CN103444985A - 饲料添加剂、其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明是有关于一种饲料添加剂、其制备方法及应用，其是由以下重量份的组分混合配制而成：杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物40～60份，构树叶枯草杆菌发酵干燥产物20～30份，苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物10～30份；其中，杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物是粪肠球菌先经液体发酵、再引入杜仲叶经固体发酵，而后经干燥而成；构树叶枯草杆菌发酵干燥产物是枯草杆菌先经液体发酵、再引入构树叶经固体发酵，而后经干燥而成；苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物是地衣芽孢杆菌先经液体发酵、再引入苹果渣经固体发酵，而后经干燥而成。其是一种无毒，无残留，无耐药性，多功能的纯天然绿色饲料添加剂。

Description

饲料添加剂、其制备方法及应用

技术领域

本发明涉及一种饲料添加剂，特别是涉及一种纯天然绿色饲料添加剂。

背景技术

饲料添加剂抗生素的危害日益显现，受到社会的广泛关注，寻求一种替代品和替代技术，既能保证畜牧业的生产效益不受影响，又能达到人类食品安全的标准是亟需研究的课题。

发明内容

本发明从理论和实践两个方面出发，从我国农业部2003年12月发布的第318号公告15中益生菌品种中，筛选出粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌。根据这三种益生菌的生化特征，针对性的选择杜仲叶，构树叶和苹果渣这些可再生植物资源不同的营养成分，同时满足合适各个物质的最佳发酵条件，分别经液体和固体双重发酵，最终获得更为丰富的活菌菌体和各种代谢产物。

粪肠球菌通常为兼性厌氧菌，特别适宜在丰富的碳水化合物环境中生长繁殖，产生大量的乳酸及代谢物质，它在pH值为4.5以下时仍可生。杜仲叶中碳水化合物含量可达50.2%，恰好满足了粪肠球菌生长繁殖的需要。研究发现其代谢产物甘露聚糖肽和活菌体对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌都有很强的抑菌效果，随着pH值得降低，抑菌作用逐渐变强，活菌体内和代谢产物中含有较高的超氧化物歧化酶（SOD）能增强动物的体液免疫和细胞免疫。

芽孢杆菌是一种能够产生芽孢的好氧菌，能耐受高温、高压和酸碱，生命力强，构树叶以及苹果渣中的维生素、碳水化合物、微量元素等营养成分。极大地满足了芽孢杆菌生长繁殖的需要。芽孢杆菌能够耐受胃酸和消化道上段胆盐和消化液的破坏，在达到消化道下段以后出芽生长繁殖，芽孢杆菌是好氧菌，在肠道内消耗大量的氧气，维持肠道厌氧环境，从而促进粪肠球菌等厌氧菌的生长，抑制需氧致病菌的生长，维持动物肠道和菌体平衡。芽孢杆菌还能够产生维生素B1、B2、B6等B族维生素、维生素C、蛋白酶、淀粉酶和脂肪酸等酶以及多种代谢产物，对饲料的降解消化吸收和动物的营养代谢起到促进作用。

杜仲叶，是我国特有树种杜仲树的叶子，杜仲叶2005被列入中国药典，属于药食两用规定范围，我国栽植面积广达40万亩，占世界总量的98%以上，主要分布在我国贵州、陕西、四川、河南、湖北等地。杜仲叶每年9～10月份采摘，晒干杀青通风保存。杜仲叶具有强筋骨，补肝肾功效，服之轻身耐劳，为中药之上品，主要成分碳水化合物含量50.2%，蛋白质14.5%，还含有硒、鍺等15种微量元素和15种游离氨基酸，且人体和动物必须氨基酸齐全。

构树叶（又名构桃树、构乳树等）：构树具有速生适应性强，分布广，易繁殖，热量高，萌发期短的特点。功能：补肾利尿、强筋骨。构树叶蛋白质含量高达20～30%，氨基酸、维生素、碳水化合物及微量元素等益生菌必需的营养都十分丰富。

苹果渣：我国年产苹果近2000万吨，苹果加工中每年产生苹果渣近100多万吨，主要成分为可溶性碳水化合物、果胶、除脂肪酸以外的有机酸和半纤维素，用于发酵益生菌，可解决我国蛋白资源的缺乏和提高水果种植和加工业的质量，减少污染具有重大意义。

本发明选择三种纯天然益生菌和三种天然可再生植物资源，在不使用抗生素和有害化学物质的前提下，选取了先分后合的培养发酵制备方法，既实现三者的优势，又可以实现三者之间的优势互补，开创了具有中国特色的生态健康型饲料添加剂的新思路。

