发明内容
发明目的:本发明针对现有技术的不足,提供了一种增强人体免疫力的保健食品以及制备方法。
技术方案:本发明所述的一种增强人体免疫力的保健食品,包括以下重量百分比的组分:蜂胶粉16~36%,紫苏子油60~80%,蜂蜡1~5%。
其中,所述蜂胶粉由蜂胶原料经过人工去杂,80%乙醇提取,粗滤,加压精滤,浓缩,干燥,提纯蜂胶,低温冷冻,粗粉碎,投加20%碳酸钙,细粉碎,过筛混合而成。
其中,所述紫苏子油由紫苏子经润湿,蒸炒,压榨,过滤得到。
制备所述的一种增强人体免疫力的保健食品的方法包括如下步骤:
(1)将蜂蜡、紫苏子油加热熔化,搅拌混匀,放至室温;
(2)取蜂胶粉,过筛,得蜂胶粉细粉,按配方量将蜂胶粉细粉和蜂蜡、紫苏子油的混合物料混合,搅拌混匀,研磨成质地细腻的浆状物,静置抽真空至无气泡,加压出料,过筛,装入胶囊,每粒胶囊含上述混合物0.6g。
其中,步骤(2)优先选用80目筛。
其中,步骤(2)中静止抽真空的真空度在0.06~0.08Mpa。
其中,步骤(2)中研磨的速度为2400~2600r/min。
本发明是以蜂胶粉、紫苏子油为主要原料制成的具有增强免疫力功能的保健食品。其中,蜂胶中含有黄酮类化学成分,现代药理研究表明,具有增强免疫力作用,本品所用蜂胶粉是在蜂胶中加入一定量的碳酸钙制得;紫苏子油经现代医学研究证实,具有调节免疫功能,目前已广泛应用于医药和保健食品领域。本发明通过各原料的共同作用,从而达到增强免疫力功能,是科学合理的。2005版药典规定,蜂胶的日用量为0.2-0.6g,本发明蜂胶粉中蜂胶占80%,每日蜂胶服用量为0.5g,在标准范围内;紫苏子的日用量为3-9g,本发明紫苏子油的每日服用量为1.715g,按出油率36%计算,折合紫苏子为4.76g,亦在标准范围内。
本发明中紫苏子油为油状物,对于含油量高的药物不适宜制成片剂、硬胶囊等固体制剂,但可制成软胶囊剂型。同时软胶囊剂型具有以下特点:良好的隔离功能,能将对光、氧敏感的功能性物料与空气、光线隔离开来,避免有效物质的氧化,使产品在有效期内保持含量稳定,保证功效的发挥;定量准确,吸收快;产品外观新颖,诱人,对消费者很有吸引力和新奇感;表面光滑,口感好,易吞服;携带安全,食用方便。故本发明选择软胶囊剂型。
有益效果:本发明很好地将蜂胶及紫苏两种原料联用,总黄酮的含量高,能增强人体的免疫力,适用于各个年龄段的人群,无任何副作用,值得大力提倡。
具体实施方式
实施例1:
将4%的蜂蜡、80%的紫苏子油(单位重量百分数,下同)置真空均质乳化机中,加热熔化,搅拌混匀,得混合物料,放至室温;取16%的蜂胶粉过80目筛,得蜂胶粉细粉,加入到蜂蜡、紫苏子油的混合物料中,搅拌混匀,用过分体式胶体磨研磨成质地细腻的浆状物,控制胶体磨转速2400r/min。0.06Mpa静置抽真空至无气泡,加压出料,过80目筛网,装入胶囊,每粒胶囊含上述药物0.6g。
实施例2:
将5%的蜂蜡、75%的紫苏子油(单位重量百分数,下同)置真空均质乳化机中,加热熔化,搅拌混匀,得混合物料,放至室温;取20%的蜂胶粉过80目筛,得蜂胶粉细粉,加入到蜂蜡、紫苏子油的混合物料中,搅拌混匀,用过分体式胶体磨研磨成质地细腻的浆状物,控制胶体磨转速2600r/min。0.08Mpa静置抽真空至无气泡,加压出料,过80目筛网,装入胶囊,每粒胶囊含上述药物0.6g。
实施例3:
将3%的蜂蜡、71%的紫苏子油(单位重量百分数,下同)置真空均质乳化机中,加热熔化,搅拌混匀,得混合物料,放至室温;取26%的蜂胶粉过80目筛,得蜂胶粉细粉,加入到蜂蜡、紫苏子油的混合物料中,搅拌混匀,用过分体式胶体磨研磨成质地细腻的浆状物,控制胶体磨转速2500r/min。0.07Mpa静置抽真空至无气泡,加压出料,过80目筛网,装入胶囊,每粒胶囊含上述药物0.6g。
实施例4:
