CN106177227A - 一种增强人体免疫力的含辅酶q10的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有增强免疫力的含辅酶Q10的组合物。该组合物主要含有20‑85重量份的辅酶Q10和20‑85重量份的葡萄籽提取物,通过加入葡萄籽提取物,极大提高了辅酶Q10的生物利用度,并且出人意料的促进了辅酶Q10增强免疫力的功能。本发明还公开含该组合物的制剂的制备方法。
Description
技术领域
本发明属于保健品领域,具体涉及一种增强人体免疫力的含辅酶Q10的组合物和含该组合物的制剂及其制备方法。
背景技术
免疫是人体的一种生理功能,人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分,从而破坏和排斥进入人体的抗原物质,或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等,以维持人体的健康,抵抗或防止微生物或寄生物的感染或其它所不希望的生物侵入的状态。执行免疫功能的是免疫系统,它是机体防卫病原体入侵最有效的武器,它能发现并清除异物、外来病原微生物等引起内环境波动的因素。免疫系统是由免疫器官(骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾、胸腺等)、免疫细胞(淋巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞、肥大细胞、血小板(因为血小板里有IGG)等),以及免疫分子(补体、免疫球蛋白、干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子等细胞因子等)组成。
参与免疫调节的细胞主要有T细胞、B细胞、NK细胞和巨噬细胞。T细胞作为免疫效应细胞主要行使两方面功能,即介导DTH反应和作为Tc细胞直接杀伤靶细胞,T细胞又是免疫调节细胞,具有辅助其他免疫细胞分化和调节免疫应答的功能,因此,T细胞在机体的细胞免疫和体液免疫诱导中均有重要作用。B细胞是体内非常重要的免疫细胞,在抗感染免疫和肿瘤免疫等方面都起着重要的作用,可通过处理抗原和释放可溶性因子对免疫功能起重要的调节作用。NK细胞参与非特异性免疫,是机体天然免疫的主要承担者,同时它对T细胞、B细胞、骨髓干细胞等均有调节作用,并通过释放细胞因子对机体免疫功能进行调节。
辅酶Q10又名癸烯醌、泛醌,是一种脂溶性醌,结构类似于维生素K,近年来的研究表明,辅酶Q10是细胞自身产生的天然抗氧化剂,可阻止自由基的形成,有助于维护免疫系统的正常运作及延缓衰老,具有良好的增强免疫力、缓解体力疲劳、抗氧化等多种生物学作用,对预防冠心病、缓解牙周炎、治疗糖尿病等方面有显著效果,在高血压、充血性心力衰竭及心绞痛、神经系统疾病和皮肤性疾病的治疗方面也扮演着重要的角色,同时还有抗肿瘤作用,临床对于癌细胞的转移有一定疗效。
人体中辅酶Q10的总含量仅为500-1500mg并随着年长而减少。在人的器官中辅酶Q10的含量在20岁时达到高峰,然后迅速减少。在心脏中辅酶Q10浓度的减少特别明显。77岁的老人比20岁的年轻人心肌中的辅酶Q10减少了57%。辅酶Q10是细胞自身产生的天然抗氧化剂,可阻止自由基的形成,有助于维护免疫系统的正常运作及延缓衰老。辅酶Q10还是一种免疫增强剂,增强网状内皮系统吞噬功能,刺激对各种因子的抗体反应,从而增强机体防御功能。同时,还可刺激淋巴细胞转化,增强T细胞免疫功能,通过提高抑制性T细胞功能达到抑制B细胞功能亢进的目的。
因此,现在保健品市场或护肤品市场有很多含辅酶Q10的产品。但是因为辅酶Q10是脂溶性的,其普通口服制剂生物利用度较差,为了克服这个问题,很多人致力于研发口服生物利用度好的产品,如陈玉军和庞睿等人(提高辅酶Q10口服生物利用度的方法与思考,J.《生物技术世界》2015第3期)将Gemini作为Q10的生物粘附材料,通过静电作用粘附于胃肠道表面,增加制剂与胃肠道的接触时间,从而提高Q10的生物利用度。还有一些产品是通过大豆油或米糠油等非极性基质增加Q10的吸收,或者将辅酶Q10制成纳米级以提高生物利用度,但这些技术要么使得产品成本过高,要么限制含辅酶Q10的产品的制备工艺,比如不能采用干法直压工艺。
