CN102100805A

CN102100805A - 一种具有缓解体力疲劳及增强免疫功能的组合物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN102100805A
Application number: CN 201110034221
Authority: CN
Inventors: 蔡愈杭; 陈伟; 何会; 罗殷
Original assignee: RIJIAMAN BEVERAGE (SHANGHAI) CO Ltd; SHANGHAI DONGJIN FOOD GROUP CO Ltd
Current assignee: RIJIAMAN BEVERAGE (SHANGHAI) CO Ltd; SHANGHAI DONGJIN FOOD GROUP CO Ltd
Priority date: 2011-01-31
Filing date: 2011-01-31
Publication date: 2011-06-22
Anticipated expiration: 2031-01-31
Also published as: CN102100805B

Abstract

本发明公开了一种具有缓解体力疲劳及增强免疫功能的组合物及其制备方法和用途。所述的组合物中含有：10-100重量份的瓜拉纳提取物，100-800重量份的牛磺酸，1-10重量份的L-赖氨酸盐酸盐，1-10重量份的L-异亮氨酸，0.1-5重量份的L-亮氨酸，0.2-5重量份的L-缬氨酸，1-15重量份的L-天门冬氨酸，0.01-0.3重量份的L-色氨酸，0.01-0.3重量份的L-苯丙氨酸，0.01-0.3重量份的L-苏氨酸，0.01-0.3重量份的L-蛋氨酸，10-100重量份的L-丙氨酸，10-100重量份的甘氨酸，1-15重量份的茶多酚，和1-20重量份的西洋参提取物。

Description

一种具有缓解体力疲劳及增强免疫功能的组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及具有保健功能的组合物的领域，尤其涉及一种具有缓解体力疲劳及增强免疫功能的组合物及其制备方法和用途。

背景技术

疲劳是机体在一定环境条件下，由于长时间或过于繁重、紧张的劳动(包括脑力和体力)而引起的工作效率暂时降低的一种生理心理现象。随着社会的进步，竞争机制的发展，人们不可避免地要不断接受到来自工作、社会、家庭的各种各样的压力，极易出现精神紧张，食欲下降，反应迟钝，记忆力减退，注意力不能集中等疲劳症状。疲劳已成为全球关注的严重问题，据报道美国约有14％的成年男性和20％的妇女患有此症；日本工作人口中有30％以上遭受此症袭击，其中有40％的患者不能正常工作和学习。我国亦有越来越多的人群患此症，如从事科研、TI行业人事及记者、演艺人员、市场营销者，国家中、高层公务员，企业中、高层管理者，发病率高达50％。

鉴于此，国内外许多专家学者纷纷将目光转移至改善这一病症现象的领域，针对能缓解体力疲劳、增强免疫力的资源和保健食品进行了大量研究。国内研究有，从对大豆异黄酮复合物，拟黑多刺蚁提取物，三七皂甙，毓华参，鱿鱼精巢组织粗提物和精核蛋白提取物等资源的缓解体力疲劳作用和动物实验研究，到对白灵醉，大豆蛋白活性肽，灵芝，牛初乳粉，乳铁蛋白，天然植物中的活性成分白藜芦醇，褪黑激素，羊胚胎盘肽，大豆生物活性物质，茶多酚，甘薯糖蛋白，核酸，金属硫蛋白，螺旋藻，桑葚等资源的免疫作用保健功能的研究；以及对即能缓解体力疲劳又能免疫调节的食用资源实验研究和阐述，如鳖甲提取物、刺五加、冬虫夏草、枸杞子、红景天、芦笋、桑叶片、珠贝提取物、人工蛹虫草胞外多糖、鹿草多糖等；并以这些研究为基础，开发研制出具有缓解体力疲劳和增强免疫力的保健食品和相关辅助药物，如某些中成药，北虫草制品，芪参麦味汤，芦草灵，枸杞油胶丸，菊泰软胶囊，复方胶股蓝，新型保健食品-羊肝菌胶囊的研究等。国外学者也从疲劳和免疫力的机理研究出发，再对缺乏某种营养元素而引起的疲劳和免疫力降低的试验研究，并研制出一些相关产品及其保健功能的实验验证。

因此，研究缓解体力疲劳的保健食品非常适合当前市场的需求，具有广阔的发展前景。目前市场上还缺乏理想的缓解体力疲劳保健品，其不足之处，主要是针对性差，起效慢，强度较低，副作用较多，很多产品均添加有对人体有害的化学成分，安全性差。

