CN106389904A - 六神曲及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种六神曲及其制备方法。本发明的六神曲制备方法包括发酵步骤：将赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种入六神曲基质中；所述赛氏曲霉的种子液的浓度为1～20个菌丝球/ml，所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为108～1010CFU/ml，且所述赛氏曲霉与所述枯草芽孢杆菌的菌液体积比为10～1:1～10。本发明的制备方法得到的六神曲健脾和胃、化食消积作用更佳，且发酵过程易于控制和检测，产品质量高，稳定性更好。

Description

六神曲及其制备方法
技术领域
本发明涉及六神曲的制备方法，尤其是多菌种发酵工艺制备六神曲的方法，还涉及采用该方法制备得到的六神曲。
背景技术
六神曲又名神曲，是由苦杏仁、赤小豆、青蒿、苍耳草、辣蓼等中药加入面粉或麦麸混合后制成的曲剂，因其消食调中、健脾和胃的功效显著，临床应用十分广泛。
目前不同产地的六神曲生产所依据的标准不同，其原料、原料配比及加入方式、生产工艺等均存在差异，且六神曲的质量评价标准尚不完善。由于六神曲的传统生产工艺采用自然发酵方式，导致不同产地甚至是相同产地不同批次的产品质量不尽相同，其中存在的某些杂菌还会产生有毒的代谢产物，如黄曲霉素，极大地影响了六神曲临床应用的安全性。因此，规范化六神曲发酵工艺，建立完善客观的质量评价指标是稳定六神曲质量的首要任务。
目前，针对六神曲制备工艺的改进多集中在各味药材的发酵前处理方法上，例如中国专利申请201010606944.5、201110283818.5等。而针对六神曲发酵菌种及工艺的优化，多尝试采用单菌种发酵，例如程亦雄等报道了采用赛氏曲霉作为单一菌种发酵神曲的工艺(赛氏曲霉深层发酵神曲的工艺优选，中国实验方剂学杂志，第19卷第19期，2013年10月)。单菌种发酵与自然发酵工艺相比，具有缩短生产周期、发酵过程易于控制和检测、提高产品质量及稳定性等优势。但本申请发明人认为，尽管单菌种发酵存在上述优势，但六神曲传统的自然发酵法是多种微生物共同作用的结果，单一菌种的代谢作用及代谢产物不能完全替代传统发酵体系中多菌种的作用，由此可能影响六神曲的治疗效果。
因此，需要一种既能够控制产品的安全性和质量稳定性，同时又具有良好的治疗效果的六神曲制备方法。
发明内容
申请人认为，在六神曲天然发酵过程中，不同的微生物有不同的代谢途径和代谢产物，不同微生物之间可能存在协同作用，从而达到单一菌种所不能达到的效果。通过研究多种菌种的不同组合和接种量配比发酵得到的六神曲，发明人意外地发现，当采用赛氏曲霉与枯草芽孢杆菌这两种微生物组合、并按照特定接种量配比对六神曲药质培养基进行共同发酵后，所获得的六神曲的健脾和胃、化食消积作用更佳，甚至优于自然发酵得到的六神曲。
本发明的第一目的是提供六神曲的制备方法，采用该方法制备得到的六神曲具有更好的健脾和胃作用。
本发明第二目的是提供上述制备方法制得的六神曲，该六神曲。
本发明的第三目的是提供含有上述六神曲的制剂。
本发明的第四目的是提供上述六神曲在制备具有健脾和胃、化食消积作用的药物中的用途。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的。
本发明提供一种六神曲的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括发酵步骤：将赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种入六神曲基质中；所述赛氏曲霉的种子液的浓度为1～20个菌丝球/ml，所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为108～1010CFU/ml，且所述赛氏曲霉与所述枯草芽孢杆菌的菌液体积比为10～1:1～10。
