CN107568740A - 一种保健食品组合物、其制备方法以及在增强免疫力方面的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种保健食品组合物、其制备方法以及在增强免疫力方面的用途。所述的食品组合物由以下重量份的各原料制成：黄芪10‑30份，大枣10‑50份，蚂蚁2‑30份以及蓝莓0.5‑10份。所述的制备方法包括取10‑30重量份黄芪以及10‑50重量份大枣，清洗去杂后煎煮，每次煎煮加10‑30倍重量的水，煎煮0.5‑3小时，共煎煮2‑5次，每次煎煮后取滤液，取2‑30重量份蚂蚁，加入10‑30倍重量的水，采用60℃‑80℃的水浸提两次，每次浸提0.5‑3小时，共浸提2‑5次，滤液与前述黄芪、大枣滤液合并，浓缩成浸膏；取0.5‑10重量份蓝莓，粉碎，过滤后，取滤液与前述浸膏合并，冷冻干燥成粉末，即得。实验证明本发明保健食品组合物具有提高机体抵抗力的功效。

Description

一种保健食品组合物、其制备方法以及在增强免疫力方面的 用途

技术领域

本发明涉及一种保健食品组合物及其制备方法，特别是涉及一种用于增强机体免疫力的保健食品组合物及其制备方法。

背景技术

当今的社会已经进入高速运转和激烈竞争时代，由于快节奏的生活，巨大的工作和学习压力，人们生活往往没有规律，饮食不合理，而劳逸失当和饮食失调造成了机体的免疫功能的下降。免疫功能一旦失调，最直接的表现就是容易生病，包括感染各种传染病或非传染病以至于各种恶性肿瘤，体弱多病就是免疫力低下人群的最明显特征。调查表明，中国人口中只有15％属于健康人群，15％属于非健康人群，70％属于亚健康人群。通过增强免疫力走出亚健康状态，恢复人们的健康状况显得刻不容缓。随着人类文明及科学的发展，追求健康，以防病为主是未来的趋势，适当使用一些增强免疫力的保健产品正是提高机体免疫力的最直接有效的方法，因而增强免疫力的健康产品具有较大的市场空间。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能够增强免疫力的保健食品组合物及其制备方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种保健食品组合物，由以下重量份的各原料制成：黄芪10-30份，大枣10-50份，蚂蚁2-30份，蓝莓0.5-10份。

其中，优选的，所述的保健食品组合物，由以下重量份的各原料制成：黄芪15-30份，大枣30-50份，蚂蚁5-20份，蓝莓1-8份。更优选的，由以下重量份的各原料制成：黄芪20份，大枣40份，蚂蚁10份，蓝莓2份。

其中，优选的，所述的蚂蚁选自拟黑多刺蚁、双齿多刺蚁、黑翅土白蚁或黄翅大白蚁中的至少一种。

进一步的，本发明还提出了一种制备所述保健食品组合物的方法，包括以下步骤：

(1)按照所述的重量份称取各原料：黄芪，大枣，蚂蚁以及蓝莓；

(2)取黄芪、大枣，清洗去杂后煎煮，每次煎煮加10-30倍重量的水，煎煮0.5-3小时，共煎煮2-5次，每次煎煮后取滤液，合并滤液；

(3)取蚂蚁，加入10-30倍重量的水，在温度为60℃-80℃下浸提0.5-3小时，浸提2-5次，每次浸提后取滤液，后合并滤液；

(4)将步骤(2)和(3)得到的滤液合并，浓缩成浸膏；

(5)取蓝莓，清洗、粉碎、过滤，与步骤(4)得到的浸膏混合，冷冻干燥或减压干燥成粉末，即得。

所述的方法中，优选的，还包括将得到的粉末加入适当的赋形剂制成相应的胶囊、片剂或颗粒剂。

更进一步的，本发明还提出了所述的保健食品组合物在制备具有增强免疫力的保健食品中的用途。

实验证明，本发明的保健食品组合物具有增强免疫功能、提高机体抵抗力的功效。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。应当理解的是，以下所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