因此本领域迫切需要提供一种高效、安全的缓解体力疲劳和增强免疫功能的物质。

发明内容

本发明旨在提供一种具有缓解体力疲劳及增强免疫功能的组合物及其制备方法和用途。

在本发明的第一方面，提供了一种具有缓解体力疲劳及增强免疫功能的组合物，所述的组合物中含有：

10-100重量份的瓜拉纳提取物，

100-800重量份的牛磺酸，

1-10重量份的L-赖氨酸盐酸盐，

1-10重量份的L-异亮氨酸，

0.1-5重量份的L-亮氨酸，

0.2-5重量份的L-缬氨酸，

1-15重量份的L-天门冬氨酸，

0.01-0.3重量份的L-色氨酸，

0.01-0.3重量份的L-苯丙氨酸，

0.01-0.3重量份的L-苏氨酸，

0.01-0.3重量份的L-蛋氨酸，

10-100重量份的L-丙氨酸，

10-100重量份的甘氨酸，

1-15重量份的茶多酚，和

1-20重量份的西洋参提取物。

在上述组合物中，以所述瓜拉纳提取物的总重量计，其中含有咖啡因5-15w/w％；较佳地，所述瓜拉纳提取物中含有咖啡因10-12w/w％。

在上述组合物中，以所述西洋参提取物的总重量计，其中含有西洋参皂甙5-15w/w％；较佳地，所述西洋参提取物中含有西洋参皂甙10-12w/w％。

在上述组合物中，以所述茶多酚的总重量计，其中含有表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG80w/w％以上；较佳地，含有EGCG 90w/w％以上

在本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的组合物的制备方法，所述的方法包括步骤：

将10-100重量份的瓜拉纳提取物，100-800重量份的牛磺酸，1-10重量份的L-赖氨酸盐酸盐，1-10重量份的L-异亮氨酸，0.1-5重量份的L-亮氨酸，0.2-5重量份的L-缬氨酸，1-15重量份的L-天门冬氨酸，0.01-0.3重量份的L-色氨酸，0.01-0.3重量份的L-苯丙氨酸，0.01-0.3重量份的L-苏氨酸，0.01-0.3重量份的L-蛋氨酸，10-100重量份的L-丙氨酸，10-100重量份的甘氨酸，1-15重量份的茶多酚，和1-20重量份的西洋参提取物混合，得到如上所述的本发明提供的组合物。

在本发明的第三方面，提供了一种如上所述的本发明提供的组合物的用途，用于制备缓解体力疲劳及增强免疫功能的药物；所述的药物中含有如上所述的本发明提供的组合物和药学上可接受的载体。

在本发明的第四方面，提供了一种如上所述的本发明提供的组合物的用途，用作或用于制备缓解体力疲劳及增强免疫功能的食物或膳食添加剂；所述的食品补充剂中含有如上所述的本发明提供的组合物和食品学上可接受的载体。

据此，本发明提供了一种高效、安全的缓解体力疲劳和增强免疫功能的物质。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，发现了一种组合物配方，即本发明提供的组合物，该组合物可以有效缓解体力疲劳和增强免疫功能。在此基础上完成了本发明。