此外,辅酶Q10是容易被氧化的物质,将辅酶Q10与其他功能原料组合容易导致其被氧化变质,影响其有效性,也正是如此,目前市场上还没有同时含辅酶Q10和其他功能成分的保健品。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明的目的在于提供一种具有增强免疫力的含辅酶Q10的组合物,该组合物生物利用度高,增强免疫力效果好。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的:
一种增强人体免疫力的含辅酶Q10的组合物,该组合物含有辅酶Q10和葡萄籽提取物。本发明的组合物,其功能性成分可以只包括辅酶Q10和葡萄籽提取物,也可以还包括此2种成分外的其他功能性成分。
作为优选,本发明的组合物含有20-85重量份的辅酶Q10和25-85重量份的葡萄籽提取物。
作为优选,本发明的组合物含有20-45重量份的辅酶Q10和65-85重量份的葡萄籽提取物。
作为优选,本发明的组合物含有40重量份的辅酶Q10和70重量份的葡萄籽提取物。
本发明的组合物选用辅酶Q10和葡萄籽提取物为功能性原料,其中,辅酶Q10在氧化呼吸链中起传递电子和质子的作用,这种作用不仅是所有生命形式必不可少的,而且还是形成ATP的关键。而ATP是机体能量的主要储存形式,也是所有细胞功能赖以正常发挥的重要基础,是机体的非特异性免疫增强剂,因此显示出极好抗疲劳作用,辅酶Q10使细胞保持良好健康的状态,因而机体充满活力,精力旺盛,脑力充沛。葡萄籽提取物是从葡萄籽中提取的一种人体内不能合成的新型高效天然抗氧化剂物质。它是目前自然界中发现的抗氧化、清除自由基能力最强的物质,其抗氧化活性为维生素E的50倍、维生素C的20倍,它能有效清除人体内多余的自由基,具有超强的延缓衰老的作用。
本发明的发明人发现含有辅酶Q10和葡萄籽提取物的组合物具有意想不到的增强免疫力的效果,特别是本发明的优选实施例在体液免疫和细胞免疫中表现出非常显著地增加免疫力功能。尤其是组合物的成分为:辅酶Q10 40重量份,葡萄籽提取物70重量份时,在不添加任何增强辅酶Q10口服生物利用度的助剂的情况下,可使含该组合物的片剂相比于普通市售辅酶Q10片剂,其生物利用度提高80%以上。辅酶Q10口服生物利用度提高的原因可能在于:葡萄籽提取物中含有大量的多酚类物质,当含本发明组合物的制剂经口服在胃肠道中崩解溶出后,这些物质可能成为促进辅酶Q10溶解于胃肠液的增溶性物质,并促进辅酶Q10的胃肠道转运,因此极大的提高了辅酶Q10的生物利用度。而且葡萄籽提取物中含丰富的儿茶素类和原花青素类,以及亚油酸、亚麻酸等不饱和脂肪酸类,与辅酶Q10配伍,不会造成辅酶Q10被氧化失效,相反,可起到抗氧剂的作用。
本发明的组合物可以加入常规制剂辅料制备成各种制剂,最常用的是便于携带和服用的口服制剂,如胶囊剂、片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。
上述常规制剂辅料视制剂类型进行选用,包括但不限于填充剂、抗氧化剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等。填充剂包括:淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、山梨醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等;抗氧化剂包括:抗坏血酸、生育酚、黄酮类、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、叔丁基对苯二酚等;崩解剂包括:淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等;润滑剂包括:硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等;助悬剂包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等;粘合剂包括:淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等;甜味剂包括:糖精钠、阿斯帕甜、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等;矫味剂包括:甜味剂及各种香精;防腐剂包括:尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等。
本发明还提供了一种含上述组合物的咀嚼片剂及其制备方法。该咀嚼片剂除包含上述组合物外,还包含辅料甘露醇、山梨醇和硬脂酸镁,优选甘露醇440-470重量份、山梨醇420-440重量份和硬脂酸镁5-10重量份。
