CN102429150A - 一种增强人体免疫力的维生素c咀嚼片 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种增强人体免疫力的保健食品，具体是一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。本发明的增强人体免疫力的维生素C咀嚼片是以樱桃粉作为天然维生素C的来源，复配合成维生素C作为主要原料，并以赤藓糖醇、白砂糖、硬脂酸镁和甜橙香料为辅料，经混合、制粒、干燥、整粒、总混、压片、内包装、外包装加工制成，具有可增强人体免疫力的保健功效，且具有低成本、携带服用、储运方便、安全无毒的特点。

Description

一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片

技术领域

本发明涉及一种增强人体免疫力的保健食品，特别涉及一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

背景技术

免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物（病毒、细菌等），处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。

人体的免疫力大多取决于遗传基因，但是环境的影响也很大，如饮食、睡眠、运动、压力等。其中，饮食具有决定性的影响力，因为有些食物的重要营养素成分能够协助刺激免疫系统，增强免疫能力，如果缺乏这些重要营养素成分，就会严重影响身体的免疫系统机能，产生免疫力低下或免疫力超常。免疫力低下的身体易于被感染成患，免疫力超常也会产生对身体有害的结果，如引发过敏反应、自身免疫疾病等。

随着社会的飞速发展，人们生活节奏的越来越快，工作、生活、家庭等各方面的压力往往使大多数人无法拥有健康的、规律的饮食和睡眠，再加上缺乏合理的运动，导致了越来越多的免疫力低下人群的出现。当免疫力低下时，则极易招致细菌、病毒、真菌等感染，最直接的表现就是容易生病，如经常感到疲劳、感冒不断、伤口容易感染、娇气的肠胃、易受传染病的攻击等。因免疫力低下而经常患病，会加重机体的消耗，导致人体体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等，生病、打针吃药成了家常便饭，而每次生病都要很长时间才能恢复，且常常反复发作，长此以往会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。因此，免疫力低下不容忽视。

对于免疫力低下人群、经常熬夜的人、工作压力大的人、经常服用抗生素的人、慢性病患者和中老年人在提倡均衡营养、合理膳食、适度劳逸的前提下，通过合理使用能增强免疫力的食品或保健品可改善机体免疫力低下的状况、预防疾病的发生及促进健康。现有的增强免疫力的保健食品，常见的是利用中药材，如灵芝、参茸、黄芪、人参、当归等、或是蜂类、维生素矿物质类作为主要成分。

维生素C是一种人们较早发现和认识的水溶性维生素。是维持正常人体代谢和生理功能所必不可少的物质。维生素C的生理功能主要有抗氧化作用、促进结缔组织形成、解毒、促进神经递质以及肉碱的合成、促进铁吸收、提高免疫功能、降低动脉硬化、预防和控制炎症等。维生素C可通过使免疫功能和体内抗感染细胞的细菌活性的增加来帮助免疫系统抵抗病毒和细菌感染，因此维生素C与人体免疫系统密切相关。维生素C有天然维生素C和合成维生素，天然维生素C主要存在于果蔬等天然食品中，具有较高的生物活性，比合成维生素C更容易被人体吸收利用，研究表明，目前种植的植物中，针叶樱桃中维生素C含量最高，每100克果中维C含量达1000毫克以上，约是柠檬的35倍，草莓的17倍，也比被认为维生素C极高的番石榴高11倍，是名副其实的“维生素C之王”，同时还含有维A、维B1、维B2、铁、钙等元素，其中含有的维生素P还能帮助维生素C的吸收；而合成维生素C虽具有与天然维生素C相同的结构，但其生物活性较低。近两年，以天然维生素C逐渐替代合成维生素C用于制备增强免疫力的保健产品是国内的发展趋势，但也存在成本较高的不足。

发明内容

本发明目的在于提供一种以樱桃粉作为天然维生素C的来源，复配合成维生素C作为主要原料制备而成的，用于增强人体免疫力的低成本、服用方便、安全无毒、口感优良且携带储运方便的维生素C咀嚼片。