如本文所用，“组合物”、“具有缓解体力疲劳和/或增强免疫功能的组合物”和“本发明提供的组合物”可以互换使用，都含有下述成分：

10-100重量份的瓜拉纳提取物，

100-800重量份的牛磺酸，

1-10重量份的L-赖氨酸盐酸盐，

1-10重量份的L-异亮氨酸，

0.1-5重量份的L-亮氨酸，

0.2-5重量份的L-缬氨酸，

1-15重量份的L-天门冬氨酸，

0.01-0.3重量份的L-色氨酸，

0.01-0.3重量份的L-苯丙氨酸，

0.01-0.3重量份的L-苏氨酸，

0.01-0.3重量份的L-蛋氨酸，

10-100重量份的L-丙氨酸，

10-100重量份的甘氨酸，

1-15重量份的茶多酚，和

1-20重量份的西洋参提取物。

较佳地，本发明提供的组合物中含有：

20-80重量份的瓜拉纳提取物，

200-700重量份的牛磺酸，

2-8重量份的L-赖氨酸盐酸盐，

2-8重量份的L-异亮氨酸，

0.5-3重量份的L-亮氨酸，

1-4重量份的L-缬氨酸，

4-13重量份的L-天门冬氨酸，

0.04-0.2重量份的L-色氨酸，

0.04-0.2重量份的L-苯丙氨酸，

0.04-0.2重量份的L-苏氨酸，

0.04-0.2重量份的L-蛋氨酸，

20-80重量份的L-丙氨酸，

20-80重量份的甘氨酸，

5-12重量份的茶多酚，和

6-25重量份的西洋参提取物。

更佳地，本发明提供的组合物中含有：

60-75重量份的瓜拉纳提取物，

500-600重量份的牛磺酸，

4-6重量份的L-赖氨酸盐酸盐，

4-6重量份的L-异亮氨酸，

1-2重量份的L-亮氨酸，

2-4重量份的L-缬氨酸，

10-12重量份的L-天门冬氨酸，

0.1-0.15重量份的L-色氨酸，

0.1-0.15重量份的L-苯丙氨酸，

0.1-0.15重量份的L-苏氨酸，

0.1-0.15重量份的L-蛋氨酸，

60-75重量份的L-丙氨酸，

60-75重量份的甘氨酸，

10-12重量份的茶多酚，和

15-20重量份的西洋参提取物。

如本文所用，“瓜拉纳(Paullinia cupana)”是一种源自于亚马逊流域的天然植物，含有咖啡因、茶碱、可可碱、单宁、皂角碱、多种儿茶酚和其他微量物质，千百年来被亚马孙流域的印第安人视为赐予他们青春、美丽和健康长寿的源泉。

如本文所用，“瓜拉纳提取物”是一种瓜拉纳籽的水醇提取物，可以通过本领域熟知的方式获得，例如但不限于，将瓜拉纳籽和70-90v/v％的乙醇水溶液混合，回流提取得到，提取时间2-5h，过滤，将得到的浸膏干燥得细粉。以得到的瓜拉纳提取物的总重量计，在提取物中含有5-15w/w％的咖啡因，较佳地含有10-12w/w％的咖啡因。

咖啡因的结构如下图：

其结构中R₁、R₃、R₇分别为

A.H、CH₃、CH₃

B.CH₃、CH₃、CH₃

C.CH₃、CH₃、H

D.H、H、H

E.CH₂OH、CH₃、CH₃

如本文所用，“西洋参”是五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根。

如本文所用，“西洋参提取物”是一种西洋参的水醇提取物，可以通过本领域熟知的方式获得，例如但不限于，将西洋参和30-70v/v％的乙醇水溶液混合，回流得到提取液，提取液沉降后过滤上清液，减压浓缩去除乙醇，再在滤液中加入乙醇混合，再次沉降后过滤上清液，将得到的浸膏干燥、粉碎，得到细粉。以得到的西洋参提取物的总重量计，在提取物中含有5-15w/w％的西洋参皂甙，较佳地含有10-12w/w％的西洋参皂甙。

皂甙的结构如下：

如本文所用，“茶多酚(Tea Polyphenols)”是一种稠环芳香烃，可分为黄烷醇类、羟基-[4]-黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、酮醇类和酚酸类等，其中以黄烷醇类为主，黄烷醇类又以儿茶素类物质为主。以茶多酚的总重量计，其中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)80w/w％以上，较佳地在90w/w％以上。可以通过本领域常规的方法制备得到茶多酚，例如但不限于醇提法或者水提法；也可以通过商购得到，例如但不限于上海诺德生物实业有限公司

如本文所用，“牛磺酸(taurine)”是哺乳动物神经系统一种重要的游离氨基酸，具有广泛的生物学活性。

如本文所用，“L-异亮氨酸(L-isoleucine)”是支链氨基酸。本发明使用的支链氨基酸还有L-赖氨酸(L-lysine)，L-亮氨酸(L-leucine)，L-缬氨酸(L-valine)，L-天门冬氨酸(L-aspartate)，L-色氨酸(L-tryptophan)，L-苯丙氨酸(L-phenylalanine)，L-苏氨酸(L-threonine)，L-蛋氨酸(L-methionine)，L-丙氨酸(L-alanine)，和甘氨酸(L-glycine)。

本发明提供的组合物可以通过下述步骤制备得到，即将10-100重量份的瓜拉纳提取物，100-800重量份的牛磺酸，1-10重量份的L-赖氨酸盐酸盐，1-10重量份的L-异亮氨酸，0.1-5重量份的L-亮氨酸，0.2-5重量份的L-缬氨酸，1-15重量份的L-天门冬氨酸，0.01-0.3重量份的L-色氨酸，0.01-0.3重量份的L-苯丙氨酸，0.01-0.3重量份的L-苏氨酸，0.01-0.3重量份的L-蛋氨酸，10-100重量份的L-丙氨酸，10-100重量份的甘氨酸，1-15重量份的茶多酚，和1-20重量份的西洋参提取物混合得到。

本发明提供的组合物和药学上/食品学上可接受的载体混合，可以得到相应的药物或食物或膳食添加剂。

如本文所用，术语“药学上可接受的”或“食品学上可接受的”的成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。

如本文所用，术语“载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’s Pharmaceutical Scierces(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找至关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可包括液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如崩解剂、润湿剂、乳化剂、pH缓冲物质等。