该咀嚼片剂的制备方法采用干法直压法,因为辅酶Q10和葡萄籽提取物的组合物具有生物利用度高、且不易被氧化的优点,所以可以无需加入抗氧化剂或其他提高辅酶Q10生物利用度的助剂,而且也不需要将辅酶Q10加工为纳米级再制备制剂。本发明制备含辅酶Q10和葡萄籽提取物的咀嚼片剂的方法包括如下步骤:
A、将辅酶Q10、葡萄籽提取物、甘露醇、山梨醇和硬脂酸镁分别粉碎过80目筛得细粉,备用;
B、先将辅酶Q10、葡萄籽提取物细粉混合均匀,再与山梨醇细粉混合均匀,其次将该混合粉与甘露醇细粉混合均匀,最后与硬脂酸镁细粉混合均匀,得总混合粉;
C、将步骤B得到的总混合粉直接压片,即得。
本发明的有益效果在于:本发明的组合物选用功能性原料辅酶Q10和葡萄籽提取物配伍,协同增效,极大的提高了组合物的增强免疫力功能。而且本发明组合物在加入葡萄籽提取物后,特别是加入优选重量份的葡萄籽提取物后,辅酶Q10的生物利用度大大提高,最优的实施例显示其生物利用度比普通市售制剂可提高80%以上。
具体实施方式
以下通过具体实施方式,对本发明的上述内容做进一步的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
表1原料配比
辅酶Q10购自浙江新和成股份有限公司;葡萄籽提取物购自北京瑞芬生物科技有限公司。
实施例1制备实施例
将辅酶Q10、葡萄籽提取物、甘露醇、山梨醇和硬脂酸镁分别按照表1对应的原料配比称重,并粉碎过80目筛得细粉,备用;
先将辅酶Q10、葡萄籽提取物细粉混合均匀,再用等量递增法与山梨醇细粉混合均匀,其次将该混合粉与甘露醇细粉混合均匀,最后与硬脂酸镁细粉混合均匀,得总混合粉;
将上一步骤得到的总混合粉直接压片,压片规格1g/片。
实施例2-8
按照表1对应的原料配比备料,根据实施例1所述的方法制备。
实施例9
取40g辅酶Q10、450g甘露醇、430g山梨醇和10g硬脂酸镁按照实施例1的方法制备产品。
实施例10功能效果试验
1.1样品:根据实施例6制备的样品1、实施例9制备的样品2以及购自卫材(中国)药业有限公司的对照品(能气朗片)进行功能学试验。样品置阴凉干爽通风处保存。人口服样品1的推荐用量为每人(成人)每日1g/60kg BW,试验时用蒸馏水作溶剂配制受试物。
1.2试验动物:由成都生物制品研究所实验动物中心提供的昆明种雄性小鼠160只,体重为18-22克,生产许可证号:SCXK(川)2011-08SPF级;试验动物房为屏障系统,使用许可证号为SYXK(川)2011-043。温度22—25℃,相对湿度:40—70%。
1.3剂量选择:设各样品低、中、高剂量组分别为:以辅酶Q10重量计,6.7mg、13.3mg、20mg/kg BW(分别相当于人体推荐用量的10、20、30倍),设一个蒸馏水阴性对照组,每组10只动物。分别根据以上给药量,称取样品,各加蒸馏水至250mL,混匀、冷藏保存。小鼠按10mL/kg BW体重一次经口灌胃,至少连续灌胃30天。
1.4主要仪器与试剂:100uL微量注射器,动物台秤、电子分析天平、离心机、洁净工作台、二氧化碳培养箱、恒温水浴箱、显微镜、半自动生化仪、酶标仪,无菌手术器械、SRBC、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、载玻片、试管、200目筛网、计时器血色素吸管,生理盐水、Hank's液(pH 7.2—7.4)、RPMI1640培养液、小牛血清、青霉素、链霉素、ConA、1%冰醋酸、1mol/L的HCL溶液、异丙醇、MTT、DNFB、PBS缓冲液(pH7.2—7.4)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、YAC-1细胞、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCL缓冲液、1%的NP40、印度墨汁、0.l%的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Gimsa染液等。
1.5实验方法
1.5.1迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)
给小鼠腹腔注射2%压积SRBC(0.2mL/每鼠)致敏4天后,测量左后足跖厚度,然后在测量部位皮下注射20%(v/v)SRBC(20ul/每鼠),于注射后24h测量左后足跖厚度,同一位置测量三次,取平均值,以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀程度)来表示DTH的程度。
