。
二、本例生产的增强免疫力保健食品，按照下述步骤进行：
1.原料预处理：分别黄芪、党参、肉苁蓉、枸杞子、黑枣清洗、低温(30-50℃)烘干备用，使用前分别将黄芪、党参、肉苁蓉进行切制，切制成薄片或小块即可；
2.醇提取：本发明中黄芪、肉苁蓉用80％乙醇提取1次，加8倍醇回流提取1小时，过滤，滤液和滤渣备用；
3.本发明中党参、枸杞子、黑枣及2下滤渣加水煎煮2次，每次加10倍量水煎煮3小时，过滤，得水提取液；
4.浓缩干燥：取2、3下醇提取液和水提取液分别真空浓缩至1.05-1.10，混合干燥，得干膏粉；
5.干粉混合：将检验合格的蜂王浆冻干粉和4下干粉、加入适量辅料(或为微晶纤维素、或为羟丙基纤维素)混合均匀，备用；
6.制粒：将4下混合均匀的粉末加入适量60％-95％的乙醇制备软材，用18目筛进行制粒，在60℃下烘干，用18目筛进行整理，得颗粒，备用。
7.压片：将6下的颗粒进行压片，备用。
8.包衣：将7下的素片进行包衣，制得包衣片。
实施例三：
一、本例生产的增强免疫力保健食品，按下列重量份的原料及辅料制备而成：
黄芪6g，党参4g，肉苁蓉4g，枸杞子2g，黑枣2g，蜂王浆冻干粉0.8g。
二、本例生产的增强免疫力保健食品，按照下述步骤进行：
1.原料预处理：分别黄芪、党参、肉苁蓉、枸杞子、黑枣清洗、低温(30-50℃)烘干备用，使用前分别将黄芪、党参、肉苁蓉进行切制，切制成薄片或小块即可；
2.醇提取：本发明中黄芪、肉苁蓉用60％乙醇提取2次，每次加8倍乙醇，回流提取,2小时，过滤，滤液和滤渣备用；
3.本发明中党参、枸杞子、黑枣及2下滤渣加水煎煮2次，每次加7倍量水煎煮1小时，过滤，得水提取液；
4.浓缩干燥：取2、3下醇提取液和水提取液分别真空浓缩至60±5℃下1.05-1.10，混合干燥，得干膏粉；
5.干粉混合：将检验合格的蜂王浆冻干粉和4下干粉、加入适量辅料(或为微晶纤维素、或为羟丙基纤维素)混合均匀，备用；
6.制粒：将4下混合均匀的粉末加入适量95％的乙醇制备软材，用18目筛进行制粒，在70℃下烘干，用18目筛进行整理，得颗粒，备用。
7.压片：将6下的颗粒进行压片，备用。
8.包衣：将7下的素片进行包衣，制得包衣片。
试验例1对本发明组合物药效学的研究与说明：
发明人对本发明提供的技术方案进行了实验研究，用来证明本发明的技术效果，下述实验用于进一步说明本发明的技术效果，但不限制本发明。
本发明组合物增强机体免疫力的作用研究
1.实验材料
1.1动物
ICR小鼠，清洁级，18～22g，雌性，购自扬州大学比较医学中心，合格证号：SCXK(苏)27～0001。
1.2药物与试剂
绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、Hank’s液(pH 7.2-7.4)、RPMIl640培养液、小牛血清、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、1％冰醋酸、1mol/L的HCl溶液、酸性异丙醇(96mL异丙醇加1mol/L的HCl溶液4mL)、MTT、PBS缓冲液(pH 7.2-7.4)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂(碳酸氢钠1.0g，高铁氰化钾0.2g，氰化钾0.05g，加蒸馏水至1000mL)、YAC-1细胞、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH 8.2)、1％NP40、印度墨汁、0.1％Na2CO3、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。
1.3仪器
ES-2100A电子天平、BS223S电子天平、755分光光度计、酶标仪、二氧化碳培养箱、低速离心机、恒温水浴、显微镜、倒置显微镜、螺旋测微仪。
洁净工作台、无菌手术器械、微量注射器(25μL)、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。
2.实验方法
2.1分组与剂量设置
剂量设置原则：本组合物推荐剂量为成人(按60kg体重计)每日1.68g，相当于0.028g/日/kg体重。实验设人体推荐量的5倍、30倍，即每日0.14g/kg·BW、0.28g/kg·BW、0.84g/kg·BW为低、中、高剂量组。
空白对照组：给予蒸馏水灌胃，0.2ml/20g体重灌胃；
低含量组：实施例1组合物，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂，蒸馏水配成溶液，0.2ml/20g体重灌胃；
中含量组：实施例1组合物，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂，蒸馏水配成溶液，0.2ml/20g体重灌胃；
高含量组：实施例1组合物，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A1组：缺肉苁蓉，黄芪10g、党参10g、枸杞子5g、黑枣5g、蜂王浆冻干粉2g；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.3g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A2组：缺蜂王浆冻干粉，黄芪10g、党参10g、肉苁蓉5g、枸杞子5g、黑枣5g；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.3g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A3组：缺黄芪，党参10g、肉苁蓉5g、枸杞子5g、黑枣5g、蜂王浆冻干粉6g；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.3g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A4组：缺党参，黄芪10g、肉苁蓉5g、枸杞子5g、黑枣5g、蜂王浆冻干粉2g；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.3g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A5组：缺枸杞子、黑枣，黄芪10g、党参10g、肉苁蓉5g、蜂王浆冻干粉2g；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.3g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A6组：只含肉苁蓉，肉苁蓉5g、以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.3g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A7组：只含蜂王浆冻干粉，蜂王浆冻干粉2g；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.3g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A8组：只含枸杞子、黑枣，枸杞子5g、黑枣5g；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.3g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