实施例1 保健食品组合物的制备

(1)取100g黄芪、200g大枣，清洗去杂，加20倍量的水(即6000g)，煎煮1小时，共煎煮两次，合并两次滤液；

(2)取50g蚂蚁，加入20倍量的水(即1000g)，控制温度为60℃-80℃浸提1小时，共浸提2次，每次浸提后合并滤液；

(3)将步骤(1)和(2)得到的滤液合并，浓缩成浸膏；

(4)取10g蓝莓，清洗、粉碎、过滤，与步骤(3)的浸膏混合，冷冻干燥或减压干燥成粉末即得。

实施例2 保健食品组合物的制备

(1)取300g黄芪、300g大枣，清洗去杂，加10倍量的水(即6000g)，煎煮1小时，共煎煮两次，合并两次滤液；

(2)取80g蚂蚁，加入20倍量的水(即1600g)，控制温度为60℃-80℃浸提1小时，共浸提2次，每次浸提后合并滤液；

(3)将步骤(1)和(2)得到的滤液合并，浓缩成浸膏；

(4)取30g蓝莓，清洗、粉碎、过滤，与步骤(3)的浸膏混合，冷冻干燥或减压干燥成粉末即得。

实施例3 保健食品组合物的制备

(1)取100g黄芪、300g大枣，清洗去杂，加20倍量的水(即8000g)，煎煮1.5小时，共煎煮两次，合并两次滤液；

(2)取50g蚂蚁，加入20倍量的水(即1000g)，控制温度为60℃-80℃浸提1小时，共浸提2次，每次浸提后合并滤液；

(3)将步骤(1)和(2)得到的滤液合并，浓缩成浸膏；

(4)取10g蓝莓，清洗、粉碎、过滤，与步骤(3)的浸膏混合，冷冻干燥或减压干燥成粉末；

(5)向步骤(4)得到的粉末中加入适当的赋形剂制成相应的胶囊、片剂或颗粒剂。

实施例4 保健食品组合物的制备

(1)取100g黄芪、350g大枣，清洗去杂，加10倍量的水(即4500g)，煎煮1小时，共煎煮两次，合并两次滤液；

(2)取40g蚂蚁，加入20倍量的水(即800g)，控制温度为60℃-80℃浸提1小时，共浸提2次，每次浸提后合并滤液；

(3)将步骤(1)和(2)得到的滤液合并，浓缩成浸膏；

(4)取20g蓝莓，清洗、粉碎、过滤，与步骤(3)的浸膏混合，冷冻干燥或减压干燥成粉末；

(5)向步骤(4)得到的粉末中加入适当的赋形剂制成相应的胶囊、片剂或颗粒剂。

试验例 本发明保健食品组合物的增强免疫力的功效评价

1.实验动物与分组

选择健康雄性小鼠40只，体重18～22g，随机分为4组，每组10只，作为免疫一组，进行碳廓清实验及动物脏/体比值测定。健康雄性小鼠40只，体重18～22g，随机分为4组，每组10只，作为免疫二组，进行半数溶血值(HC50)测定和抗体生成细胞检测。健康雄性小鼠40只，体重18～22g，随机分为4组，每组10只，作为免疫三组，进行迟发型变态反应实验。健康雄性小鼠40只，体重18～22g，随机分为4组，每组10只，作为免疫四组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。健康雄性小鼠40只，体重18～22g，随机分成4组，每组10只，作为免疫五组，进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定。

2.受试样品与剂量

将实施例1得到的产品(样品1)，通过灌胃的方式给予小鼠30天。本品人体推荐剂量为5g/人/天，如成人体重以70kg计，则人体每日推荐剂量为0.07g/kg BW。以人体推荐量的10倍作为中剂量，即每日0.7g/kg BW；上、下各设一个剂量组，分别为推荐剂量的30倍(即每日2.1g/kg BW)和5倍(即每日0.35g/kg BW)分别作为高剂量和低剂量；另设一个阴性对照组(蒸馏水)，各组动物均按10mL/kg BW灌胃容积进行灌胃。连续灌胃30天后进行各项指标检测。

3.实验方法

3.1脏器/体重比值测定

将受试小鼠称重后颈椎脱臼处死，取脾脏、胸腺，用滤纸拭净血污，应用分析天平进行称重。计算脾脏体重比值和胸腺体重比值。

3.2 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)

脾细胞悬液的制备：将受试小鼠颈椎脱臼处死,无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank's液的小平皿中用镊子轻轻将脾撕碎，制成单细胞悬液。用4层纱布将脾磨碎，经200目筛网过滤，Hank's液洗3次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，用酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为3×10⁶个/mL。

将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，一孔加75μL ConA液(相当于7.5μg/mL)，另一孔作为对照。置5％CO2培养箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混均，使紫色结晶完全溶解。移入96孔培养板，每孔分成3孔，用酶标仪于波长570nm处测定OD值。

3.3 NK细胞活性测定(LDH测定法)

试验前24h，将靶细胞进行传代培养。应用前以Hank's液洗3次。用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/mL。取靶细胞和脾细胞悬液(细胞浓度为2×10⁷个/mL)各100μL，加入U型底96孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL。上述各项均设三个复孔，于37℃5％CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清液100uL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应10min每孔加入1moL/L的HCl 30μL,在酶标仪490nm处测定OD值,NK细胞活性按下式计算：

NK％＝(反应孔OD－自然释放孔OD)/(最大释放孔OD－自然释放孔OD)×100％

3.4迟发型变态反应(足跖增厚法)