1.5.2ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法):
无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank's液的平皿中,制成细胞悬液,经200目筛网过滤。用Hank's液洗2次,每次离心l0min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL完全培养液中,计数活细胞数,用RPMI1640培养液调整细胞浓度为3*106个/mL.。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1mL,在其中一孔加入75uL ConA液(相当于7.5uL/mL),另一孔作为对照,置5%CO2,37℃二氧化碳孵箱中培养72h。培养结束前4h轻轻吸去上清液0.7mL,加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液,同时加入MTT(5mg/mL)50uL/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1mL酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解,然后分装到96孔培养板中,每个孔作3个平行孔,用酶标仪,以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。
1.5.3抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)
取脱纤维的羊血,用生理盐水洗涤3次,每次离心l0min(2000r/min),用生理盐水将压积SRBC配成2%(v/v)的细胞悬液,每鼠腹腔注射0.2mL。将免疫后5天的小鼠处死,取脾,轻轻磨碎,用Hank's液制成细胞悬液,200目筛网过滤,洗涤、离心2次,最后将细胞悬浮在5mL Hank's液中。将表层培养基(lg琼脂糖加双蒸水至l00mL)加热溶解后,放45~50℃水浴保温,与等量pH7.2—74、2倍浓度的Hank’s液混合,分装小试管,每管0.5mL,再向管内加用SA液配制的10%SRBC50uL(v/v)、25uL脾细胞悬液,迅速混匀后倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上,待凝固后,将玻片平扣放在玻片架上,放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h,用SA缓冲液稀释的补体(1:8)加入玻片架凹槽内,继续孵育1.5h,计数溶血空斑数。用空斑数/全脾细胞表示抗体生成细胞数。
1.5.4血清溶血素的测定(血凝法)
取脱纤维的羊血,用生理盐水洗涤3次,每次离心l0min(2000r/min),用生理盐水将压积SRBC配成2%(v/v)的细胞悬液,每鼠腹腔注射0.2mL。继续灌胃5天后,摘除小鼠的眼球,取血于离心管内,放置约1h,2000r/min离心l0min,分离、收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释,将不同稀释度的血清分别置于微量血凝板内,每孔l00uL,再加入100u L 0.5%(V,v)的SRBC悬液,均匀,装入湿润的平盘内加盖,于37℃温箱孵育3h,观察血球凝集程度。按下式计算抗体积数:
抗体积数=(S1+2S2+3S3…~nSn。)
式中1、2、3……n为对倍稀释的指数,s为凝集程度的级别。
1.6实验数据统计:应用SPSS统计软件进行方差分析统计处理。
2.结果
2.1样品对小鼠细胞免疫功能的影响
2.1.1样品对小鼠迟发型变态反应的影响
表2样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
由上表可见,三个样品各剂量组动物的足跖肿胀度差值均大于阴性对照组,其中,样品1的三个剂量组和对照品的中高剂量组与阴性对照组相比,差异具有显著性(P<0.05),并且样品1的中高剂量组差异性非常显著(P<0.01)。可见在给予辅酶Q10剂量相同的情况下,样品1的效果优于样品2和对照品。
2.1.2样品对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响