将2%的蜂蜡、68%的紫苏子油(单位重量百分数,下同)置真空均质乳化机中,加热熔化,搅拌混匀,得混合物料,放至室温;取30%的蜂胶粉过80目筛,得蜂胶粉细粉,加入到蜂蜡、紫苏子油的混合物料中,搅拌混匀,用过分体式胶体磨研磨成质地细腻的浆状物,控制胶体磨转速2400r/min。0.06Mpa静置抽真空至无气泡,加压出料,过80目筛网,装入胶囊,每粒胶囊含上述药物0.6g。
实施例5:
将4%的蜂蜡、60%的紫苏子油(单位重量百分数,下同)置真空均质乳化机中,加热熔化,搅拌混匀,得混合物料,放至室温;取36%的蜂胶粉过80目筛,得蜂胶粉细粉,加入到蜂蜡、紫苏子油的混合物料中,搅拌混匀,用过分体式胶体磨研磨成质地细腻的浆状物,控制胶体磨转速2600r/min。0.08Mpa静置抽真空至无气泡,加压出料,过80目筛网,装入胶囊,每粒胶囊含上述药物0.6g。
实施例6:
本发明增强免疫力功能实验研究
1.材料
1.1样品:由无锡市天赐康生物科技有限公司提供。
1.2试剂、实验器材及动物
1.2.1试剂
SRBC(绵羊红细胞),Hank’s液,DNFB(2,4二硝基氟苯),SA缓冲液,琼脂糖,印度墨汁,Na2CO3(碳酸钠),RPMI1640培养液,鸡红细胞悬液,生理盐水,YAC-1细胞。以上试剂由四川省疾病预防控制中心提供。
1.2.2实验器材
100μ微量注射器,二氧化碳培养箱,电子分析天平,723分光光度仪,离心机,手术器械。
1.2.3实验动物
四川省医学科学院实验动物研究所提供的昆明种小鼠160只,全雌,体重18-22g,生产许可证号为SCXK(川)2004-16SPF级;试验动物房为屏障系统,使用许可证号为川实动管SYXK(川)2008-043。温度20-25℃,相对湿度40~70%。
2.实验方法
2.1剂量选择
受试物设400mg/kg.BW、800mg/kg.BW、1200mg/kg.BW三个剂量组(分别相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍、30倍),分别称取10g、20g、30g受试物加蒸馏水至250ml混匀,冷藏保存,用完再配,另设植物油阴性对照组,每组40只动物。分为免疫一组、二组、三组、四组,其中一组用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;二组用于NK细胞活性测定及淋巴细胞转化实验;三组用于抗体生成细胞实验、血清溶血素测定和迟发型变态反应;四组用于小鼠碳廓清实验。小鼠按20mg/kg.BW体重一次经口灌胃,连续给予30天,每周称一次体重,调整灌胃体积。
2.2实验步骤
2.2.1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法):连续灌胃30天后,每只小鼠腹腔注射20%的鸡红细胞悬液1ml,30分钟后,颈椎脱臼处死,将其固定在鼠板上,正中剪开腹壁皮肤,经腹腔注入生理盐水2ml,转动鼠板1分钟,吸出腹腔洗液1ml,平均滴于2张载玻片上,置湿盒37℃30分钟,取出在生理盐水漂洗、晾干、固定,4%GiemsaPBS染色3分钟,蒸馏水漂洗晾干,镜检。计算吞噬百分率及吞噬指数。
2.2.2NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法):连续灌胃30天后,颈椎脱臼处死动物,取出脾脏,撕碎,过200目筛网后,用Hank’s液洗3次,用完全RPMI1640培养液配成2×107个/ml细胞悬液。将各只小鼠的细胞悬液取300μl分3孔置于96孔培养板中,每孔100μl,每孔加靶细胞(YAC-1细胞,4×105个/ml)100μl,同时做靶细胞自然释放孔(靶细胞100μl+培养液100μl)及最大释放孔(靶细胞100μl+2.5%Triton100μl)各8孔,37℃5%CO2培养4小时,取出1500r/min离心5min。将各孔上清液100μl置于另一培养板中,每孔再加入100μl基质液,10分钟后加1mol/L的HCL30μl终止反应,在490nm处测定OD值,计算NK细胞活性率。
