CN101940313A - 一种增强人体免疫力的保健食品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种增强人体免疫力的保健食品及其制备方法，该保健食品包括以下重量百分比的组分：20～35％的姬松茸提取物，15～30％的灰树花提取物，5～20％的红景天提取物，35～50％的淀粉，0～1％的硬脂酸镁。该保健品的制备方法为：将姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁分别过筛，取过筛后的姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁混合，将混合后的混合物料装入胶囊。本发明选用中药原料，制成胶囊剂，方便服用，几味原料联用，共同起到调节人体免疫力的功能。

Description

一种增强人体免疫力的保健食品及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种保健食品及其制造方法，具体是一种增强人体免疫力的保健食品及其制备方法。

背景技术

免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。免疫功能失调或低下时，会降低机体对抗感染的能力，降低识别和清除自身衰老的组织细胞能力，降低杀伤和清除异常突变细胞在体内的能力，导致人体抗病力与自愈力的下降。而现代社会，生活节奏的加快，竞争压力的增大，每日紧张的工作和学习会使机体处于透支状态，如得不到及时的休息和调整，日积月累，就会抑制免疫功能；同时，紧张的工作和学习让更多的人不得不食用方便快餐，造成体内营养素的失衡，如果机体长期处于这种状态，会使机体免疫力下降，最终导致机体的亚健康状态。

要想从根本上预防亚健康，最理想的办法是在加强体育锻炼的同时，注意自我保健，合理食用保健食品，从而使身体达到最佳的免疫功能状态。因此，开发安全有效的增强人体免疫力的保健食品是个热门的题目。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于针对现有技术不足，提供一种增强人体免疫力的保健食品。

本发明的另一目的在于提供上述保健食品的制备方法。

技术方案：本发明所述的一种增强人体免疫力的保健食品，包括以下重量百分比的组分：0～35％的姬松茸提取物，15～30％的灰树花提取物，5～20％的红景天提取物，35～50％的淀粉，0～1％的硬脂酸镁。

其中，所述姬松茸提取物是由姬松茸经水提取，将提取液浓缩，取浓缩液醇沉，将醇沉物干燥，粉碎，过筛而得到。

其中，所述灰树花提取物是由灰树花经水提取，将提取液浓缩，取浓缩液醇沉，将醇沉物干燥，粉碎，过筛而得到。

其中，所述红景天提取物是由红景天经粉碎，70％乙醇回流提取，将提取液浓缩，干燥，粉碎，过筛而得到。

制备上述保健食品的方法，包括以下步骤：

(1)取姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁分别过筛；

(2)将过筛后的姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁混合；

(3)将混合后的混合物料装入胶囊，每粒0.35g。

其中，步骤(1)优先选用60目筛。

其中，步骤(2)的混合时间以30min为最佳。

姬松茸为蘑菇科姬松茸的干燥子实体，为可用于保健食品的普通食品。其功效成分为姬松茸多糖，姬松茸多糖可以减弱四氯化碳的毒性，并保护枯否细胞Fc受体，提高枯否细胞免疫活性。同时，能对抗肿瘤细胞扩散，具有提高机体的免疫功能。

灰树花为多孔菌科灰树花的干燥子实体，为可用于保健食品的普通食品。其有效成分为灰树花多糖，灰树花多糖可以提高小鼠的足跖胀度、抗体细胞生成数，具有很好的免疫调节作用。

红景天为景天科植物大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.f.etThoms.)H.Ohba的干燥根及根茎，为可用于保健食品的物品。红景天是我国传统的药用植物，从《神农本草》、《本草纲目》到现在的《现代实用草本》，都有记载。红景天有调节免疫等特殊功效，同时对小鼠细胞及体液免疫功能都有增强作用。

有益效果：本发明选用红景天提取物、姬松茸提取物、松花粉提取物为原料，制成胶囊剂，方便服用。几味原料联用，共同起到调节人体免疫力的功能。同时，由于采用非化学类原料，无任何毒副作用，适合各年龄段人群。

具体实施方式

实施例1：

将20％的姬松茸提取物(单位为重量百分比，下同)、27.5％的灰树花提取物、11.5％的红景天提取物、40.5％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛，取过筛后的姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁混合30min，将混合后的混合物料装入胶囊，每粒0.35g。

实施例2：

将22.5％的姬松茸提取物、25％的灰树花提取物、7.5％的红景天提取物、44.5％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛，取过筛后的姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁混合30min，将混合后的混合物料装入胶囊，每粒0.35g。

实施例3：

将25.5％的姬松茸提取物、22％的灰树花提取物、10.5％的红景天提取物、41.5％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛，取过筛后的姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁混合30min，将混合后的混合物料装入胶囊，每粒0.35g。

实施例4：

将29.5％的姬松茸提取物、18％的灰树花提取物、18.5％的红景天提取物、35.5％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛，取过筛后的姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁混合30min，将混合后的混合物料装入胶囊，每粒0.35g。