本发明的另一个目的在于提供上述一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片的制备方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：本发明增强人体免疫力的维生素C咀嚼片采用下列重量百分比的原料：樱桃粉15-25%、合成维生素C 5-17%、赤藓糖醇25-40%、白砂糖30-38%、硬脂酸镁0.5-2%和甜橙香料0.1-0.5%。

本发明增强人体免疫力的维生素C咀嚼片的制备方法包括如下具体步骤：

（1）按下列重量百分比选取原料：樱桃粉15-25%、合成维生素C 5-17%、赤藓糖醇25-40%、白砂糖30-38%、硬脂酸镁0.5-2%和甜橙香料0.1-0.5%；

（2）将白砂糖30-38%分成部分白砂糖6-8%和剩余白砂糖24-30%两部分，并将剩余白砂糖24-30%制成糖浆；

（3）将樱桃粉15-25%、合成维生素C 5-17%、赤藓糖醇25-40%、部分白砂糖6-8%投入混合制粒机中混合8-12min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖24-30%制得的糖浆进行制粒，再在50-60℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为2-3%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁0.5-2%和甜橙香料0.1-0.5%投入混合设备中进行总混，混合30-40min后，经压片机压片即制成一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

本发明相对于现有技术的有益效果是：

（1）本发明采用天然维生素C与合成维生素C复配作为主要功效成分，与采用合成维生素C为功效成分的同类产品相比，提高了产品中功效成分的活性，促进了功效成分的吸收，达到增强人体免疫力的目的；而与采用天然维生素C为主要功效成分的同类产品相比，大大降低了生产成本；

（2）本发明以白砂糖作为填充剂兼矫味剂，具有一定的黏合力，可使咀嚼片的硬度增加，表面光洁美观；选用甜橙香料调节气味，使产品具有香甜的橙味，具有其特有的优良口感。

（3）本发明根据产品原料的特点、结合市场上的趋势，在产品的剂型上选用咀嚼片剂，使产品具有良好的口感，还可加速崩解，提高吸收效率；咀嚼片剂内功效成分的含量依照配方规定，含量差异小，消费者按片食用，计量准确；片剂还具有质量稳定、携带服用、储运方便，生产机械化、自动化程度高、产量大、成本低，此外还可制成各种用途的片剂，以适应保健预防的需要。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。

实施例1  使用下列原料及其重量百分比，按下列方法制备本发明产品。

采用下列重量百分比的原料：樱桃粉15%、合成维生素C 17%、赤藓糖醇27.5%、白砂糖38%、硬脂酸镁2%和甜橙香料0.5%。

采用下列步骤制备一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片：

（1）按上述重量百分比选取各组分原料；

（2）将38%的白砂糖分成部分白砂糖8%和剩余白砂糖30%两部分，并将剩余白砂糖30%制成糖浆；

（3）将樱桃粉15%、合成维生素C 17%、赤藓糖醇27.5%、部分白砂糖8%投入混合制粒机中混合10min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖30%制得的糖浆进行制粒，再在50℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为2%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁2%和甜橙香料0.5%投入混合设备中进行总混，混合30min后，经压片机压片即制成一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

实施例2  使用下列原料及其重量百分比，按下列方法制备本发明产品。

采用下列重量百分比的原料：樱桃粉22%、合成维生素C 15%、赤藓糖醇32%、白砂糖30%、硬脂酸镁0.7%和甜橙香料0.3%。

采用下列步骤制备一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片：

（1）按上述重量百分比选取各组分原料；

（2）将30%的白砂糖分成部分白砂糖6%和剩余白砂糖24%两部分，并将剩余白砂糖24%制成糖浆；

（3）将樱桃粉22%、合成维生素C 15%、赤藓糖醇32%、部分白砂糖6%投入混合制粒机中混合8min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖24%制得的糖浆进行制粒，再在50℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为3%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁0.7%和甜橙香料0.3%投入混合设备中进行总混，混合35min后，经压片机压片即制成一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

