CN102335347A - 一种三七洋参软胶囊 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药营养保健品技术领域，具体提供了一种三七洋参软胶囊，由以下重量份的主要原料和辅料组成：三七提取物40份-50份、银杏提取物100份-150份、西洋参提取物70份-80份、天麻提取物70份-80份、辅料1190份-1250份。本发明的三七洋参软胶囊可以提高免疫力、抗疲劳、改善亚健康、是一种功能性保健品，产品无毒副作用，效果显著。

Description

一种三七洋参软胶囊

技术领域

本发明属于医药营养保健品技术领域，具体提供了一种增强机体免疫力、抗疲劳、改善亚健康状态的功能性保健品。

背景技术

目前市场上已有的保健品有很多种，功能也是各不一样，也有利用三七提取物和西洋参提取物来制备保健品药品的相关专利。随着但是本发明研制出了一种具有增强机体免疫力、抗疲劳、改善亚健康状态的功能性保健品，现有技术中未见具有相同的配方和制备方法的保健品的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种可以增强机体免疫力、抗疲劳、改善亚健康状态的保健品。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：一种三七洋参软胶囊，由以下重量份的主要原料和辅料组成：

三七提取物        40份-50份、

银杏提取物        100份-150份、

西洋参提取物      70份-80份、

天麻提取物        70份-80份、

辅料              1190-1250份。

所述原料(提取物)的制备方法为：分别将原料粉碎，用相对于原料5-20倍质量的水或乙醇提取2-3次，每次1-2小时，然后过滤，滤液浓缩至相对密度为1.0-1.15(相对于原料质量的1.0-1.15倍)，再喷雾干燥至水份含量≤5％，得粉末状三七提取物、银杏提取物、西洋参提取物或天麻提取物。

所述辅料包括以下重量份的成分：

大豆油640份-650份、       蜂蜡38份-42份、

明胶210份-220份、         甘油100份-110份、

棕氧化铁0.001份-0.01份、  纯化水210份-220份。

所述辅料优选的重量份为：

大豆油646份、      蜂蜡40份、

明胶216份、        甘油108份、

棕氧化铁0.004份、  纯化水216份。

本发明的三七洋参软胶囊在提高免疫力、抗疲劳方面的应用。

本发明的三七洋参软胶囊在预防冠心病、心绞痛方面的应用。

本发明的三七洋参软胶囊在改善亚健康方面的应用。

本发明的三七洋参软胶囊在制备成保健品方面的应用。

下面对本发明的三七洋参软胶囊的药理性质做进一步的解释和说明：

三七提取物由三七提取所得。三七为五加科植物三七的干燥根，其性甘、微苦，温。主人肝、胃、大肠经。三七含有多种化学成分，其中三七总皂苷为主要有效活性成分之一，其含量8％-12％。三七中还含有醇类、黄酮类、核苷类、生物碱、蛋白质、维生素C等化合物及钾、镁、钙等18种以上的多种元素。三七在中枢神经系统、心脑血管系统、血液系统、免疫系统以及抗纤维化、抗衰老、抗肿瘤等方面具有广泛生理活性。

药典规定三七用量为3-9克，本品每日服用三七提取物0.168克，折合原药材每日服用三七1.008克。

银杏叶提取物由银杏叶提取所得，银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶。性味：甘、苦、涩、平，归心、肺经。功能主治：敛肺，平喘，活血化瘀，止痛。用于肺虚咳喘，冠心病，心绞痛，高血脂症。银杏叶的化学成分有黄酮类、内酯类及生物碱等化合物。黄酮类为银杏叶的主要有效成分之一，具有抗氧化、抗病毒、预防心血管疾病，增强免疫力等作用。

药典规定银杏叶用量9-12克，本品每日服用银杏叶提取物0.48克，折合原材料每日服用银杏叶3.84克。

西洋参提取物由西洋参提取所得，西洋参为五加科植物西洋参的干燥根。味甘、微苦，性凉，归心、肺、肾经。功能补气养阴，清热生津。用于气虚阴亏，内热，咳喘痰血，虚热烦倦，消渴，口燥咽干。具有抗凝血、促进蛋白质合成、增强免疫系统功能，抑制肿瘤细胞生长、刺激中枢神经系统兴奋、促进核蛋白合成等，还能健脑提神、消除疲劳、增强免疫力、降血压、降血糖等作用。