A9组：只含党参，党参10g；以上成分按照实施例1制备方法制成制剂，按照小鼠每1kg体重给予本组制剂0.3g的标准，蒸馏水配成溶液，0.2mL/20g体重灌胃；
2.2实验动物与给药
将360只ICR小鼠分为3批，每批120只，每批随机分为12组，每组10只。
(1)实验一批进行碳廓清实验；
(2)实验二批进行脏体比值测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、迟发型变态反应实验、半数溶血值(HC50)的测定和抗体生成细胞数的测定；
(3)实验三批进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定。
每日经口灌胃给予2.1项下实验组组合物一次，空白组给予蒸馏水，灌胃体积为0.2ml/20g·BW，连续灌胃30天。
2.3检测指标
体重、脏器/体重比值、足跖厚度、淋巴细胞的增值能力、抗体生成细胞数、半数溶血值(HC50)、碳廓清指数、吞噬细胞的吞噬率和吞噬指数、NK细胞活性。
3.实验方法
3.1脏器/体重比值的测定
小鼠称重后颈椎脱臼处死，取脾脏和胸腺，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称重，计算脾脏/体重比值和胸腺/体重比值。
3.2迟发型变态反应(DTH)实验(足跖增厚法)
取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC(2000r/min，10min)0.2mL，致敏后4d，测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。然后在测量部位皮下注射20％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC20μL，于注射后24h测量左后足跖部厚度，以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH的程度。受试样品组的差值显著高于对照组的差值，可判定该项实验结果阳性。
3.3ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，制成细胞悬液。用Hank’s液洗3次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，镜检计数，调整细胞浓度为3×106个/mL。再将脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，在其中一孔加75μLConA液(相当于7.5μg/mL)，另一孔作为对照，置5％CO2，37℃的CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后将此液体移入比色杯中，在755分光光度计上比色测定，波长570nm。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增值能力。受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项实验结果阳性。
3.4抗体生成细胞数的测定(Jerne改良玻片法)
取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC0.2mL。将SRBC免疫5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，轻轻磨碎脾脏，制成细胞悬液。离心(1000r/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬液在8mLHank’s液中。将琼脂糖加热溶解后，与等量双倍Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加10％(v/v，用SA液配制)压积SRBC50μL、脾细胞悬液8μL，迅速混匀后，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中37℃温育1h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1∶8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。用空斑数/全脾细胞数来表示。受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑数，可判定该项实验结果阳性。
3.5半数溶血值(HC50)的测定
取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC0.2mL进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为300倍，取1mL置试管内，依次加入10％(v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBC0.5mL，补体1mL(用SA缓冲液按1∶8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温15min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清1mL，加都氏试剂至3mL。同时取10％(v/v，用SA缓冲液配制)的压积SRBC0.25mL，加都氏试剂至4mL于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。
溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下式计算：
样品半数溶血值＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数
受试样品组的HC50显著高于对照组的HC50，可判定该项实验结果阳性。
3.6小鼠碳廓清实验
