CN109938332A

CN109938332A - 一种含麦角硫因的猴头菌保健品制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN109938332A
Application number: CN201910157075.3A
Authority: CN
Inventors: 陆震; 魏玉洁; 贾玉倩; 石艳丽; 郭学平; 栾贻宏
Original assignee: Bloomage Biotech Co Ltd; Shandong Bloomage Hyinc Biopharm Co Ltd
Current assignee: Beijing Huaxi Rongxi Biotechnology Research Co ltd; Bloomage Biotech Co Ltd
Priority date: 2019-03-01
Filing date: 2019-03-01
Publication date: 2019-06-28
Anticipated expiration: 2039-03-01
Also published as: WO2020177389A1; CN109938332B

Abstract

本发明公开了一种含麦角硫因的猴头菌保健品制剂的制备方法，其特征在于，包括步骤1：将猴头菌菌丝接种到液体种子培养基中培养，得到种子液；步骤2：将种子液接种到发酵培养基中发酵，发酵至终点，得到发酵液；步骤3：将含有菌丝体的发酵液经高压匀浆机匀浆，加入辅料混匀，高温喷雾干燥后，制得粉剂作为含麦角硫因的猴头菌保健品制剂，该制剂保留了发酵液中的猴头菌菌丝体同时还富含发酵过程中合成的真菌胞外多糖、麦角硫因等活性物质，不仅能够抗氧化、防辐射，还具有护胃养胃等作用，可作为保健品制剂制备成胶囊、冲剂等产品，本发明适用于猴头菌发酵液的深加工利用。

Description

一种含麦角硫因的猴头菌保健品制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及保健品领域，特别涉及含麦角硫因的猴头菌保健品制剂及其制备方法。

背景技术

猴头菇(Hericium erinaceum)隶属担子菌纲猴菇目猴菇科猴菇属，因其子实体外形酷似猴子的脑袋而取名。野生猴头菇主要分布在东北大兴安岭，西北的天山和阿尔泰山，内蒙古、河南、河北、四川、湖北、广西、浙江、江西等省区也有生产。在国外，美国、日本、俄罗斯和西欧等均有生产。早在我过古代本草纲目中就有记载，猴头菇性平、味甘，具有利五脏，健脾益胃的功能。近年研究证明，猴头菇还可用于治疗胃、十二指肠溃疡、神经衰弱、身体虚弱等疾病，猴头菇多糖具有降胆固醇、保肝、抗癌、抗微波、抗氧化、抗衰老、防辐射等功能。可见，猴头菇是一种较好的药食兼用并且可广泛应用于保健品领域的安全性食用菌，不仅味道鲜美，营养丰富，还含有多种活性成分，如多糖能够治疗胃炎、胃溃疡，抗肿瘤；甾醇具有抗炎、抗癌、降血脂、保护胃黏膜等生物活性；腺苷具有镇静、扩血管、抗缺氧及较弱的抗炎、降胆固醇等作用；麦角硫因具有抗氧化、抗衰老、抗辐射等功能，特别是麦角硫因作为一种稀有天然氨基酸是机体内的中药活性物质，不但在生理 pH下不会自发氧化，且极易溶于水，能同时清除自由基和活性氧化物，对 O^-2具有高亲和力。众多的活性成分使得猴头菌具有良好的功效，成为了食用菌界的宠儿，因此针对猴头菌制备方面的研究也越来越多。

目前多数猴头菌制品采用人工栽培技术，通过木屑及棉花籽壳进行栽培，此方法技术简单然后周期较长，产量较低。针对此缺陷，液态发酵猴头菌逐渐发展起来，而通过此类技术开发出的终端产品也种类繁多，如在医药制剂领域中猴头菌经三级菌丝选育后在发酵罐中发酵7～10天，然后放罐收集菌丝体烘干后配制成各种剂型的中成药，用于治疗消化不良、消化道溃疡、炎症等疾病效果有奇特效果，然而该工艺过程中经发酵后的发酵上清液全部被弃掉，而发酵液中含有胞外多糖、麦角硫因、粗纤维、不饱和脂肪酸等多种活性成分均可应用于医药及保健品中，造成了浪费(非专利文献1)。再如有非专利文献2和非专利文献3报道对猴头菌进行液体发酵后再经酵母菌发酵和醋酸菌发酵，来制得一种新型、风味独特、口感新鲜具营养价值的保健醋，发酵过程涉及三步发酵，属多种菌体的混合发酵，中间发酵过程复杂难以保证过程中不染菌，难以放大生产，无实际应用价值。另外有制备猴头菇菌丝粉冲剂的报道(非专利文献4)，完全可食用培养基料，接入猴头菇菌种，菌丝长满培养瓶(袋)后，连同培养基料烘干加工成粉，研制出猴头菌丝粉冲剂。该工艺制备出的产品具有营养丰富、提高免疫力等特点但为固体培养，菌体生长周期较慢，无法大规模制备。

综上所述，目前制备猴头菌保健产品存在以下问题：

1.传统的固体栽培技术周期长，无法扩大生产，同时难以高效富集活性产物。

2.多数猴头菌发酵固体制品只取固体菌丝体，发酵液弃掉，而诸如胞外多糖、部分麦角硫因均存在于发酵液中造成了浪费。

3.猴头菌发酵液体制品虽可以将活性成分完全保留，但作为保健品液体产品通常稳定性较差，长时间放置会造成变质、染菌，难以长时间保存应用。

4.目前保健品中尚无以麦角硫因为主要功效活性的产品。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:谭佳媛、王栩俊、王星丽等.猴头菇的养生保健价值.食药用菌，2015,2(3)：188～193；

非专利文献2：王广耀，慈钊.猴头菇保健醋的生产工艺.中国调味品， 2009，34(6)：76～79；

非专利文献3：邵伟，胡滨，等.发酵型猴头菇保健醋的研制.食用菌， 2001(5)：39-40；

非专利文献4：张沿江，吴金玉，孙艳辉，等.猴头菇的药用功能及其菌丝粉冲剂的制作.食药用菌，2014，22(1)：41-42

发明内容

基于上述问题，本发明旨在发明一种含麦角硫因的猴头菌保健品制剂的制备方法及其应用，该方法工艺不仅简单，发酵周期短易于放大，还可以将猴头菌本身及发酵转化过程中产生的所有活性成分长时间以固体粉剂形式长期保留且不变质，该粉剂可以应用于保健品领域制备胶囊、冲剂等。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

1.一种含麦角硫因的猴头菌保健品制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将猴头菌菌丝接种到液体种子培养基中培养，得到种子液；

步骤2：将种子液接种到发酵培养基中发酵，发酵至终点，得到发酵液；

步骤3：将含有菌丝体的发酵液经高压匀浆机匀浆，加入辅料混匀，高温喷雾干燥后，制得粉剂作为含麦角硫因的猴头菌保健品制剂。

2.根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述猴头菌(Hericium erinaceum)的保藏编号为CCTCC NO:M2018567。

3.根据项1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述种子培养基包括以下组分：1～10质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源和0.01～1质量％的无机盐。

4.根据项1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，在15～30℃、pH 4.0～7.0、50～300rpm、优选为100rpm～200rpm振荡培养5～10天，得到种子液。

5.根据项1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下组分：1～5质量％碳源、1～10质量％的有机氮源、0.01～1质量％的无机盐、 0.0001～0.001质量％的微量元素和0.0001～0.001质量％的辅酶。

6.根据项1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，在15～30℃、pH 4.0～7.0、50～300rpm、优选为100rpm～200rpm振荡发酵7～15天，发酵至终点，获得发酵液。

7.根据项1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，所述发酵终点为发酵液中残糖≤0.5质量％。

8.根据项1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，高压匀浆的匀浆功率为50KW～200KW，工作压力为10MPa～100MPa、优选为20MPa～50MPa，均质时间为10～30min。

9.根据项1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述喷雾为离心式或压力式喷雾干燥，其进风温度为50℃～100℃，出风温度为150℃～200 ℃。

10.根据项1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，在1份发酵液中加入1％～20％辅料。

11.根据项1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述辅料为麦芽糊精、玉米淀粉和环糊精中的至少一种，优选为麦芽糊精。