2.2.3ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验(MTT法):首先进行脾细胞悬液的制备。将细胞浓度调整为3×106个/ml,然后将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1ml,一孔加75μlConA液,另一孔作对照,置5%CO2孵箱37℃培养72h。培养结束前4h,每孔轻轻吸去上清液0.7ml加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液,同时加入MTT(5mg/ml)50μ/孔继续培养4h,培养结束后,每孔加入1ml酸性异丙醇,使紫色结晶完全溶解,然后将每孔液体移入比色杯中,用723分光光度仪于570nm波长处比色测定光密度值。
2.2.4抗体生成细胞检测(Jernr改良玻片法):连续灌胃30天后,每只小鼠腹腔注射2%压积SRBC0.2ml,将免疫5天半后的小鼠颈椎脱臼处死,取出脾脏放在盛有Hank’s液的平皿内,制成脾细胞悬液。将琼脂糖配成1%水溶液,水浴煮30min,与等量双倍Hank’s液混合,分装小试管,每管0.5ml,再向管内加10%(用SA缓冲液配制)压积SRBC50μl,脾细胞悬液各20μl做两个平行样,迅速混匀后,倾倒于琼脂糖薄层玻片上,待琼脂凝固后,将玻片水平扣放在片架上,放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h,然后将补体加入到玻片架凹槽内,继续温育1.5h,计数溶血空斑数。
2.2.5血清溶血素测定(血凝法):在连续灌胃30天后,每只小鼠腹腔注射2%SRBC0.2ml免疫,继续灌胃5天后,摘除眼球取血于离心管内,放置1h,剥离,2000r/min离心10min,收集血清,用生理盐水将血清作倍比稀释,每份稀释12孔,将不同稀释度的血清置于血凝板中,每孔100μl,再加入0.5%SRBC悬液100μl,混匀,置湿盒37℃3h后观察结果,记录每孔的凝集程度。计算抗体积数。
2.2.6迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法):灌胃30天后,给小鼠腹腔注射2%压积SRBC(0.2ml/每鼠)致敏4天后,测量左后足跖厚度,然后再测量部位皮下注射20%(v/v)SRBC(20μl/每鼠),于注射后24h测量左后足跖厚度,同一位测量三次,取平均值,以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。
2.2.7小鼠碳廓清试验:连续灌胃30天后,于小鼠尾静脉注射用4倍生理盐水稀释的印度墨汁,按0.1ml/10g墨汁注入后立即计时,于注入墨汁后第2、10min分别从内眦静脉丛取血20μl,加到2mlNa2CO3溶液中,以Na2CO3溶液作空白对照,用723分光光度计在600nm处测定光密度值。取血后处死小鼠,取肝、脾称重,计算吞噬指数。
3.试验数据统计
试验数据采用SPSS10.0 for Windows软件包处理。对照组与剂量组的数据经方差齐性检验,方差齐,进行方差分析,如P值小于0.05,则用Dunnett法进行两两比较;若方差不齐,则进行数据转换,仍不齐,改用秩和检验,如P值小于0.05,则用Dunnett’sT3法进行两两比较。
4.结果
4.1本发明对小鼠体重的影响见表1-4。