药典规定用量3-6克，本品每日服用西洋参提取物0.304克，折合原材料每日服用西洋参1.52克。

天麻提取物由天麻提取所得，天麻为兰科植物天麻的干燥块茎，天麻的化学成分包括酚性化合物及其苷类、甾醇和有机酸类、多糖类。具有镇静、抗惊、熄风止痉，平抑肝阳，祛风通络等功效。

药典规定天麻用量3-9克，本品每日服用天麻提取物0.304克，折合原材料每日服用天麻1.52克。

三七总皂苷是三七的主要有效活性成分，三七总皂苷具有增强免疫力的作用，能明显刺激小鼠的脾淋巴细胞增值、转化作用，提高小鼠抗体生成细胞数，提高小鼠的血清溶血素水平，增强小鼠NK细胞活性。

银杏叶提取物能提高人体免疫力，增强小鼠淋巴细胞功能和中性粒细胞活力，增强B淋巴细胞抗体生成，增强淋巴细胞脱氢酶活性，增强粒细胞髓过氧化物酶的活性。

西洋参含人参皂甙6.4-7.3％，还含有精氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸等18种人体极为需要的氨基酸以及挥发油、树脂等。人参皂苷具有抗凝血、促进蛋白质合成、增强免疫系统功能，抑制肿瘤细胞生长、刺激中枢神经系统兴奋、促进蛋白合成的作用。

天麻能显著增加C57BL小鼠的胸腺重量，连续皮下注射9天能显著增强移值抗寄生主反应。结果显示天麻具有增强机体非特异性免疫及细胞免疫的作用。

综上所述，三七提取物、银杏提取物、西洋参提取物、天麻提取物各具有不同的免疫增强作用，本发明集中提取四味中药中的有效成分，得到本发明的三七洋参软胶囊，采用联合用药的药理机制，发挥1+1＜2的效应。本产品集营养、保健功能于一体，改善微循环，增强免疫力，抗疲劳等多种优点，产品无毒副作用，效果显著；产品原料天然可靠，简单易得，生产工艺科学合理，质量稳定。

附图说明

图1是原料三七提取物的制备流程图；

图2是原料天麻提取物的制备流程图；

图3是原料西洋参提取物的制备流程图；

图4是原料银杏提取物的制备流程图；

图5是本发明的三七洋参软胶囊的制备流程图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步的解释和说明，但是以下并不限制本发明的保护范围。

实施例1：三七洋参软胶囊的制备

原料的制备，具体过程见流程图，如图1-图4所示。

三七洋参软胶囊的制备，具体过程见流程图，如图5所示。

实施例2：本发明的三七洋参软胶囊的安全性毒理学评价报告，由四川大学华西公共卫生学院分析检测中心根据申请人提供的样品进行检测得出的结论。

1材料和方法

1.1样品

金六谷牌三七洋参软胶囊，批号：081211，送检品为褐色油状物(胶囊内容物)，湖南金六谷药业有限公司提供，推荐成人服用量为4g/日。样品为褐色油状物，混和均匀后，测得其比重约为1g/ml，实验时样品采用植物油溶解配制成需要的浓度。

1.2实验动物及饲养

清洁级昆明种小鼠和SD大鼠均由成都达硕生物科技有限公司提供，合格证号：SCXK(川)2008-25号。实验前检疫一周，整个实验过程中，动物饲养于屏障级动物房(许可证号：四川省实验动物管理委员会第011号)，动物自由摄食和饮水，动物房温度20℃24℃，相对湿度50％～65％。

1.3主要仪器与试剂

1.3.1主要仪器超净生物工作台，恒温孵箱，日本OLYMPUS公司的U-400全自动生化分析仪，瑞典产全自动血液分析仪，OLYMPUS生物显微镜等。

1.3.2主要试剂2，4，7-三硝基芴酮(2，4，7-TNFone)，4-硝基喹啉-N-氧化物(4-NQNO)，2-氨基芴(2-AF)和1，8-二羟基蒽醌(Dan)均为Sigma公司产品。丝裂霉素C(MMC)由江苏恒瑞医药有限公司生产，环磷酰胺(CP)由上海华联制药有限公司生产。自制大鼠肝S9，由多氯联苯诱导，经鉴定合格后保存于-80℃。

1.4急性毒性试验(MTD法)