按体重从小鼠尾静脉注射稀释4倍的印度墨汁(0.05mL/10g)，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并将其加到2mL0.1％Na2CO3溶液中。用755分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na2CO3溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏称重。以碳廓清指数(a)表示小鼠碳廓清的能力，按下式计算a：
k＝(logOD1-logOD2)/(t2-t1)
a＝体重÷(肝重+脾重)×k1/3
受试样品组的碳廓清指数显著高于对照组的碳廓清指数，可判定该项实验结果阳性。
3.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)
小鼠腹腔注射20％(v/v，用生理盐水配制)鸡红细胞(2000r/min，10min)悬液1mL，间隔30min，颈椎脱臼处死，将其仰位固定于鼠板上，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min。取腹腔巨噬细胞洗液1mL，分别滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以丙酮:甲醇＝1：1溶液固定，Gicmsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数，每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：
吞噬百分率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100
吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数
得出的吞噬百分率再按下式进行数据转换，式中P为吞噬百分率，用小数表示。受试样品组的吞噬百分率和吞噬指数均显著高于对照组的吞噬百分率和吞噬指数，可判定该项实验结果阳性。
3.8NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)
实验前24h将靶细胞YAC-1进行传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL。受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20s，裂解红细胞后再加入0.5mL2倍Hank’s液及8mLHank’s液，1000r/min，10min离心，用1mL含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，镜检计数，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL。使效靶比为50∶1。取靶细胞和效应细胞各100μL，加入U形96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL；上述各项均设三个平行孔，37℃、5％CO2培养箱中培养4h，将96孔板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，加入LDH基质液100μL，反应3-10min，然后每孔加入1mol/L的HCl溶液30μL终止反应，在酶标仪490nm处测光密度值(OD)，计算NK细胞活性：
NK细胞活性(％)＝(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100
得出的NK细胞活性按下式进行数据转换，式中P为NK细胞活性，用小数表示。所得数据为计量资料，受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，可判定该项实验结果阳性。
3.9数据处理
用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性，F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
3.10结果判定依据
《保健食品检验与评价技术规范)》(2003版)规定：在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。
4.实验结果
(1)本发明能增强免疫力的组合物对小鼠体重的影响，见表1、2、3：
表1本发明能增强免疫力的组合物对实验一批小鼠体重的影响
表2本发明能增强免疫力的组合物对实验二批小鼠体重的影响
表3本发明能增强免疫力的组合物对实验三批小鼠体重的影响
由表1-3可见，各剂量组实验初期、实验中期、实验末期小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与空白对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)，即本组合物对小鼠体重无不良影响。
(2)本发明能增强免疫力的组合物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响，见表4：
表4本发明能增强免疫力的组合物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响
由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明能增强免疫力的组合物30天，对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值均无显著影响(P＞0.05)。
(3)本发明能增强免疫力的组合物对小鼠细胞免疫功能的影响，见表5、6：
表5本发明能增强免疫力的组合物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
*与空白组比较有显著性差异
由表5可知，经口给予小鼠不同剂量的本发明能增强免疫力的组合物30天，高剂量组足跖肿胀度明显高于对照组，差异具有显著性(P＜0.05)。
表6本发明能增强免疫力的组合物对小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响
*与空白组比较有显著
由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明能增强免疫力的组合物30天，高剂量组小鼠淋巴细胞转化能力与对照组比较，有差异显著性(P＜0.05)。即本发明在高剂量组能提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力。
(4)本发明能增强免疫力的保健食品胶囊对体液免疫的影响，见表7、8：
