CN102524407A

CN102524407A - 一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片

Info

Publication number: CN102524407A
Application number: CN2011104225180A
Authority: CN
Inventors: 殷光玲; 黄远英
Original assignee: GUANGDONG BY-HEALTH BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: GUANGDONG BY-HEALTH BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2011-12-15
Filing date: 2011-12-15
Publication date: 2012-07-04

Abstract

本发明公开了一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。本发明的增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片是由碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、甘露醇、白砂糖、二氧化硅和硬脂酸镁，按一定重量配比组成。本发明产品配方中以碳酸钙、牛初乳粉相配伍，使其通过各自有效途径发挥对免疫系统的调节作用，同时以全脂奶粉、甘露醇、白砂糖等作为辅料调节口感，使本品有浓郁的牛奶香甜味，具有口感佳，易吸收的特点。本发明的增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片适用于免疫力低下的4岁以上儿童、青少年和成人，是一种高效的增强免疫力的保健食品。

Description

一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片

技术领域

本发明涉及一种保健食品，具体是一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片及其制备方法。

背景技术

免疫力是机体以免疫器官和免疫球蛋白等免疫组分为物质基础，识别和排除抗原性异物的功能，即机体区分自己和非己的功能，从而抵抗疾病、维持机体生理平衡，它能通过人体免疫系统识别人体内正常与不正常的微生物和细胞等，并通过免疫应答排除内、外致病微生物和变性、衰老的细胞，通俗地说免疫力就是免疫系统发挥出来的保护机体的能力。

随着社会竞争的加剧、各种压力的增加、生活习惯的改变以及环境污染越来越严重，各种内在外在的因素导致人体的免疫系统不能正常发挥作用，人体健康受到影响，易导致细菌、病毒、真菌等感染，常患病，且易感体质虚弱、营养不良，表现出精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等症状。研究发现，目前亚健康人群的比例在地域分布和年龄范围上都不断扩大，约70%左右的人群处于健康和患病之间的过渡状态，即“亚健康”状态。

长期处于“亚健康”或免疫力低下的状态下，会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。因此，要维护身体健康，增强免疫力是关键。

发明内容

本发明目的在于提供一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，它具有可以增强人体免疫力的功效，适用于免疫力低下的4岁以上儿童、青少年和成人。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，由以下重量百分比的原料组成：碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10-30%、甘露醇10-30%、白砂糖10-20%、二氧化硅0.5-1.5%、硬脂酸镁0.5-1.0%。

所述的增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，其制备方法包含如下步骤：

（1）按重量百分比取碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10-30%、甘露醇10-30%、白砂糖10-20%、二氧化硅0.5-1.5%、硬脂酸镁0.5-1.0%；

（2）将碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10-30%、经粉碎并过100目筛的甘露醇10-30%、白砂糖10-20%混合10-15分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与二氧化硅0.5-1.5%、硬脂酸镁0.5-1.0%进行混合后，压制成片，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

本发明相对于现有技术的有益效果是：

（1）钙是生命活动必不可少的矿物元素，它与人体免疫系统活力密切相关，且在胸腺中参与T细胞的激活；牛初乳除了含有丰富的优质蛋白质、维生素等，还富含免疫球蛋白等功效组分，能攻击侵入人体的致病原，抑制病菌繁殖，具有促进生长发育、增进免疫调节等保健功能；本发明增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片以碳酸钙和牛初乳相配伍，通过其各自不同的的途径对免疫系统发挥调节作用；

（2）本发明增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片配方中使用全脂奶粉、甘露醇、白砂糖作为辅料调节口感，使产品有浓郁的牛奶香甜味，具有口感佳，易吸收的特点，能更好的满足消费者的需求；同时，本发明产品在剂型选择上采用咀嚼片，易于携带、服用方便；

（3）本发明增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片适用于免疫力低下的4岁以上儿童、青少年和成人用于增强免疫力；