本发明从我国饲料添加剂规定可以使用的15种益生菌品种中筛选出粪肠球菌、枯草杆菌、地衣芽孢杆菌这三种人用药理长期应用的益生菌，根据此三种益生菌的生化特征针对性选择杜仲叶、构树叶和苹果渣三种天然可再生植物资源的营养成分，优选适合三种益生菌自身特点的最佳培育发酵条件，分别采取液体和固体的双重发酵并超前将人用药品生产和质量管理GMP环境和手段，运用和贯彻到本发明生产的全过程之中，同时将益生菌发酵技术融汇了微生物学、动物营养学、饲料学和药物制剂学等学科的知识，结合先进的不锈钢制药制剂设备，使三种益生菌和三种天然可再生植物资源的营养成分和生物功效得到充分的释放产品中丰富的活性菌体和代谢产物，极大地增强了产品在实际应用上的效果。

本发明的主要目的在于提供一种无毒，无残留，无耐药性，多功能的纯天然绿色饲料添加剂。

本发明的另一目的在于提供一种上述饲料添加剂的制备方法。

本发明的再一目的在于提供一种上述饲料添加剂添加到畜禽饲料中的用途。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的饲料添加剂，其是由以下重量份的组分混合配制而成：杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物40～60份，构树叶枯草杆菌发酵干燥产物20～30份，苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物10～30份；其中，杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物是粪肠球菌先经液体发酵、再引入杜仲叶经固体发酵，而后经干燥而成；构树叶枯草杆菌发酵干燥产物是枯草杆菌先经液体发酵、再引入构树叶经固体发酵，而后经干燥而成；苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物是地衣芽孢杆菌先经液体发酵、再引入苹果渣经固体发酵，而后经干燥而成。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

较优地，前述的饲料添加剂，其中形成所述苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物的固体发酵步骤中还引入麸皮和杜仲叶中至少一种。本发明人经过试验证明，引入麸皮和/或杜仲叶后效果会更好，因为苹果渣里面的主要成分在制备苹果汁等产品的时候损失的比较多，麸皮中含有较高的碳水化合物和有效成分，在微生物发酵过程中提供能量；而杜仲叶粉也可辅助性地增加能量和有效成分。

较优地，前述的饲料添加剂，其中每克所述饲料添加剂含粪肠球菌至少2个亿、枯草杆菌至少1个亿、地衣芽孢杆菌至少1个亿，甘露聚糖肽≥200mg/kg、绿原酸≥0.4%、京尼平苷酸≥0.4%、总黄酮≥4.0%、含总糖≥12%、含蛋白质≥12%。

较优地，前述的饲料添加剂，其中：所述粪肠球菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2～4%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，葡萄糖2～4%，碳酸钙0.5～1.5%，接种量3～5%，其余为纯净水，pH6.8～7.2，发酵温度37℃～40℃，发酵时间：一、二级20～22小时，三级12～14小时；所述枯草杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨0.5～2%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，硫酸盐0.03%，接种量5～8%，其余为纯净水，pH7.0，发酵温度37～40℃，发酵时间18～20小时；所述地衣芽孢杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1～3%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，接种量6～10%，其余为纯净水，pH7.0～7.2，培养发酵温度37～40℃，发酵时间24～30小时；所述粪肠球菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：杜仲叶40目粗粉100份，碳酸钙1～1.5%，纯净水是杜仲叶粗粉的60%，混合均匀，置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温至37～40℃，接种粪肠球菌三级发酵液，接种量10%，分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～42℃，发酵时间36～42小时，沸腾干燥，温度40～44℃；所述枯草杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：构树叶40目粗粉100份，碳酸钙1～1.5%，纯净水是构树叶粗粉的60%，拌匀后置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温37～40℃，接种枯草杆菌三级发酵液，接种量8～10%，混合均匀后分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～40℃，发酵时间24～30小时，沸腾干燥，温度40～44℃；所述地衣芽孢杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：苹果渣40目粗粉100份，麸皮15%，杜仲叶40目粗粉8-10%，无机盐0.5～2.0%，加入纯净水量是苹果渣粗粉的60%，混合后，置蒸汽灭菌，控制灭菌温度115～121℃，灭菌时间30～60min，冷却至室温，接种地衣芽孢杆菌三级发酵液，接种量10～12%，拌合均匀，分装置预先灭菌的不锈钢筛网容器控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度30～40℃，发酵时间40～48小时，沸腾干燥40～44℃；以上三种固体发酵干燥产物按比例混合，置V型混合机，混合20～35min，按标准检验合格后，即得该饲料添加剂。