根据本发明的制备方法，优选地，所述赛氏曲霉的种子液的浓度为2～15个菌丝球/ml，所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为109～1010CFU/ml；所述赛氏曲霉与所述枯草芽孢杆菌的菌液体积比为5～1:1～5。
根据本发明的制备方法，优选地，所述赛氏曲霉种子液和所述枯草芽孢杆菌种子液的接种总量为所述六神曲基质的6～12wt％。
根据本发明的制备方法，优选地，所述六神曲基质通过如下方式获得：将2～8重量份赤小豆、2～8重量份苦杏仁、1～8重量份青蒿、1～8重量份苍耳草、1～8重量份辣蓼和50～150重量份小麦加工品粉碎，混合，然后灭菌；所述的小麦加工品选自面粉和/或麦麸。
根据本发明的制备方法，优选地，通过所述的发酵步骤得到发酵后的产物；在该发酵步骤中，发酵温度为28～32℃，发酵湿度为75～90％，发酵时间为6～12天。
根据本发明的制备方法，优选地，发酵温度为28～30℃，发酵湿度为80～90％，发酵时间为7～10天。
根据本发明的制备方法，优选地，所述的制备方法还包括干燥步骤：将所述发酵后的产物置于35～50℃下干燥5～20小时。
本发明还提供根据上述的制备方法制得的六神曲。
本发明还提供一种六神曲制剂，所述制剂中含有根据上述的制备方法制得的六神曲或所述六神曲的炮制品，所述六神曲的炮制品为炒神曲、焦神曲或麸制神曲。
本发明还提供根据上述的制备方法制得的六神曲或所述六神曲的炮制品用于制备健脾和胃和/或化食消积的药物的用途。
本发明的制备方法得到的六神曲采用了特定配比和用量的赛氏曲霉和枯草芽孢杆菌作为发酵菌种，所得六神曲的健脾和胃、化食消积作用更佳，甚至优于自然发酵得到的六神曲。同时，本发明的六神曲制备方法，其发酵过程易于控制和检测，产品质量高，稳定性更好。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
本发明中的论述中，包括实施例和对比例中，制备六神曲基质的各味药材配比均为重量配比；所述的青蒿、苍耳草和辣蓼这三味药材均为干品。需要说明的是，本发明也可以采用所述三味药材的鲜品制备六神曲基质，其用量根据鲜品与干品的重量换算即可。通常，上述三味药材鲜品与干品的重量比例为约3:1。
为了避免自然发酵和单菌种发酵的各自的缺点，发明人研究了多菌种对六神曲基质发酵的影响，试验了多种单菌种、各菌种的不同种类的组合、和各菌种不同接种量的配比对六神曲基质发酵的影响，意外地发现，当采用赛氏曲霉与枯草芽孢杆菌这两种微生物的组合、并按照特定接种量配比对六神曲药质培养基进行共同发酵时，所获得的六神曲的蛋白酶和淀粉酶活力更高，且通过药效学验证，其具有优异的健脾和胃、化食消积作用，甚至优于自然发酵得到的六神曲。
＜六神曲的制备方法＞
本发明中，所述赛氏曲霉拉丁名为Aspergillus sydowii，可以来自市售，也可以按照现有文献记载的方法制备得到。所述枯草芽孢杆菌拉丁名为Bacillus subtilis，可以来自市售，也可根据现有文献记载的方法制备。
本发明的制备方法包括发酵步骤以及干燥步骤。
本发明的发酵步骤为：所述制备方法包括发酵步骤：将赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种入六神曲基质中；所述赛氏曲霉的种子液的浓度为1～20个菌丝球/ml，所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为108～1010CFU/ml，且所述赛氏曲霉与所述枯草芽孢杆菌的菌液体积比为10～1:1～10。本发明的制备方法中，优选地，所述赛氏曲霉与所述枯草芽孢杆菌的菌液体积比为5～1:1～5，更优选为1:1～3。根据本发明一个优选的实施方式，所述赛氏曲霉与枯草芽孢杆菌的菌液体积比为约1:2。本发明的制备方法中，优选地，所述赛氏曲霉种子液的赛氏曲霉浓度为2～15个菌丝球/ml，所述枯草芽孢杆菌种子液的枯草芽孢杆菌浓度为109～1010CFU/ml。更优选地，所述赛氏曲霉种子液的赛氏曲霉浓度为3～8个菌丝球/ml，所述枯草芽孢杆菌种子液的枯草芽孢杆菌浓度为1～5×109CFU/ml。当赛氏曲霉和枯草芽孢杆菌的比例在上述范围内时，六神曲基质发酵的蛋白酶和淀粉酶活力均较高。