SD大鼠(体重180g～220g)20只，雌雄各半。设20g/kg.bw一个剂量组，将受试物均匀混合后，直接按2ml/100g.bw一次经口灌胃，灌胃后观察两周内死亡动物数及一般健康情况，根据最大耐受量判断受试物的急性毒性。

1.5遗传毒性试验

1.5.1Ames试验：采用经鉴定符合要求的IA97、TA98、TA100和TA102菌株，进行加与不加大鼠肝S9的标准平皿掺入法试验(S9mix用量为0.5ml/皿)。设五个金六谷牌三七洋参软胶囊剂量：8、40、200、1000和5000μg/皿(样品配制与灭菌：准确称取受试物1.0g，加二甲基亚砜至20ml得到最高工作浓度50mg/ml。将配制好的溶液盛在打开的平皿内，放在超净工作台台面，用紫外线照射30min灭菌。取该液100μl加入平皿为最高终浓度5000μg/皿。其它浓度以最高工作浓度为基础，依次用二甲基亚砜5倍往下稀释)，同时设自发对照、溶剂对照(二甲基亚砜100μl/皿)和阳性对照。不加S9试验的阳性对照为2，4，7-TNFone(0.2μg/皿，适用菌株TA97、TA98)；4-NQNO(0.5μg/皿，适用菌株TA100)、MMC(0.5μg皿，适用菌株TA102)；加S9试验的阳性对照为2-AF(10.0μg/皿，适用菌株TA97、TA98、TA100)、1，8-二羟基蒽醌(Dan)(50.0μg/皿，适用菌株TA102)。每个试验剂量作三个平行皿，重复试验一次。

1.5.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：昆明种小鼠(体重25g～30g)随机分为5组，每组10只，雌雄各半。试验设阴性对照(植物油)、阳性对照(环磷酰按CP 40mg/kg.bw)和2.5、5.0和10.0g/kg.bw金六谷牌三七洋参软胶囊试验组(分别称取5.0g和10.0g样品，各加植物油至20ml；10.0g/kg.bw剂量组则直接采用样品20ml)。动物分别于第0小时和第24小时按1ml/100g.bw经口灌胃，末次染毒后6小时处死动物，按程序制片。每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，观察含有微核的嗜多染红细胞数，计算微核率(‰)，同时观察200个红细胞中PCE和RBC所占数目，并计算PCE/RBC比值。

1.53小鼠精子畸形试验：昆明种雄性小鼠(体重25g～35g)随机分为5组，每组5只。试验设阴性对照组(植物油)，阳性对照组(CP 40mg/kg.bw)和2.5g、5.0g和10.0g/kg.bw三个金六谷牌三七洋参软胶囊剂量组(灌胃液配制同微核试验)，按1ml/100g.bw经口灌胃动物，连续5天。于首次灌胃后第35天处死动物，取双侧附睾，按标准程序制片，每只动物观察1000个完整精子，记录各类畸形精子数。

1.6大鼠30天喂养试验

断乳SD大鼠适应性喂养3～5天后，按体重随机分为四组，每组20只，雌雄各半。试验设一个阴性对照组(植物油)和三个受试物剂量组：2g、5g和7g/Kg.bw(相当于人体推荐摄入量的30、75和105倍。配制方法：分别称取20g、50g和70g样品，各加植物油至100ml)。动物每日按1ml/100g.bw灌胃一次，连续30天。每周称一次动物体重、两次给食量和剩食量，并计算摄食量。分别按周增重及周摄食量计算周食物利用率(％)，同时计算总食物利用率(％)。30天后处死动物，进行血液学、血清生化学及组织病理学检查和脏器系数测定。

1.7实验数据统计

采用各实验组与对照组均数比较的方差分析对数据进行处理。方差不齐采用秩和检验。所用软件为PEMS3.1《中国医学百科全书医学统计学》统计软件包(第三版)。

2结果

2.1急性毒性试验

表1.1金六谷牌三七洋参软胶囊对SD大鼠的急性经口毒性试验结果

金六谷牌三七洋参软胶囊20g/kg.bw剂量经口染毒后，两周内未见动物死亡，亦无明显的中毒症状或不良反应，结果见表1。两周实验结束后剖杀全部动物，内脏器官未见明显异常改变。即本检品对雌、雄性SD大鼠的急性经口MTD大于20g/kg.bw，属无毒类。