（3）本发明增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片的制备方法严格按照保健食品良好生产规范要求生产，生产过程质量控制合理，食用安全，方便。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。

实施例1 采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

所采用原料（以重量百分比计）：碳酸钙18%，牛初乳粉18%、全脂奶粉22%、甘露醇22%、白砂糖18.8%、二氧化硅0.6%、硬脂酸镁0.6%。

采用如下制备步骤：

（1）按重量百分比取以下原料：碳酸钙18%，牛初乳粉18%、全脂奶粉22%、甘露醇22%、白砂糖18.8%、二氧化硅0.6%、硬脂酸镁0.6%；

（2）将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、白砂糖混合10分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

实施例2 采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

所采用原料（以重量百分比计）：碳酸钙20%，牛初乳粉20%、全脂奶粉13.5%、甘露醇30%、白砂糖15%、二氧化硅0.75%、硬脂酸镁0.75%。

采用如下制备步骤：

（1）按重量百分比取以下原料：碳酸钙20%，牛初乳粉20%、全脂奶粉13.5%、甘露醇30%、白砂糖15%、二氧化硅0.75%、硬脂酸镁0.75%；

（2）将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、白砂糖混合12分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

实施例3 采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

所采用原料（以重量百分比计）：碳酸钙22%，牛初乳粉17%、全脂奶粉30%、甘露醇15%、白砂糖14%、二氧化硅1.2%、硬脂酸镁0.8%。

采用如下制备步骤：

（1）按重量百分比取以下原料：碳酸钙22%，牛初乳粉17%、全脂奶粉30%、甘露醇15%、白砂糖14%、二氧化硅1.2%、硬脂酸镁0.8%；

（2）将上述碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、白砂糖混合15分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

实施例4 采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

所采用原料（以重量百分比计）：碳酸钙25%，牛初乳粉15.5%、全脂奶粉25%、甘露醇20%、白砂糖12%、二氧化硅1.5%、硬脂酸镁1.0%。

采用如下制备步骤：

（1）按重量百分比取以下原料：碳酸钙25%，牛初乳粉15.5%、全脂奶粉25%、甘露醇20%、白砂糖12%、二氧化硅1.5%、硬脂酸镁1.0%；

（2）将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、白砂糖混合13分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

实施例5 采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

所采用原料（以重量百分比计）：碳酸钙30%，牛初乳粉10%、全脂奶粉28%、甘露醇10%、白砂糖20%、二氧化硅1.0%、硬脂酸镁1.0%。

采用如下制备步骤：

（1）按重量百分比取以下原料：碳酸钙30%，牛初乳粉10%、全脂奶粉28%、甘露醇10%、白砂糖20%、二氧化硅1.0%、硬脂酸镁1.0%；

实施例6 采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

所采用原料（以重量百分比计）：碳酸钙28%，牛初乳粉12%、全脂奶粉21%、甘露醇21%、白砂糖16.4%、二氧化硅0.8%、硬脂酸镁0.8%。

采用如下制备步骤：

（1）按重量百分比取以下原料：碳酸钙28%，牛初乳粉12%、全脂奶粉21%、甘露醇21%、白砂糖16.4%、二氧化硅0.8%、硬脂酸镁0.8%；

（2）将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、白砂糖混合14分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

实施例7 采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

所采用原料（以重量百分比计）：碳酸钙35%，牛初乳粉16%、全脂奶粉10%、甘露醇28%、白砂糖10%、二氧化硅0.5%、硬脂酸镁0.5%。

采用如下制备步骤：

（1）按重量百分比取以下原料：碳酸钙35%，牛初乳粉16%、全脂奶粉10%、甘露醇28%、白砂糖10%、二氧化硅0.5%、硬脂酸镁0.5%；

（2）将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、白砂糖混合11分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。

实验例以下通过试验来进一步说明本发明：以本发明实施例4所制备的牛初乳钙咀嚼片进行增强免疫力功能评价试验。

1 材料和方法。

1. 1 样品：本发明实施例4所制备的牛初乳钙咀嚼片，为浅黄色咀嚼片，置阴凉干燥处保存。人体口服推荐剂量为1.2g/片×4片/次×1次/天，适宜人群为免疫力低下的4 岁及以上儿童、青少年及成人。以成人每人60kg 体重计算，折合剂量0.08g/kg/天。片剂粉碎后备用。奶粉对照组采用厂家提供的全脂奶粉。

1.2 实验动物与分组：河南省实验动物中心（实验动物生产许可证号为SCXK（豫）2005-0001）提供的清洁级昆明种雄性小鼠250 只，体重18g~22g。饲料由同一单位提供。每50 只小鼠为一大组，共五大组。免疫I 组，进行碳廓清实验；免疫II组，进行脏体比值测定、半数溶血值(HC₅₀) 的测定和抗体生成细胞数的测定；免疫III组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定；免疫IV组，进行迟发型变态反应实验；免疫V组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。每大组50只小鼠按体重随机分为5小组，即溶剂对照组和奶粉对照组、低、中、高剂量组。

1.3 实验环境条件：温度22℃~24℃，湿度52%~58%。实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。

1. 4 剂量选择及样品处理：据人体口服推荐量，设本试验牛初乳钙咀嚼片低、中、高剂量分别为0.4g/kg.bw、0.8g/kg.bw、2 .4g/kg.bw (分别相当于人体推荐量的5、10 、30 倍)，受试液配制时分别取本试验牛初乳钙咀嚼片4.00g、8.00g、24.00g加蒸馏水至200ml ，按0.2ml/10g.bw体积给小鼠灌胃，每天一次，连续30 天。奶粉对照组参照样品中剂量设置为0.8g/kg.bw，受试液配制时取全脂奶粉8.00g 加蒸馏水至200ml，按0.2ml/10g.bw体积给小鼠灌胃。溶剂对照组灌胃予以等体积的蒸馏水。

1.5 主要仪器与试剂：动物台秤、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、722 分光光度计、恒温水浴箱、酶标仪、显微镜等。无菌手术器械、游标卡尺、微量注射器、细胞计数器、24 孔和96 孔平底细胞培养板，96 孔U 型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200 目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。

绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、Hank's 液(pH7.2-7.4)、RPMI1640 培养液、小牛血清、青链霉素、ConA、1% 冰醋酸， lmol/L的HCL 溶液，酸性异丙醇(96mL 异丙醇加1mol/L 的HCL溶液4mL) 、MTT、PBS 缓冲液(Ph7.2-7.4)、补体、SA 缓冲液、琼脂糖、都氏试剂、YAC-1 细胞、乳酸纳、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCL 缓冲液、1% 的NP40 、印度墨汁、0.1 % 的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Giemsa 染液等。

1.6 实验方法。

1. 6.1 脏器/体重比值测定：称重后处死小鼠，取出脾脏和胸腺，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。

1.6.2 迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)：小鼠腹腔注射2%(v/v)SRBC (0.2ml/每鼠)致敏后4天，测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20%(v/v) SRBC(20ul/每鼠)，于注射后24h 测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。以攻击前后足距厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH 的程度。

1.6.3 ConA 诱导的小鼠淋巴细胞转化实验（MTT 法）：无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's 液的小平皿中，制成细胞悬液，经200 目筛网过滤。用Hank's 液洗2次，每次离心10分钟(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL 完全培养液中，计数活细胞数，用RPMI1640 培养液调整细胞浓度为3×10⁶个/mL。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔lmL，在其中一孔加75μL ConA液(相当于7.5μg/mL) ，另一孔作为对照，置5% 二氧化碳，37??C 培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入不含小牛血清的RPMI1640 培养液，同时加入MTT(5mg/mL) 50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入lmL 酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3个平行孔，用酶标仪，以570nm 波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。

1.6.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)：取羊血，用生理盐水洗涤3 次，每次离心(2000 r/min) 10min ，将压积SRBC用生理盐水配成2%(v/v) 的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2ml。将免疫后5天的小鼠处死，取脾，轻轻磨碎，用Hanks 液制成细胞悬液， 200目筛网过滤，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮在5ml Hanks 液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5×10⁶个/mL。将表层培养基加热溶解后与等量的PH7.4、2倍浓度的Hanks 液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加入用SA液配制的10%SRBC50ul(v/v)、20ul 脾细胞悬液(5×l0⁶个/mL)，迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片水平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA 液稀释的补体(1：10)加入到玻片凹槽内，继续温育1.5h 后计数溶血空斑数。

1.6.5半数溶血值(HC₅₀) 的测定：取羊血，用生理盐水洗涤3 次，每只鼠经腹腔注射2%(v/v，用生理盐水配制)压积RBC0.2mL 进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h ，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000rpm离心10min，收集血清。用SA 缓冲液将血清稀释为200倍，取l mL置试管内，依次加入10%(v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBC0.5mL。补体lmL(用SA缓冲液按1：10稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37??C 恒温水浴中保温30min后，冰浴终止反应。2000rpm离心10min，取上清1mL，加都氏试剂3mL。同时取10%(v/v，用SA 缓冲液配制)压积SRBC0.25mL，加都氏试剂至4mL于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示，按下式计算：

半数溶血值(HC₅₀)=样品光密度值/SRBC 半数溶血时的光密度值×稀释倍数

1.6.6 小鼠碳廓清实验：小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每l0g体重注射0.l mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min，分别从内眦静脉丛取血20ul，加入到2ml 0.1 %Na₂CO₃ 溶液中，摇匀。以0.1% Na₂CO₃溶液作空白对照，用722 型分光光度计在600nm波长处比色测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、牌，称重，计算吞噬指数a。

1.6.7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)：小鼠腹腔注射20% (v/v，用生理盐水配制)的压积鸡红细胞(2000rpm，10min)悬液l mL，间隔30min，颈椎脱臼处死，仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板l min。取腹腔巨噬细胞洗液lmL，滴于载破片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，置37??C 孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗以除去未贴片细胞。晾干，以甲醇：丙酮(1:1) 固定，4%(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色，用蒸馏水漂洗晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：

吞噬率%=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100

吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

1.6.8 NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶测定法)：受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank's 液洗3 次，弃上清将细胞浆弹起，加入0.5ml 灭菌水20 秒，裂解红细胞后再加入0.5m1 2倍Hank’s液及8ml Hank’s液，1000rpm 离心10min ，用1mL 含10% 小牛血清的RPMI1640 完全培养液重悬，用台酚兰染色计数(活细胞数应在95%以上)，调整细胞浓度为2×10⁷个/mL 此为效应细胞，取传代后24h 生长良好的YAC-l 细胞用RPMI1640 完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵ 个/ml 此为靶细胞；取靶细胞和效应细胞各100ul(效靶比50：1) ，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100ul，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5%Triton 各100ul；上述各项均设三个平行孔，于37??C，5% 二氧化碳培养箱中培养4h，然后将96 孔培养板以1500r/min 离心5min，每孔吸取上清100ul置平底96 孔培养板中，同时加入LDH 基质液100ul，根据室温反应3-10min，每孔加入1mol/L 的HC1 30ul，在酶标仪490nm 处测定光密度(OD)。

NK细胞活性=[(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)]×100%

1. 7 实验数据统计：用Exce12003、Spss11.0 软件进行统计分析。用Spssl1.0 软件分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett 法进行各剂量组与奶粉对照组、各剂量组与溶剂对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane 'sT2 检验进行两两比较。

2 结果

2.1 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠体重的影响：见表1-5。经方差齐性检验，免疫I 组小鼠体重增长值方差不齐，采用秩和检验统计，各组小鼠实验初、实验中期、实验末体重及其它组小鼠实验期间体重增长方差齐，采用单因素方差分析，结果显示，各组之间上述指标总体比较无显著性差异(P>0.05)。

表l 免疫I 组小鼠体重(

±s，g)

组别

剂量(g/kg.bw)

动物数(只)

初始体重

中期体重

末期体重

增重

溶剂对照

0.0

10

20.3±1.4

32.7±3.1

36.3±5.6

16.0±5.4

奶粉对照

0.8

10

20.3±1.3

32.4±3.9

37.0±2.7

16.8±2.7

低剂量

0.4

10

20.3±1.3

32.5±2.7

35.5±4.0

15.2±3.6

中剂量

0.8

10

20.4±1.4

29.6±4.0

36.1±3.4

15.7 ±3.3

高剂量

2.4

10

20.4±1.3

30.7±2.7

35.2±3.1

14.9±2.6

表2 免疫

组小鼠体重(

±s，g)

组别

剂量(g/kg.bw)

动物数(只)

初始体重

中期体重

末期体重

增重

溶剂对照

0.0

10

19.7±1.5

32.0±5.5

35.8±5.7

16.0±5.3

奶粉对照

0.8

10

19.7±1.3

30.4±3.7

34.0±4.2

14.4±4.5

低剂量

0.4

10

19.7±1.3

32.2±3.1

35.4±4.1

15.7±3.6

中剂量

0.8

10

19.8±1.4

30.7±2.3

34.4±2.2

14.6 ±3.0

高剂量

2.4

10

19.8±1.4

30.9±2.6

35.6±2.8

15.8±2.0

表3 免疫

Figure 2011104225180100002DEST_PATH_IMAGE003

组小鼠体重(

±s，g)

组别

剂量(g/kg.bw)

动物数(只)

初始体重

中期体重

末期体重

增重

溶剂对照

0.0

10

20.0±1.6

31.1±2.5

35.1±3.0

15.1±3.2

奶粉对照

0.8

10

20.0±1.6

30.3±3.5

35.5±4.5

15.6±4.1

低剂量

0.4

10

20.0±1.5

32.2±3.4

36.2±3.4

16.3±2.7

中剂量

0.8

10

20.1±1.6

32.4±5.0

34.1±3.5

14.1±2.8

高剂量

2.4

10

20.1±1.5

32.2±3.1

36.8±4.4

16.7±4.9

表4 免疫

Figure 2011104225180100002DEST_PATH_IMAGE004

组小鼠体重(

±s，g)

组别

剂量(g/kg.bw)

动物数(只)

初始体重

中期体重

末期体重

增重

溶剂对照

0.0

10

20.3±1.5

30.6±2.2

36.0±3.2

15.7±3.8

奶粉对照

0.8

10

20.3±1.4

29.8±2.8

36.1±3.3

15.8±3.3

低剂量

0.4

10

20.3±1.3

29.2±1.2

36.3±3.1

16.0±2.7

中剂量

0.8

10

20.4±1.4

30.5±2.9

35.4±3.4

15.0±4.0

高剂量

2.4

10

20.4±1.3

30.0±2.5

36.3±3.9

15.8±3.1

表5 免疫组小鼠体重(

±s，g)

组别

剂量(g/kg.bw)

动物数(只)

初始体重

中期体重

末期体重

增重

溶剂对照

0.0

10

20.2±1.5

30.6±2.5

35.9±3.0

15.7±3.0

奶粉对照

0.8

10

20.2±1.4

31.1±2.7

34.7±2.8

14.6±3.0

低剂量

0.4

10

20.2±1.3

31.5±3.0

35.7±3.6

15.5±4.1

中剂量

0.8

10

20.3±1.4

31.3±3.4

35.9±3.4

15.6±3.2

高剂量

2.4

10

20.3±1.3

30.1±3.2

35.6±3.4

15.2±3.4

2.2 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响：见表5。经方差齐性检验，各组小鼠胸腺/体重、脾脏/体重方差齐，采用单因素方差分析，结果显示，两项指标各组总体比较无显著性差异(P>0.05) 。

表5 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响(

±s)