较优地，前述的饲料添加剂，其中所述粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌在进行液体发酵培养时，培养基配方中含有杜仲叶提取浓缩液，其是将合格的杜仲新鲜干叶，按1:6的比例，加纯净水浸泡提取2h，控温70～80℃，再进行膜分离浓缩，控制比重1.20～1.28而得。据本发明人研究，杜仲叶提取浓缩液的加入可使发酵后益生菌的数量增加，同时缩短发酵周期。

本发明的目的及解决其技术问题还采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的饲料添加剂的制备方法，其是由以下重量份的组分混合配制而成：杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物40～60份，构树叶枯草杆菌发酵干燥产物20～30份，苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物10～30份；其中，杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物是粪肠球菌先经液体发酵、再引入杜仲叶经固体发酵，而后经干燥而成；构树叶枯草杆菌发酵干燥产物是枯草杆菌先经液体发酵、再引入构树叶经固体发酵，而后经干燥而成；苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物是地衣芽孢杆菌先经液体发酵、再引入苹果渣经固体发酵，而后经干燥而成。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

较优地，前述的饲料添加剂的制备方法，其中形成所述苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物的固体发酵步骤中还引入麸皮和杜仲叶中至少一种。

较优地，前述的饲料添加剂的制备方法，其中：所述粪肠球菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2～4%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，葡萄糖2～4%，碳酸钙0.5～1.5%，接种量3～5%，其余为纯净水，pH6.8～7.2，发酵温度37℃～40℃，发酵时间：一、二级20～22小时，三级12～14小时；所述枯草杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨0.5～2%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，硫酸盐0.03%，接种量5～8%，其余为纯净水，pH7.0，发酵温度37～40℃，发酵时间18～20小时；所述地衣芽孢杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1～3%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，接种量6～10%，其余为纯净水，pH7.0～7.2，培养发酵温度37～40℃，发酵时间24～30小时；所述粪肠球菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：杜仲叶40目粗粉100份，碳酸钙1～1.5%，纯净水是杜仲叶粗粉的60%，混合均匀，置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温至37～40℃，接种粪肠球菌三级发酵液，接种量10%，分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～42℃，发酵时间36～42小时，沸腾干燥，温度40～44℃；所述枯草杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：构树叶40目粗粉100份，碳酸钙1～1.5%，纯净水是构树叶粗粉的60%，拌匀后置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温37～40℃，接种枯草杆菌三级发酵液，接种量8～10%，混合均匀后分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～40℃，发酵时间24～30小时，沸腾干燥，温度40～44℃；所述地衣芽孢杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：苹果渣40目粗粉100份，麸皮15%，杜仲叶40目粗粉8-10%，无机盐0.5～2.0%，加入纯净水量是苹果渣粗粉的60%，混合后，置蒸汽灭菌，控制灭菌温度115～121℃，灭菌时间30～60min，冷却至室温，接种地衣芽孢杆菌三级发酵液，接种量10～12%，拌合均匀，分装置预先灭菌的不锈钢筛网容器控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度30～40℃，发酵时间40～48小时，沸腾干燥40～44℃；以上三种固体发酵干燥产物按比例混合，置V型混合机，混合20～35min，按标准检验合格后，即得该饲料添加剂。

较优地，前述的饲料添加剂的制备方法，其中所述粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌在进行液体发酵培养时，培养基配方中含有杜仲叶提取浓缩液，其是将合格的杜仲新鲜干叶，按1:6的比例，加纯净水浸泡提取2h，控温70～80℃，再进行膜分离浓缩，控制比重1.20～1.28而得。

本发明的目的及解决其技术问题另外再采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的前述的饲料添加剂添加到畜禽饲料中的用途。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

（1）本发明所选择三种益生菌，都具有较强的耐酸耐碱能力，芽孢杆菌还具有耐热耐湿能力，均能在动物体内低pH值及胆汁内生存，而顺利地进入胃肠道，切实起到维持肠道菌群平衡同时可以结合产品中绿原酸、总黄酮进一步强化了杀死和抑制有害菌的生长，提高富余养殖的成活率。

（2）本发明产品中的甘露聚糖肽，各种酶活性小肽等丰富的代谢产物能激活动物体内吞噬细胞，干扰病毒核合成，抑制病毒在动物体内正常细胞内的复制，促进体液和细胞免疫，增强动物的免疫和非特异性免疫功能，具有很强的抗病毒能力，同时对病原微生物不易产生抗药性，没有药残和抗生素残留，是一种可以替代抗生素和化学药物类的饲料添加剂。