例如，本发明的组合物还可以含有其它具有缓解疲劳和/或增强免疫力的物质，例如但不限于灵芝、何首乌等。

如本文所用，术语“含有”或“包括”包括了“包含”、“基本上由……构成”、和“由……构成”。

如本文所用，术语“基本上由……构成”指在组合物中，除了含有必要成分或必要组份之外，还可含有少量的且不影响有效成分的次要成分和/或杂质。例如，可以含有甜味剂以改善口味、抗氧化剂以防止氧化，以及其他本领域常用的添加剂。

如本文所用，术语“单元剂型”是指为了服用方便，将本发明提供的组合物制备成单次服用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如片剂)、液体剂、胶囊剂、缓释剂。所述的单元剂型中含有对于缓解体力疲劳和增强免疫功能有效的本发明提供的组合物。

如本文所用，“重量份”或“重量份数”可互换使用，所述的重量份可以是任何一个固定的以毫克、克数或千克数表示重量(如1mg、1g、2g、5g、或1kg等)。例如，一个由1重量份组分a和9重量份组分b构成的组合物，可以是1克组分a+9克组分b，也可以是10克组分a+90克组分b等构成的组合物。在所述组合物，某一组分的百分比含量＝(该组分的重量份数/所有组分的重量份数之和)×100％。因此，由1重量份组分a和9重量份组分b构成的组合物中，组分a的含量为10％，组分b为90％。

本发明提供的组合物可直接用于缓解体力疲劳和增强免疫功能，或可与其它药物或膳食添加剂共同给予动物体。

在本发明的一个实施例中，含有本发明提供的组合物的药物或食物或膳食添加剂的制备方法：将瓜拉纳提取物、西洋参提取物、牛磺酸、总氨基酸，按照配方量混匀，再与常规辅料混匀，按公知的制剂技术制备成饮料、胶囊剂、片剂、咀嚼片、颗粒剂、口服液、软胶囊、膏状物、流汁及半流汁等常用剂型，优选为饮料剂型。所述的药物或食物或膳食添加剂的原辅料，要符合中国药典或国家或行业的食品卫生标准、营养素补充剂标准、食品添加剂标准。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以用任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

本发明的主要优点在于：

1、本发明提供的组合物具有显著的增强免疫力及缓解体力疲劳保健功能。

2、本发明提供的组合物安全无毒。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1-3

组合物1-3

	组合物A	组合物B	组合物C
				瓜拉纳提取物(g)	10	20	75
牛磺酸(g)	100	200	600
				L-赖氨酸盐酸盐(g)	1	2	6
L-异亮氨酸(g)	1	2	6
				L-亮氨酸(g)	0.1	0.5	2
L-缬氨酸(g)	0.2	1	4
				L-天门冬氨酸(g)	1	4	12
L-色氨酸(g)	0.01	0.04	0.15
				L-苯丙氨酸(g)	0.01	0.04	0.15
L-苏氨酸(g)	0.01	0.04	0.15
				L-蛋氨酸(g)	0.01	0.04	0.15
L-丙氨酸(g)	10	20	75
				甘氨酸(g)	10	20	75
茶多酚(g)	1	5	12
				西洋参提取物(g)	1	6	20

按上述配方将各种成分混合，分别得到组合物1、组合物2和组合物3。

瓜拉纳提取物的制备方法为：

1、瓜拉纳籽用6-10倍量90％浓度的乙醇回流提取3次，每次提取3h；

2、过滤，合并滤液，减压回收乙醇后，减压浓缩至60℃，得到浸膏；

3、将浸膏进行喷雾干燥(进风温度为150-180℃，出风温度为60-90℃)，得到喷雾干燥细粉，即得。

经检测(检测方法：GB/T 5009.139-2003饮料中咖啡因的测定)，以所得到的瓜拉纳提取物的总重量计，其中咖啡因含量10-12％。

西洋参提取物的制备方法为：

1、西洋参前处理：将西洋参净选后切成0.5-1.0cm左右片状；

2、提取：100kg西洋参投于3吨多功能提取罐。加入10倍量(w/r)50％食用乙醇，加热回流3h，收集提取液，残渣加入10倍量50％实用乙醇回流3h，收集提取液。残渣再加入8倍量50％食用乙醇，回流1h收集收集提取液；