2.2遗传毒性试验

2.2.1 Ames试验：无论加与不加S9的试验，自发对照组的每皿平均回变菌落数均在正常值范围内，而阳性对照组诱发的每皿平均回变菌落数均为自发对照组二倍以上，呈明显阳性反应。金六谷牌三七洋参软胶囊各剂量组的平均回变菌落数均未超过溶剂对照组的一倍，呈阴性反应，即本检品无诱导试验菌株回复突变的作用。结果见2.1和2.2。

2.22小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：阳性对照组雌、雄动物的微核率均显著高于阴性对照组(P＜0.01)，受试物各组的微核率与阴性对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)，提示本检品在小鼠骨髓细胞微核试验中为阴性结果。结果见表2.3。

2.2.3小鼠精子畸形试验：阳性对照组的精子畸形率显著高于阴性对照组(P＜0.01)，金六谷牌三七洋参软胶囊各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)，提示本检品在小鼠精子畸形试验中为阴性结果。结果见表2.4。

2.3大鼠30天喂养试验

阴性对照组和3个剂量组动物在30天喂养期间，摄食、饮水、大小便正常，生长发育情况和一般表现良好，未观察到明显行为改变和中毒表现。

2.3.1对体重和食物利用率的影响：各实验组在整个试验期间的体重和食物利用率结果见表3.1和3.2。除个别指标外，受试物各剂量组动物各周体重、总增重和总食物利用率经方差分析与阴性对照组比较无显著性差异(P＞0.05)，表明该受试物对机体生长发育无不良影响。

2.3.2脏器系数测定结果：表3.3显示受试物各剂量组的重要脏器的重量和脏器系数(脏器湿重/体重×100)，由表可见雌、雄鼠各剂量组重要脏器的重量和脏器系数与阴性对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。

2.3.3末期血液学检验结果：表3.4显示试验末期的常规血液学指标(红细胞、血红蛋白、白细胞及分类)测定结果。从表可见，受试物各剂量组雌雄鼠的血液学测定指标与阴性对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。

2.3.4末期生化标检验结果：表3.5显示，雄鼠中、高剂量组的胆固醇(CHO)较阴性对照组升高，并有显著性差异(P＜0.05)，但在本室正常历史范之内，无生物学意义。各实验组肝功、肾功和血糖等生化指标，雌、雄鼠各剂量组与阴性对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。

23.5组织学检查结果：试验结束时对肝、心、肺、肾、胃、空肠、脾脏和卵巢/睾丸等进行大体检查和组织病理学检查。大体检查未发现明显病变，因此仅选高剂量组和阴性对照组作组织学检查。镜下见个别动物肝局灶性间质性炎，肺局灶性间质性炎，肾局灶性间质炎。详细结果见表3.6～3.13，但其发生率实验组和对照组相比无显著性差异(P＞0.05)，因此所出现的病变，应属动物的自发病变。综上述，各剂量组动物脏器均未见由受试物引起的损害性改变。

表2.1金六谷牌三七洋参软胶Ames试验结果(第一次)(个/皿)

表2.2金六谷牌三七洋参软胶Ames试验结果(第二次)(个/皿)

表2.3金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠骨髓细胞微核发生率的影响

注：与阴性对照比较^**，P＜001。

表2.4金六谷牌三七洋参软胶囊小鼠精子畸形试验结果

注：与阴性对照比较^*，P＜005。^△，包括双头、双尾，胖头......等。

表3.1金六谷牌三七洋参软胶囊对大鼠体重的影响

表3.2金六谷牌三七洋参软胶囊对大鼠食物利用率的影响

表3.3金六谷牌三七洋参软胶囊对大鼠脏器重量和系数的影响(n＝10，

)

表3.4金六谷牌三七洋参软胶囊对大鼠血液学指标的影响

注：RBC为红细胞，Hb为血红蛋白，WBC为白细胞，GR为中性粒细胞，LY为淋巴细胞。

表3.5金六谷牌三七洋参软胶囊对大鼠血清生化指标的影响(

n＝10)

注：1.ALT为谷丙转氨酶，AST为谷草转氨酶，TP为总蛋白，ALB为白蛋白，BUN为尿素氨，CR为肌酐，GLU为血糖，CHO为胆固醇，TG为甘油三脂。2.与阴性对照比较^*，P＜0.05：^**，P＜0.01。