本发明中，优选地，所述赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液的接种总量为所述六神曲基质的6～12wt％，更优选为7～10wt％。采用本发明的接种浓度时，六神曲基质的发酵的蛋白酶和淀粉酶活力均较高，且发酵时间缩短。
本发明中，所述赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液可通过任何常规方法制备，只要达到上述浓度即可。根据本发明优选的实施方式，所述赛氏曲霉种子液的制备方法为：将赛氏曲霉斜面活化1～3次，接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)液体培养基中，于25～33℃、转速120～200r·min-1(即rpm)条件下振荡培养1～4天。优选地，所述赛氏曲霉种子液的制备方法为：将赛氏曲霉斜面活化1～2次，接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)液体培养基中，于28～30℃、转速150～180r·min-1条件下振荡培养2～3天。根据本发明一个优选的实施方式，所述赛氏曲霉种子液的制备方法为：将赛氏曲霉斜面活化2次，接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)液体培养基中，于28℃、转速160r·min-1条件下振荡培养3天，得到赛氏曲霉种子液。采用本发明的方法得到的赛氏曲霉种子液，赛氏曲霉活力更好，更有利于六神曲基质的发酵。
根据本发明优选的实施方式，所述枯草芽孢杆菌种子液的制备方法为：将枯草芽孢杆菌斜面活化1～3次，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于25～33℃、转速120～200r·min-1条件下振荡培养1～4天。优选地，所述枯草芽孢杆菌种子液的制备方法为：将枯草芽孢杆菌斜面活化1～2次，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于28～30℃、转速150～180r·min-1条件下振荡培养2～3天。根据本发明一个优选的实施方式，所述枯草芽孢杆菌种子液的制备方法为：将枯草芽孢杆菌斜面活化2次，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于30℃、转速160r·min-1条件下振荡培养3天，得到枯草芽孢杆菌种子液。发明人发现，采用本发明的方法制备的枯草芽孢杆菌种子液，枯草芽孢杆菌活力更好，更有利于六神曲基质的发酵。
可通过测定赛氏曲霉种子液的浓度和枯草芽孢杆菌种子液的浓度，计算二者分别接种入六神曲基质中的种子液的体积。测定菌液浓度的方法可采用重量法、比浊法或平板计数法。
本发明中，所述六神曲基质是指待发酵处理的六神曲药质培养基，其是通过将原料赤小豆、苦杏仁、青蒿、苍耳草、辣蓼和小麦加工品混合，灭菌后得到的。所述的小麦加工品选自面粉和/或麦麸。优选地，其中赤小豆2～8重量份、苦杏仁2～8重量份、青蒿1～8重量份、苍耳草1～8重量份、辣蓼1～8重量份、小麦加工品50～150重量份粉碎，混合，灭菌后得到的。当小麦加工品同时包含面粉和麦麸时，二者重量配比不限。根据本发明一个优选的实施方式，面粉与麦麸的重量比为1～2:1～2，更优选为1:1～2。根据本发明一个优选的实施方式，所述六神曲基质是通过将原料赤小豆2.4重量份、苦杏仁2.4重量份、青蒿1.4重量份、苍耳草1.4重量份、辣蓼1.4重量份、面粉40重量份、麦麸20重量份粉碎，混合，灭菌后得到的。本发明中，所述赤小豆、苦杏仁、青蒿、苍耳草和辣蓼可以是经过直接粉碎得到的，也可根据现有方法在粉碎前后经过多种方式的预处理，对此没有特别限定。根据本发明一个优选的实施方式，将赤小豆、苦杏仁、青蒿、苍耳草、辣蓼、面粉和/或麦麸粉碎，混合均匀，加水，置于120～140℃下高压灭菌20～30分钟，更优选为121℃下灭菌25min。