3、沉降(1)合并三次提取液，置沉降桶内，沉降24h，取上清液过滤；

4、浓缩(1)上述过滤液置于回收塔中在90℃以下中减压，回收至无醇味；

5、沉降(2)在上述过滤液中加入适量95％乙醇，并搅拌1h，在沉降桶内沉降24h后将上清液过滤；

6、浓缩(2)将上述过滤于回收塔中，在90℃以下，减压回收。浓缩至相对密度为1.10-1.20浸膏；

7、干燥：将上述浸膏放入洁净不绣钢盘中，在真空干燥箱中，在90℃以下，减压真空干燥；

8、粉碎：将干燥物用粉碎机粉碎，过100目筛即得西洋参提取物固体粉末。

经检测(检测方法：GB/T 22996-2008人参中多种人参皂甙含量的测定)，以所得到的西洋参提取物的总重量计，其中西洋参皂甙的含量为10w/w％。

以下安全性试验及功能试验的样品均通过将实施例1-3中组合物A、组合物B、组合物C各组份各缩小500倍得到组合物1、组合物2、组合物3，具体组成如下表：

	组合物1	组合物2	组合物3
				瓜拉纳提取物(g)	0.01667	0.03333	0.12500
牛磺酸(g)	0.16667	0.33333	1.00000
				L-赖氨酸盐酸盐(g)	0.00167	0.00333	0.01000
L-异亮氨酸(g)	0.00167	0.00333	0.01000
				L-亮氨酸(g)	0.00017	0.00083	0.00333
L-缬氨酸(g)	0.00033	0.00167	0.00667
				L-天门冬氨酸(g)	0.00167	0.00667	0.02000
L-色氨酸(g)	0.00002	0.00007	0.00025
				L-苯丙氨酸(g)	0.00002	0.00007	0.00025
L-苏氨酸(g)	0.00002	0.00007	0.00025
				L-蛋氨酸(g)	0.00002	0.00007	0.00025
L-丙氨酸(g)	0.01667	0.03333	0.12500
				甘氨酸(g)	0.01667	0.03333	0.12500
茶多酚(g)	0.00167	0.00833	0.02000

西洋参提取物(g)

0.00167

0.01000

0.03333

实施例4

安全性试验

实验动物：昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重：18-22克，由中国科学院上海实验动物中心提供。生产许可证号：SCXK(沪)2002-0010，实验动物饲养室温度20-25℃，相对湿度40-70％。实验动物许可证号：SCXK(沪)2002-0006。动物饲养料，由苏州双狮实验动物饲料科技服务有限公司提供，登记证号：苏E饲生字(2002)06。

实验方法：

(1)受试样品配制：本品每日推荐剂量即为实施例1-3中组合物3配方各组份的总重量，称取20倍重量的组合物3加蒸馏水至20ml，充分混匀后作为受试样品。

(2)试验方法：通过小鼠急性经口毒性试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验、30天喂养试验来进行毒理安全评价，上述试验方法参见通用的卫生部《保健食品检验和评价技术规范》(2003版)毒理学检验方法-急性毒性试验、哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠精子畸形试验、致突变的处理方法。

本发明提供的组合物的I和II阶段的毒理安全试验表明：该产品安全无毒。上海市疾病预防控制中心对本发明提供的组合物的I和II阶段毒理安全试验表明：

(1)小鼠急性经口毒性试验，雌雄小鼠经口LD₅₀值大于20000mg/kg b.wt，表明本发明提供的组合物属无毒级。

(2)小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：剂量达10000mg/kg b.wt，未检出对雌雄小鼠骨髓嗜多染红细胞的致微核作用。

(3)小鼠精子畸形试验：剂量达10000mg/kg b.wt，未检出对雄性小鼠精子的诱变活性。

(4)Ames试验：平板掺入法，剂量达20mg/皿.，加及不加S9，对标准测试菌TA97，TA98，TA100和TA102均未检出明显的诱变活性。因此，本发明提供的组合物没有致畸、致突变和致癌性。

(5)30天喂养试验，受试样品以20，100和200mg/kg b.wt剂量(相当于推荐剂量的10，50和100倍的实际摄入量时)，喂养大鼠30天，大鼠的生长发育及脏器、血液学、血红素、红细胞、白细胞等生化病理指标均未检出明显有害作用，未见明显不良影响。该样品30天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量(NOAEL值)为2000mg/kg/d。

实施例5

缓解体力疲劳功能试验

实验动物：昆明种小白鼠，许可证号：SCXK(沪)2002-0010，体重18-22克，雌性，由中国科学院上海实验动物中心提供的清洁级动物(本站SPF动物房饲养)。实验动物饲养室温度20-25℃，相对湿度40-70％，实验动物许可证号：SCXK(沪)2002-0006，动物饲养料，由苏州双狮实验动物饲料科技服务有限公司提供，登记证号：苏E饲生字(2002)06。