表3.6金六谷牌三七洋参软胶囊30天喂养试验肝脏组织学观察

^*注：大体检查未发现明显病变，因此仅选高剂量组作组织学检查，以下同。

表3.7金六谷牌三七洋参软胶囊30天喂养试验肺脏组织学观察

表3.8金六谷牌三七洋参软胶囊30天喂养试验肾组织学观察

表3.9金六谷牌三七洋参软胶囊30天喂养试验脾的组织学观察

表3.10金六谷牌三七洋参软胶囊30天喂养试验胃肠组织学观察

实施例3：本发明的三七洋参软胶囊的功效成分和稳定性评价报告，由四川大学华西公共卫生学院分析检测中心根据申请人提供的样品进行检测得出的结论。具体结论如表2-1至表2-5所示。

表2-1产品性质

表2-2产品稳定性实验1

表2-3产品稳定性实验3(保存方法同表2-2)

表2-4产品稳定性实验4

表2-5产品稳定性实验5

实施例3：本发明的三七洋参软胶囊在提高免疫力方面的检测报告，由四川大学华西公共卫生学院分析检测中心根据申请人提供的样品进行检测得出的结论。

1材料与方法

1.1样品

金六谷牌三七洋参软胶囊，批号：081211，由湖南金六谷药业有限公司提供，送检方推荐日服用建议剂量为4g/人/日。

1.2试验动物

清洁级雄性Balb/c小鼠，体重18g～22g。四川大学华西实验动物中心提供(合格证号：SCXK(川)-09-2006号)。使用屏障级动物房(许可证号：四川省实验动物管理委员会第011号)饲养。

1.3剂量选择

动物购回，基础饲料喂饲3天后，按随机分组原则分为0.67g/kg.bw组、1.33g/kg.bw组和2.0g/kg.bw组(分别相当于送检方推荐的日服用建议剂量的10倍、20倍和30倍)及对照组。实验组以相应剂量的样品(称取送检样品5g，加色拉油至50ml研磨混匀，作为高剂量组灌胃液，取色拉油1份，高剂量组灌胃液2份混匀后即为中剂量组，用色拉油对倍稀释中剂量组灌胃液，混匀后即为低剂量组)，水对照组以蒸馏水灌胃，油对照组以色拉油灌胃，灌胃量为20ml/kg.bw，每天一次，连续灌胃30天。

1.4主要仪器与试剂

1.4.1主要仪器TB-214电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；数显游标卡尺：上海塞拓五金工具有限公司；Model680型酶标仪：BIO-RAD。CO₂孵箱：日本三洋；722分光光度计：上海分析仪器厂。

1.4.2主要试剂绵羊红细胞(SRBC)：采自健康绵羊颈静脉；鸡红细胞(CRBC)：采自健康公鸡心脏血；氧化型辅酶I：Sigma公司产品；一得阁墨汁：北京一得阁工贸公司；ConA：Sigma公司产品；MTT：Sigma公司产品；补体：4只健康豚鼠的混合血清。

1.5实验方法

1.5.1脏器/体重比值测定：连续灌胃30天后，称取动物体重，颈椎脱臼处死动物，取出脾脏、胸腺，分别称出脾脏、胸腺重量，计算脏器/体重比值(以mg/10g表示)。

1.5.2迟发型变态反应(足跖增厚法)：在连续灌胃的第25天，每只小鼠腹腔注射2％SRBC 0.2ml免疫，继续灌胃4天后，测量左后足跖厚度，测量3次取平均值；然后在测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC，每只20μl。注射后24小时测量左后足跖厚度，测量3次取平均值。计算攻击前后足跖厚度的差值，以差值表示小鼠足跖增厚的程度。

1.5.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)：连续灌胃30天后，颈椎脱臼处死动物，无菌取出脾脏，撕碎，过200目筛网后，用Hank’s液洗3次，用完全1640培养液配成3×10⁶个/ml细胞悬液。将每份脾细胞悬液加入24孔培养板中，1ml/孔，2孔/份样品，一孔加75μl ConA液(相当于7.5μg/ml)，一孔作为对照，置CO₂培养箱培养68h后，取出培养板，每孔轻轻吸取0.7ml上清液，加入0.7ml不含小牛血清的1640培养液，及50ulMTT液(5mg/ml)，继续培养4h。取出培养板，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打使紫色结晶完全溶解。将溶解液移入2ml比色杯中，在570nm波长处测定OD值。