表3样品对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响
由上表可见,样品2和对照品各剂量组与阴性对照组比较,淋巴细胞增殖能力无明显差异(P>0.05),只有样品1表现出显著差异性(P<0.01),说明样品1具有促进小鼠的淋巴细胞增殖、转化能力的作用。
2.2样品对小鼠体液免疫的影响
2.2.1样品对小鼠抗体生成细胞的影响
表4样品对小鼠抗体生成细胞检测实验结果
由上表可见,样品2和对照品各剂量组与阴性对照组比较,溶血空斑数无明显差异(P>0.05),而样品1表现出显著差异性(P<0.05),特别是高剂量组,其差异具有非常显著性(P<0.01)。
2.2.2样品对小鼠血清溶血素的影响
表5小鼠溶血素测定结果
由表5可见,3个样品各剂量组抗体积数均高于阴性对照组,样品1各剂量组,样品2中高剂量组以及对照品高剂量组与阴性对照组比较差异均具有显著性(P<0.05),且样品1高剂量组表现出非常显著的差异性(P<0.01),表明该样品具有显著提高小鼠的血清溶血素水平的作用。
实施例11生物利用度实验
1.1样品:根据实施例1-9得到的样品A-I,以及购自自卫材(中国)药业有限公司的对照品(能气朗片)。
1.2试验剂量和对象:给药剂量按辅酶Q10重量计,每天1次,每次40mg。健康男性受试者50人,每组5人,年龄(30±9)岁,身高(167±3)cm,体重(60±7)kg。受试者经全面体检,肝肾功能正常,符合试验要求。试验期间以及试验前2个月未服用其他药物,试验期间统一饮食。
1.3试验方案和数据处理参加文献肖淑华魏广力陆榕等.辅酶Q10片的人体生物利用度研究,中国临床药理学与治疗学,2000,5(1),39-41.计算各样品相比于对照品的相对生物利用度。
1.4结果
表6样品的相对生物利用度
由上表可见,样品5-8相对于对照品,生物利用度大大提高,增加幅度达到40%以上,较佳的实施例生物利用度增加幅度达到80%以上。
本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合,以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。
Claims (10)
1.一种增强人体免疫力的含辅酶Q10的组合物,其特征在于,所述组合物还含有葡萄籽提取物。
2.如权利要求1所述的增强人体免疫力的含辅酶Q10的组合物,其特征在于,所述组合物含有20-85重量份的辅酶Q10和20-85重量份的葡萄籽提取物。
3.如权利要求1所述的增强人体免疫力的含辅酶Q10的组合物,其特征在于,所述组合物含有20-45重量份的辅酶Q10和65-85重量份的葡萄籽提取物。
4.如权利要求1所述的增强人体免疫力的含辅酶Q10的组合物,其特征在于,所述组合物含有40重量份的辅酶Q10和70重量份的葡萄籽提取物。
5.一种含权利要求1-4任意一项所述的增强人体免疫力的含辅酶Q10的组合物的制剂,其特征在于,所述制剂为胶囊剂、片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。
6.如权利要求5所述的制剂,其特征在于,所述制剂为片剂。
7.如权利要求6所述的制剂,其特征在于,所述片剂为咀嚼片剂。
8.如权利要求7所述的制剂,其特征在于,所述制剂包括辅料甘露醇、山梨醇和硬脂酸镁。
9.如权利要求7所述的制剂,其特征在于,所述甘露醇440-470重量份、山梨醇420-440重量份和硬脂酸镁5-10重量份。
10.一种制备权利要求6所述制剂的方法,包括如下步骤:
A、将辅酶Q10、葡萄籽提取物、甘露醇、山梨醇和硬脂酸镁分别粉碎过80目筛得细粉,备用;
B、先将辅酶Q10、葡萄籽提取物细粉混合均匀,再与山梨醇细粉混合均匀,其次将该混合粉与甘露醇细粉混合均匀,最后与硬脂酸镁细粉混合均匀,得总混合粉;
C、将步骤B得到的总混合粉直接压片,即得。
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PB01 | Publication | ||
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Application publication date: 20161207 |
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WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |