CN106728083A - 酸枣仁茯苓共发酵产物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种酸枣仁茯苓共发酵产物的制备方法，步骤包括：1)制备茯苓种子液培养基；2)培养茯苓种子液；3)取酸枣仁粉末置于摇瓶中，加入蒸馏水，混匀，灭菌，制得酸枣仁培养基；4)将茯苓种子液按照酸枣仁培养基质量的2～10％接种于酸枣仁培养基中，放入摇床中，于培养温度22～34℃，摇床转速120～240rpm，避光发酵7～21天；5)将发酵产物，冷冻干燥，粉碎过筛，即得酸枣仁‑茯苓共发酵产物。酸枣仁‑茯苓共发酵产物进一步加工成共发酵产物提取液、共发酵产物提取物。经实验证明：酸枣仁‑茯苓共发酵产物提取物具有改善睡眠的功效。酸枣仁‑茯苓共发酵产物可制备成用于治疗失眠的药品、改善睡眠的保健食品或功能性食品。

Description

酸枣仁茯苓共发酵产物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药食两用中药发酵产物，特别涉及酸枣仁和茯苓共发酵产物，具体属于一种酸枣仁-茯苓共发酵产物及其制备方法和应用。

背景技术

酸枣仁为鼠李科枣属植物酸枣Ziziphus jujuba Spinosa(Bunge)Huex H.F.Chou的干燥种子，味甘，性平，有宁心安神、养肝、敛汗生津之效，始载于《神农本草经》，在治疗失眠中药排行榜上位列第一，使用频率高达为67.3％，远远超过其他常用安神类中药。目前市场上销售的酸枣仁产品，大多数是直接以酸枣仁为原料，或者利用酸枣仁粗提物为原料加工成合适剂型的粗加工产品；也没有酸枣仁微生物共发酵相关产品。尽管酸枣仁具有较好的改善睡眠活性，但是缺少高附加值的产品，其丰富的资源没有得到充分利用。

茯苓(Poria)为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，是中医药最常用的药用真菌之一。《神农本草经》将茯苓列为上品，言其“久服，安魂养神，不饥延年”，说明茯苓具有较好的益智、改善记忆、宁心安神的作用。茯苓作为我国传统中药，是多种方剂及中成药的原料，有“十药九茯苓”之说。目前茯苓作为中华九大“仙草”之一的药用真菌，其固体发酵或者液体深层发酵研究均已十分成熟，但将其作为工程菌用于中药发酵产品开发的报道几乎未见。

中医药对药用真菌的使用可追溯到2500年前，其代谢产物在疾病治疗、预防及抑制或保健方面体现出尤为重要的作用。药用真菌本身具有强大而丰富的酶系统，可以担负中药发酵工程菌的角色。利用药用真菌对中药进行发酵具有多方面的优点：①药用真菌与中药共发酵可以提高已知成分的相对含量，增强中药的疗效；②药用真菌与中药共发酵可以产生新的活性成分，为中药活性成分的结构修饰提供新的途径；③药用真菌与中药共发酵可以对中药起到减毒增效的作用；④药用真菌与中药共发酵可以有效的提高中药资源的利用率；⑤药用真菌与中药共发酵反应在常温、常压等较为温和的条件下进行，能最大限度地保护中药活性成分。这些均体现了中药发酵的技术优势。

酸枣仁、茯苓是我国卫生与计划生育委员会公布的既是食品又是中药材物质，目前两者均是开发改善睡眠药物、保健食品、功能食品的热点研究对象。本发明借鉴现代生物发酵技术，以我国具有资源优势的药食同源药材酸枣仁为培养基质，利用药用真菌茯苓为工程菌，对酸枣仁进行微生物发酵。在发酵过程中，茯苓菌株利用酸枣仁的非药用部位(淀粉、蛋白、脂肪油等)作为其生长繁殖所需的营养要素，产生茯苓三萜、茯苓多糖等有效成分；同时茯苓对酸枣仁非药用部位进行代谢利用，在一定程度上减少酸枣仁非药用部位，从而减少酸枣仁的服用量；此外，茯苓菌株中丰富的酶系统，可以催化酸枣仁中化学成分发生生物转化反应，产生新的活性成分，从而提高酸枣仁改善睡眠作用。通过酸枣仁与茯苓的配伍和茯苓的生物发酵作用，既强化了酸枣仁、茯苓各自的宁心安神效果，又起到了减少服用量的作用，可将酸枣仁-茯苓共发酵产物开发成高附加值的中药新药、中药保健食品、中药功能食品等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种工艺简单、绿色安全的酸枣仁-茯苓共发酵产物的制备方法；本发明的另一目的是提供酸枣仁-茯苓共发酵产物在制备治疗失眠药品、改善睡眠保健食品或功能性食品中的应用。

为实现上述目的，本发明提供的一种酸枣仁-茯苓共发酵产物的制备方法，包括以下步骤：

1)称取葡萄糖、磷酸氢二钾、酵母膏、玉米粉，装入摇瓶中，加入蒸馏水摇匀，纱布及牛皮纸封口，于蒸汽灭菌器中121℃,灭菌20min，即得茯苓种子液培养基；

2)将步骤1)制备好的茯苓种子液培养基中接入茯苓菌丝，用纱布及牛皮纸封口，放入摇床中，于22～34℃，120～200rpm条件下，摇瓶避光振荡培养3～5天后，即得茯苓种子液；

3)取酸枣仁，粉碎，过筛；称取酸枣仁粉末置于摇瓶中，加入蒸馏水，混匀；瓶口用纱布及牛皮纸封口，在121℃条件下灭菌20min后，即得酸枣仁培养基；

4)将步骤2)茯苓种子液按照酸枣仁培养基质量的2～10％接种量，转接于步骤3)所得酸枣仁培养基中；将已接种茯苓的酸枣仁培养基放入摇床中，于培养温度22～34℃，摇床转速120～240rpm，避光发酵7～21天；

5)将步骤4)所得发酵产物，冷冻干燥，粉碎过筛，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物。

步骤1)中所述茯苓种子液培养中葡萄糖、磷酸氢二钾、酵母浸膏、玉米粉、蒸馏水的质量比为(0.25～1.5)︰(0.125～0.375)︰(0.1～0.4)︰(0.25～0.75)︰(25～75)。

步骤3)中所述酸枣仁粉碎后过24目～100目筛；所述酸枣仁培养基中酸枣仁粉末、蒸馏水加入量质量比为(0.5～1.5)︰(3～7)；酸枣仁培养基的PH值为5～7。

步骤5)中所述冷冻干燥条件：冻结温度为-10～-30℃，冷阱温度为-29～-31℃，真空度为10～20Pa，冻干最终温度为40～80℃；所述酸枣仁-茯苓共发酵产物粉碎后过24目～100目筛。

本发明同时对酸枣仁-茯苓共发酵产物改善睡眠作用进行了考察。结果表明，酸枣仁-茯苓共发酵产物均能显著抑制小鼠的自主活动，增加阈下剂量戊巴比妥钠引起的小鼠入睡率，缩短戊巴比妥钠阈上剂量小鼠进入睡潜伏期的时间，表明酸枣仁-茯苓共发酵产物具有显著的镇静催眠作用，可以根据使用需要应用于不同的药品、保健食品和功能食品中。

本发明所述的酸枣仁-茯苓共发酵产物可以被制成各种剂型产品，如胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、分散片、袋茶、口服液、保健饮料、功能性饼干等。

本发明制备的酸枣叶提取物具有如下优点和效果：

(1)本发明选取在我国华北地区具有丰富野生植物资源的酸枣仁为研究对象，利用现代发酵技术对其深入开发，丰富了酸枣仁的应用范围，实现了药用植物资源的综合利用。

(2)本发明选取中医临床常用药用真菌茯苓为发酵工程菌，利用液体深层发酵技术，通过响应曲面发优化了酸枣仁-茯苓的发酵工艺，相较于茯苓传统固体培养方法，极大地减少了茯苓培养时间，在原有茯苓药用功效基础上拓展了茯苓的在中药生物工程领域的用途。

(3)本发明发酵工艺操作简便，发酵周期短、不易污染、能耗成本较低，安全可靠，绿色环保，适合于大规模工业化生产。

具体实施方式

实施例1

(1)酸枣仁-茯苓共发酵产物制备工艺的单因素考察

发酵温度的考察。制备酸枣仁培养基，无菌环境下接种茯苓种子液，接种量1ml，摇床转速150r/min，分别于22℃、25℃、28℃、31℃、34℃条件下避光培养5天。利用可见分光光度法测定共发酵产物中总皂苷与总多糖含量。综合考虑不同温度条件下总皂苷与总多糖含量，选取25～31℃为最佳培养温度。

摇瓶转速的考察。制备酸枣仁培养基，无菌环境下接种茯苓种子液，接种量1ml，温度28℃，分别在90r/min、120r/min、150r/min、180r/min、210r/min条件下避光培养5天。利用可见分光光度法测定共发酵产物中总皂苷与总多糖含量。综合考虑不同转速条件下总皂苷与总多糖含量，选取120～180r/min为最佳摇床转速。

培养基初始PH值的考察。配制酸枣仁培养基，用10％的盐酸将酸枣仁液体液体培养基分别调PH值至1、2、3、4、5、6、7、8，高压蒸汽121℃灭菌20min后，无菌环境下接种茯苓种子液，接种量1ml，温度28℃，摇床转速150r/min条件下避光培养5天。利用可见分光光度法测定共发酵产物中总皂苷与总多糖含量。综合考虑不同PH值条件下总皂苷与总多糖含量，选取PH值5～7为最佳PH值条件。

接种量的考察。制备酸枣仁培养基，无菌环境下接种茯苓种子液，接种量分别为酸枣仁培养基质量的0.5％(0.5ml)，2％(1ml)，4％(2ml)，6％(3ml)，8％(4ml)，10％(5ml)，温度28℃，摇床转速150r/min条件下避光培养5天。利用可见分光光度法测定共发酵产物中总皂苷与总多糖含量。综合考虑不同接种量条件下总皂苷与总多糖含量，选取0.5％～4％为最佳接种量条件。

料液比的考察。分别按照料液比为2.5g/50ml、5.0g/50ml、7.5g/50ml、10.0g/50ml、12.5g/50ml、15.0g/50ml制备酸枣仁培养基，高压蒸汽121℃灭菌20min后，无菌环境下接种茯苓种子液，接种量1ml，温度28℃，摇床转速150r/min条件下避光培养5天。利用可见分光光度法测定共发酵产物中总皂苷与总多糖含量。综合考虑不同料液比条件下总皂苷与总多糖含量，选取7.5～12.5g/50ml为最佳料液比条件。

发酵时间的考察。制备酸枣仁培养基，无菌环境下接种茯苓种子液，接种量1ml，温度28℃，摇床转速150r/min条件下，分别避光培养1至28天。利用可见分光光度法测定共发酵产物中总皂苷与总多糖含量。综合考虑不同发酵时间条件下总皂苷与总多糖含量，选取12～16天为最佳发酵时间。

茯苓种子液菌龄的考察。制备酸枣仁培养基，无菌环境下分别接种培养1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天的茯苓种子，接种量1ml，温度28℃，摇床转速150r/min条件下避光培养5天(每组设置3个平行试验)。利用可见分光光度法测定共发酵产物中总皂苷与总多糖含量。综合考虑不同茯苓种子液菌龄条件下总皂苷与总多糖含量，选取3～5天为最佳茯苓种子液菌龄条件。

(2)茯苓～酸枣仁共发酵工艺的响应曲面法优化

对上述各单因素条件下共发酵产物总皂苷和总多糖含量进行t-检验，表明影响茯苓-酸枣仁共发酵的主效应因素为发酵温度、发酵时间、pH值。根据Box-Behnken的中心组合设计原理，利用Design Expert 8.0.6软件设计3因素响应面设计，以发酵温度、发酵时间、pH值等3个因素为自变量，进一步优化茯苓-酸枣仁共发酵工艺。按照软件设计出17组不同因素水平进行试验后，测定共发酵产物总皂苷和总多糖含量，结果见表1。

表1响应曲面面设计及结果

在Design expert软件中，进一步对模型进行典型性分析，设置皂苷含量与多糖含量为最大值，软件自动预测的最佳发酵条件，预测在此条件下酸枣仁-茯苓共发酵共发酵产物中皂苷含量为7.60362mg/g，多糖含量为120.538mg/g。综合考虑，选用发酵条件为温度25～31℃，发酵时间为12～16天，PH为5～7为最佳发酵条件。

实施例2

称取葡萄糖1g、磷酸氢二钾0.375g、酵母膏0.25g、玉米粉0.5g，装入250ml摇瓶中，加入50ml蒸馏水摇匀，纱布及牛皮纸封口，于蒸汽灭菌器中121℃灭菌20min，即得茯苓种子液培养基。制作好的茯苓种子液培养基中接入茯苓菌丝，纱布封口，放入摇床中，28℃，150rpm摇瓶振荡培养，4天后即得茯苓种子液。取酸枣仁，粉碎，过筛。称取酸枣仁粉末置于摇瓶中，加入蒸馏水，酸枣仁粉末与蒸馏水质量比为1:5，混匀，调整Ph值为6。瓶口用纱布及报纸封口，在121℃条件下灭菌20min后，即得酸枣仁培养基。将茯苓种子液按照2％接种量转接于酸枣仁培养基中，放入摇床中，于培养温度28℃，摇床转速150rpm，发酵周期14天，冷冻干燥，粉碎过60目筛，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物。

实施例3

称取葡萄糖1.2g、磷酸氢二钾0.125g、酵母膏0.3g、玉米粉0.25g，装入250ml摇瓶中，加入50ml蒸馏水摇匀，纱布及牛皮纸封口，于蒸汽灭菌器中121℃灭菌20min，即得茯苓种子液培养基。制作好的茯苓种子液培养基中接入茯苓菌丝，纱布封口，放入摇床中，22℃，180rpm摇瓶振荡培养，3天后即得茯苓种子液。取酸枣仁，粉碎，过筛。称取酸枣仁粉末置于摇瓶中，加入蒸馏水，酸枣仁粉末与蒸馏水质量比为2:5，混匀，调整Ph值为7。瓶口用纱布及报纸封口，在121℃条件下灭菌20min后，即得酸枣仁培养基。将茯苓种子液按照8％接种量转接于酸枣仁培养基中，放入摇床中，于培养温度22℃，摇床转速180rpm，发酵周期7天，冷冻干燥，粉碎过60目筛，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物。

实施例4

称取葡萄糖0.8g、磷酸氢二钾0.5g、酵母膏0.35g、玉米粉0.75g，装入250ml摇瓶中，加入50ml蒸馏水摇匀，纱布及牛皮纸封口，于蒸汽灭菌器中121℃灭菌20min，即得茯苓种子液培养基。制作好的茯苓种子液培养基中接入茯苓菌丝，纱布封口，放入摇床中，25℃，120rpm摇瓶振荡培养，4天后即得茯苓种子液。取酸枣仁，粉碎，过筛。称取酸枣仁粉末置于摇瓶中，加入蒸馏水，酸枣仁粉末与蒸馏水质量比为1:3，混匀，调整Ph值为5。瓶口用纱布及报纸封口，在121℃条件下灭菌20min后，即得酸枣仁培养基。将茯苓种子液按照4％接种量转接于酸枣仁培养基中，放入摇床中，于培养温度34℃，摇床转速120rpm，发酵周期21天，冷冻干燥，粉碎过60目筛，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物。

实施例5

称取葡萄糖1.5g、磷酸氢二钾0.5g、酵母膏0.4g、玉米粉0.5g，装入250ml摇瓶中，加入50ml蒸馏水摇匀，纱布及牛皮纸封口，于蒸汽灭菌器中121℃灭菌20min，即得茯苓种子液培养基。制作好的茯苓种子液培养基中接入茯苓菌丝，纱布封口，放入摇床中，28℃，150rpm摇瓶振荡培养，4天后即得茯苓种子液。取酸枣仁，粉碎，过筛。称取酸枣仁粉末置于摇瓶中，加入蒸馏水，酸枣仁粉末与蒸馏水质量比为1:10，混匀，调整Ph值为6。瓶口用纱布封口，在121℃条件下灭菌20min后，即得酸枣仁培养基。将茯苓种子液按照6％接种量转接于酸枣仁培养基中，放入摇床中，于培养温度25℃，摇床转速150rpm，发酵周期7天，冷冻干燥，粉碎过60目筛，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物。

实施例6酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物制备

称取实施例2酸枣仁-茯苓共发酵产物，置于40～60℃烘箱内干燥，干燥产物过50～80目筛。取酸枣仁-茯苓共发酵产物粉末，置于圆底烧瓶中，加8倍量蒸馏水，浸泡30min，加热回流1h，用8层纱布过滤，滤渣再加8倍量蒸馏水回流1h，滤过，合并滤液。浓缩至1.125g/ml生药浓度，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物提取液；提取液浓缩至干，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物，可用于以下实验。

实施例7酸枣仁-茯苓共发酵产物胶囊制备方法

取实施例6制备的酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物100g，微粉硅胶适量，混合均匀，采用胶囊制备工艺制备，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物胶囊。

实施例8酸枣仁-茯苓共发酵产物滴丸制备方法

取实施例6制备的酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物100g，加到200g熔融的聚乙二醇6000中，采用滴丸制备工艺制备，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物滴丸。

实施例9酸枣仁-茯苓共发酵产物片剂制备方法

取实施例6制备的酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物100g，糊精200g，混合均匀，制粒，过筛，干燥，即得酸枣仁-茯苓发酵提取物的颗粒剂；或将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物片剂。

实施例10酸枣仁-茯苓共发酵产物分散片制备方法

取实施例6制备的酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物100g，微晶纤维素120g，羧甲基纤维素钠30g，微粉硅胶1g，混合均匀，压片，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物分散片。

实施例11酸枣仁-茯苓共发酵产物软胶囊制备方法

取实施例6制备的酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物100g，植物油250g，混匀，用明胶作囊壳材料，压制成软胶囊，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物软胶囊。

实施例12酸枣仁-茯苓共发酵产物保健饮料的制备方法

(1)按实施例6中制备得到酸枣仁-茯苓共发酵产物提取液；

(2)调配：为了使口感更为甘甜可口，进行调配，配方为：取酸枣仁-茯苓共发酵产物提取液(浓度为0.25g/mL)为原料1000mL，再以其总体积计，加入白砂糖：4.5％；柠檬酸：0.05％；木糖醇：2.0％；β～环状糊精：2.0％；麦芽糊精：1.5％；蜂蜜：1.5％；混合均匀后经过灌装，灭菌，即得酸枣仁-茯苓共发酵保健饮料。

实施例13酸枣仁-茯苓共发酵饼干的制备方法

将30g绵白糖、6g全脂奶粉、12.5g黄油(加热融化)、1.5g食盐及酸枣仁-茯苓共发酵产物20g混合揽拌，揽拌后混合物温度降至25℃，再加入3g小苏打混合。将称量好的75g低筋面粉(过筛)、9g玉米淀粉与预调的配料混合后，放入和面机进行调制面团，面团成型后静置5min。辊印面团，使面胚成型.最后送入烘箱设以面火170℃、底火150℃，烘烤9～13min。烘烤完成后，冷却饼干，即得酸枣仁-茯苓共发酵饼干成品。

实施例14酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物改善睡眠活性研究

(1)对自主活动的影响

取小鼠75只，随机分成5组，每组15只。空白组给予蒸馏水。酸枣仁提取物组地西泮组，共发酵提取物组按表2中的剂量灌胃给药。由于酸枣仁经茯苓发酵后，其质量平均会减少到原来的90％，所以共发酵提取物低、中剂量组选择给予5.625g/kg，11.25g/kg。给药体积为0.2ml/10g，每天给药1次，连续给药7d，末次给药30min后，将小鼠放入自主活动仪的中心区域，待小鼠适应2min后，按旷场法记录5min内小鼠穿过的格数。

表2酸枣仁提取物、酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物对小鼠自主活动的影响

与空白组比较，﹡P＜0.05

与空白组比较，6.25g/kg酸枣仁提取物组、5.625g/kg共发酵提取物组和地西泮组小鼠穿过的格数明显缩短(P＜0.05)，活动能力减弱，而11.25g/kg共发酵提取物组没有显著变化，结果表明酸枣仁茯苓共发酵产物对小鼠有一定的镇静作用，且服用量较酸枣仁明显减少。

(2)阈上剂量戊巴比妥钠协同作用比较

取小鼠75只，随机分成5组，每组15只。空白组给予蒸馏水。酸枣仁提取物组，地西泮组，共发酵提取物组按表3中的剂量灌胃给药。。由于酸枣仁经茯苓共发酵后，其质量平均会减少到原来的90％，所以共发酵提取物选择给予5.625g/kg，11.25g/kg。给药体积为0.2ml/10g，每天给药1次，连续给药7d，各组小鼠末次给药30min后，腹腔注射戊巴比妥钠55mg/kg。提起小鼠尾部，将小鼠腹部朝上放在310K的热板上，观察并记录小鼠的睡眠潜伏期及睡眠时间。结果见表3。

表3酸枣仁提取物、酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物对小鼠潜伏期与睡眠时间影响

与空白组比较，﹡P＜0.05，﹡﹡P＜0.01

与空白组比较，6.25g/kg酸枣仁提取物组和5.625g/kg、11.25g/kg共发酵提取物组可以显著缩短睡眠潜伏期(P＜0.05)。同时提示酸枣仁-茯苓共发酵产物在相同改善睡眠效果条件下，可以明显减少口服剂量。

(3)阈下剂量戊巴比妥钠协同作用比较

取小鼠75只，随机分成5组，每组15只。空白组给予蒸馏水。酸枣仁提取物组，地西泮组，共发酵提取物组按表4中的剂量灌胃给药。由于酸枣仁经茯苓共发酵后，其质量平均会减少到原来的90％，所以共发酵提取物选择给予5.625g/kg，11.25g/kg。给药体积为0.2ml/10g，每天给药1次，连续给药7d，各组小鼠末次给药30min后，腹腔注射戊巴比妥钠25mg/kg。提起小鼠尾部，将小鼠腹部朝上放在310K的热板上，观察并记录小鼠的睡眠潜伏期及睡眠时间。结果见表4。

表4酸枣仁提取物、酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物对小鼠入睡率影响

与空白组比较，^**P＜0.01

与空白组比较，6.25g/kg酸枣仁提取物组和5.625g/kg共发酵提取物可以显著提高小鼠入睡率。同时提示酸枣仁-茯苓共发酵产物提取物在改善睡眠效果相同的条件下，可以明显减少口服剂量。

Claims (8)

1.一种酸枣仁-茯苓共发酵产物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)称取葡萄糖、磷酸氢二钾、酵母膏、玉米粉，装入摇瓶中，加入蒸馏水摇匀，用纱布及牛皮纸封口，于蒸汽灭菌器中121℃灭菌20min，即得茯苓种子液培养基；

2)将步骤1)制备好的茯苓种子液培养基中接入茯苓菌丝，用纱布及牛皮纸封口，放入摇床中，于22～34℃，120～200rpm条件下，摇瓶避光振荡培养3～5天，即得茯苓种子液；

3)取酸枣仁粉末置于摇瓶中，加入蒸馏水，混匀；用纱布及牛皮纸封口，在121℃条件下灭菌20min后，即得酸枣仁培养基；

4)将步骤2)茯苓种子液按照酸枣仁培养基质量的2～10％接种量，转接于步骤3)所得酸枣仁培养基中；放入摇床中，于培养温度22～34℃，摇床转速120～240rpm，避光发酵7～21天；

5)将步骤4)所得产物，冷冻干燥，粉碎过筛，即得酸枣仁-茯苓共发酵产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中所述茯苓种子液培养中葡萄糖、磷酸氢二钾、酵母浸膏、玉米粉、蒸馏水的质量比为0.25～1.5︰0.125～0.375︰0.1～0.4︰0.25～0.75︰25～75。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3)中所述酸枣仁粉碎后过24目～85目筛；所述酸枣仁培养基中酸枣仁粉末、蒸馏水的质量比为0.5～1.5︰3～7；酸枣仁培养基的PH值为5～7。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤5)中所述冷冻干燥条件：冻结温度为-10～-30℃，冷阱温度为-29～-31℃，真空度为10～20Pa，冻干最终温度为40～80℃；所述酸枣仁-茯苓共发酵产物粉碎后过24目～85目筛。

5.根据权利要求1至4所述任一方法制备的酸枣仁-茯苓共发酵产物在制备改善睡眠药物中的应用。

6.根据权利要求1至4所述任一方法制备的酸枣仁-茯苓共发酵产物在制备改善睡眠保健食品中的应用。

7.根据权利要求1至4所述任一方法制备的酸枣仁-茯苓共发酵产物在制备改善睡眠功能型食品中的应用。

8.根据权利要求1至4所述任一方法制备的酸枣仁-茯苓共发酵产物。