（3）本发明选择的杜仲叶，构树叶和苹果渣三种天然可再生植物资源，丰富多彩的营养成分，既能促进三种益生菌的生长繁殖，使产品中活菌体和代谢产物成倍增加，又能使营养成分自身得到充分降解。更有利动物的消化吸收，促进动物生长，产品独有的亲在平苷酸成分。临床证明，具有独特的活化动物合成胶原蛋白的能力和降低动物饱和脂肪酸、降低胆固醇能力，使畜禽肉蛋口感更加鲜美，更具野生风味。可以预言，随着人们对食品安全，生态安全和环境保护的关注，随着人们对无公害，保健型肉蛋奶产品需求量的日益增加，本发明将会在动物生态养殖中起到越来越重要的作用。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举较佳实施例，详细说明如下。

具体实施方式

为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效,以下结合较佳实施例，对依据本发明提出的饲料添加剂、其制备方法及应用其具体实施方式、方法、步骤、特征及其功效，详细说明如后。

实施例1

本发明的绿色复合型微生物多功能饲料添加剂的制备方法及配方如下：

（一）杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物的制备

1．制备粪肠球菌斜面菌种：购买一支粪肠球菌原始菌，接种于一级合成流体培养基中，37～40℃恒温培养箱进行活化发酵培养24小时后从中吸取1mL菌液，置不同稀释度的平皿，每只平皿倒入20mL的琼脂营养培养基，凝固后倒置恒温箱37～40℃，培养72小时，再从中挑选透明大菌落和相对比较小的菌落两份，其中一份作鉴别试验，以确定原始菌种扩繁后的纯度和菌落数量，另一份继续置试管液体培养基中40℃恒温培养24小时后，用接种环从摇匀后的试管发酵培养基中钩取一铂金耳，在预先配制灭菌冷却的固体斜面培养基表面划线，37～40℃恒温培养24小时即可，可供生产应用的斜面菌种。

2．1～3级液体发酵培养基的配方和制法

（1）将斜面菌种逐级装入一、二级试管和三角瓶进行增菌培养发酵。

（2）一、二、三级发酵用液体培养基的制备：各级培养基配方：蛋白胨4%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，碳酸钙0.5%，一、二级用葡萄糖2%，三级用葡萄糖4%，杜仲叶提取浓缩液1.0%，碳酸钙1.5%，pH6.8～7.2，接种量4.7%，剩余用纯净水补充到总量100%。

其中，杜仲叶提取浓缩液的制备方法为：将合格的杜仲新鲜干叶，按1:6的比例，加纯净水浸泡提取2h，控温70～80℃，再进行膜分离浓缩，控制比重1.20～1.28而得。

（3）培养发酵条件：一、二、三级培养发酵温度都为37～40℃；培养发酵时间一、二级20小时，三级14小时。

（4）三级液体发酵合格后，转入固体发酵。

3．粪肠球菌固体发酵培养基的配方和制备方法：

（1）将合格的杜仲干叶粉碎过40目筛。

（2）称取40目杜仲粉100份，碳酸钙1.5%、纯净水是杜仲叶粗粉的60%，置球型蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌时间30min，迅速冷却降温至37～40℃，接种于上述制备好的三级发酵液，接种量为10%，球型蒸汽灭菌旋转，内置物料混合均匀后，分装于预先灭菌的不锈钢筛网容器内，控制厚度8～10cm，置灭菌恒温培养间进行固体发酵，控制培养发酵温度37～40℃，发酵时间42小时，即可转入沸腾干燥进行控温干燥，44℃，干燥至水分含量合格为止，制成杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物，供总混备用。

（二）构树叶枯草芽孢杆菌发酵干燥产物的制备

1．制备枯草杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨0.5%，牛肉膏0.1%，氯化钠0.17%，杜仲叶提取浓缩液0.5%，硫酸盐0.03%，纯净水93.7%，pH7.0，发酵温度37～40℃，接种量5%，发酵时间18小时。

2．枯草芽孢杆菌固体发酵培养基的配方及制备：所述枯草杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：构树叶40目粗粉100份，碳酸钙1%，纯净水是构树叶粗粉的60%，拌匀后置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温37～40℃，接种枯草杆菌三级发酵液，接种量8%，混合均匀后分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～40℃，发酵时间24小时。

3．固体发酵结束后，进行沸腾干燥控制干燥温度40～44℃即得构树叶枯草芽孢杆菌干燥产物，密封，装桶，备用。

（三）苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物的制备

1．所述地衣芽孢杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1%，牛肉膏0.1%，氯化钠0.1%，杜仲叶提取浓缩液0.5%，纯净水92.3%，pH7.0～7.2，接种量6%，培养发酵温度37～40℃，发酵时间24小时。