12.根据项1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，喷雾前发酵液的固形物含量为5％～20％，料液温度维持在30℃～60℃。

13.根据项1所述的制备方法，其特征在于，还包括步骤4：在由步骤3 得到粉剂中添加食品级辅料制备成保健品。

14.根据项13所述的制备方法，其特征在于，所述食品级辅料为葡萄糖、蜂蜜、糊精、二氧化硅和香精中的至少一种，优选为糊精、葡萄糖。

15.根据项13所述的制备方法，其特征在于，所述保健品的形态为胶囊或冲剂。

16.根据项1所述的制备方法，其特征在于，所得到的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂中的麦角硫因的含量为0.1g/kg以上。

17.一种采用项1-16中任一项所述的制备方法获得的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂。

18.根据项17所述的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂，其特征在于，含有猴头菌菌丝体、麦角硫因、真菌多糖及食品添加剂。

19.根据项17所述的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂，其特征在于，含有：0.1g/kg以上的麦角硫因、60g/kg以上的蛋白质、2.0g/kg以上的粗纤维和5.0g/kg以上的粗脂肪。

20.一种由项1-16中任一项所述的制备方法获得的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂或项17-19中任一项所述的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂在保健品生产中的应用。

21.一种含麦角硫因的猴头菌保健品制剂组合物，其特征在于，含有： 0.1g/kg以上的麦角硫因、60g/kg以上的蛋白质、2.0g/kg以上的粗纤维和 5.0g/kg以上的粗脂肪。

22.一种用于生产含麦角硫因的猴头菌保健品制剂的发酵培养基组合物，其特征在于，包括以下组分：1～5质量％的碳源、1～10质量％的有机氮源、0.01～1质量％的无机盐、0.0001～0.001质量％的微量元素和0.0001～0.001 质量％的辅酶。

本发明具有以下优点：

(1)本发明采用对发酵液直接进行处理的方式，保留了发酵过程中的全部活性营养成分；(2)本发明采用喷雾干燥方式可有效地将水分去除且最终产品可长时间保留活性成分，可加入辅料后直接包装制备成保健胶囊、冲剂等，广泛应用于保健品领域。目前保健品中尚无以麦角硫因为主要功效活性的产品，本发明填补了此类产品空白。

附图说明

图1为麦角硫因含量测定的HPLC图谱，其中，a)为标准品(麦角硫因含量浓度为100mg/L)，b)为实施例2的样品S1，c)为实施例3的样品S2，d) 为实施例4的样品S3。

发明的具体实施方式

以下将对本发明做以详细说明。

本发明提供的一种含麦角硫因的猴头菌保健品制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

本发明采用猴头菌菌丝体发酵法，并对发酵液直接进行处理，保留了发酵过程中的全部活性营养成分，而且本发明采用喷雾干燥方式可有效地将水分去除且最终产品可长时间保留活性成分，采用本发明的制备方法所得到的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂中的麦角硫因的含量为0.01质量％以上。

步骤1

步骤1：将猴头菌菌丝接种到液体种子培养基中培养，得到种子液。

其中，猴菇菌为真菌类担子菌纲多孔菌目齿菌科猴头菌Hericium erinaceum(Rull ex F.)Pers.，是一种腐生菌，也是一种著名的食用菌。全形似刺猬或猴头，故俗称猴头菇或猴菇。其中，猴头菌优选为猴头菌(Hericium erinaceum)CCTCC NO：M 2018567，已于2018年8月23日在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉武汉大学)保藏，该菌株是本申请人发现的新的猴头菌种，而且发现其可用于麦角硫因的生物合成。

单一丝网状细胞称为菌丝,包括营养菌丝和气生菌丝，菌丝集合在一起构成一定的宏观结构称为菌丝体。

在一个具体的实施方式中，猴头菌菌丝从试管中取约5*5cm大小菌块接种液体种子培养基中，培养条件为，温度为15～30℃，pH为4～7，摇床振荡 50～300rpm、优选100rpm～200rpm摇床振荡培养，培养时间为5～10天，得到种子液。

