CN111388606A - 一种六神曲发酵前处理工艺及六神曲 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药技术领域。本发明公开了一种六神曲发酵前处理工艺，其包括备料、三鲜汁制备、酶解、配制、切割和发酵等步骤；本发明中还公开了一种由上述工艺制得的六神曲。本发明中的发酵前处理工艺，在六神曲发酵之间经过一系列预酶解处理，使得原料中的各营养组分更易于被米曲霉利用，其具有工艺简单但发酵程度更加的彻底，并且发酵时间短，发酵效率高；本发明中制得的六神曲，具有丰富的消化酶，并且其中的消化酶具有良好的酶活性，使得六神曲消食导滞、健脾和胃效果好。

Description

一种六神曲发酵前处理工艺及六神曲

技术领域

本发明涉及中药技术领域，尤其是涉及一种六神曲发酵前处理工艺及六神曲。

背景技术

六神曲又名六曲、神曲，最早记载于《药性论》，云：“化水谷宿食、结积滞，健脾暖胃”，其为苦杏仁、赤小豆、青蒿、苍耳草、辣蓼等药材加入面粉和麦麸混合后经发酵而成的曲剂，性温，味甘辛，主入脾、胃二经。具有消食导滞、健脾和胃的作用，用于外感伤食、脾虚胀满、呕吐泄利等症，临床用于脾胃虚弱、饮食停滞、胸痞腹胀、小儿积食的治疗，应用广泛；

六神曲除了在临床上被广泛用作组方配伍使用外，还是中药成方制剂中使用最广泛的一味发酵类中药；经初步统计，现行《中国药典》收载的成方制剂中共有41个含有六神曲，部颁标准成方制剂中含有六神曲的更是多达326个；中药配方颗粒，又称免煎颗粒，是在传统中医药理论的指导下，以单味中药饮片为原料，经水提、浓缩、干燥、制粒四个步骤制备而成，经中医临床组方配伍后，由患者自行冲服使用；但是现有技术中，六神曲也存在着发酵工艺、炮制工艺不一，存在巨大差异，且没有统一的质量标准，某些市售的六神曲其效果较差，无法实现消食导滞、健脾和胃的作用。

中国专利公开号CN103006840A于2013年4月3日公开了一种六神曲的制备方法，其规范了六神曲制备的各个参数，产品质量稳定，降低了劳动强度，改善了卫生条件，适用于大规模生产，显著提高了六神曲的质量；但是其也存在仅仅是规范了传统六神曲制备工艺并无在传统工艺上进行进一步提升的问题，并且所制备的六神曲中所含淀粉、粗蛋白、淀粉酶活力等参数也仅仅是略优于市售传统工艺制得的六神曲。

中国专利公开号CN106389904A于2017年2月15日公开了一种六神曲及其制备方法，其采用赛氏曲霉菌和枯草芽孢杆菌代替传统六神曲制备过程中采用的米曲霉，其制备方法中发酵过程易于控制和检测，产品质量高，稳定性更好；但是如同上一份专利，其所制备的六神曲中所含淀粉、粗蛋白、淀粉酶活力等参数相较于市售传统工艺制得的六神曲效果不明显。

中国专利公开号CN108653419A于2018年10月16日公开了一种中药六神曲的制备方法及其加工设备，其中也公开了一种六神曲的制备方法，其在提取青蒿、苍耳和辣蓼过程中采用了煎煮的方法进行提取，高温煎煮对于三种原料中的活性物质损伤较大，其处理过程虽然由于标准化处理使得最终制得的六神曲效果比市售传统工艺制得的六神曲略有提升，但是提升程度也仅仅是略有提升而已。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种在传统六神曲制备工艺上进行标准化改造，并进行相应前处理提高辣蓼、苍耳草和青蒿中活性物质提取并大幅提升六神曲中所含淀粉、粗蛋白、淀粉酶活力的六神曲发酵前处理工艺；