本发明的制备方法中，优选地，发酵步骤的发酵温度为28～32℃，更优选为28～30℃。优选地，发酵湿度为75～90％，更优选为80～90％。优选地，发酵时间为6～12天，更优选为7～10天。根据本发明一个优选的实施方式，发酵步骤的发酵温度为28～30℃，发酵湿度为80～90％，发酵时间为7～10天，得到发酵后的产物。根据本发明一个特别优选的实施方式，所述发酵步骤的发酵温度为30℃，发酵湿度为85％，发酵时间为8天。采用上述发酵步骤时，所得的六神曲具有较高的淀粉酶和蛋白酶活力。
本发明的六神曲制备方法还包括干燥步骤：将发酵后的产物干燥。优选地，将发酵后的产物置于35～50℃下干燥5～20小时，优选置于38～42℃下干燥8～15小时，更优选置于40℃下干燥12小时。
根据本发明一个优选的实施方式，所述六神曲的制备方法为：
采用赛氏曲霉和枯草芽孢杆菌对六神曲基质进行发酵处理，所述赛氏曲霉与所述枯草芽孢杆菌的重量比为3～1:1～3，所述六神曲基质是通过将赤小豆2～8重量份、苦杏仁2～8重量份、青蒿1～8重量份、苍耳草1～8重量份、辣蓼1～8重量份、面粉和/或麦麸50～150重量份粉碎，混合，置于120～140℃下高压灭菌20～30分钟得到的；发酵处理的发酵温度为28～30℃，发酵湿度为80～90％，发酵时间为7～10天，得到发酵后的产物；将所述发酵后的产物置于35～50℃下干燥5～20小时，得到六神曲。
＜六神曲及其炮制品＞
本发明的六神曲是根据上述制备方法制得的。与自然发酵得到的六神曲产品及单菌种发酵得到的六神曲产品相比，本发明的六神曲产品的蛋白酶活力和淀粉酶活力更强；更重要的是，经药效实验证明，本发明的六神曲的健脾和胃、化食消积作用更强。本发明的六神曲的炮制品包括将上述制备方法制得的六神曲分别进行炒制、炒焦、麸制而分别获得的炒神曲、焦神曲、麸制神曲。
＜六神曲制剂＞
本发明的六神曲制剂是采用上述方法制得的六神曲和/或上述六神曲炮制品作为药用原料制得的制剂。具体而言，本发明的六神曲制剂含有上述制备方法制得的六神曲，可以不含有或含有其他药用组分或药用原料，可含有或不含有药学上可接受的辅料。在本发明中，药学上可接受的辅料可以是领域内常规使用的那些，并没有特别限定，具体的实例包括但不限于淀粉、糖粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、水(包括注射用水)、植物油等。本发明的药物制剂形式并没有特别限制，例如可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、栓剂、注射剂、口服液等。本发明所提供的各种药物剂型均可以以药学常规方法制备而成。
<制药用途>
本发明的六神曲和/或其炮制品可用于制备健脾和胃、化食消积的药物制剂，且本发明的六神曲的健脾和胃、化食消积效果明显优于现有的自然发酵六神曲和单菌种发酵六神曲。
实施例1
六神曲A的制备方法：
将粉碎、过40目筛后的赤小豆2.4重量份、苦杏仁2.4重量份、青蒿1.4重量份、苍耳草1.4重量份、辣蓼1.4重量份、面粉40重量份、麦麸20重量份混合均匀，加入26重量份蒸馏水，于121℃下灭菌25min，冷却，得到六神曲基质。
将赛氏曲霉斜面活化2次，接种于PDA液体培养基中，于28℃下、转速160r·min-1条件下振荡培养3d，得到赛氏曲霉种子液，该赛氏曲霉种子液的浓度为约5～6个菌丝球/ml。将枯草芽孢杆菌斜面活化2次，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于30℃、转速160r·min-1条件下振荡培养3天，得到枯草芽孢杆菌种子液，该枯草芽孢杆菌种子液的浓度为约3.2×109CFU/ml。
将赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液按照体积比2:1、总体积为六神曲基质重量的10wt％，接种于上述六神曲基质中，在发酵温度为30℃，发酵湿度为85％的条件下，发酵8天，置于40℃下干燥12小时，得到六神曲A。
实施例2
六神曲B的制备方法：
将粉碎、过40目筛后的赤小豆8重量份、苦杏仁8重量份、青蒿5重量份、苍耳草5重量份、辣蓼5重量份、面粉100重量份混合均匀，加入50重量份蒸馏水，于121℃下灭菌25min，冷却，得到六神曲基质。
将赛氏曲霉斜面活化2次，接种于PDA液体培养基中，于30℃下、转速200r·min-1条件下振荡培养2天，得到赛氏曲霉种子液，该赛氏曲霉种子液的浓度为6～7个菌丝球/ml。将枯草芽孢杆菌斜面活化1次，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于28℃、转速150r·min-1条件下振荡培养4天，得到枯草芽孢杆菌种子液，该枯草芽孢杆菌种子液的浓度为约5.5×109CFU/ml。
将赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液按照体积比3:1、总体积为六神曲基质重量的12wt％，接种于上述六神曲基质中，在发酵温度为28℃，发酵湿度为75％的条件下，发酵10天，置于40℃下干燥12小时，得到六神曲B。
实施例3
除了将实施例1中赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液的体积比设为1:3，其他操作与实施例1相同，得到六神曲C。
实施例4
除了将实施例1中赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液的总体积比设为六神曲基质重量的7wt％，其他操作与实施例1相同，得到六神曲D。
实施例5
将实施例1得到的六神曲A，用小火炒至表面焦黄，取出，放凉，得到炒神曲。
实施例6
将实施例1得到的六神曲A，炒至外焦黑内焦黄，取出，放凉，得到焦神曲。
实施例7
将10重量份的麸皮撒入热锅内，待起烟时，倒入100重量份的实施例1得到的六神曲A，拌炒至深黄色，取出，筛去麸皮，放凉，得到麸制神曲。
对比例
自然发酵六神曲E的制备：
将粉碎、过40目筛后的赤小豆2.4重量份、苦杏仁2.4重量份、青蒿1.4重量份、苍耳草1.4重量份、辣蓼1.4重量份、面粉40重量份、麦麸20重量份混合均匀，加入26重量份蒸馏水，于121℃下灭菌25min，冷却，得到六神曲基质。将该六神曲基质敞口置于34℃，湿度为90％的恒温恒湿箱中发酵10天，取出后置于40℃烘箱中干燥12小时，粉碎过筛，得到自然发酵的六神曲。
通过对上述六神曲A～E的淀粉酶活力和蛋白酶活力的测定，发现六神曲A～D中上述两种酶的活力均高于六神曲E。而为了进一步观察本发明的六神曲是否具有不劣于现有方法制备的六神曲的药效，申请人进行了药效实验，并惊奇地发现，本发明的六神曲药效明显优于对比例的六神曲，也优于市场上销售的同仁堂生神曲产品。
实验例
＜实验动物与药物＞
ICR雄性小鼠，体重18～20g，购自北京斯贝福实验动物科技有限公司。
实验采用的协同发酵六神曲是实施例1方法制得的六神曲A，自然发酵六神曲是对比例1方法制得的，同仁堂生神曲是市售的北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂生产的生神曲。以上三种六神曲分别粉碎过100目筛，加蒸馏水配制成40％的混悬液，置于冰箱储藏待用。
复方地芬诺酯片(常州康普药业有限公司，产品批号：201406004)，配制成1.0mg/ml的复方地芬诺酯混悬液备用。