表1 各组小鼠的初始体重(X±S)
表2 各组小鼠的中期体重(X±S)
表3 各组小鼠的结束体重(X±S)
表4 本发明对小鼠体重增重的影响(X±S)
由表1-4可见,本发明免疫一组、免疫二组、免疫三组及免疫四组小鼠的初始体重与阴性对照组相比,经方差齐性检验,方差齐(P>0.05),且方差分析结果(P>0.05),说明各组小鼠与阴性对照组之间的初始体重是均衡的。三个剂量组小鼠试验中期、末期的体重以及试验期间小鼠体重的增长与阴性对照组相比,经统计学处理,无显著性差异(P>0.05),即本发明对小鼠的体重增长无影响。
4.2本发明对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响
表5 本发明对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清功能的影响(X±S)
由表5可见,连续灌胃30天后,三个剂量组小鼠的碳廓清能力与阴性对照组相比,经统计学处理,中剂量组有显著性差异(P<0.05)
表6 本发明对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响(X±S)
由表6可见,连续灌胃30天后,三个剂量组动物的吞噬率和吞噬指数与阴性对照组相比,经统计学处理,无显著性差异(P>0.05)。
由表5、表6可见,本发明对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能试验结果阴性。
4.3本发明对小鼠细胞免疫的影响
表7 本发明对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响(X±S)
由表7可见,连续灌胃30天后,三个剂量组小鼠的足跖肿胀度与阴性对照组相比,经统计学处理,高剂量组动物的足跖肿胀度有显著性差异(P<0.05)
表8本发明对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响(X±S)
由表8可见,连续灌胃小鼠30天后,三个剂量组小鼠的淋巴细胞增殖能力与阴性对照相比,经统计学处理,无显著性差异(P>0.05)。
由表7、表8可见本发明对小鼠细胞免疫试验结果为阴性。
4.4本发明对小鼠体液免疫的影响
表9 本发明对小鼠抗体生成细胞的影响(X±S)
由表9可见,连续灌胃30天后,三个剂量组小鼠的溶血空斑数与阴性对照相比,经统计学处理,无显著性差异(P>0.05)。
表10 本发明对小鼠血清溶血素的影响(X±S)
由表10可见,连续灌胃30天后,三个剂量组小鼠的抗体积数与阴性对照组相比,经统计学处理,低、高剂量组有显著性差异(P<0.05、P<0.05)
由表9、表10可见,本发明对小鼠体液免疫试验结果呈阳性。
4.5本发明对小鼠NK细胞活性的影响
表11 本发明对小鼠NK细胞活性的影响(X±S)
由表11可见,连续灌胃30天后,三个剂量组小鼠NK细胞活性与阴性对照相比,经统计学处理,中、高剂量组有显著性差异(P<0.05、P<0.05)。本发明对小鼠的NK细胞活性试验结果显阳性。
5.总结
本发明连续灌胃小鼠30天后,对小鼠体重无明显影响(P>0.05);对小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能试验结果阴性;对小鼠的细胞免疫试验结果阴性;对小鼠的体液免疫试验,三个剂量组的抗体积数与阴性对照组比较,低、高剂量组差异均有显著性(P<0.05),试验结果阳性;对小鼠的NK细胞试验,三和剂量组NK细胞活性与阴性对照组比较,中、高剂量组差异均有显著性(P<0.05),试验结果阳性。
依据《保健食品检验与评价技术规范》2003年版可以判定,本发明对动物具有增强免疫力的功能。