本发明还公开了由上述六神曲发酵前处理工艺制得的六神曲。

为解决上述问题，本发明采用的技术方案如下：

一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于包括以下步骤：

a)备料：准备麦粉、麸皮、赤豆粉、苦杏仁粉、鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草；

b)三鲜汁制备：将鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草切碎后加水，并向其中加入果胶酶，并将pH值调至3.0～3.5，在27～32℃下搅拌下处理4～6小时，然后将pH值调至7.0～7.5，然后压榨制得三鲜汁；

c)酶解：向制得的三鲜汁中加入纤维素酶，在27～32℃下搅拌下处理2～3小时，制得酶解三鲜汁；

d)配制：将麦粉、麸皮、赤豆粉和苦杏仁粉混合均匀后加入到三鲜汁中，混合均匀后在25～35℃下搅拌处理3～5小时，之后将含水量降低至10～20wt％制得原料粉；

e)切割：将原料粉挤压并切割成型制得软块；

f)发酵：将软块发酵制得六神曲。

传统六神曲制备工艺中，三鲜汁和麦粉、麸皮、赤豆粉、苦杏仁粉混合后就直接制成软块在进行固态发酵处理，发酵过程中米曲霉利用原料中的养分生长并产生一些酶，如淀粉酶、糖化酶和蛋白酶等，也正是这些具有活性的酶使得六神曲起到了消食导滞、健脾和胃的效果，因此六神曲中淀粉酶、糖化酶和蛋白酶的数量及活性就决定了六神曲的功效；传统工艺中，直接进行固态发酵，对于米曲霉来说原料中的一些养分利用速度较缓慢，并且利用率也不是很高，因此需要增加所制得六神曲的功效，只能采用较长的发酵时间，但即使是延长了发酵时间，其最终的效果也提升有限。本发明中对六神曲的原料进行预处理，主要是对其中的三鲜汁进行预处理，新鲜原料中绝大部分是获得植物细胞，而植物细胞中含有大量的具有高活性的蛋白酶、淀粉酶等活性酶，但是由于是活细胞，这些酶并不发生作用；本发明中先采用果胶酶对仅经过粉碎三鲜原料进行处理，使得其中细胞间的果胶被酶解，使得三鲜中细胞更易于分离，也为后续利用纤维素酶酶解细胞壁杀死细胞作准备；接下来榨汁制得三鲜汁后采用纤维素酶处理三鲜汁，使三鲜汁中的细胞破裂释放大量的淀粉酶、蛋白酶等各种生物酶；接着将麦粉、麸皮、赤豆粉和苦杏仁粉与三鲜汁混合，并在适宜温度下处理一段时间，这段时间就是让三鲜汁中的各种生物酶分解原料中的淀粉和蛋白质等营养组成，使其变成更易被后续米曲霉利用的小分子营养组分，也即在这一步即提高了原料中的酶数量和质量，也提高了用于后续米曲霉生长的小分子营养物质，利于发酵过程的进行，更利于在发酵过程中米曲霉产生更多并具有更高活性的生物酶，提高最终制得六神曲中的淀粉酶、糖化酶和蛋白酶的活力值，以实现本发明的目的。

作为优选，步骤a)中，按以下重量份准备原料，麦粉100份，麸皮90～110份，赤豆粉80～100份，苦杏仁粉80～100份，鲜青蒿95～105份，鲜辣蓼85～115份，鲜苍耳草95～105份。

作为优选，步骤b)中，鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草切碎后加入鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草总重量50～60wt％的水。

作为优选，步骤b)中，果胶酶的加入量为鲜青蒿的10～15wt％；所述步骤c)中，纤维素酶的加入量为三鲜汁的3～7wt％。

作为优选，步骤b)中搅拌的速度为4～6rpm，所述步骤c)中搅拌的速度为4～6rpm，所述步骤d)中搅拌速度为2～3rpm。

采用低速搅拌进行处理，既避免了过于激烈的搅动对酶解过程的影响，也增进物料的散热，使在处理过程中不至于温度过高导致生物酶失效。

作为优选，步骤d)中通过低温蒸发的方式降低含水量。

作为优选，步骤e)中，制得软块的孔隙率在35～45％。

35～45％的孔隙率，能够保证软块的强度，同时也能保证后续米曲霉生长所需的空间，利于其汲取养分。

作为优选，步骤f)中发酵工艺具体为，将步骤e)制得的软块灭菌处理，然后平铺后在表面拍上麦粉重量0.25～0.35wt％的米曲霉孢子粉，然后在25～31℃，相对湿度70～80％环境下发酵处理2～5天，制得六神曲。

作为优选，步骤f)中，米曲霉孢子粉使用前，先用米曲霉孢子粉9～10倍重量的麦粉稀释。

一种六神曲，其由前述的六神曲发酵前处理工艺制得。

因此，本发明具有以下有益效果：本发明中的发酵前处理工艺，在六神曲发酵之间经过一系列预酶解处理，使得原料中的各营养组分更易于被米曲霉利用，其具有工艺简单但发酵程度更加的彻底，并且发酵时间短，发酵效率高；本发明中制得的六神曲，具有丰富的消化酶，并且其中的消化酶具有良好的酶活性，使得六神曲消食导滞、健脾和胃效果好。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步的说明。