实验方法：

(1)剂量设计：本实验设组合物1、组合物2、组合物3三个剂量组，另设蒸馏水空白对照组和5.6％糖对照组。

(2)样品处理：将组合物加蒸馏水至20ml，充分混匀后作为受试样品。

(3)给样途径：灌胃，灌胃容量0.4ml/20g体重。

(4)受试物的给予：分别取样品1000，2000，6000mg，加双蒸水至200ml配制成各组受试液(存放于4℃冰箱，每3天配制一次)，溶剂对照组给予双蒸水，各组每日以20ml/kgb.wt.的量经口灌胃，连续30d。

(5)受试物对动物体重的影响：取昆明种小白鼠150只，逐只称重，按体重分层随机分为15组，每组10只。以每五组为一个实验组，按剂量设计连续喂养30天，各组动物每周称量体重。

(6)游泳时间测定：末次经口灌胃给予受试物30min后，置尾根部负荷5％体重铅皮的小鼠于游泳箱中，水深大于30cm，水温25℃±1.0℃，记录小鼠从游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间。

(7)乳酸测定：取上述按剂量设计连续喂养30天后的三剂量组及各对照组动物各一组，测血乳酸并在末次给氧后30min，负重2％(体重)在温度25-30℃水中游泳30min，取出，测血乳酸，热风烘干，安静2min后，再测血乳酸。

(8)尿素氮测定：取上述按剂量设计连续喂养30天后的三剂量组及各对照组动物各一组，于末次灌胃后30min，将小鼠放入30℃水中游泳90min，取出，热风烘干，使安静，取鼠血，离心，取血清测尿素氮。

(9)肝糖元测定：取小白鼠40只，随机分为五组，每组10只。按剂量设计连续喂养30天，于末次灌胃后30min，将小鼠放入30℃水中游泳90min，取出，立刻取鼠肝脏，测肝糖原。

结果

1、对体重的影响见表1

表1本发明提供的组合物对小鼠体重的影响

结果表明，本发明提供的组合物对动物体重无明显影响。

2、对小鼠负重游泳时间的影响见表2

表2本发明提供的组合物对小鼠负重游泳时间的影响

组别	动物数(只)	负重游泳时间(秒)
			对照	10	730±148
组合物1	10	785±175
			组合物2	10	980±254*
组合物3	10	1252±369**
			糖对照	10	774±159

*P＜0.05与糖对照组相比(经方差分析)**P＜0.01与糖对照组相比(经方差分析)

结果表明，本发明提供的组合物与糖对照组相比，使小鼠负重游泳时间延长。

3、对小鼠运动后血乳酸的影响见表3

表3本发明提供的组合物对小鼠运动后血乳酸曲线下面积的影响

组别	动物数(只)	血乳酸曲线下面积
			对照	10	217.8±19.65
组合物1	10	180.7±18.60*
			组合物2	10	160.2±16.38*
组合物3	10	140.7±11.47**
			糖对照	10	228.7±10.17

结果表明，本发明提供的组合物与糖对照组相比，可减少动物血乳酸曲线下面积。

4、对小鼠运动后血清尿素氮的影响见表4

表4本发明提供的组合物对小鼠运动后血清尿素氮的影响

组别	动物数(只)	尿素氮(mmol/l)
			对照	10	8.88±0.49
组合物1	10	8.32±0.19
			组合物2	10	8.18±0.49

组合物3	10	5.30±0.58*
			糖对照	10	8.84±0.26

*P＜0.05与糖对照组相比(经方差分析)

结果表明，本发明提供的组合物与糖对照组相比，可减少小鼠运动后血清尿素氮含量。

5、对小鼠运动后肝糖原的影响见表5

表5本发明提供的组合物对小鼠运动后肝糖原的影响

组别	动物数(只)	肝糖原(mg/100g)
			对照	10	496±32
组合物1	10	693±45*
			组合物2	10	855±38*
组合物3	10	954±51**
			糖对照	10	641±38

结果表明，本发明提供的组合物与糖对照组相比，可增加小鼠运动后肝糖原的含量。

由以上数据可以看出，本发明提供的组合物在对小鼠负重游泳时间、对小鼠运动后血乳酸的影响、对小鼠运动后血清尿素氮的影响、对小鼠运动后肝糖原的影响上与对照组相比均有显著性差异，且组合物3相对于组合物2及组合物1更显著。

6、总结：根据以上试验结果、根据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)对缓解体力疲劳保健食品功能学评价标准，上海市疾病预防控制中心对本发明提供的组合物的功效经过动物实验表明，本发明提供的3种组合物具有显著的缓解体力疲劳功能，且组合物3相对于组合物2及组合物1更显著。