实施例5：

将35％的姬松茸提取物、15.5％的灰树花提取物、9.5％的红景天提取物、39.5％的淀粉和0.5％的硬脂酸镁分别过60目筛，取过筛后的姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁混合30min，将混合后的混合物料装入胶囊，每粒0.35g。

实施例6：

本发明对增强人体免疫力功能的研究

1.材料

1.1样品

由无锡市天赐康生物科技有限公司提供。人体推荐量为每日2次，每次4粒，成人体重按60kg计算，折合剂量0.0467g/kg.bw。

1.2实验动物

SPF级昆明种雌性小鼠200只，体重为18～22g，由河南省实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK(豫)2005-0001。饲料由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，生产许可证号为SCXK(湘)2006-0001。实验条件为屏障环境，温度22～24℃，湿度52～54％。每40只分为1组，共5组。免疫I组，进行碳廓清实验；免疫II组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；免疫III组，进行迟发型变态反应实验；免疫IV组，进行半数溶血值(HC₅₀)和抗体生成细胞数的测定；免疫V组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定。每大组随机分为对照组、低、中、高剂量组，每组10只小鼠。

1.3主要仪器与试剂

动物台秤、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、722分光光度计、恒温水浴箱、酶标仪、显微镜、无菌手术器械、游标卡尺、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片。以上实验仪器由湖南省疾病预防控制中心提供。

绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、Hank’s液(pH7.2～7.4)、RPMI1640培养液、小牛血清、清链霉素、ConA(伴刀豆球蛋白)、1mol/L的HCL溶液，酸性异丙醇(96mL异丙醇加1mol/L的HCL溶液4mL)、MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)、PBS缓冲液(pH7.2-7.4)，SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂、YAC-1细胞、乳酸钠、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCL缓冲液、2.5％Triton(聚乙二醇辛基苯基醚)、印度墨汁、0.1％的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液。以上试剂由湖南省疾病预防控制中心提供。

2.实验方法

2.1剂量选择与受试物给予方式

据人体口服推荐量，设本发明低、中、高剂量组分别为0.233g/kb.Bw、0.467g/kb.Bw、1.400g/kb.Bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)。分别取样品2.33g、4.67g、14.00g加蒸馏水定容至200ml，分别给予受试小鼠灌胃，每天灌胃一次，灌胃体积为0.2ml/10g.bw，对照组予以等体积的溶剂，连续30天。

2.2实验步骤

2.2.1小鼠碳廓清实验

小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每10g体重注射0.1ml，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，加入到2mlNa₂CO₃溶液中，摇匀。以Na₂CO₃溶液作空白对照，用722型分光光度计在600nm波长处比色测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、脾称重，计算吞噬指数a。

2.2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)

小鼠腹腔注射20％(v/v，用生理盐水配制)的鸡红细胞(2000rpm，10min)悬液1mL，间隔30min，颈椎脱臼处死，仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1分钟。取腹腔巨噬细胞洗液1mL，滴于载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗以除去未贴片细胞。晾干，以甲醇∶丙酮(1∶1)固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色，用蒸馏水漂洗晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：吞噬率％＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100，吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数。

2.2.3迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)

小鼠腹腔注射2％(v/v)SRBC(0.2ml/每鼠)致敏4天后，测量左后足跖厚度，然后再测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC(20μl/每鼠)，于注射后24h测量左后足跖厚度，同一位测量三次，取平均值，以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。

2.2.4ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验(MTT法)

无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，制成细胞悬液，经200目筛网过滤。用Hanks液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL完全培养液中，计数活细胞数，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为3×10⁶个/ml。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μlConA液，另一孔作对照，置5％CO₂孵箱37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μL/孔继续培养4h，培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3个平行孔，用酶标仪，以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。

2.2.5抗体生成细胞检测(Jernr改良玻片法)

取羊血用生理盐水洗涤3次，每次离心2000rpm10min，将压积SRBC用生理盐水配成2％(v/v)细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2ml。将免疫后5天的小鼠处死，取脾，磨碎，用Hanks液制成细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮在8mlHanks液中。计数细胞，并将细胞浓度调整为5×10⁶个/mL。将表层培养基加热溶解后与等量的PH7.4、2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加入用SA液配制的10％SRBC50μl(v/v)、20μl脾细胞悬液(5×10⁶个/mL)，迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，将用SA液稀释的补体(1∶8)加入到玻片凹槽内继续温育1.5h后计数溶血空斑数。

2.2.6半数溶血值(HC₅₀)的测定

取羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)SRBC0.2mL进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置1h，剥离，2000r/min离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为200倍，去1mL置管内，依次加入10％(v/v，用SA缓冲液配制)SRBC0.5mL，补体1mL(用SA缓冲液按1∶8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温30min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清液1mL加都氏试剂3mL。同时取10％(v/v，用SA缓冲液配制)SRBC0.25mL，加都氏试剂至4mL于另一管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示，按下式计算：半数溶血值(HC₅₀)＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数。