显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

在本发明中，若非特指，所有的设备和原料均可从市场上购得或是本行业常用的，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域常规方法。

实施例1

一种六神曲发酵前处理工艺包括以下步骤：

a)备料：按以下重量份准备原料，麦粉100份，麸皮90份，赤豆粉80份，苦杏仁粉80份，鲜青蒿95份，鲜辣蓼85份，鲜苍耳草95份；

b)三鲜汁制备：将鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草切碎后加入鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草总重量50wt％的水，并向其中加入鲜青蒿的10wt％的果胶酶，并将pH值调至3.0，在27℃下以4rpm搅拌处理4小时，然后将pH值调至7.0，然后压榨制得三鲜汁；

c)酶解：向制得的三鲜汁中加入三鲜汁的3wt％的纤维素酶，在27℃下以4rpm搅拌处理2小时，制得酶解三鲜汁；

d)配制：将麦粉、麸皮、赤豆粉和苦杏仁粉混合均匀后加入到三鲜汁中，混合均匀后在25℃下以2rpm搅拌处理3小时，之后通过30℃低温蒸发的方式将含水量降低至10wt％制得原料粉；

e)切割：将原料粉挤压并切割成型制得孔隙率为35％的软块；

f)发酵：将软块灭菌处理，然后平铺后在表面拍上麦粉重量0.25wt％的米曲霉孢子粉，然后在25℃，相对湿度70％环境下发酵处理2天，制得六神曲；米曲霉孢子粉使用前，先用米曲霉孢子粉9倍重量的麦粉稀释。

一种六神曲，其由前述的六神曲发酵前处理工艺制得。

实施例2

一种六神曲发酵前处理工艺，包括以下步骤：

a)备料：按以下重量份准备原料，麦粉100份，麸皮95份，赤豆粉85份，苦杏仁粉85份，鲜青蒿100份，鲜辣蓼90份，鲜苍耳草100份；

b)三鲜汁制备：将鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草切碎后加入鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草总重量55wt％的水，并向其中加入鲜青蒿的12wt％的果胶酶，并将pH值调至3.2，在29℃下以5rpm搅拌处理4.5小时，然后将pH值调至7.2，然后压榨制得三鲜汁；

c)酶解：向制得的三鲜汁中加入三鲜汁的4wt％的纤维素酶，在29℃下以5rpm搅拌处理2.5小时，制得酶解三鲜汁；

d)配制：将麦粉、麸皮、赤豆粉和苦杏仁粉混合均匀后加入到三鲜汁中，混合均匀后在30℃下以2rpm搅拌处理3.5小时，之后通过35℃低温蒸发的方式将含水量降低至13wt％制得原料粉；

e)切割：将原料粉挤压并切割成型制得孔隙率为37％的软块；

f)发酵：将软块灭菌处理，然后平铺后在表面拍上麦粉重量0.30wt％的米曲霉孢子粉，然后在27℃，相对湿度75％环境下发酵处理3天，制得六神曲；米曲霉孢子粉使用前，先用米曲霉孢子粉9.5倍重量的麦粉稀释。

一种六神曲，其由前述的六神曲发酵前处理工艺制得。

实施例3

一种六神曲发酵前处理工艺，包括以下步骤：

a)备料：按以下重量份准备原料，麦粉100份，麸皮105份，赤豆粉95份，苦杏仁粉95份，鲜青蒿100份，鲜辣蓼110份，鲜苍耳草100份；

b)三鲜汁制备：将鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草切碎后加入鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草总重量55wt％的水，并向其中加入鲜青蒿的13wt％的果胶酶，并将pH值调至3.3，在30℃下以5rpm搅拌处理5.5小时，然后将pH值调至7.3，然后压榨制得三鲜汁；

c)酶解：向制得的三鲜汁中加入三鲜汁的6wt％的纤维素酶，在30℃下以5rpm搅拌处理2.5小时，制得酶解三鲜汁；

d)配制：将麦粉、麸皮、赤豆粉和苦杏仁粉混合均匀后加入到三鲜汁中，混合均匀后在30℃下以3rpm搅拌处理4.5小时，之后通过35℃低温蒸发的方式将含水量降低至17wt％制得原料粉；

e)切割：将原料粉挤压并切割成型制得孔隙率为42％的软块；

f)发酵：将软块灭菌处理，然后平铺后在表面拍上麦粉重量0.30wt％的米曲霉孢子粉，然后在29℃，相对湿度75％环境下发酵处理4天，制得六神曲；米曲霉孢子粉使用前，先用米曲霉孢子粉9.5倍重量的麦粉稀释。