2．地衣芽孢杆菌固体培养基的配方和制备

合格干燥的40目苹果渣粗粉100份，麸皮15%，杜仲叶40目粗粉8%，无机盐0.5%，纯净水的总量是苹果渣粗粉的60%，混合后，置球型蒸汽灭菌器混匀，控制灭菌温度115～121℃，灭菌时间30min，抽真空迅速降温至室温，接种地衣芽孢杆菌三级发酵液，接种量10%。

3．接种后的地衣芽孢杆菌固体发酵物料搅拌均匀，分装置预先灭菌的不锈钢筛网容器控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度30～40℃，发酵时间40小时，沸腾干燥40～44℃。

（四）总混

将上述杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物60份，构树叶枯草芽孢杆菌发酵干燥产物30份，苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物10份，三者精确称量置V型混合机混合20～35min，取样送检合格后包装。

最终产品每克含活性粪肠球菌至少2个亿，每克含枯草杆菌至少1个亿，每克含地衣芽孢杆菌至少1个亿。含甘露聚糖肽≥200mg/kg、含绿原酸≥0.4%、京尼平苷酸≥0.4%、总黄酮≥4.0%、含总糖≥12%、含蛋白质≥12%。

实施例2

本发明的绿色复合型微生物多功能饲料添加剂的制备方法及配方如下：

（一）杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物的制备

1．粪肠球菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨3%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，葡萄糖3%，碳酸钙1%，杜仲叶提取浓缩液1.5%，纯净水86%，pH6.8～7.2，接种量4.5%，发酵温度37℃～40℃，发酵时间：一、二级22小时，三级14小时。

2．粪肠球菌固体发酵培养基的配方和制备方法

（1）将合格的杜仲干叶粉碎过40目筛。

（2）称取40目杜仲粉100份，碳酸钙1.5%、纯净水是杜仲叶粗粉的60%，置球型蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌时间25～30min，迅速冷却降温至37～40℃，接种于上述制备好的三级发酵液，接种量为10%，球型蒸汽灭菌旋转，内置物料混合均匀后，分装于预先灭菌的不锈钢筛网容器内，控制厚度8～10cm，置灭菌恒温培养间进行固体发酵，控制培养发酵温度37～42℃，发酵时间42小时，即可转入沸腾干燥进行控温干燥，温度40～44℃。干燥至水分含量合格为止，制成杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物，供总混备用。

（二）构树叶枯草芽孢杆菌发酵干燥产物的制备

1．制备枯草杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1.5%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.47%，杜仲叶提取浓缩液1.5%，硫酸盐0.03%，纯净水90%，pH7.0，发酵温度37～40℃，接种量6%，发酵时间20小时。

2．枯草芽孢杆菌固体发酵培养基的配方及制备：所述枯草杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：构树叶40目粗粉100份，碳酸钙1.5%，纯净水是构树叶粗粉的60%，拌匀后置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温37～40℃，接种枯草杆菌三级发酵液，接种量10%，混合均匀后分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～40℃，发酵时间30小时。

3．固体发酵结束后，进行沸腾干燥控制干燥温度40～44℃即得构树叶枯草芽孢杆菌干燥产物，密封，装桶，备用。

（三）苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物的制备

1．制备地衣芽孢杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为蛋白胨2%，牛肉膏0.3%，氯化钠0.2%，杜仲叶提取浓缩液1.5%，纯净水90%，pH7.0～7.2，接种量6%，培养发酵温度37～40℃，发酵时间24小时。

2．地衣芽孢杆菌固体培养基的配方和制备

合格干燥的40目苹果渣粗粉100份，麸皮15%，杜仲叶40目粗粉10%，无机盐2%，纯净水的总量是苹果渣粗粉的60%，混合后，置球型蒸汽灭菌器混匀，控制灭菌温度115～121℃，灭菌时间60min，抽真空迅速降温至室温，接种地衣芽孢杆菌三级发酵液，接种量10%。

3．接种后的地衣芽孢杆菌固体发酵物料搅拌均匀，分装置预先灭菌的不锈钢筛网容器控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度30～40℃，发酵时间48小时，沸腾干燥40～44℃。

（四）总混

将上述杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物50份，构树叶枯草芽孢杆菌发酵干燥产物30份，苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物20份，三者精确称量置V型混合机混合20～35min，取样送检合格后包装，即得该饲料添加剂。

最终产品每克含活性粪肠球菌至少2个亿，每克含枯草杆菌至少1个亿，每克含地衣芽孢杆菌至少1个亿。含甘露聚糖肽≥200mg/kg、含绿原酸≥0.4%、京尼平苷酸≥0.4%、总黄酮≥4.0%、含总糖≥12%、含蛋白质≥12%。

