CN103098986A - 有益微生物无抗生物饲料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种有益微生物无抗生物饲料及其制备方法，分别二级发酵培养制备嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液、酿酒酵母菌液和地衣芽孢杆菌菌液；然后，将地衣芽孢杆菌菌液与棉籽粕混合，进行好氧发酵；再将发酵棉籽粕、玉米粉、啤酒渣、预混料混合均匀，并加入由嗜酸乳杆菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液组成的复合菌液，混合均匀，恒温发酵，即得。本发明的无抗生物饲料，不添加抗生素药物，有益微生物含量高，具有很好诱食性，适口性好，增加动物的采食量，营养消化吸收率高，促进动物生长，提高动物健康水平，改善动物机体免疫抗病力。应用本发明于无抗畜禽产品的养殖中，可降低养殖成本，提高经济效益，推动养殖业的健康发展。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵饲料领域，尤其涉及一种有益微生物无抗生物饲料及其制备方法。
背景技术
现代化养殖业日益趋于规模化、集约化，使用抗生素药物成为保障畜牧业发展的关键环节。但是，在养殖业中由于不科学用药、滥用药物，导致在畜禽肉制品中药物残留超标，并诱发病原菌耐药性的加剧，残留的药物通过食物链将影响消费者的健康；粪便中残留的抗生素药物会改变土壤固有微生物结构，破坏大自然生态平衡。近年来，随着肉制品药物残留超标事件的频繁曝光，畜牧业工作者开始考虑养殖安全、食品安全、生态安全的协调发展。
显然，有益微生物无抗生物饲料正符合发展健康畜牧养殖的需求。无抗生物饲料的生产是应用有益微生物在饲料合适环境中大量繁殖，降解饲料原料中抗营养因子，并将大分子营养物质降解为易消化的小分子物质，从而提高营养消化吸收率，同时拓宽饲料原料来源，缓解人畜争粮的紧张局面。此外，有益微生物在代谢过程中，分泌的有机酸、维生素、脂多糖、活性小肽等可提高动物机体免疫抗病力，并提高生长速度。然而，目前无抗生物饲料生产还存在一些问题，如发酵关键工艺的优化以及菌种的科学选择复配。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种配方安全合理、工艺科学简单、成本低功效高的有益微生物无抗生物饲料及其制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：有益微生物无抗生物饲料，主要由发酵棉籽粕、玉米粉、啤酒渣、预混料和复合菌液经发酵制成；复合菌液由嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液组成。
上述有益微生物无抗生物饲料，主要由发酵棉籽粕7kg、玉米粉60kg、啤酒渣17kg、预混料4.0kg和复合菌液3～9kg经发酵制成；复合菌液由嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液按重量比1～3:1～3:1～3组成，嗜酸乳杆菌菌液活菌数≥1×109CFU/ml、植物乳杆菌菌液活菌数≥6×108CFU/ml、酿酒酵母菌液活菌数≥10×108CFU/ml。
上述有益微生物无抗生物饲料的制备方法，分别二级发酵培养制备嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液、酿酒酵母菌液和地衣芽孢杆菌菌液；然后，将地衣芽孢杆菌菌液与棉籽粕混合，进行好氧发酵；再将发酵棉籽粕、玉米粉、啤酒渣、预混料混合均匀，并加入由嗜酸乳杆菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液组成的复合菌液，混合均匀，恒温发酵，即得。
上述有益微生物无抗生物饲料的制备方法，包括以下步骤：
<1>有益微生物菌液的二级发酵制备
嗜酸乳杆菌菌液的制备：一级菌液——将活化菌种接种于500ml无菌MRS培养基中，按体积比计接种量为2%，在厌氧培养箱中37℃恒温培养24h，活菌数≥1×109CFU/ml；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌MRS培养基中，接种量为2%，37℃恒温厌氧培养24h，每2h搅拌培养基1min，活菌数≥1×109CFU/ml；
植物乳杆菌菌液的制备：一级菌液——将活化菌种接种于500ml无菌MRS培养基中，按体积比计接种量为3%，在厌氧培养箱中37℃恒温培养36h，活菌数≥6×108CFU/ml；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌MRS培养基中，接种量为3%，37℃恒温厌氧培养24h，每2h搅拌培养基1min，活菌数≥6×108CFU/ml；
酿酒酵母菌液的制备：一级菌液——将活化斜面菌种接种于装有100ml无菌麦芽汁培养基的锥形瓶中，锥形瓶容积为1000ml，放于30℃恒温震荡培养箱中培养24h，转速为200rpm，活菌数≥5×108CFU/ml；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌麦芽汁培养基中，接种量为1%，装料系数0.65，搅拌转速300rpm，调节通气量维持培养液的溶氧值≥35%，30℃恒温好氧培养24h，活菌数≥10×108CFU/ml；