表7本发明能增强免疫力的组合物对小鼠抗体生成细胞数的影响
*与空白组比较有显著(P＜0.05)；**与空白组比较有极显著(P＜0.01)
由表7可知，经口给予小鼠不同剂量的本发明能增强免疫力的组合物30天，中剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组比较具有显著性差异(P＜0.05)，而高剂量组小鼠抗体生成细胞数明显高于对照组，差异具有极显著性(P＜0.01)。即本发明胶囊在中、高剂量时能提高小鼠抗体生成细胞数。
表8本发明能增强免疫力的组合物对小鼠半数溶血值(HC50)的影响
*与空白组比较有显著(P＜0.05)；**与空白组比较有极显著(P＜0.01)
由表8可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明能增强免疫力的组合物30天，中剂量组小鼠半数溶血值与对照组比较具有显著性差异(P＜0.05)，高剂量组小鼠半数溶血值与照组比较，差异有极显著性(P＜0.01)。即本发明在中、高剂量时能提高小鼠半数溶血值。(5)本发明能增强免疫力的组合物对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响，见表9、10、11：
表9本发明能增强免疫力的保健食品胶囊对小鼠单核一巨噬细胞碳廓清能力的影响
*与空白组比较有显著(P＜0.05)
由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明能增强免疫力的组合物30天，高剂量组小鼠吞噬指数显著高于对照组，差异有显著性(P＜0.05)。即本发明在高剂量时能提高小鼠碳廓清能力。
表10本发明能增强免疫力的组合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响
表11本发明能增强免疫力的组合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响
由表10-11可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明能增强免疫力的组合物30天，各剂量组与空白组比较，无显著性差异(P＞0.05)。即各剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无明显影响。
(6)本发明能增强免疫力的组合物对小鼠NK细胞活性的影响，见表12：
表12本发明能增强免疫力的组合物对小鼠NK细胞活性的影响
由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明能增强免疫力的组合物30天，各剂量组对小鼠NK细胞活性与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)。即对小鼠NK细胞活性无明显影响。
5.实验结论
本实验中，经口给予小鼠低剂量、高剂量的本发明能增强免疫力的组合物30天，中剂量组能提高小鼠的抗体生成细胞数和小鼠血清半数溶血值；高剂量能增强小鼠迟发型变态反应、提高小鼠的抗体生成细胞数，提高小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的能力，高剂量能提高小鼠血清半数溶血值、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力。与对照组比较，P＜0.05或P＜0.01。对小鼠体重增长、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值、小鼠NK细胞活性、小鼠巨噬细胞鸡红细胞的能力无明显影响。以上实验结果提示本发明能增强免疫力的组合物具有显著增强免疫力的功能。
在本实验中，2.1项下A1-A9组对小鼠迟发型变态反应、提高小鼠的抗体生成细胞数，单核-巨噬细胞碳廓清的能力，血清半数溶血值、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力无显著作用，但与空白组比较，具有一定的提高作用。对小鼠体重增长、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值、小鼠NK细胞活性、小鼠巨噬细胞鸡红细胞的能力无明显影响。
对比例1
除了组分中不添加肉苁蓉，其他条件同实施例1。
对比例2
除了组分中不添加蜂王浆冻干粉，其他条件同实施例1。
对比例3
除了组分中不添加黄芪，其他条件同实施例1。
对比例4
除了组分中不添加党参，其他条件同实施例1。
对比例5
除了组分中不添加枸杞子和黑枣，其他条件同实施例1。
对比例6
组分中只含有肉苁蓉，其他条件同实施例1。
对比例7
组分中只含有蜂王浆冻干粉，其他条件同实施例1。
对比例8
组分中只含有枸杞子和黑枣，其他条件同实施例1。
对比例9
组分中只含有党参，其他条件同实施例1。
Claims (6)
1.一种含肉苁蓉增强免疫力的保健组合物，其特征在于该组合物由下述重量配比的原料制成：
黄芪：3-10份，党参：3-10份，肉苁蓉：2-5份，枸杞子：2-5份，黑枣：2-5份，蜂王浆冻干粉：0.5-2份。
2.根据权利要求1所述的含肉苁蓉增强免疫力的保健组合物，其特征在于该组合物由下述重量配比的原料制成：
黄芪：5-10份，党参：3-5份，肉苁蓉：2-3份，枸杞子：2-3份，黑枣：2-3份，蜂王浆冻干粉：0.5-1份。
3.权利要求1或2所述的保健组合物在制备增强免疫力的药物或保健食品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的药物的剂型为胶囊剂、片剂或颗粒剂；所述的保健食品为饮料或粉状或颗粒状的营养粉或干性食品。
5.权利要求1或2所述的含肉苁蓉、具有增强免疫力的保健组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
1)醇提取：将黄芪、肉苁蓉用质量浓度为50％-80％的乙醇提取1-2次，每次加7-10倍乙醇，每次回流提取1-3小时，过滤，得到醇提液和滤渣；
2)将党参、枸杞子、黑枣及步骤1得到的滤渣加水煎煮1-2次，每次加7-10倍量水煎煮1-3小时，过滤，得水提取液；
3)浓缩干燥：取醇提取液和水提取液分别真空浓缩至60±5℃下相对密度1.05-1.10，混合，干燥，粉碎，得干膏粉；
4)干粉混合：将蜂王浆冻干粉与干膏粉混合。
6.根据权利要求5所述的所述的含肉苁蓉、具有增强免疫力的保健组合物的制备方法，其特征在于原料在醇提和水煎煮前进行预处理：分别将黄芪、党参、肉苁蓉、枸杞子、黑枣清洗，30-50℃低温烘干，使用前分别将黄芪、党参、肉苁蓉进行切制，切制成薄片或小块。
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