一种六神曲，其由前述的六神曲发酵前处理工艺制得。

实施例4

一种六神曲发酵前处理工艺，包括以下步骤：

a)备料：按以下重量份准备原料，麦粉100份，麸皮110份，赤豆粉100份，苦杏仁粉100份，鲜青蒿105份，鲜辣蓼115份，鲜苍耳草105份；

b)三鲜汁制备：将鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草切碎后加入鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草总重量60wt％的水，并向其中加入鲜青蒿的15wt％的果胶酶，并将pH值调至3.5，在32℃下以6rpm搅拌处理6小时，然后将pH值调至7.5，然后压榨制得三鲜汁；

c)酶解：向制得的三鲜汁中加入三鲜汁的7wt％的纤维素酶，在32℃下以6rpm搅拌处理3小时，制得酶解三鲜汁；

d)配制：将麦粉、麸皮、赤豆粉和苦杏仁粉混合均匀后加入到三鲜汁中，混合均匀后在35℃下以3rpm搅拌处理5小时，之后通过40℃低温蒸发的方式将含水量降低至20wt％制得原料粉；

e)切割：将原料粉挤压并切割成型制得孔隙率为45％的软块；

f)发酵：将软块灭菌处理，然后平铺后在表面拍上麦粉重量0.35wt％的米曲霉孢子粉，然后在31℃，相对湿度80％环境下发酵处理5天，制得六神曲；米曲霉孢子粉使用前，先用米曲霉孢子粉10倍重量的麦粉稀释。

一种六神曲，其由前述的六神曲发酵前处理工艺制得。

对比例1

以广西某某药业有限公司市售的六神曲作为对比例1。

对比例2

以四川某某药业股份有限公司市售的六神曲作为对比例2。

六神曲中消化酶测定

针对六神曲中的三种能够消化酶，即淀粉酶、糖化酶和蛋白酶进行酶活力测定，其中测定方法采用如下方法：

1.酶液制备：称取由上述实施例1～4制备的六神曲样品粉末各5g，将纯水12.5mL，配制成40vol％的溶液，置于4℃冰箱中浸泡过夜，取出，以5000rpm的转速离心处理10分钟，去上清液即得酶液，4℃冰箱中保存备用；

2.DNS试剂配制：称取18.20g酒石酸钾钠溶于50mL纯水中，45℃加热，趁热加入0.63g3,5-二硝基水杨酸，另配制2mol/L氢氧化钠溶液，取26.20mL加入上述溶液中，分别称量0.51g苯酚和无水硫酸钠加入到配制好的溶液中，蒸馏水定容至100mL，避光低温保存7～10天；

3.淀粉酶活力测定：采用DNS比色法测定淀粉酶活性，具体测定方法为，取1％可溶性淀粉溶液250μL加入试管中，再加100μL 1％NaCl溶液，37℃保温10分钟，同时将酶液预热，精准吸取酶液50μL加入试管中，准确计时反应15分钟后，立即加50μL的0.4mol/L氢氧化钠溶液终止反应，再加1000μL超纯水稀释，最后加入50μL的DNS溶液显色，并煮沸8分钟显色，冷却后540nm波长下测定吸光度；酶活力单位定义：淀粉酶活性以每分钟每克六神曲样品中酶催化作用下产生的麦芽糖的质量表示，即mg/(min·g)；

对照品溶液处理方法相同，只是将50μL的酶液以50μL的0.2mg/mL的麦芽糖对照品溶液代替，平行6份，取平均值；

4.糖化酶活力测定：采用DNS比色法测定糖化酶的活力，具体测定方法如下：取酶液50μL,加100μL 2％可溶性淀粉溶液，50℃水浴1h，之后加入150μLDNS试剂稀释到2mL，混匀，煮沸5分钟显色，冷却540nm波长下测定吸光度；酶活力单位定义：糖化酶活性以每分钟每克六神曲样品中酶催化作用下产生的葡萄糖的质量表示，即mg/(min·g)；