实施例3  使用下列原料及其重量百分比，按下列方法制备本发明产品。

采用下列重量百分比的原料：樱桃粉17%、合成维生素C 10%、赤藓糖醇40%、白砂糖31.7%、硬脂酸镁1.0%和甜橙香料0.3%。

采用下列步骤制备一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片：

（1）按上述重量百分比选取各组分原料；

（2）将31.7%的白砂糖分成部分白砂糖7%和剩余白砂糖24.7%两部分，并将剩余白砂糖24.7%制成糖浆；

（3）将樱桃粉17%、合成维生素C 10%、赤藓糖醇40%、部分白砂糖7%投入混合制粒机中混合10min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖24.7%制得的糖浆进行制粒，再在50℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为3%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁1.0%和甜橙香料0.3%投入混合设备中进行总混，混合40min后，经压片机压片即制成一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

实施例4  使用下列原料及其重量百分比，按下列方法制备本发明产品。

采用下列重量百分比的原料：樱桃粉20%、合成维生素C 11%、赤藓糖醇32%、白砂糖35.7%、硬脂酸镁1.0%和甜橙香料0.3%。

采用下列步骤制备一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片：

（1）按上述重量百分比选取各组分原料；

（2）将35.7%的白砂糖分成部分白砂糖7%和剩余白砂糖28.7%两部分，并将剩余白砂糖28.7%制成糖浆；

（3）将樱桃粉20%、合成维生素C 11%、赤藓糖醇32%、部分白砂糖7%投入混合制粒机中混合10min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖28.7%制得的糖浆进行制粒，再在60℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为2%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁1.0%和甜橙香料0.3%投入混合设备中进行总混，混合30min后，经压片机压片即制成一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

实施例5  使用下列原料及其重量百分比，按下列方法制备本发明产品。

采用下列重量百分比的原料：樱桃粉22.5%、合成维生素C 8%、赤藓糖醇34%、白砂糖33.8%、硬脂酸镁1.5%和甜橙香料0.2%。

采用下列步骤制备一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片：

（1）按上述重量百分比选取各组分原料；

（2）将33.8%的白砂糖分成部分白砂糖7%和剩余白砂糖26.8%两部分，并将剩余白砂糖26.8%制成糖浆；

（3）将樱桃粉22.5%、合成维生素C 8%、赤藓糖醇34%、部分白砂糖7%投入混合制粒机中混合10min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖26.8%制得的糖浆进行制粒，再在60℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为3%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁1.5%和甜橙香料0.2%投入混合设备中进行总混，混合40min后，经压片机压片制得增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

实施例6  使用下列原料及其重量百分比，按下列方法制备本发明产品。

采用下列重量百分比的原料：樱桃粉25%、合成维生素C 13%、赤藓糖醇25%、白砂糖35.7%、硬脂酸镁1.2%和甜橙香料0.1%。

采用下列步骤制备一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片：

（1）按上述重量百分比选取各组分原料；

（2）将35.7%的白砂糖分成部分白砂糖7%和剩余白砂糖28.7%两部分，并将剩余白砂糖28.7%制成糖浆；

（3）将樱桃粉25%、合成维生素C 13%、赤藓糖醇25%、部分白砂糖7%投入混合制粒机中混合10min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖28.7%制得的糖浆进行制粒，再在60℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为3%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁1.2%和甜橙香料0.1%投入混合设备中进行总混，混合35min后，经压片机压片制得增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