实施例6

增强免疫功能实验

实验方法：

(3)给样途径：灌胃，灌胃容量0.4ml/20g体重。

(4)受试物的给予：(存放于4℃冰箱，每3天配制一次)，溶剂对照组给予双蒸水，各组每日以20ml/kgb.wt.的量经口灌胃，连续30d。

实验结果

血清溶血素试验：

动物连续给样30天后，用2％(V/V)SRBC免疫动物5天后，眼眶采血，颈椎脱臼处死，分离血清。在96孔微量血凝板上加25μl生理盐水，再分别在第一排加25μl血清，以后各排作对半稀释，每孔加1％SRBC 1滴，振荡后37℃放置3h，当血球对照出现沉落后观察结果。

血清溶血素试验

组别	动物数(只)	时间(天)	抗体积数
				对照	10	30	70.4±18.7
组合物1	10	30	92.3±17.8*
				组合物2	10	30	109.4±19.4*
组合物3	10	30	163.9±26.9**

经统计学分析：本发明提供的组合物1、组合物2、组合物3与对照组相比，均有显著性差异，且组合物3相对于组合物2及组合物1更显著。

抗体生成检测试验：

连续给样30天后，将脱纤维绵羊红细胞免疫5天半后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏放在盛有Hank’s液的平皿内，制成脾细胞悬液。将琼脂糖配成1％水溶液，水浴45℃煮30min，与等量pH 7.2-7.4双倍Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加入50μl 10％SRBC，脾细胞悬液20ul做两个平行样，迅速混匀后，倾倒于琼脂糖薄层玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，然后将补体加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h，计数溶血空斑数。结果用方差分析进行统计。

抗体生成检测试验

组别	动物数(只)	溶血空斑数(*1000个/全脾)
			对照	10	10.1±2.02
组合物1	10	17.3±1.89*

组合物2	10	23.8±2.50*
			组合物3	10	34.9±3.18**

胸腺指数、脾指数的测定：

动物连续给样30天后：每鼠称重，颈椎脱臼处死，取胸腺、脾脏称重，分别计算胸腺指数和脾指数。

胸腺指数、脾指数

组别	动物数(只)	胸腺指数(％)	脾指数(％)
				对照	10	0.28±0.06	0.56±0.15
组合物1	10	0.28±0.04	0.53±0.12
				组合物2	10	0.27±0.05	0.74±0.11*
组合物3	10	0.33±0.10	0.82±0.13**

经统计学分析：本发明提供的组合物2、组合物3与对照组相比，均有显著性差异，且组合物3相对于组合物2及组合物1更显著。

小鼠碳廓清试验

小鼠尾静脉注射1∶3稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min，分别从眼静脉丛取血20μl，并将其加到2ml Na₂CO₃

溶液中，用分光光度计在600nm波长处测OD值，以Na₂CO₃溶液作空白对照。根据动物体重、肝重、脾重计算吞噬指数，结果以方差分析进行统计。

碳廓清试验

组别	动物数(只)	吞噬指数
			对照	10	3.11±0.33
组合物1	10	4.70±0.49*
			组合物2	10	6.74±0.69*

组合物3

10

8.90±0.78**

经统计学分析：本发明提供的组合物与对照组相比，均有显著性差异。

ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验

动物连续给样30天后，颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为2*106个/ml，将细胞悬液分两孔加入24孔培养板，每孔1ml，一孔加50μl ConA液(相当于5μg/ml)，另一孔作为对照，置于5％CO₂，37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的PRM 1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μg/孔，继续培养4h，培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吸打混匀，使紫色结晶完全溶解后，以570nm波长进行比色，结果用方差分析进行分析。

ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验

DTH测定

致敏：动物连续给样30天后，每鼠腹部去毛，范围约3*3cm，将1％的DNFB溶液50μl均匀涂抹致敏。

DTH的产生与测定：5日后，用1％DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击。24h后，颈椎脱臼处死小鼠，用打孔器取下直径8mm的左右耳片，称重并计算肿胀度。

DHT测定结果

由上表可见，本发明提供的组合物与对照组相比，均无显著性差异。

NK细胞活性测定

动物连续给样30天后：颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾细胞悬液(效应细胞)，取传代后24h，YAC-1细胞加1640完全培养液，调整细胞浓度为1*105个/ml(靶细胞)，取靶细胞和效应细胞各100效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μl，上述各项均设三个复孔，于37℃，5％CO₂培养箱中培养4h，每孔吸取上清液100μl置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，反应3min，每孔加入1mol/L的HCL 30μl终止，用酶标仪在490mm处测定光密度值(OD)。

NK细胞活件测定

组别	动物数(只)	时间(天)	NK细胞活性
				对照	10	30	31.1±5.49
组合物1	10	30	48.3±9.98*
				组合物2	10	30	62.94±9.93*
组合物3	10	30	74.69±10.16**