对照品溶液处理方法相同，只是将50μL的酶液以50μL 1.25mg/mL的葡萄糖对照品溶液代替，平行6份，取平均值；

5.蛋白酶活力测定：采用福林酚法测定蛋白酶的活力，具体测定方法如下：取0.65％酪蛋白溶液125μL于37℃预热5min，再加酶液50μL，加纯化水450μL，混匀，之后加0.4mol/L三氯乙酸溶液125μL，混匀，37℃水浴30min，离心，取上清100μ L，加125μL 0.4mol/L的Na₂CO₃溶液，混匀，再加100μL 2mol/L福林酚试剂混匀，于37℃水浴30min，在波长660nm处测定吸光度值；酶活力单位定义：蛋白酶活性以每分钟每克六神曲样品中酶催化作用下产生的诺氨酸的质量表示，即mg/(min·g)。

对照品溶液处理方法相同，只是将50μL的酶液以50μL 1.10mg/mL的诺氨酸对照品溶液代替，重复操作6次，平行6份，取平均值。

6.酶活力测定结果：上述实施例1～4及对比例2中制得的六神曲中酶活力测定结果如下表1所示；

由上表1中可以得知，本发明中制备获得的六神曲中三种消化酶除蛋白酶之外均具有良好的酶活力，但基于六神曲主要消米面食的特性，其蛋白酶活力降低也是可以理解的；同时，由本发明制得的六神曲无论是淀粉酶活力、糖化酶活力，还是蛋白酶活力都由于两个对比例中的市售六神曲；因此，由本发明制备获得的六神曲具有比市售六神曲更好的消化酶活性，也即具有更好的消食特性。

应当理解的是，对于本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (10)

1.一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于包括以下步骤：

a）备料：准备麦粉、麸皮、赤豆粉、苦杏仁粉、鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草；

b）三鲜汁制备：将鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草切碎后加水，并向其中加入果胶酶，并将pH值调至3.0～3.5，在27～32℃下搅拌下处理4～6小时，然后将pH值调至7.0～7.5，然后压榨制得三鲜汁；

c）酶解：向制得的三鲜汁中加入纤维素酶，在27～32℃下搅拌下处理2～3小时，制得酶解三鲜汁；

d）配制：将麦粉、麸皮、赤豆粉和苦杏仁粉混合均匀后加入到三鲜汁中，混合均匀后在25～35℃下搅拌处理3～5小时，之后将含水量降低至10～20wt%制得原料粉；

e）切割：将原料粉挤压并切割成型制得软块；

f）发酵：将软块发酵制得六神曲。

2.根据权利要求1所述的一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于：

所述步骤a）中，按以下重量份准备原料，麦粉100份，麸皮90～110份，赤豆粉80～100份，苦杏仁粉80～100份，鲜青蒿95～105份，鲜辣蓼85～115份，鲜苍耳草95～105份。

3.根据权利要求1或2所述的一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于：

所述步骤b）中，鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草切碎后加入鲜青蒿、鲜辣蓼和鲜苍耳草总重量50～60wt%的水。

4.根据权利要求1或2所述的一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于：

所述步骤b）中，果胶酶的加入量为鲜青蒿的10～15wt%；所述步骤c）中，纤维素酶的加入量为三鲜汁的3～7wt%。

5.根据权利要求1或2所述的一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于：

所述步骤b）中搅拌的速度为4～6rpm，所述步骤c）中搅拌的速度为4～6rpm，所述步骤d）中搅拌速度为2～3rpm。

6.根据权利要求1或2所述的一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于：

所述步骤d）中通过低温蒸发的方式降低含水量。

7.根据权利要求1或2所述的一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于：

所述步骤e）中，制得软块的孔隙率在35～45%。

8.根据权利要求1或2所述的一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于：

所述步骤f）中发酵工艺具体为，将步骤e）制得的软块灭菌处理，然后平铺后在表面拍上麦粉重量0.25～0.35wt%的米曲霉孢子粉，然后在25～31℃，相对湿度70～80%环境下发酵处理2～5天，制得六神曲。

9.根据权利要求8所述的一种六神曲发酵前处理工艺，其特征在于：

所述步骤f）中，米曲霉孢子粉使用前，先用米曲霉孢子粉9～10倍重量的麦粉稀释。

10.一种六神曲，其特征在于：

由权利要求1～9任一所述的六神曲发酵前处理工艺制得。