地衣芽孢杆菌菌液的制备：一级菌液——将活化斜面菌种接种于装有100ml无菌DY培养基的锥形瓶中，锥形瓶容积为1000ml，放于37℃恒温震荡培养箱中培养22h，转速为200rpm，活菌数≥2×109CFU/m1；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌DY培养基中，接种量为1%，装料系数0.65，搅拌转速300rpm，调节通气量维持培养液的溶氧值≥35%，37℃恒温好氧培养22h，活菌数≥8×109CFU/ml；
<2>发酵棉籽粕的制备
将地衣芽孢杆菌菌液0.5～3.5kg、棉籽粕100kg、水100kg混合均匀，于35℃恒温条件下好氧发酵48h，即得发酵棉籽粕；
<3>无抗生物饲料的制备
将发酵棉籽粕7kg、花生粕5kg、玉米粉60kg、啤酒渣17kg、糖蜜5kg、磷酸氢钙0.4kg、碳酸钙1kg、食盐0.2kg、预混料4.0kg、赖氨酸0.4kg投入混合机混合均匀，然后将复合菌液3～9kg溶于80kg的35℃水中，喷入混合机中再次混合均匀，在35℃恒温条件下发酵2天，即得；复合菌液由嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液按重量比1～3:1～3:1～3组成。
MRS培养基组成为胰蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸二铵2.0g/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、七水硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L、吐温801ml/L、葡萄糖20g/L、碳酸钙10g/L，pH值为6.3；麦芽汁培养基由12波美度全麦芽汁中加入1.5%蛋白胨配制而成；DY培养基组成为蛋白胨10g/L、牛肉膏5g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾1g/L、七水硫酸镁0.5g/L、氯化钠3g/L，pH值为6.8。
预混料中每千克含维生素A100万IU，维生素D20万IU，维生素E2000IU，维生素K200mg，维生素B1200mg，维生素B2500mg，维生素B6200mg，维生素B121.5mg，泛酸钙1g，烟酰胺1.5g，叶酸110mg，氯化胆碱40g，Mn3g，Zn3g，Cu5g，Fe10g，碘40mg，Se50mg。
针对目前养殖业用药不科学及其带来的药物残留超标和无抗生物饲料生产方面的问题，发明人建立本发明有益微生物无抗生物饲料及其制备方法。与现有技术相比，本发明具有以下突出优点：
1、本发明的有益微生物菌液分开单独培养，活性强，在饲料发酵过程迅速繁殖成优势菌群并产生大量乳酸、活性小肽、维生素等，能有效抑制饲料中杂菌、有害菌的生长，发酵效果稳定，可提高饲料养分的消化率。
2、本发明选择复配的有益微生物对饲料原料的抗营养因子降低能力强，可有效消除其对动物肠道的致敏反应或毒害，提高非常规饲料原料的使用效果。
3、本发明采用生料固体发酵，节约能源，并有效保护饲料原料中生物活性成分，易于实现流水线操作，生产成本低。
4、本发明制备的无抗发酵饲料，不添加抗生素药物，有益微生物含量高，可有效稳定动物肠道微生态系统，提高动物健康水平；饲料在发酵过程中产生菌体蛋白、细胞壁，富含生物活性小肽、酵母细胞，可以提高动物机体免疫抗病力；而且酸醇味浓，呈味氨基酸含量高，粗纤维软化效果好，具有很好诱食性，适口性好，增加动物的采食量，营养消化吸收率高，促进动物生长，应用于无抗畜禽产品的养殖中，可降低养殖成本，提高经济效益，推动养殖业的健康发展。
具体实施方式
实施例1
<1>有益微生物菌液的二级发酵制备
嗜酸乳杆菌菌液的制备：一级菌液——将活化菌种接种于500ml无菌MRS培养基中，按体积比计接种量为2%，在厌氧培养箱中37℃恒温培养24h，活菌数≥1×109CFU/ml；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌MRS培养基中（装于发酵灌），接种量为2%，37℃恒温厌氧培养24h，每2h搅拌培养基1min，活菌数≥1×109CFU/ml；
植物乳杆菌菌液的制备：一级菌液——将活化菌种接种于500ml无菌MRS培养基中，按体积比计接种量为3%，在厌氧培养箱中37℃恒温培养36h，活菌数≥6×108CFU/ml；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌MRS培养基中（装于发酵灌），接种量为3%，37℃恒温厌氧培养24h，每2h搅拌培养基1min，活菌数≥6×108CFU/ml；
其中，MRS培养基组成为胰蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸二铵2.0g/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、七水硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L、吐温801ml/L、葡萄糖20g/L、碳酸钙10g/L，pH值为6.3。