实施例3

本发明的绿色复合型微生物多功能饲料添加剂的制备方法及配方如下：

（一）杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物的制备

1．粪肠球菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨4%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，葡萄糖4%，碳酸钙1.5%，纯净水84.5%，pH6.8～7.2，接种量5%，发酵温度37℃～40℃，发酵时间：一、二级22小时，三级14小时，三级液体发酵合格后，转入固体发酵。

3．粪肠球菌固体发酵培养基的配方和制备方法

（1）将合格的杜仲干叶粉碎过40目筛。

（2）称取40目杜仲粉100份，碳酸钙1.5%、纯净水是杜仲叶粗粉的60%，置球型蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌时间25～30min，迅速冷却降温至37～40℃，接种于上述制备好的三级发酵液，接种量为10%，球型蒸汽灭菌旋转，内置物料混合均匀后，分装于预先灭菌的不锈钢筛网容器内，控制厚度8～10cm，置灭菌恒温培养间进行固体发酵，控制培养发酵温度37～40℃，发酵时间42小时，即可转入沸腾干燥进行控温干燥，温度40～44℃，干燥至水分含量合格为止，制成杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物，供总混备用。

（二）构树叶枯草芽孢杆菌发酵干燥产物的制备

1．枯草杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，硫酸盐0.03%，纯净水88.97%，pH7.0，发酵温度37～40℃，接种量8%，发酵时间20小时。

2．枯草芽孢杆菌固体发酵培养基的配方及制备：所述枯草杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：构树叶40目粗粉100份，碳酸钙1.5%，纯净水是构树叶粗粉的60%，拌匀后置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温37～40℃，接种枯草杆菌三级发酵液，接种量10%，混合均匀后分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～40℃，发酵时间30小时。

3．固体发酵结束后，进行沸腾干燥控制干燥温度40～44℃即得构树叶枯草芽孢杆菌干燥产物，密封，装桶，备用。

（三）苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物的制备

1．地衣芽孢杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，纯净水90%，pH7.0～7.2，接种量7%，培养发酵温度37～40℃，发酵时间30小时。

2．地衣芽孢杆菌固体培养基的配方和制备：

合格干燥的40目苹果渣粗粉100份，麸皮15%，杜仲叶40目粗粉10%，无机盐2%，纯净水的总量是苹果渣粗粉的60%，混合后，置球型蒸汽灭菌器混匀，控制灭菌温度115～121℃，灭菌时间30min，抽真空迅速降温至室温，接种地衣芽孢杆菌三级发酵液，接种量12%。

3．接种后的地衣芽孢杆菌固体发酵物料搅拌均匀，分装置预先灭菌的不锈钢筛网容器控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度30～40℃，发酵时间48小时，沸腾干燥40～44℃。

4．总混，将上述杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物60份，构树叶枯草芽孢杆菌发酵干燥产物20份，苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物20份，三者精确称量置V型混合机混合20～35min，取样送检合格后包装。

最终产品每克含活性粪肠球菌至少2个亿，每克含枯草杆菌至少1个亿，每克含地衣芽孢杆菌至少1个亿。含甘露聚糖肽≥200mg/kg、含绿原酸≥0.4%、京尼平苷酸≥0.4%、总黄酮≥4.0%、含总糖≥12%、含蛋白质≥12%。

实施例4

本发明的绿色复合型微生物多功能饲料添加剂的制备方法及配方如下：

（一）杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物的制备：

1．粪肠球菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨3%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，葡萄糖4%，碳酸钙1%，纯净水86%，pH6.8～7.2，接种量5%，发酵温度37℃～40℃，发酵时间：一、二级22小时，三级14小时，三级液体发酵合格后，转入固体发酵。

2．粪肠球菌固体发酵培养基的配方和制备方法

（1）将合格的杜仲干叶粉碎过40目筛

（2）称取40目杜仲粉100份，碳酸钙1.5%、纯净水是杜仲叶粗粉的60%，置球型蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌时间25～30min，迅速冷却降温至37～40℃，接种于上述制备好的三级发酵液，接种量为10%，球型蒸汽灭菌旋转，内置物料混合均匀后，分装于预先灭菌的不锈钢筛网容器内，控制厚度8～10cm，置灭菌恒温培养间进行固体发酵，控制培养发酵温度37～40℃，发酵时间44小时，即可转入沸腾干燥进行控温干燥，温度40～44℃，干燥至水分含量合格为止，制成杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物，供总混备用。

（二）构树叶枯草芽孢杆菌发酵干燥产物的制备

1．枯草杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，硫酸盐0.03%，纯净水90%，pH7.0，发酵温度37～40℃，接种量6.97%，发酵时间20小时。