在一个具体的实施方式中，上述种子培养基包括以下组分：1～10质量％碳源、1～5质量％的有机氮源和0.01～1质量％的无机盐。

上述碳源为微生物常用碳源，没有特别限定，可以包括以下的一种或多种的组合：甘油、蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖等，优选为蔗糖，

上述氮源为微生物培养常用氮源，没有特别限定，可以包括以下的一种或多种的组合：牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、豆饼粉等，优选为豆饼粉，

上述无机盐为微生物培养常用无机盐，没有特别限定，可以包括以下的一种或多种的组合：氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钾、硫酸钠等，优选为磷酸二氢钠和硫酸钠。

种子培养基的pH调节可以用常见有机酸或无机酸，如磷酸、盐酸、醋酸、乳酸，优选为醋酸。通过在上述条件下培养猴头菌，更适合菌种的生长，能够获得活性好的菌种。

步骤2

步骤2：将种子液接种到发酵培养基中发酵，发酵至终点，得到发酵液。

在一个具体的实施方式中，在15～30℃、pH 4.0～7.0、50～300rpm、优选 100rpm～200rpm摇床振荡发酵7～15天，发酵至终点，获得发酵液。

发酵培养基的pH调节可以用常见有机酸或无机酸，如磷酸、盐酸、醋酸、乳酸，优选为醋酸。

在一个具体的实施方式中，发酵培养基包括以下组分：1～5质量％碳源、 1～10质量％的有机氮源、0.01～1质量％的无机盐、0.0001～0.001质量％的微量元素和0.0001～0.001质量％的辅酶。

上述碳源为微生物常用碳源，没有特别限定，可以包括以下的一种或多种的组合：甘油、蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖等，优选为甘油。

上述氮源为微生物培养常用氮源，没有特别限定，可以包括以下的一种或多种的组合：牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、豆饼粉等，优选为牛肉膏。

上述微量元素，可以包括以下的一种或多种的组合：硫酸镁、氯化亚铁、氯化锌等，优选为氯化锌。

上述辅酶，可以包括以下的一种或多种的组合：生物素、烟酸、磷酸吡哆醛、甜菜碱、维生素B12，核黄素等，优选为磷酸吡哆醛。

本发明通过对发酵培养基中的碳源、氮源、辅酶等因素进行优化，可提高麦角硫因的产量，

在一个具体的实施方式中，种子液接种到发酵液中接种量为1～10体积％。

在一个具体的实施方式中，上述发酵终点为发酵液中残糖≤0.5质量％。优选为发酵液中无葡萄糖，上述葡萄糖含量测定可采用常用的化学法，如 DNS法、斐林试剂法、间接碘量法或者旋光法等。

步骤3

在一个具体的实施方式中，高压匀浆的匀浆功率为50KW～200KW，工作压力为10MPa～100MPa，优选为20MPa～50MPa，均质时间为10～30min。在该条件下，能够将发酵液更好地匀浆，使菌丝体中所含的活性物质充分释放。

在一个具体的实施方式中，上述喷雾可以为离心式或压力式喷雾干燥，其进风温度为50℃～100℃，出风温度为150℃～200℃。在该条件下能够更好地保留活性物质的活性。

在一个具体的实施方式中，在1份发酵液中加入1％～20％辅料。其中，上述辅料为麦芽糊精、玉米淀粉和环糊精中的至少一种，优选为麦芽糊精。

在一个具体的实施方式中，喷雾前发酵液的固形物含量为5％～20％，料液温度维持在30℃～60℃，由此能够进行喷雾，且保留活性物质的活性。

步骤4

本发明的方法根据需要，还可以包括步骤4：在由步骤3得到粉剂中添加食品级辅料制备成保健品。

在一个具体的实施方式中，上述食品级辅料为葡萄糖、蜂蜜、糊精、二氧化硅和香精中的至少一种，优选为糊精、葡萄糖。

在一个具体的实施方式中，上述保健品的形态可以为胶囊或冲剂。这样在本发明的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂中加入辅料后直接包装制备成保健胶囊、冲剂等，可以广泛应用于保健品领域。