酿酒酵母菌液的制备：一级菌液——将活化斜面菌种接种于装有100ml无菌麦芽汁培养基的锥形瓶中，锥形瓶容积为1000ml，放于30℃恒温震荡培养箱中培养24h，转速为200rpm，活菌数≥5×108CFU/ml；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌麦芽汁培养基中（装于发酵灌），接种量为1%，装料系数0.65，搅拌转速300rpm，调节通气量维持培养液的溶氧值≥35%，30℃恒温好氧培养24h，活菌数≥10×108CFU/ml；
其中，麦芽汁培养基由12波美度全麦芽汁中加入1.5%蛋白胨配制而成。
地衣芽孢杆菌菌液的制备：一级菌液——将活化斜面菌种接种于装有100ml无菌DY培养基的锥形瓶中，锥形瓶容积为1000ml，放于37℃恒温震荡培养箱中培养22h，转速为200rpm，活菌数≥2×109CFU/m1；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌DY培养基中（装于发酵灌），接种量为1%，装料系数0.65，搅拌转速300rpm，调节通气量维持培养液的溶氧值≥35%，37℃恒温好氧培养22h，活菌数≥8×109CFU/ml；
其中，DY培养基组成为蛋白胨10g/L、牛肉膏5g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾1g/L、七水硫酸镁0.5g/L、氯化钠3g/L，pH值为6.8。
<2>发酵棉籽粕的制备
将地衣芽孢杆菌菌液0.5kg、棉籽粕100kg、水100kg混合均匀，于35℃恒温条件下好氧发酵48h，即得发酵棉籽粕，小肽含量为5%（以干基计算，采用三氯乙酸法检测）；
<3>无抗生物饲料的制备
将发酵棉籽粕7kg（按含干物质88%计算，即干品约为6.16kg）、花生粕5kg、玉米粉60kg、啤酒渣17kg、糖蜜5kg、磷酸氢钙0.4kg、碳酸钙1kg、食盐0.2kg、预混料4.0kg、赖氨酸0.4kg投入混合机混合均匀，然后将复合菌液（由嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液按重量比1:1:1组成）3kg溶于80kg的35℃水中，喷入混合机中再次混合均匀，按每桶50kg包装，桶盖设有单向透气阀，在35℃恒温条件下发酵2天，即得无抗生物饲料，小肽含量为1.3%（以干基计算），pH值为5.8。
其中，预混料中每千克含维生素A100万IU，维生素D20万IU，维生素E2000IU，维生素K200mg，维生素B1200mg，维生素B2500mg，维生素B6200mg，维生素B121.5mg，泛酸钙1g，烟酰胺1.5g，叶酸110mg，氯化胆碱40g，Mn3g，Zn3g，Cu5g，Fe10g，碘40mg，Se50mg。
饲养试验：选用80头瘦肉型猪，初体重45±0.85kg，分试验组和对照组，试验组饲喂实施例1制得的无抗生物饲料（饲料用量按干物质含量为88%折算），对照组饲喂含抗生素药物的常规日粮（未经发酵处理），预饲期5天，正式试验周期25天，结果见表1。
表1实施例1无抗生物饲料饲养试验结果
实施例2
步骤<2>中地衣芽孢杆菌菌液2kg，发酵棉籽粕小肽含量为8%；步骤<3>中，复合菌液（由嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液按重量比3:3:1组成）7kg，无抗生物饲料，小肽含量为2.1%（以干基计算），pH值为4.7。此外，其他基本同实施例1。
饲养试验：选用80头瘦肉型猪，初体重45±0.68kg，分试验组和对照组，试验组饲喂实施例2制得的无抗生物饲料（饲料用量按干物质含量为88%折算），对照组饲喂含抗生素药物的常规日粮（未经发酵处理），预饲期5天，正式试验周期25天，结果见表2。
表2实施例2无抗生物饲料饲养试验结果
实施例3
步骤<2>中地衣芽孢杆菌菌液3.5kg，发酵棉籽粕小肽含量为9.5%；步骤<3>中，复合菌液（由嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液按重量比2:1:3组成）6kg，无抗生物饲料，小肽含量为2.8%（以干基计算），pH值为5.2。此外，其他基本同实施例1。
饲养试验：选用100头瘦肉型猪，初体重46±0.95kg，分试验组和对照组，试验组饲喂实施例3制得的无抗生物饲料（饲料用量按干物质含量为88%折算），对照组饲喂含抗生素药物的常规日粮（未经发酵处理），预饲期5天，正式试验周期25天，结果见表3。
表3实施例3无抗生物饲料饲养试验结果
Claims (6)
1.一种有益微生物无抗生物饲料，其特征在于主要由发酵棉籽粕、玉米粉、啤酒渣、预混料和复合菌液经发酵制成；所述复合菌液由嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液组成。
2.根据权利要求1所述的有益微生物无抗生物饲料，其特征在于主要由发酵棉籽粕7kg、玉米粉60kg、啤酒渣17kg、预混料4.0kg和复合菌液3～9kg经发酵制成；所述复合菌液由嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液按重量比1～3:1～3:1～3组成，嗜酸乳杆菌菌液活菌数≥1×109CFU/ml、植物乳杆菌菌液活菌数≥6×108CFU/ml、酿酒酵母菌液活菌数≥10×108CFU/ml。