2．枯草芽孢杆菌固体发酵培养基的配方及制备：所述枯草杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：构树叶40目粗粉100份，碳酸钙1.5%，纯净水是构树叶粗粉的60%，拌匀后置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温37～40℃，接种枯草杆菌三级发酵液，接种量8%，混合均匀后分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～40℃，发酵时间30小时。

3．固体发酵结束后，进行沸腾干燥控制干燥温度40～44℃即得构树叶枯草芽孢杆菌干燥产物，密封，装桶，备用。

（三）苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物的制备

1．地衣芽孢杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨3%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，纯净水90%，pH7.0～7.2，接种量6%，培养发酵温度37～40℃，发酵时间30小时。

2．地衣芽孢杆菌固体培养基的配方和制备

合格干燥的40目苹果渣粗粉100份，麸皮15%，杜仲叶40目粗粉10%，无机盐2%，纯净水的总量是苹果渣粗粉的60%，混合后，置球型蒸汽灭菌器混匀，控制灭菌温度115～121℃，灭菌时间60min，抽真空迅速降温至室温，接种地衣芽孢杆菌三级发酵液，接种量12%。

3．接种后的地衣芽孢杆菌固体发酵物料搅拌均匀，分装置预先灭菌的不锈钢筛网容器控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度30～40℃，发酵时间48小时，沸腾干燥40～44℃。

4．总混，将上述杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物50份，构树叶枯草芽孢杆菌发酵干燥产物20份，苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物30份，三者精确称量置V型混合机混合20～35min，取样送检合格后包装。

最终产品每克含活性粪肠球菌至少2个亿，每克含枯草杆菌至少1个亿，每克含地衣芽孢杆菌至少1个亿。含甘露聚糖肽≥200mg/kg、含绿原酸≥0.4%、京尼平苷酸≥0.4%、总黄酮≥4.0%、含总糖≥12%、含蛋白质≥12%。

需说明的是，以上各实施例中，本发明的饲料添加剂的制备方法并不仅限于此，一些步骤或操作方法可由本领域技术人员得知的其他惯用步骤或方法所替换以实现本发明。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的方法及技术内容作出些许的更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种饲料添加剂，其特征在于其是由以下重量份的组分混合配制而成：杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物40～60份，构树叶枯草杆菌发酵干燥产物20～30份，苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物10～30份；

其中，杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物是粪肠球菌先经液体发酵、再引入杜仲叶经固体发酵，而后经干燥而成；构树叶枯草杆菌发酵干燥产物是枯草杆菌先经液体发酵、再引入构树叶经固体发酵，而后经干燥而成；苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物是地衣芽孢杆菌先经液体发酵、再引入苹果渣经固体发酵，而后经干燥而成。

2.如权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于形成所述苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物的固体发酵步骤中还引入麸皮和杜仲叶中至少一种。

3.如权利要求1或2所述的饲料添加剂，其特征在于每克所述饲料添加剂含粪肠球菌至少2个亿、枯草杆菌至少1个亿、地衣芽孢杆菌至少1个亿，甘露聚糖肽≥200mg/kg、绿原酸≥0.4%、京尼平苷酸≥0.4%、总黄酮≥4.0%、含总糖≥12%、含蛋白质≥12%。

4.如权利要求2所述的饲料添加剂，其特征在于：

所述粪肠球菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2～4%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，葡萄糖2～4%，碳酸钙0.5～1.5%，接种量3～5%，其余为纯净水，pH6.8～7.2，发酵温度37℃～40℃，发酵时间：一、二级20～22小时，三级12～14小时；

所述枯草杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨0.5～2%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，硫酸盐0.03%，接种量5～8%，其余为纯净水，pH7.0，发酵温度37～40℃，发酵时间18～20小时；

所述地衣芽孢杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1～3%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，接种量6～10%，其余为纯净水，pH7.0～7.2，培养发酵温度37～40℃，发酵时间24～30小时；

所述粪肠球菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：杜仲叶40目粗粉100份，碳酸钙1～1.5%，纯净水是杜仲叶粗粉的60%，混合均匀，置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温至37～40℃，接种粪肠球菌三级发酵液，接种量10%，分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～42℃，发酵时间36～42小时，沸腾干燥，温度40～44℃；

所述枯草杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：构树叶40目粗粉100份，碳酸钙1～1.5%，纯净水是构树叶粗粉的60%，拌匀后置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温37～40℃，接种枯草杆菌三级发酵液，接种量8～10%，混合均匀后分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～40℃，发酵时间24～30小时，沸腾干燥，温度40～44℃；