取脱纤维羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(V/V，用生理盐水配制)压积SRBC(2000rpm，10分钟)0.2ml，致敏后4天，测量左后足跖部容积，同一部位测量三次，取平均值。然后在测量部位皮下注射20％(V/V，用生理盐水配制)压积SRBC 20μl，于注射后24小时测量左后足跖部容积，以攻击前后足跖容积的差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。

3.5小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)

鸡红细胞悬液制备：取鸡血置于有玻璃珠的锥形瓶中，朝一个方向充分摇动，以脱纤维。用生理盐水洗涤2～3次，离心(2000r/min，10min)，去上清，用生理盐水配成20％(v/v)的鸡红细胞悬液。

吞噬功能测定：每只鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1ml，间隔30min，颈椎脱臼处死动物，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1min，然后吸出腹腔洗液1ml，平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿沙布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温30min，孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞，晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。

结果以吞噬百分率或吞噬指数来表示小鼠巨噬细胞的吞噬功能，油镜下计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数。

吞噬率％＝(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞)×100％

吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞

3.6半数溶血值的测定

取脱纤维的羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心2000r/min，10min。将压积SRBC用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL。免疫5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1小时，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000rpm离心10分钟，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释250倍，取1ml置试管内，依次加入10％(V/V，用SA缓冲液配制)压积SRBC 0.5ml，补体1ml(用SA缓冲液按1:10稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温30分钟后，冰浴终止反应。2000rpm离心10分钟，取上清液1ml、加都氏试剂3ml，同时取10％(V/V，用SA缓冲液配制)的压积SRBC 0.25ml、加都氏试剂至4ml于另一试管中，充分混匀，放置10分钟后，于540nm波长处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下式计算。

样品HC50＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数

3.7抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)

脾细胞悬液的制备：将受试小鼠颈椎脱臼处死,无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank's液的小平皿中用镊子轻轻将脾撕碎,制成单细胞悬液。用4层纱布将脾磨碎，经200目筛网过滤，Hank's液洗3次,每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，用酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上),最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为3×106个/mL。

空斑的测定：将表层培养基(1g琼脂糖加双蒸水至100ml)加热溶解后，放45～50℃水浴保温，与等量pH 7.2～7.4，2倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl 10％SRBC(v/v，用SA液配制)，20μl脾细胞悬液(5×106个/ml)，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1～1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1:8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1～1.5h后，计数溶血空斑数。

3.8小鼠碳廓清实验

小鼠按0.1ml/10g体重尾静脉注射1:3.5倍稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时。

注入墨汁后2、10分钟，分别从内眦静脉丛取血20μl，并将其加到2mL Na₂CO₃溶液中。将小鼠称重后颈椎脱臼处死，取肝脏、脾脏和胸腺去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。

用722分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na₂CO₃溶液作空白对照。按下式计算吞噬指数α：

K＝(lgOD1–lgOD2)/(t2－t1)

3.9数据处理及结果判定

采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验。如方差齐，计算F值。F值<F0.05，结论为各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05，再用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐性要求后，用转换后的数据进行统计。

4.结果

4.1样品1对小鼠体重的影响

小鼠给予样品130天后对小鼠体重的影响分别见表1-表5。

表1 样品1对小鼠体重的影响(免疫一组)

表2 样品1对小鼠体重的影响(免疫二组)

表3 样品1对小鼠体重的影响(免疫三组)

表4 样品1对小鼠体重的影响(免疫四组)

表5 样品1对小鼠体重的影响(免疫五组)

由表1、2、3、4、5结果可见，在各免疫实验组中，低、中、高剂量组动物的初始体重和终末体重与阴性对照组相比较均无显著性差异(P>0.05)，说明本实验条件下样品1对小鼠体重增长无影响。

4.2样品1对小鼠脏器/体重比值的影响

小鼠给予样品1 30天后，对脏器/体重比值的影响见表6。

表6 样品1对小鼠脏器/体重比值的影响

注：*与阴性对照组比较有显著性差异P<0.05.

由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的样品1 30天，各剂量组动物脾脏/体重比值与阴性对照组间比较均无显著性差异(P>0.05)，中剂量组动物脾脏/体重比值与阴性对照组间比较有显著性差异(P<0.05)，低、高剂量组动物与阴性对照组比较无显著统计学差异。

4.3样品1对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

小鼠给予样品1 30天后对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响见表7。

表7 样品1对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

注：**与阴性对照组比较有显著性差异P<0.01.

由表7可见，经口给予小鼠不同剂量的样品1 30天，经统计学处理，中、高剂量组动物足跖肿胀度(足跖容积)在注射SRBC前后差值与阴性对照组间比较均有显著性差异(P<0.05)，说明样品1能增强小鼠的迟发型变态反应。

4.4样品1对小鼠脾淋巴细胞转化影响

给予小鼠样品1 30天后对小鼠脾淋巴细胞转化影响见表8。

表8 样品1对小鼠脾淋巴细胞转化的影响

注：*与阴性对照组比较无显著性差异P<0.05,**与阴性对照组比较无显著性差异P<0.01.