自制营养糊为采用飞鹤奶粉(批号：20150213)配制。
＜神曲对正常及肠动力障碍模型小鼠小肠推进的影响＞
神曲对正常小鼠小肠推进的影响：
取ICR雄性小鼠40只，按体重随机分成4组，即空白对照组、协同发酵六神曲组、自然发酵六神曲组和同仁堂生神曲组。空白对照组灌服与药物等体积的蒸馏水，给药组每天给予40wt％六神曲混悬液，4g/kg体重，连续给药5d，实验前禁食不禁水18h；在末次给药2h后，各组分别墨汁灌胃(0.3ml/只)，5min后立即脱颈椎处死小鼠，完整取出自胃幽门至小肠末端的部分，测定幽门至墨水运行最远的距离及小肠的总长度，计算推进率。推进率计算公式为：
推进率＝墨水推进长度/总长度×100％。
神曲对肠动力障碍模型小鼠小肠推进的影响：
取ICR雄性小鼠50只，按体重随机分成5组，即空白对照组、胃肠动力障碍模型组、协同发酵六神曲组、自然发酵六神曲组和同仁堂生神曲组。空白对照组和模型组均灌服与药物等体积的蒸馏水，给药组每天给予40％药物混悬液，4g/kg体重，连续给药5d，实验前禁食不禁水18h，在末次给药2h后，不同六神曲组及胃肠动力障碍模型组分别给予复方地芬诺酯(10mg/kg体重)灌胃，空白对照组灌服等体积蒸馏水，0.5h后，各组分别给予墨汁灌胃(0.3ml/只)，5min后测定小肠推进率，测定和计算方法同上。实验结果见表1。
表1不同神曲对正常及肠动力障碍模型小鼠小肠推进功能的影响
注：和空白组比较，*表示有差异，P<0.05；**表示有显著性差异，P<0.01。
由表可见，市售同仁堂六神曲和协同发酵六神曲组均能够提高正常小鼠的小肠推进率，差异有统计学意义。自然发酵六神曲与空白组相比较，差异无统计学意义(P>0.05)，表明其不能提高正常小鼠的小肠推进率。复方地芬诺酯组与空白组相比，显著降低了小鼠的小肠推进率(P<0.01)，认为模型有效；与模型组相比，协同发酵六神曲组改善了肠动力障碍模型小鼠的肠推进率(P<0.05)，而自然发酵六神曲组和同仁堂生神曲组未能显著改善肠动力障碍模型小鼠的肠推进率。
＜不同神曲对正常小鼠体重增加的影响＞
取ICR雄性小鼠40只，按体重随机分成4组，即空白对照组、协同发酵六神曲组、自然发酵六神曲组和同仁堂生神曲组。空白对照组灌服与药物等体积的蒸馏水，给药组每天给予40wt％神曲混悬液，4g/kg体重，连续给药5d，每组小鼠均饲喂等量饲料(200g/kg体重)，不限制饮水，记录每只小鼠体重变化情况。实验结果见表2。
表2不同神曲对正常小鼠体重增加的影响
注：和空白组比较，*表示有差异，P<0.05，**表示有显著性差异，P<0.01。
由表可见，与空白组相比，在饲喂等量饲料的条件下，协同发酵六神曲可以提高小鼠体重增量(P<0.05)，其他神曲对小鼠体重的增加无统计学意义。这说明协同发酵的神曲对小鼠的吸收功能有积极的影响。
＜不同神曲对正常小鼠胃酸分泌和胃残留率的影响＞
不同神曲对正常小鼠胃酸分泌的影响：
取ICR雄性小鼠40只，按体重随机分成4组，即空白对照组、协同发酵六神曲组、自然发酵六神曲组和同仁堂生神曲。空白对照组灌服与药物等体积的蒸馏水，给药组每天给予40％药物混悬液，4g/kg，连续给药5d，实验前禁食不禁水18h，末次给药1h后，立刻脱颈椎处死小鼠。立即取出胃，充分剪开，置于50ml锥形瓶中，加5ml蒸馏水并震荡，滴入酚酞试剂作为显色剂，混匀，用0.01mo/L的NaOH溶液进行滴定，边滴边震荡摇匀，直至酚酞显色为止，记录所用NaOH溶液体积。
不同神曲对正常小鼠胃残留率的影响：
取ICR雄性小鼠50只，按体重随机分成5组，即空白对照组、协同发酵六神曲组、自然发酵六神曲组、同仁堂生神曲组和复方地芬诺酯组。其中空白对照组灌服与药物等体积的蒸馏水，给药组每天给予40％药物混悬液，4g/kg体重，复方地芬诺酯组每天给予10mg/kg体重。连续给药5d，实验前禁食不禁水18h，末次给药1h后，每只小鼠灌胃1g自制营养糊，15min后脱颈椎处死小鼠，打开腹腔，结扎胃贲门和幽门，取胃，用滤纸擦干后称全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后擦干，称净重。以胃全重和胃净重之差为胃内残留物重量，计算胃内残留物占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率。实验结果见表3。