1.5.4血清溶血素测定(血凝法)：在连续灌胃的第25天，每只小鼠腹腔注射2％ SRBC0.2ml免疫，继续灌胃5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置1小时，剥离，2000r/min离心10分钟，收集血清，用生理盐水将血清作倍比稀释，每份稀释12孔，将不同稀释度的血清置于血凝板中，每孔100μl，再加入0.5％ SRBC悬液100μl，混匀，置湿盒37℃3小时后观察结果，记录每孔的凝集程度。计算抗体积数。

1.5.5抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)：在连续灌胃的第25天，每只小鼠腹腔注射2％ SRBC 0.2ml免疫，继续灌胃5天后，颈椎脱臼处死小鼠，取出脾脏，撕碎，过200目筛网后，用Hank’s液洗3次，用完全1640培养液配成5×10⁶个/ml细胞悬液备用。在含有0.5ml(45℃～50℃)表层培养基的小试管中加入50μl 10％SRBC及20μl已配好的脾细胞悬液，迅速混匀，加于挂膜玻片上，凝固后，将玻片扣放在片架上，置CO₂培养箱培养1.5h，在玻片架凹槽内加入用SA缓冲液稀释的补体，继续培养1.5h后，计数溶血抗体生成细胞数。

1.5.6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)：连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1ml，30分钟后，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1分钟，吸出腹腔洗液1ml，平均滴于2张载玻片上，置湿盒37℃30分钟，取出在生理盐水中漂洗、晾干、固定，4％ Giemsa PBS染色3分钟，蒸馏水漂洗晾干，镜检。计算吞噬百分率及吞噬指数。

1.5.7小鼠碳廓清实验：连续灌胃30天后，按0.01ml/g bw从小鼠尾静脉注入1∶4稀释的墨汁，立即计时，分别于2min、10min从小鼠内眦静脉丛取血20μl，加到含2ml0.1％Na₂CO₃溶液的试管中，混匀，用722分光光度计，在600nm波长处测定OD值(用0.1％Na₂CO₃溶液作空白对照)。

1.5.8NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法)：连续灌胃30天后，颈椎脱臼处死动物，取出脾脏，撕碎，过200目筛网后，用Hank’s液洗3次，用完全1640培养液配成2×10⁷个/ml细胞悬液。将各只小鼠的细胞悬液取300μl分置于96孔培养板中，每孔100μl，每孔加靶细胞(YAC-1细胞，4×10⁵个/ml)100μl，同时做靶细胞自然释放孔(靶细胞100μl+培养液100μl)及最大释放孔(靶细胞100μl+1％NP-40 100μl)各8孔，37℃ 5％ CO₂培养4小时，取出1500r/min离心5分钟。将各孔上清液100μl置于另一培养板中，每孔再加入100μl基质液，10分钟后加1mol/L HCl 30μl终止反应，在490nm处测定O.D.值，计算NK细胞活性率。

1.6实验数据统计

采用各实验组与对照组均数比较的方差分析对数据进行处理。所用软件为《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包(PEMS 3.0，四川大学华西公卫卫生统计学教研室)。

2结果

2.1金六谷脾三七洋参软胶囊对小鼠体重的影响

2.1.1血清溶血素、抗体生成细胞与迟发型变态反应测定组经方差分析，各剂量组分别与水对照组及油对照组相比，初始体重F＝1.0721，P＝0.3802；中期体重F＝0.2196，P＝0.9263；结束体重F＝0.8893，P＝0.4773，体重增长值F＝0.1894，P＝0.9429，均无显著性差异(P＞0.05)，见表1。

表1.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠体重的影响(血清溶血素、抗体生成细胞与迟发型变态反应测定组)

2.1.2吞噬鸡红细胞与淋转测定组经方差分析，各剂量组分别与水对照组及油对照组相比，初始体重F＝0.1572，P＝0.9589；中期体重F＝0.0338，P＝0.9977；结束体重F＝0.1539，P＝0.9603；体重增长值F＝0.1539，P＝0.9604，均无显著性差异(P＞0.05)，见表2。

表2.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠体重的影响(吞噬鸡红细胞组)