本发明还提供一种采用含麦角硫因的猴头菌保健品制剂的制备方法获得的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂。其中含有猴头菌菌丝体、麦角硫因、真菌多糖及食品添加剂。优选地，本发明的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂含有：0.1g/kg以上的麦角硫因、60g/kg以上的蛋白质、2.0g/kg以上的粗纤维和5.0g/kg以上的粗脂肪。

本发明的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂可广泛应用于保健品领域，目前保健品中尚无以麦角硫因为主要功效活性的产品，本发明填补了此类产品空白。本发明的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂在给予急性胃粘膜损伤的小鼠后，小鼠的胃肿胀程度明显减轻，胃组织重量较模型组明显减少，说明本发明的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂具有养胃护胃的作用。本发明的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂对受试者改善消化系统疾病有较好的作用，给药本发明的含麦角硫因的猴头菌保健品制剂的受试者饮食排泄均恢复正常，特别是对患有胃溃疡、胃炎疾病的受试者的效果更为明显。

实施例

下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊要求，均为常规方法。下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

(1)试管保藏菌种取菌块接种到500ml种子培养基中，200rpm摇床，25 ℃培养7天；

种子培养基成分如下：

葡萄糖20g/L，酵母粉20g/L，磷酸氢二钠0.5g/L，醋酸调pH 6.5

(2)种子培养基接种到15L发酵培养基中，200rpm摇床，25℃培养11天至残糖＜0.5％发酵结束；

发酵培养基成分如下：

葡萄糖60g/L，酵母粉35g/L，硫酸钠0.75g/L，磷酸氢二钠1g/L，氯化锌0.005g/L，磷酸吡哆醛0.001g/L，醋酸调pH 5.5，天冬氨酸5mM，谷氨酰胺5mM，组氨酸，5mM，甜菜碱20Mm。

实施例2

(1)取实施例1中发酵结束的发酵液500ml，经高压匀浆机匀浆，匀浆压力为35MPa，匀浆时间为20min，向发酵液中加入麦芽糊精25g，加热至 50℃搅拌混匀，使辅料充分溶解；

(2)料液进行喷雾干燥，采用压力式喷雾，进料速度为400ml/h，进风温度为85℃，出风温度为180℃，最终可得棕黄色猴头菌粉剂42g，液相检测菌粉中麦角硫因含量为0.222g/kg。

实施例3

(1)取实施例1中发酵结束的发酵液10L，经高压匀浆机匀浆，匀浆压力为50MPa，匀浆时间为30min，匀浆结束后向发酵液中加入麦芽糊精 1500g，加热至60℃搅拌，使辅料混匀充分溶解；

(2)料液进行喷雾干燥，采用离心式喷雾，进料速度为2000ml/h，进风温度为95℃，出风温度为190℃，最终可得淡黄色猴头菌粉剂2.36kg，液相检测菌粉中麦角硫因含量为0.146g/kg。

实施例4

(1)取实施例1中发酵结束的发酵液1L，经高压匀浆机匀浆，匀浆压力为20Mpa，匀浆时间为15min，匀浆结束后向发酵液中加入麦芽糊精100g，加热至60℃搅拌，使辅料混匀充分溶解；

(2)料液进行喷雾干燥，采用高压式喷雾，进料速度为300ml/h，进风温度为75℃，出风温度为200℃，最终可得淡黄色猴头菌粉剂121g，液相检测菌粉中麦角硫因含量为0.101g/kg。

实施例5麦角硫因猴头菌粉剂的功效性评价

样品：采用实施例2中所制备的猴头菌粉剂。

动物模型建立：实验动物采用健康的5～6周龄SPF级BALB-c小鼠 40只，雌、雄各半，由上海斯莱克实验动物有限公司提供。实验动物在温度 20～25℃、相对湿度为40％～70％的环境中饲养。

所用试样品推荐摄入量每天猴头菌粉剂为20mg/kg，设置40mg/kg、 20mg/kg，10mg/kg高、中、低三个剂量组选用SPF级BALB-c小鼠40只，按体重随机分为正常对照组、模型组和猴头菌胶囊低、中、高剂量组，每组 8只。各剂量组灌胃样品30天，对照组给予无菌水，各剂量组灌胃样品30 天后，全部动物严格禁食24小时(不禁水)，此期间亦禁止给予受试物。除空白对照外，所有试验组每一只动物给予无水乙醇0.1ml，1小时后处死动物，暴露完整胃，用滤纸吸干胃表面水分，在电子天平上秤取胃样品重量，计算胃体系数，胃体系数＝100*胃重/体重。