实施例7  使用下列原料及其重量百分比，按下列方法制备本发明产品。

采用下列重量百分比的原料：樱桃粉20%、合成维生素C12%、赤藓糖醇30%、白砂糖36%、硬脂酸镁1.8%和甜橙香料0.2%。

采用下列步骤制备一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片：

（1）按上述重量百分比选取各组分原料；

（2）将36%的白砂糖分成部分白砂糖8%和剩余白砂糖28%两部分，并将剩余白砂糖28.7%制成糖浆；

（3）将樱桃粉20%、合成维生素C 12%、赤藓糖醇30%、部分白砂糖8%投入混合制粒机中混合12min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖28%制得的糖浆进行制粒，再在60℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为3%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁1.8%和甜橙香料0.2%投入混合设备中进行总混，混合35min后，经压片机压片制得增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

实施例8 使用下列原料及其重量百分比，按下列方法制备本发明产品。

采用下列重量百分比的原料：樱桃粉24%、合成维生素C 5%、赤藓糖醇38%、白砂糖32.1%、硬脂酸镁0.5%和甜橙香料0.4%。

采用下列步骤制备一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片：

（1）按上述重量百分比选取各组分原料；

（2）将36%的白砂糖分成部分白砂糖6%和剩余白砂糖26.1%两部分，并将剩余白砂糖28.7%制成糖浆；

（3）将樱桃粉24%、合成维生素C 5%、赤藓糖醇38%、部分白砂糖6%投入混合制粒机中混合10min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖26.1%制得的糖浆进行制粒，再在60℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为3%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁0.5%和甜橙香料0.4%投入混合设备中进行总混，混合30min后，经压片机压片制得增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。

实验例  以下通过试验来进一步说明本发明：以本发明实施例4所制备的维生素C咀嚼片进行产品增强免疫力功能试验。

1 材料和方法。

1.1样品：采用本发明实施例4所制备的维生素C咀嚼片，规格1g/片，置阴凉干爽通风处保存。人口服推荐用量为每人（成人）每日1 次，每次3片，成人体重按60kg 计算，折合剂量50 mg/kg BW。

1.2实验动物与分组：SPF级健康昆明种雄性小鼠240只，体重为18~22克，由广西医科大学医学实验动物中心繁殖，生产许可证号：SCXK（桂）2009-0002，实验动物质量合格证号：00021243.每40只小鼠为1组，共6组。免疫Ⅰ组，进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验：免疫Ⅱ组，进行迟发型变态反应实验；免疫Ⅲ组：进行脏/体比测定，血清溶血素测定和抗体生成细胞数测定：免疫Ⅳ~Ⅵ组，分别进行碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验和NK细胞活性测定。

1.3 实验环境条件：实验动物室温度：22~25??C，相对湿度：55~70%。实验动物使用许可证号：SYXK（桂）2007-0003。

1. 4 剂量选择与受试物给予方式：根据人口服推荐用量，设样品低、中、高剂量组分别为250、500、1000 mg/kg.BW（分别相当于人体推荐用量的5、10、20 倍），设一个阴性对照组，每组10 只动物。分别称取维生素C 咀嚼片2.5、5.0、10.0g，各加蒸馏水至200mL，混匀、配成12.5、25.0、50.0mg/mL浓度溶液，按0.2mL/10g.BW的体积给予相应剂量组动物灌胃，阴性对照组予以等体积的蒸馏水，每天灌胃一次，连续灌胃30天。

1. 5 主要仪器与试剂：动物台秤、电子分析天平、离心机、洁净工作台、二氧化碳培养箱、恒温水浴箱、显微镜、紫外可见分光光度计（UV-2450）、酶标仪等。

无菌手术器械、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、载玻片、试管、200目筛网、计时器血色素吸管等。

绵羊红细胞( SRBC) 、生理盐水、Hank's 液(pH 7.2~7.4)、RPMI1640 培养液、小牛血清、青霉素、链霉素、ConA、1 %冰醋酸、l mol/L的HCL 溶液、异丙醇、MTT、DNFB、PBS 缓冲液(pH7.2~7 .4)、补体（豚鼠血清）、SA 缓冲液、琼脂糖、YAC-l细胞、乳酸锂、硝基氯化囚氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2 mol /L的Tris-HCL缓冲液、1% 的NP40 、印度墨汁、0.1 %的碳酸纳、鸡红细胞、甲醇、Gimsa 染液等。