2.2.7NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)

颈椎脱臼处死动物，取出脾脏，制成脾细胞悬浮液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，弃上清将细胞浆弹起，加入0.5ml灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5ml2倍Hanks液及8mlHanks液，1000rpm离心10min，用1mL含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用台酚兰染色计数(活细胞应在95％以上)，调整细胞浓度为2×10⁷个/ml此为效应细胞，取传代后24h生长良好的YAC-1细胞用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/ml此为靶细胞；取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5％Triton各100μl；上述各项均设3个平行孔，于37℃，5％CO₂培养箱培养4小时，取出1500r/min离心5min。将各孔上清液100μl置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，根据室温反应3-10min，每孔加入1mol/L的HCL30μl，在酶标仪490nm处测定光密度(OD)。NK细胞活性＝[(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)]×100％

3.实验数据统计

用Spss11.0软件进行统计分析。

4.结果

4.1本发明对小鼠体重的影响

表1本发明免疫力功能试验I组小鼠体重

表2本发明免疫力功能试验II组小鼠体重

表3本发明免疫力功能试验III组小鼠体重

表4本发明免疫力功能试验IV组小鼠体重

表5本发明免疫力功能试验V组小鼠体重

由表1-5可见，各剂量组实验初、实验中期、实验末小鼠体重及实验期间小鼠体重增长对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)，说明本发明对小鼠体重无影响。

4.2本发明对小鼠单核-巨噬细胞吞噬碳廓清功能的影响

表6本发明对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响

由表6可见，经口给予本发明受试物30天后，各剂量组小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。

4.3本发明对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

表7本发明对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响

表8本发明对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响

由表7、8可见，经口给予本发明受试物30天后，各剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力未见明显影响，与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。

4.3本发明对小鼠细胞免疫的影响

表9本发明对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

由表9可见，经口给予本发明受试物30天后，中、高剂量组小鼠的足跖肿胀度大于照组，差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。

表10本发明对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响

由表10可见，经口给予本发明受试物30天后，各剂量组小鼠的淋巴细胞转化能力与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。

4.4本发明对小鼠体液免疫的影响

表11本发明对小鼠抗体生成细胞的影响

由表11可见，经口给予本发明受试物30天后，高剂量能增加小鼠抗体生成数，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。

表12本发明对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响

由表12可见，经口给予本发明受试物30天后，高剂量能增加小鼠半数溶血值，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。

4.5本发明对小鼠NK细胞活性的影响

表13本发明对小鼠NK细胞活性的影响

由表13可见，经口给予本发明受试物30天后，中、高剂量组能增加小鼠NK细胞活性，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。

5.总结

本实验室条件下，经口给予小鼠0.233g/kg.Bw、0.467g/kg.Bw、1.400g/kg.Bw剂量的本发明受试物30天，1.400g/kg.Bw剂量能增加抗体生成细胞数、小鼠血清半数溶血值，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)；0.467g/kg.Bw、1.400g/kg.Bw剂量能增加小鼠迟发型变态反应能力、NK细胞活性，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01)；对小鼠体重增长、小鼠淋巴细胞转化能力、小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无明显影响(P＞0.05)。依据《保健食品检验与评价技术规范》2003年版可以判定，本发明具有提高免疫力的功能。

Claims (7)

1.一种增强人体免疫力的保健食品，其特征在于它包括以下重量百分比的组分：20～35％的姬松茸提取物，15～30％的灰树花提取物，5～20％的红景天提取物，35～50％的淀粉，0～1％的硬脂酸镁。

2.根据权利要求1所述的一种增强人体免疫力的保健食品，其特征在于所述姬松茸提取物是由姬松茸经水提取，将提取液浓缩，取浓缩液醇沉，将醇沉物干燥，粉碎，过筛而得到。

3.根据权利要求1所述的一种增强人体免疫力的保健食品，其特征在于所述灰树花提取物是由灰树花经水提取，将提取液浓缩，取浓缩液醇沉，将醇沉物干燥，粉碎，过筛而得到。

4.根据权利要求1所述的一种增强人体免疫力的保健食品，其特征在于所述红景天提取物是由红景天经粉碎，70％乙醇回流提取，将提取液浓缩，干燥，粉碎，过筛而得到。

5.制备权利要求1所述的一种增强人体免疫力的保健食品的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)取姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁分别过筛；

(2)将过筛后的姬松茸提取物、灰树花提取物、红景天提取物、淀粉和硬脂酸镁混合；

(3)将混合后的混合物料装入胶囊。

6.根据权利要求5所述的制备一种增强人体免疫力的保健食品的方法，其特征在于步骤(1)选用60目筛。

7.根据权利要求5所述的制备一种增强人体免疫力的保健食品的方法，其特征在于步骤(2)的混合时间为30min。