表3不同神曲对正常小鼠胃酸分泌和胃残留率的影响
注：和空白对照组比较，*表示有差异，P<0.05；**表示有显著性差异，
P<0.01。
由表可见，与空白对照组相比，实验室自制协同发酵、自然发酵六神曲都可显著促进小鼠胃酸的分泌(P<0.01)；同仁堂市售神曲没有使小鼠胃酸分泌增多。与空白对照组相比，协同发酵组和自然发酵组的胃残留率均显著高于空白对照组，市售的同仁堂生神曲组胃残留率与空白组差异无统计学意义；复方地芬诺酯组极显著地增加了小鼠的胃残留率，远高于六神曲组，说明六神曲抑制小鼠胃排空的药效比较温和。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。

Claims (10)

1.一种六神曲的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括发酵步骤：将赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种入六神曲基质中；所述赛氏曲霉的种子液的浓度为1～20个菌丝球/ml，所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为108～1010CFU/ml，且所述赛氏曲霉与所述枯草芽孢杆菌的菌液体积比为10～1:1～10。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述赛氏曲霉的种子液的浓度为2～15个菌丝球/ml，所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为109～1010CFU/ml；所述赛氏曲霉与所述枯草芽孢杆菌的菌液体积比为5～1:1～5。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述赛氏曲霉种子液和所述枯草芽孢杆菌种子液的接种总量为所述六神曲基质的6～12wt％。
4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述六神曲基质通过如下方式获得：将2～8重量份赤小豆、2～8重量份苦杏仁、1～8重量份青蒿、1～8重量份苍耳草、1～8重量份辣蓼和50～150重量份小麦加工品粉碎，混合，然后灭菌；所述的小麦加工品选自面粉和/或麦麸。
5.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，通过所述的发酵步骤得到发酵后的产物；在该发酵步骤中，发酵温度为28～32℃，发酵湿度为75～90％，发酵时间为6～12天。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，发酵温度为28～30℃，发酵湿度为80～90％，发酵时间为7～10天。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法还包括干燥步骤：将所述发酵后的产物置于35～50℃下干燥5～20小时。
8.根据权利要求1～7任一项所述的制备方法制得的六神曲。
9.一种六神曲制剂，其特征在于，所述制剂中含有根据权利要求1～7任一项所述的制备方法制得的六神曲或所述六神曲的炮制品，所述六神曲的炮制品为炒神曲、焦神曲或麸制神曲。
10.根据权利要求1～7任一项所述的制备方法制得的六神曲或所述六神曲的炮制品用于制备健脾和胃或者化食消积的药物的用途。
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