2.1.3NK细胞活性测定组经方差分析，各剂量组分别与水对照组及油对照相比，初始体重F＝0.0666，P＝0.9916；中期体重F＝0.1273，P＝0.9718；结束体重F＝0.0227，P＝0.9997；体重增长值F＝0.1791，P＝0.9482均无显著性差异(P＞0.05)，见表3。

表3.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠体重的影响(NK细胞活性测定与淋转测定组)

2.1.4碳廓清测定组经方差分析，各剂量组分别与水对照组及油对照组比，初始体重F＝0.1469，P＝0.9634；中期体重F＝0.1908，P＝0.9420；结束体重F＝0.3352，P＝0.8528；体重增长值F＝0.4678，P＝0.7590，均无显著性差异(P＞0.05)，见表4。

表4.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠体重的影响(碳廓清测定组)

2.2金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠脏器/体重比值的影响

2.2.1脾脏/体重比值经方差分析，F＝0.2289，P＝0.9209。油对照组与水对照组小鼠相比，各剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其脾脏/体重比值均无显著性差异(P＞0.05)，见表5。

2.2.2胸腺/体重比经方差分析，F＝0.3216，P＝0.8622，油对照组与水对照组小鼠相比，各剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其胸腺/体重比值均无显著性差异(P＞0.05)，见表5。

表5.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠脏器/体重比值的影响

2.3金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

经方差分析，F＝4.6670，P＝0.0028。抗原攻击后24小时，油对照组与水对照组小鼠相比，其足跖肿胀度无显著性差异(P＞0.05)；0.67g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其足跖肿胀度均无显著性差异(P＞0.05)；1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其足跖肿胀度均有显著性差异(P＜0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其足跖肿胀度均有显著性差异(P＜0.01)，见表6。

表6.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

*表示与水对照组相比，P＜0·05，**表示与水对照组相比，P＜0.01；△表示与油对照组相比，P＜0.05，△△表示与对照组相比，P＜0.01

2.4ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)：

经方差分析，F＝4.6067，P＝0.0030。油对照组与水对照组小鼠相比，其光密度差值无显著性差异(P＞0.05)；0.67g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其光密度差值均无显著性差异(P＞0.05)；1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其光密度差值均有显著性差异(P＜0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其光密度差值均有显著性差异(P＜0.01)，见表7。

表7.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠淋巴细胞转化的影响

*表示与水对照组相比，P＜0.05，**表示与水对照组相比，P＜0.01；△表示与油对照组相比，P＜0.05，△△表示与对照组相比，P＜0.01

2.5金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠血清溶血素产生的影响

经方差分析，F＝3.3805，P＝0.0159。油对照组与水对照组小鼠相比，其抗体积数无显著性差异(P＞0.05)；0.67g/kg.bw和1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其抗体积数均无显著性差异(P＞0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其抗体积数均有显著性差异(P＜0.05)，见表8。

表8.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠血清溶血素抗体积数的影响

*表示与对照组相比，P＜0.05；△表示与油对照组相比，P＜0.05

2.6抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)

经方差分析，F＝4.6284，P＝0.0029。油对照组与水对照组小鼠相比，其抗体生成细胞数无显著性差异(P＞0.05)；0.67g/kg.bw与1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其抗体生成细胞数均无显著性差异(P＞0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其抗体生成细胞数均有显著性差异(P＜0.01)，见表9。

表9.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠抗体生成细胞的影响

**表示与对照组相比，P＜0.01；△△表示与对照组相比，P＜0.01

2.7金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

2.7.1吞噬百分率经方差分析，F＝4.7913，P＝0.0024。油对照组与水对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率无显著性差异(P＞0.05)；0.67g/kg.bw与1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率均无显著性差异(P＞0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率均有显著性差异(P＜0.01)，见表10。

2.7.2吞噬指数经方差分析，F＝3.3417，P＝0.0168。油对照组与水对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数无著性差异(P＞0.05)；0.67g/kg.bw与1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数均无著性差异(P＞0.05)；2.0g/kg.bw剂量组与水对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数有显著性差异(P＜0.05)；2.0g/kg.bw剂量组与油对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数有显著性差异(P＜0.01)，见表10。