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验

动物连续给样30天后，每鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1ml，间隔30min，颈椎脱臼处死，固定于鼠板上，剪开腹壁皮肤，注射生理盐水2ml，转动鼠板1min，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37℃孵箱湿孵30min，用生理盐水漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸缓冲溶液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干，用油镜镜检，计算吞噬％和吞噬指数。

巨噬细胞吞噬试验

组别	动物数(只)	吞噬％	吞噬指数
				对照	10	11±1.5	0.17±0.03
组合物1	10	15±1.2*	0.27±0.02*
				组合物2	10	19±2.1*	0.33±0.03*
组合物3	10	26±2.1**	0.51±0.04**

结论：动物经口给予样品30天后，本发明提供的组合物能明显增加NK细胞活性、提高巨噬细胞吞噬能力以及体液免疫和细胞免疫活性，因此本发明提供的组合物具有增强免疫力功能。

综上，本发明提供的组合物负重游泳试验结果呈阳性，尿素氮和血乳酸试验结果呈阳性，本发明提供的组合物能明显增加NK细胞活性、提高巨噬细胞吞噬能力以及体液免疫和细胞免疫活性，根据保健食品功能学评价标准，本发明提供的组合物具有缓解体力疲劳及增强免疫力的作用。

实施例7

片剂

实施例2的组合物2(g)	8
		微晶纤维素	20
乳糖	60
		羧甲淀粉钠	3
微粉硅胶	2
		8％聚乙烯吡咯烷酮_k30水溶液(以固形物计)	4
硬脂酸镁	0.3

按以上配方并通过常规的压片工艺，得到含有本发明组合物的药物片剂。

实施例8

膳食添加剂

饮料

原辅料名称	重量(g)
		瓜拉纳提取物	0.12
白砂糖	5
		牛磺酸	0.88
L-赖氨酸盐酸盐	0.01
		L-异亮氨酸	0.008
L-亮氨酸	0.0025
		L-缬氨酸	0.005
L-天门冬氨酸	0.02
		L-色氨酸	0.0002
L-苯丙氨酸	0.0002
		L-苏氨酸	0.0002
L-蛋氨酸	0.0002
		甘氨酸	0.12
L-丙氨酸	0.12
		西洋参提取物(10％)	0.03
食用香精	0.1
		水	93.5837
总计	100

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims

1.一种具有缓解体力疲劳及增强免疫功能的组合物，其特征在于，所述的组合物中含有：

10-100重量份的瓜拉纳提取物，

100-800重量份的牛磺酸，

1-10重量份的L-赖氨酸盐酸盐，

1-10重量份的L-异亮氨酸，

0.1-5重量份的L-亮氨酸，

0.2-5重量份的L-缬氨酸，

1-15重量份的L-天门冬氨酸，

0.01-0.3重量份的L-色氨酸，

0.01-0.3重量份的L-苯丙氨酸，

0.01-0.3重量份的L-苏氨酸，

0.01-0.3重量份的L-蛋氨酸，

10-100重量份的L-丙氨酸，

10-100重量份的甘氨酸，

1-15重量份的茶多酚，和

1-20重量份的西洋参提取物。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，以所述瓜拉纳提取物的总重量计，其中含有咖啡因5-15w/w％。

3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述瓜拉纳提取物中含有咖啡因10-12w/w％。

4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，以所述西洋参提取物的总重量计，其中含有西洋参皂甙5-15w/w％。

5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述西洋参提取物中含有西洋参皂甙10-12w/w％。

6.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，以所述茶多酚的总重量计，其中含有表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)80w/w％以上。

7.一种如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

将10-100重量份的瓜拉纳提取物，100-800重量份的牛磺酸，1-10重量份的L-赖氨酸盐酸盐，1-10重量份的L-异亮氨酸，0.1-5重量份的L-亮氨酸，0.2-5重量份的L-缬氨酸，1-15重量份的L-天门冬氨酸，0.01-0.3重量份的L-色氨酸，0.01-0.3重量份的L-苯丙氨酸，0.01-0.3重量份的L-苏氨酸，0.01-0.3重量份的L-蛋氨酸，10-100重量份的L-丙氨酸，10-100重量份的甘氨酸，1-15重量份的茶多酚，和1-20重量份的西洋参提取物混合，得到如权利要求1所述的组合物。

8.一种如权利要求1-6任一所述的组合物的用途，其特征在于，用于制备缓解体力疲劳及增强免疫功能的药物。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的药物中含有如权利要求1-6任一所述的组合物和药学上可接受的载体。

10.一种如权利要求1-6任一所述的组合物的用途，其特征在于，用作或用于制备缓解体力疲劳及增强免疫功能的食物或膳食添加剂；所述的食品补充剂中含有如权利要求1-6任一所述的组合物和食品学上可接受的载体。