1. 6 实验方法

1. 6.1 脏器/体重比值测定：称重后处死小鼠，取出胸腺和脾脏，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。

1.6.2 ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)

    无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s 液的平皿中，制成细胞悬液，经200 目筛网过滤。用Hank's 液洗2 次，每次离心10min(1000 r/min) 。然后将细胞悬浮于lmL 完全培养液中，计数活细胞数，用RPM I1640 培养液调整细胞浓度为3×10⁶个/ mL。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔l mL，在其中一孔加75ul ConA液（相当于7.5ug/mL），另一孔作为对照，置5%CO₂，37??C二氧化碳孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640 培养液，同时加入MTT(5 mg/mL) 50μL /孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入lmL 酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96 孔培养板中，每个孔作3个平行孔，用酶标仪，以570nm 波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA 孔的光密度值减去不加ConA 孔的光密度值表示。

1. 6.3 二硝基氟苯诱导的小鼠DTH 实验(耳肿胀法)

    实验结束前5天将小鼠腹部皮肤脱毛约3cm×3 cm 范围，用50μL DNFB 溶液均匀涂抹致敏，5天后将10μL DNFB 均匀涂抹于小鼠右耳两面进行攻击，24小时后颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下8mm 直径的耳片、称重，以左右耳重量之差值表示DTH 的程度。

1. 6 .4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)

    取脱纤维的羊血，用生理盐水洗涤3 次，每次离心10min (2000 r/min)，用生理盐水将压积SRBC 配成2% (v/v) 的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2mL。将免疫后5 天的小鼠处死， 取脾， 轻轻磨碎，用Hank’s液制成细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮在5mL RPMI1640培养液中。将表层培养基( 1g琼脂糖加双蒸水至100mL) 加热溶解后，放45~50 ??C水浴保温，与等量pH7.2~7.4、2.倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5rnL， 再向管内加入用SA 液配制的10% SRBC50μL (v/v)、25μL脾细胞悬液，迅速混匀后倾倒于己刷琼脂糖薄层的玻片上，待凝固后，将玻片平扣放在破片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5 h，用SA 缓冲液稀释的补体(1：8) 加入玻片架凹槽内，继续孵育1.5h，计数溶血空斑数。用空斑数/10⁶脾细胞表示抗体生成细胞数。

1. 6.5 血清溶血素的测定(血凝法)

    取脱纤维的羊血，用生理盐水洗涤3 次，每次离心10min (2000 r/min )，用生理盐水将压积SRBC 配成2% (v/v) 的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2mL。免疫5天后，摘除小鼠的眼球，取血于离心管内，放置约lh，2000r/min 离心10min，分离、收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝板内，每孔100μL，再加入100μL 0.5 % (v/v) 的SRBC悬液，均匀，装入湿润的平盘内加盖，于37??C 温箱孵育3h，观察血球凝集程度。按下式计算抗体积数：抗体积数( S₁+2S₂ +3S₃ …… nS_n)，式中1 、2 、3 ……n为对倍稀释的指数，S为凝集程度的级别。

1.6.6 小鼠碳廓清实验

    经尾静脉给小鼠注射用生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每10g体重注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min，分别从眼内眦静脉丛取血20μL，加入到2mL 0.1%Na₂CO₃ 溶液中，摇匀。以Na₂CO₃溶液作空白对照，用紫外可见分光光度计以600 nm 波长测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、脾脏，称重。按下式计算吞噬指数a。

        a=K^1/3×体重/(肝重+脾重)     式中K=(lgOD₁- lgOD₂)/(t₂- t₁)