3.根据权利要求1所述有益微生物无抗生物饲料的制备方法，其特征在于分别二级发酵培养制备嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液、酿酒酵母菌液和地衣芽孢杆菌菌液；然后，将地衣芽孢杆菌菌液与棉籽粕混合，进行好氧发酵；再将发酵棉籽粕、玉米粉、啤酒渣、预混料混合均匀，并加入由嗜酸乳杆菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液组成的复合菌液，混合均匀，恒温发酵，即得。
4.根据权利要求3所述有益微生物无抗生物饲料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
<1>有益微生物菌液的二级发酵制备
嗜酸乳杆菌菌液的制备：一级菌液——将活化菌种接种于500ml无菌MRS培养基中，按体积比计接种量为2%，在厌氧培养箱中37℃恒温培养24h，活菌数≥1×109CFU/ml；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌MRS培养基中，接种量为2%，37℃恒温厌氧培养24h，每2h搅拌培养基1min，活菌数≥1×109CFU/ml；
植物乳杆菌菌液的制备：一级菌液——将活化菌种接种于500ml无菌MRS培养基中，按体积比计接种量为3%，在厌氧培养箱中37℃恒温培养36h，活菌数≥6×108CFU/ml；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌MRS培养基中，接种量为3%，37℃恒温厌氧培养24h，每2h搅拌培养基1min，活菌数≥6×108CFU/ml；
酿酒酵母菌液的制备：一级菌液——将活化斜面菌种接种于装有100ml无菌麦芽汁培养基的锥形瓶中，锥形瓶容积为1000ml，放于30℃恒温震荡培养箱中培养24h，转速为200rpm，活菌数≥5×108CFU/ml；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌麦芽汁培养基中，接种量为1%，装料系数0.65，搅拌转速300rpm，调节通气量维持培养液的溶氧值≥35%，30℃恒温好氧培养24h，活菌数≥10×108CFU/ml；
地衣芽孢杆菌菌液的制备：一级菌液——将活化斜面菌种接种于装有100ml无菌DY培养基的锥形瓶中，锥形瓶容积为1000ml，放于37℃恒温震荡培养箱中培养22h，转速为200rpm，活菌数≥2×109CFU/m1；二级菌液——将一级菌液按无菌操作接入100L无菌DY培养基中，接种量为1%，装料系数0.65，搅拌转速300rpm，调节通气量维持培养液的溶氧值≥35%，37℃恒温好氧培养22h，活菌数≥8×109CFU/ml；
<2>发酵棉籽粕的制备
将地衣芽孢杆菌菌液0.5～3.5kg、棉籽粕100kg、水100kg混合均匀，于35℃恒温条件下好氧发酵48h，即得发酵棉籽粕；
<3>无抗生物饲料的制备
将发酵棉籽粕7kg、花生粕5kg、玉米粉60kg、啤酒渣17kg、糖蜜5kg、磷酸氢钙0.4kg、碳酸钙1kg、食盐0.2kg、预混料4.0kg、赖氨酸0.4kg投入混合机混合均匀，然后将复合菌液3～9kg溶于80kg的35℃水中，喷入混合机中再次混合均匀，在35℃恒温条件下发酵2天，即得；所述复合菌液由嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液按重量比1～3:1～3:1～3组成。
5.根据权利要求4所述有益微生物无抗生物饲料的制备方法，其特征在于：所述MRS培养基组成为胰蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸二铵2.0g/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、七水硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L、吐温801ml/L、葡萄糖20g/L、碳酸钙10g/L，pH值为6.3；所述麦芽汁培养基由12波美度全麦芽汁中加入1.5%蛋白胨配制而成；所述DY培养基组成为蛋白胨10g/L、牛肉膏5g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾1g/L、七水硫酸镁0.5g/L、氯化钠3g/L，pH值为6.8。
6.根据权利要求5所述有益微生物无抗生物饲料的制备方法，其特征在于：所述预混料中每千克含维生素A100万IU，维生素D20万IU，维生素E2000IU，维生素K200mg，维生素B1200mg，维生素B2500mg，维生素B6200mg，维生素B121.5mg，泛酸钙1g，烟酰胺1.5g，叶酸110mg，氯化胆碱40g，Mn3g，Zn3g，Cu5g，Fe10g，碘40mg，Se50mg。
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