表1麦角硫因猴头菌粉剂对BALB-c小鼠体重的影响

由上述表可以看出，在急性胃粘膜损伤的模型(BALB-c)小鼠中喂养实施例5中样品30d后，各剂量组小鼠体重增长良好，体重持续增长，各个剂量组与正常组比较无明显差异(p＞0.5)。

表2麦角硫因猴头菌粉剂对BALB-c小鼠胃重量作用

上述表显示乙醇刺激胃黏膜后，小鼠胃组织明显水肿，重量有明显增加趋势，差异有统计学意义(P<0.001)，而猴头菌灌胃各剂量组，在给予急性乙醇灌胃后，肿胀程度明显减轻，胃组织重量较模型组明显减少，说明实施例 2的猴头菌粉剂具有养胃护胃的作用。

实施例6胶囊制品制备

(1)分别取实施例2中的喷雾干燥制备的猴头菌粉剂4份，与1份无水葡萄糖混合搅拌均匀。

(2)混合物过100目筛，取筛下混合物上胶囊填充机进行充填即可。

(3)将包装好的胶囊用包装盒包装成品入库。

实施例7颗粒制品制备

(1)取实施例3中的喷雾干燥猴头菌粉剂10份，蔗糖30份，蜂蜜1份，香料0.25份，在搅拌下混合均匀。

(2)将混合好的物料导入膨化机进行膨化，制备成为颗粒状制品，产品装袋后经封口机封口用包装盒包装入库。

理化性质检测

实施例8麦角硫因含量检测

取实施例2、3、4的样品分别作为S1、S2、S3，采用外标法检测麦角硫因含量。HPLC条件：Hypersil ODS C18柱(250mm×4.6mm，粒径5μm)；流动相：乙腈-水(3∶97)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长： 254nm；进样量：20μL。色谱图如图1所示，其中，a)为标准品(麦角硫因含量浓度为100mg/L)，b)为S1，c)为S2，d)为S3，结果如表1所示。

表3实施例2、3、4中麦角硫因的含量

实施例9蛋白质含量检测

取实施例2、3、4中的样品总蛋白采用自动凯氏定氮法测定，分别称取 1g，精确至0.001g至消化管中，再加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸于消化炉进行消化。当消化炉温度达到420℃之后，继续消化1h，此时消化管中的液体呈绿色透明状，取出冷却后加入50mL水，于自动凯氏定氮仪上实现自动加液、蒸馏、滴定和记录滴定数据的过程。

试样中蛋白质的含量按式(1)计算:

式中:

X——试样中蛋白质的含量，单位为克每百克(g/100g)；

V1——试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升(mL)；

V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升(mL)；

c——硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；

0.0140——1.0mL硫酸[c(12H₂SO₄)＝1.000mol/L]或盐酸[c(HCl) ＝1.000mol/L]标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克(g)；

m——试样的质量，单位为克(g)；

V3——吸取消化液的体积，单位为毫升(mL)；

F——氮换算为蛋白质的系数，为6.25；；

100——换算系数。

蛋白含量结果如表2所示。

表4实施例2、3、4中蛋白质的含量

	实施例2	实施例3	实施例4
				总蛋白含量(g/kg)	229.6	78.7	60.2

实施例10粗纤维含量测定

(1)粗纤维含量测定采用GBT5009.10-2003方法进行测定，分别取实施例4、5的样品25g粉碎，置于500ml锥形瓶中，加入200ml煮沸1.25％硫酸，微沸，维持30min，每5min摇动一次，充分混合瓶内物质。取下锥形瓶，用亚麻布过滤后，沸水洗涤至洗液不呈现酸性。

(2)用200mL煮沸的1.25％氢氧化钾溶液将亚麻布上存留的物质洗入锥形瓶内加热微沸30min，亚麻布过滤，沸水洗涤2～3次，移入干燥称量的 G2垂融坩埚中，抽滤，用热水充分洗涤后抽干。依次用乙醇和乙醚洗涤。将坩埚和内容物在105℃烘箱中烘干后称重，重复至恒重。