所述地衣芽孢杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：苹果渣40目粗粉100份，麸皮15%，杜仲叶40目粗粉8-10%，无机盐0.5～2.0%，加入纯净水量是苹果渣粗粉的60%，混合后，置蒸汽灭菌，控制灭菌温度115～121℃，灭菌时间30～60min，冷却至室温，接种地衣芽孢杆菌三级发酵液，接种量10～12%，拌合均匀，分装置预先灭菌的不锈钢筛网容器控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度30～40℃，发酵时间40～48小时，沸腾干燥40～44℃；

以上三种固体发酵干燥产物按比例混合，置V型混合机，混合20～35min，按标准检验合格后，即得该饲料添加剂。

5.如权利要求1、2或4所述的饲料添加剂，其特征在于所述粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌在进行液体发酵培养时，培养基配方中含有杜仲叶提取浓缩液，其是将合格的杜仲新鲜干叶，按1:6的比例，加纯净水浸泡提取2h，控温70～80℃，再进行膜分离浓缩，控制比重1.20～1.28而得。

6.一种饲料添加剂的制备方法，其特征在于其是由以下重量份的组分混合配制而成：杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物40～60份，构树叶枯草杆菌发酵干燥产物20～30份，苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物10～30份；

其中，杜仲叶粪肠球菌发酵干燥产物是粪肠球菌先经液体发酵、再引入杜仲叶经固体发酵，而后经干燥而成；构树叶枯草杆菌发酵干燥产物是枯草杆菌先经液体发酵、再引入构树叶经固体发酵，而后经干燥而成；苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物是地衣芽孢杆菌先经液体发酵、再引入苹果渣经固体发酵，而后经干燥而成。

7.如权利要求6所述的饲料添加剂的制备方法，其特征在于形成所述苹果渣地衣芽孢杆菌发酵干燥产物的固体发酵步骤中还引入麸皮和杜仲叶中至少一种。

8.如权利要求7所述的饲料添加剂的制备方法，其特征在于：

所述粪肠球菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2～4%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，葡萄糖2～4%，碳酸钙0.5～1.5%，接种量3～5%，其余为纯净水，pH6.8～7.2，发酵温度37℃～40℃，发酵时间：一、二级20～22小时，三级12～14小时；

所述枯草杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨0.5～2%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，硫酸盐0.03%，接种量5～8%，其余为纯净水，pH7.0，发酵温度37～40℃，发酵时间18～20小时；

所述地衣芽孢杆菌液体发酵培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1～3%，牛肉膏0.1～0.5%，氯化钠0.1～0.5%，接种量6～10%，其余为纯净水，pH7.0～7.2，培养发酵温度37～40℃，发酵时间24～30小时；

所述粪肠球菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：杜仲叶40目粗粉100份，碳酸钙1～1.5%，纯净水是杜仲叶粗粉的60%，混合均匀，置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温至37～40℃，接种粪肠球菌三级发酵液，接种量10%，分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～42℃，发酵时间36～42小时，沸腾干燥，温度40～44℃；

所述枯草杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：构树叶40目粗粉100份，碳酸钙1～1.5%，纯净水是构树叶粗粉的60%，拌匀后置蒸汽灭菌器115～121℃，灭菌25～30min，冷却降温37～40℃，接种枯草杆菌三级发酵液，接种量8～10%，混合均匀后分装预先灭菌的不锈钢筛网容器，控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度37～40℃，发酵时间24～30小时，沸腾干燥，温度40～44℃；

所述地衣芽孢杆菌固体发酵培养基的配方和制备方法为：苹果渣40目粗粉100份，麸皮15%，杜仲叶40目粗粉8-10%，无机盐0.5～2.0%，加入纯净水量是苹果渣粗粉的60%，混合后，置蒸汽灭菌，控制灭菌温度115～121℃，灭菌时间30～60min，冷却至室温，接种地衣芽孢杆菌三级发酵液，接种量10～12%，拌合均匀，分装置预先灭菌的不锈钢筛网容器控制厚度8～10cm，置无菌恒温培养间，控制发酵温度30～40℃，发酵时间40～48小时，沸腾干燥40～44℃；

以上三种固体发酵干燥产物按比例混合，置V型混合机，混合20～35min，按标准检验合格后，即得该饲料添加剂。

9.如权利要求6、7或8所述的饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌在进行液体发酵培养时，培养基配方中含有杜仲叶提取浓缩液，其是将合格的杜仲新鲜干叶，按1:6的比例，加纯净水浸泡提取2h，控温70～80℃，再进行膜分离浓缩，控制比重1.20～1.28而得。

10.如权利要求1-5任一权利要求所述的饲料添加剂添加到畜禽饲料中的用途。