1.6.7 小鼠腹腔巨噬细胞鸡红血细胞实验（半体内法）

    给小鼠腹腔注射20% (v/v，用生理盐水配制)的压积鸡红细胞悬液，每鼠lmL，间隔30min，颈椎脱臼处死小鼠，正中剪开腹壁皮肤，腹腔注入2mL 生理盐水，转动鼠板lmin，|吸出腹腔洗液1mL，平均滴于2片载玻片上，放入生在有湿纱布的搪瓷盒内，置37??C 孵箱温育30min。孵毕，取出玻片于生理盐水中漂洗后晾干，用甲醇：丙酣(1：1)溶液固定，4%(v/v) Giemsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗、晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：

    吞噬率(%) =吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100

     吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

1.6.8 NK细胞活性测定(LDH 测定法)

    将小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s 液洗2次，每次离心10min (1000r/min )。弃上清，将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL 2倍Hank’s 液及8mL Hank’s液， 1000r/min离心10min，用lmL含10% 小牛血清的RPMI1640 完全培养液重悬，用1%冰醋酸稀释后计数(活细胞数应在95%以上)，用台酚兰染色计数活细胞数，最后用RPMI1640 完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个/mL，此为效应细胞。取传代后24h 生长良好的YAC-1细胞，用RPMII640 完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/mL，此为靶细胞。取靶细胞和效应细胞各100μL（效靶比50：1），加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μL。上述各项各设3个平行孔，置5% CO₂、37??C 二氧化碳孵箱中培养4h。然后将96孔培养板以1500r/min 离心5min ，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH 基质液100μL，反应8分钟，每孔加入lmol/L的HCl 30μL，在酶标仪490nm 处测定光密度（OD）值。按下式计算NK细胞活性。

NK细胞活性(%)=(反应孔OD -自然释放孔OD) /(最大释放孔OD-自然释放孔OD) ×100%

1. 7 实验数据统计：应用SPSS 统计软件进行方差分析统计处理

2 结果

2.1 样品对小鼠体重的影响

表1 维生素C咀嚼片样品增强免疫力功能试验小鼠体重(                                                

±s)

表2  维生素C咀嚼片样品增强免疫力功能试验小鼠体重(

±s)

    由表1、表2可见，实验初期、中期、末期样品各剂量组的小鼠体重及实验期间小鼠的体重增长与阴性对照组间比较，差异均无显著性（P＞0.05），表明样品对小鼠的体重增长无明显影响。

2.2 样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

表3 维生素C咀嚼片样品增强免疫力功能试验小鼠的免疫器官脏器/体重比值(

±s)

     由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的维生素C咀嚼片样品30天，小鼠的胸腺/体重及脾脏/体重比值与阴性对照组比较，均无显著性差异（P＞0.05），表明样品对小鼠的免疫器官重量无明显影响。

2.3 样品对小鼠的细胞免疫的影响

2.3.1 样品对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力的影响

表4 维生素C咀嚼片样品的小鼠淋巴细胞转化实验结果(

±s)

从表4可见，经口给予小鼠不同剂量的维生素C咀嚼片样品30天，各剂量组小鼠的淋巴细胞转化能力均高于阴性对照组，其中的高剂组量与阴性对照组的差异具有显著性（P＜0.05），表明样品具有促进小鼠的淋巴细胞增殖、转化能力的作用。

2.3.2 样品对小鼠迟发型变态反应(DTH) 的影响

 表5 维生素C咀嚼片样品的小鼠迟发型变态反应(DTH) 实验结果(

±s)

从表5可见，经口给予小鼠不同剂量的维生素C咀嚼片样品30天，各剂量组小鼠的左右耳片重量差值明显高于阴性对照组，其中的高、中剂组量与阴性对照组的差异具有显著性（分别P＜0.01和P＜0.05），表明样品具有促进小鼠的迟发型变态反应的作用。

2.4样品对小鼠的体液免疫的影响

2.4.1 样品对小鼠的抗体生成细胞数的影响

表6 维生素C咀嚼片样品的抗体生成细胞检测实验结果(

±s)