由表8可见，经口投予不同剂量的样品1 30天，经统计学处理，中、高剂量组的小鼠脾淋巴细胞转化功能与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01)，说明样品1能增强小鼠脾淋巴细胞转化功能。

4.5样品1对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响

小鼠给予样品1 30天后对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响见表9。

表9 样品1对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响

注：与阴性对照组比较有显著性差异**P<0.01

由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的样品1 30天，中、高剂量组小鼠的半数溶血值与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01)，表明样品1能提高小鼠半数溶血值。

4.6样品1对小鼠抗体生成细胞的影响

给予小鼠样品1 30天后对小鼠抗体生成细胞的影响，见表10。

表10 样品1对小鼠抗体生成细胞的影响

由表10可见，经口投予不同剂量的样品1 30天，各剂量组溶血空斑数与阴性对照组比较均无显著性差异(P>0.05)，说明样品1不能增强小鼠抗体生成细胞功能。

4.7样品1对小鼠碳廓清功能的影响

给予小鼠样品1 30天后对小鼠碳廓清能力的影响见表11。

表11 样品1对小鼠碳廓清功能的影响

由表11可见，经口给予小鼠不同剂量的样品1 30天，经统计学处理，各剂量组动物吞噬指数与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05)，说明样品1不能增加小鼠碳廓清功能。

4.8样品1对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响

给予小鼠样品1 30天后对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响见表12。

表12 样品1对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响

注：*与溶剂对照组比较有显著性差异P<0.05

由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的样品1 30天经统计学处理，进行变量变换式中P为吞噬率，用小数表示。为原始数据进行变量变换后且方差齐，进行的四组比较结果。各剂量组的吞噬指数与阴性对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。说明样品1不能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

4.9样品1对小鼠NK细胞活性的影响

给予小鼠样品1 30天后对小鼠NK细胞活性的影响见表13。

表13 样品1对小鼠NK细胞活性的影响(x±SD)

由表13可见，经口给予小鼠不同剂量的样品1 30天，将NK细胞活性进行变量变换式中P为NK细胞活性，用小数表示。经统计学处理，各剂量组的NK细胞活性与阴性对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。即样品1对小鼠NK细胞活性功能无影响。

5.小结

经口投予小鼠不同剂量的样品1 30天，进行了四类检验共计7项试验，即细胞免疫功能(ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)和迟发型变态反应(足跖增厚法))、体液免疫功能(抗体生成细胞检测(改良玻片法)和半数溶血值(HC50)的测定)、单核-巨噬细胞吞噬功能的检测(小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验)以及NK细胞活性的检测。结果表明高、中剂量样品1可明显增强小鼠的脾淋巴细胞转化功能、迟发型变态反应及数溶血值。根据“保健食品功能学评价程序和检验方法”中的判定标准，认为样品1具有增强免疫力的功能。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (7)

1.一种保健食品组合物，其特征在于，由以下重量份的各原料制成：黄芪10-30份，大枣10-50份，蚂蚁2-30份，蓝莓0.5-10份。

2.根据权利要求1所述的保健食品组合物，其特征在于，由以下重量份的各原料制成：黄芪15-30份，大枣30-50份，蚂蚁5-20份，蓝莓1-8份。

3.根据权利要求1所述的保健食品组合物，其特征在于，由以下重量份的各原料制成：黄芪20份，大枣40份，蚂蚁10份，蓝莓2份。

4.根据权利要求1-3任一项所述的保健食品组合物，其特征在于，所述的蚂蚁选自拟黑多刺蚁、双齿多刺蚁、黑翅土白蚁或黄翅大白蚁中的至少一种。

5.一种制备权利要求1-4任一项所述的保健食品组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)按照权利要求1-3任一项所述的重量份称取各原料：黄芪，大枣，蚂蚁以及蓝莓；

(2)取黄芪、大枣，清洗去杂后煎煮，每次煎煮加10-30倍重量的水，煎煮0.5-3小时，共煎煮2-5次，每次煎煮后取滤液，合并滤液；

(3)取蚂蚁，加入10-30倍重量的水，在温度为60℃-80℃下浸提0.5-3小时，浸提2-5次，每次浸提后取滤液，后合并滤液；

(4)将步骤(2)和(3)得到的滤液合并，浓缩成浸膏；

(5)取蓝莓，清洗、粉碎、过滤，与步骤(4)得到的浸膏混合，冷冻干燥或减压干燥成粉末，即得。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，还包括将得到的粉末加入适当的赋形剂制成相应的胶囊、片剂或颗粒剂。

7.权利要求1-4任一项所述的保健食品组合物在制备具有增强免疫力的保健产品中的用途。