表10.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

*表示与对照组相比，P＜0.05，**表示与对照组相比，P＜0.01；△表示与油对照组相比，P＜0.05，△△表示与对照组相比，P＜0.01

2.8小鼠碳廓清实验

经方差分析，F＝3.4950，P＝0.0144。油对照组与水对照组小鼠相比，其吞噬指数a无显著性差异(P＞0.05)；0.67g/kg.bw与1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其吞噬指数a均无显著性差异(P＞0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其吞噬指数a均有显著性差异(P＜0.05)，见表11。

表11.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠碳廓清的影响

*表示与对照组相比，P＜0.05；△表示与油对照组相比，P＜0.05

2.9金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠NK细胞活性的影响

经方差分析，F＝5.3080，P＝0.0012。油对照组与水对照组小鼠相比，其NK细胞活性率无显著性差异(P＞0.05)；0.67g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其NK细胞活性率均无显著性差异(P＞0.05)；1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其NK细胞活性率均有显著性差异(P＜0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其NK细胞活性率均有显著性差异(P＜0.01)，见表12。

表12.金六谷牌三七洋参软胶囊对小鼠NK细胞活性的影响

*表示与时照组相比，P＜0.05，**表示与对照组相比，P＜0.01；△表示与油对照组相比，P＜0.05，△△表示与对照组相比，P＜0.01

3小结

分别经口给予小鼠(Balb/c)0.67g/kg.bw、1.33g/kg.bw和2.0g/kg.bw剂量的金六谷牌三七洋参软胶囊30天后，来见本检品对小鼠体重和增重有不良影响。在小鼠脏器/体重比值测定中，各剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其脏器/体重比值均无显著性差异(P＞0.05)。在小鼠迟发型变态反应试验中，抗原攻击后24小时，1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其足跖肿胀度均有显著性差异(P＜0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其足跖肿胀度均有显著性差异(P＜0.01)。在小鼠脾淋巴细胞转化实验中，1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其光密度差值均有显著性差异(P＜0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其光密度差值均有显著性差异(P＜0.01)。在小鼠血清溶血素测定试验中，2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其抗体积数均有显著性差异(P＜0.05)。在抗体生成细胞检测试验中，2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其抗体生成细胞数均有显著性差异(P＜0.01)。在小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验中，2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率均有显著性差异(P＜0.01)；2.0g/kg.bw剂量组与水对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数有显著性差异(P＜0.05)；2.0g/kg.bw剂量组与油对照组小鼠相比，其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数有显著性差异(P＜0.01)。在小鼠碳廓清实验中，2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其吞噬指数a均有显著性差异(P＜0.05)。在小鼠NK细胞活性测定试验中，1.33g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其NK细胞活性率均有显著性差异(P＜0.05)；2.0g/kg.bw剂量组分别与水对照组及油对照组小鼠相比，其NK细胞活性率均有显著性差异(P＜0.01)。据评价标准可认为该检品(金六谷牌三七洋参软胶囊)具有增强免疫力功能。

Claims (7)

1.一种三七洋参软胶囊，其特征是，由以下重量份的主要原料和辅料组成：

三七提取物    40份-50份、

银杏提取物    100份-150份、

西洋参提取物  70份-80份、

天麻提取物    70份-80份、

辅料          1190-1250份。

2.根据权利要求1所述三七洋参软胶囊，其特征是，所述原料的制备方法为：分别将原料粉碎，用相对于原料5-20倍质量的水或乙醇提取2-3次，每次1-2小时，然后过滤，滤液浓缩至相对密度为1.0-1.15，再喷雾干燥至水份含量≤5％，得粉末状三七提取物、银杏提取物、西洋参提取物或天麻提取物。

3.根据权利要求1所述三七洋参软胶囊，其特征是，所述辅料包括以下重量份的成分：

大豆油640份-650份、       蜂蜡38份-42份、

明胶210份-220份、         甘油100份-110份、

棕氧化铁0.001份-0.01份、  纯化水210份-220份。

4.根据权利要求3所述三七洋参软胶囊，其特征是，所述辅料包括以下重量份的成分：

大豆油646份、        蜂蜡40份、

明胶216份、          甘油108份、

棕氧化铁0.004份、    纯化水216份。

5.权利要求1-4之一所述三七洋参软胶囊在提高免疫力、抗疲劳方面的应用。

6.权利要求1-4之一所述三七洋参软胶囊在改善亚健康方面的应用。

7.权利要求1-4之一所述三七洋参软胶囊在制备成保健品方面的应用。

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