    从表6可见，经口给予小鼠不同剂量的维生素C咀嚼片样品30天，各剂量组小鼠的抗体生成细胞数高于阴性对照组，其中的高、中剂组量与阴性对照组的差异具有显著性（P＜0.05），表明样品具有促进小鼠的抗体生成细胞增殖的作用。

2.4.2 样品对小鼠血清溶血素的影响

 [0060] 表7 维生素C咀嚼片样品的小鼠血清溶血素测定结果(

±s)

从表7可见，经口给予小鼠不同剂量的维生素C咀嚼片样品30天，各剂量组小鼠的抗体积数均高于阴性对照组，其中的高剂组量与阴性对照组的差异具有显著性（P＜0.05），表明样品具有提高小鼠的血清溶血素水平的作用。

 2.5 样品对小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

2.5.1 样品对小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清的影响

表8 维生素C咀嚼片样品的小鼠单核-巨噬细胞碳廓清实验结果(

±s)

从表8可见，经口给予小鼠不同剂量的维生素C咀嚼片样品30天，样品各剂量组小鼠的吞噬指数均高于阴性对照组，其中的高剂组量与阴性对照组的差异具有显著性（P＜0.05），表明样品具有促进小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清功能的作用。

2.5.2 样品对小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

表9 维生素C咀嚼片样品的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果(

±s)

      从表9可见，经口给予小鼠不同剂量的维生素C咀嚼片样品30天，样品各剂量组小鼠的腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数均高于阴性对照组，其中的高、中剂量组的吞噬率及吞噬指数与阴性对照组的差异具有显著性（P＜0.01或P＜0.05），表明样品具有促进小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能的作用。

2.6 样品对小鼠的NK细胞活性的影响

表10 维生素C咀嚼片样品的小鼠NK细胞活性测定结果(±s)

     从表10可见，经口给予小鼠不同剂量的维生素C咀嚼片样品30天，样品各剂量组小鼠的NK细胞活性均高于阴性对照组，但各剂量组与阴性对照组的差异均无显著性（P＞0.05），表明样品对小鼠的NK细胞活性无明显的提高作用。

3 小结：经口给予小鼠250、500、1000mg/kg BW相当于人体推荐用量5、10、20倍）剂量的本试验维生素C咀嚼片30天，能促进小鼠的脾淋巴细胞增殖、转化作用，促进小鼠的抗体生成细胞增殖，提高小鼠的血清溶血素水平、促进小鼠的迟发型变态反应及其单核-巨噬细胞的吞噬功能，对小鼠的体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值和NK细胞活性无明显影响，提示本发明的维生素C咀嚼片具有增强免疫力的功能。

Claims (2)

1.一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片，其特征在于它是由下列原料组分按重量百分比组成：樱桃粉15-25%、合成维生素C 5-17%、赤藓糖醇25-40%、白砂糖30-38%、硬脂酸镁0.5-2%和甜橙香料0.1-0.5%。

2.一种如权利要求1所述的增强人体免疫力的维生素C咀嚼片的制备方法，其特征在于：该制备方法包括如下具体步骤：

（1）按下列重量百分比选取原料：樱桃粉15-25%、合成维生素C 5-17%、赤藓糖醇25-40%、白砂糖30-38%、硬脂酸镁0.5-2%和甜橙香料0.1-0.5%；

（2）将白砂糖30-38%分成部分白砂糖6-8%和剩余白砂糖24-30%两部分，并将剩余白砂糖24-30%制成糖浆；

（3）将樱桃粉15-25%、合成维生素C 5-17%、赤藓糖醇25-40%、部分白砂糖6-8%投入混合制粒机中混合8-12min，然后向混合制粒机中加入由剩余白砂糖24-30%制得的糖浆进行制粒，再在50-60℃条件下将制出的颗粒干燥至颗粒水分为2-3%，然后过16目筛进行整粒；整粒后的颗粒与硬脂酸镁0.5-2%和甜橙香料0.1-0.5%投入混合设备中进行总混，混合30-40min后，经压片机压片即制成一种增强人体免疫力的维生素C咀嚼片。