如不溶性杂质较多，可将试样移入石棉坩埚中，再移入550℃高温炉中灰化，使含碳物质全部灰化，置于干燥器内，冷却至室温称量，所损失量为粗纤维量。

(3)结果计算

式中：

X——试样中粗纤维含量；

G——残余物的质量(或经高温炉损失的质量)，单位为克(g)；

m——试样的质量，单位为克(g)。

粗纤维含量结果如表3所示。

表5实施例2、3、4中粗纤维的含量

	实施例2	实施例3	实施例4
				粗纤维含量(g/kg)	11.2	2.9	2.1

实施例11粗脂肪含量检测

(1)粗纤维含量测定采用GBT5009.6-2016方法进行测定称取实施例2、 3、4中的样品各2.5g，准确至0.001g，全部移入滤纸筒内。

(2)将滤纸筒放入索氏抽提器的抽提筒内，连接已干燥至恒重的接收瓶，由抽提器冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至瓶内容积的三分之二处，于水浴上加热，使无水乙醚或石油醚不断回流抽提(6次/h～8次/h)，抽提10h。提取结束，用磨砂玻璃棒接取1滴提取液，磨砂玻璃棒上无油斑表明提取完毕。

(3)取下接收瓶，回收无水乙醚或石油醚，待接收瓶内溶剂剩余1mL～2mL 时在水浴上蒸干，再于100℃±5℃干燥1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。

(4)结果计算：

式中:

X——试样中脂肪的含量，单位为克每百克(g/100g)；

m1——恒重后接收瓶和脂肪的含量，单位为克(g)；

m0——接收瓶的质量，单位为克(g)；

m2——试样的质量，单位为克(g)；

100——换算系数。

粗脂肪含量结果如表4所示。

表6实施例2、3、4中粗脂肪的含量

	实施例2	实施例3	实施例4
				粗脂肪含量(g/kg)	21.5	6.8	5.1

实施例12麦角硫因猴头菌胶囊人体功效作用

在上述实验基础上，选取30名30～50岁，体重60kg～100kg之间有不同消化系统疾病(主要为胃部、肝部相关疾病，如胃胀、腹痛、便秘、恶心、皮肤发黄、面色晦暗等症状)的志愿者人员，作为受试对象。服用方法与服用剂量：每天早饭与晚饭前空腹用温开水各服用一次实施例6中制备的胶囊， 5粒/次，坚持服用三个月。服用后的人员效果如下所示。

	无明显效果	有所改善	明显改善
				人员数量	2	3	25

30名受事人员服用麦角硫因猴头菌胶囊后，有90％以上的人员消化系统疾病有所好转，饮食排泄均恢复正常，特别是对患有胃溃疡、胃炎疾病的患者有明显效果。上述有所改善人员的受试者仍在继续服用。

本发明的以上实施例仅用来说明实现本发明的具体实施方式，这些实施方式不能理解为是对本发明的限制。其他的任何在未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均视为等效的置换方式，落在本发明的保护范围之内。

Claims

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述猴头菌(Hericium erinaceum)的保藏编号为CCTCC NO:M2018567。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述种子培养基包括以下组分：1～10质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源和0.01～1质量％的无机盐。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，在15～30℃、pH 4.0～7.0、50～300rpm振荡培养5～10天，得到种子液。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下组分：1～5质量％的碳源、1～10质量％的有机氮源、0.01～1质量％的无机盐、0.0001～0.001质量％的微量元素和0.0001～0.001质量％的辅酶。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，在15～30℃、pH 4.0～7.0、50～300rpm振荡发酵7～15天，发酵至终点，获得发酵液。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，所述发酵终点为发酵液中残糖≤0.5质量％。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，高压匀浆的匀浆功率为50KW～200KW，工作压力为10MPa～100MPa，均质时间为10～30min。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述喷雾为离心式或压力式喷雾干燥，其进风温度为50℃～100℃，出风温度为150℃～200℃。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，在1份发酵液中加入1％～20％辅料。