Figure 2011104225180100002DEST_PATH_IMAGE007

2.3 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠细胞免疫功能的影响

2.3.1 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠迟发型变态反应(DTH) 的影响：见表6。经方差齐性检验，各组小鼠足跖肿胀度方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有显著性差异(P=0.004)。进一步用Dunnett 法进行各剂量组与奶粉对照组、各剂量组与溶剂对照组均数间的两两比较，结果显示中、高剂量组小鼠足跖肿胀度均显著高于奶粉对照组、溶剂对照组(P <0.05)。

表6 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响(

±s)

Figure 2011104225180100002DEST_PATH_IMAGE009

2.3.2 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响：见表7。经方差齐性检验，各组小鼠淋巴细胞增殖能力方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较无显著性差异(P>0.05) 。

表7 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响(

±s)

2.4本试验牛初乳钙咀嚼片对体液免疫的影响

2.4.1 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠抗体生成细胞数的影响：见表8。经方差齐性检验，各组小鼠溶血空斑数方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有显著性差异(P=0.005) 。进一步用Dunnett法进行各剂量组与奶粉对照组、各剂量组与溶剂对照组均数间的两两比较，结果显示中、高剂量组小鼠溶血空斑数显著高于奶粉对照组、溶剂对照组(P<0.05或P<0.0l)。

表8 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠抗体生成细胞数的影响(

±s)

2.4.2 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠半数溶血值(HC₅₀) 的影响：经方差齐性检验，各组小鼠半数溶血值方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较无显著性差异(P>0.05，见表9)。

表9 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响(

±s)

Figure 2011104225180100002DEST_PATH_IMAGE013

2.5 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

2.5.1 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响：见表10。经方差齐性检验，各组小鼠吞噬指数方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有显著性差异(P=0.012) 。进一步用Dunnett 法进行各剂量组与奶粉对照组、各剂量组与溶剂对照组均数间的两两比较，结果显示高剂量组小鼠碳廓清能力显著高于奶粉对照组和溶剂对照组(P<0.05或P<0.0l) 。

表10 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响(

±s)

Figure 2011104225180100002DEST_PATH_IMAGE014

2.5.2 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响：见表11。经方差齐性检验，各组小鼠吞噬率平方根反正弦转换值、吞噬指数方差齐，单因素方差分析显示，各组之间上述两项指标总体比较无显著性差异(P>0.05) 。

表11 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率、吞噬指数的影响(±s)

Figure 2011104225180100002DEST_PATH_IMAGE016

2.6 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠NK细胞活性的影响：经方差齐性检验，各组小鼠NK 细胞活性平方根反正弦转换值方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有显著性差异(P=0.000)。进一步用Dunnett 法进行各剂量组与奶粉对照组、各剂量组与溶剂对照组均数间的两两比较，结果显示中、高剂量组小鼠NK细胞活性显著高于奶粉对照组和溶剂对照组(P<0.00l，见表12) 。

表12 本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠NK 细胞活性的影响(±s)

Figure 2011104225180100002DEST_PATH_IMAGE017

3 结论

经口给予小鼠0.4g/kg.bw、0.8glkg.bw、2.4g/kg.bw剂量的本试验牛初乳钙咀嚼片30天，与溶剂对照组和奶粉对照组相比，0.8g/kg.bw、2.4g/kg.bw剂量能显著提高小鼠的迟发型变态反应、抗体生成细胞数和NK 细胞活性，2.4g/kg.bw剂量能显著小鼠的碳廓清能力。各剂量对小鼠体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、半数溶血值、小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力及ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力均无显著影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中判定标准，提示本试验牛初乳钙咀嚼片具有增强免疫力作用。

Claims

1.一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，其特征在于：由以下重量百分比的原料组成：碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10-30%、甘露醇10-30%、白砂糖10-20%、二氧化硅0.5-1.5%、硬脂酸镁0.5-1.0%。

2.根据权利要求1所述的增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，其特征在于其制备方法如下：