CN111184758A - 一种包括功劳木醇提取物和虫草素的组合物、制剂及其应用 - Google Patents

一种包括功劳木醇提取物和虫草素的组合物、制剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种组合物及其制备方法和应用，属于医药和保健技术领域，所述组合物包括功劳木醇提取物和虫草素；所述功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:(0.5～1.5)；所述组合物能抑制3T3‑L1前体脂肪细胞增殖，并且呈一定的时间、剂量依赖性。所述组合物能抑制脂肪细胞分化，抑制分化过程中脂滴的形成，具有显著的减肥降脂功效。

Description

一种包括功劳木醇提取物和虫草素的组合物、制剂及其应用
技术领域
本发明属于医药和保健技术领域，尤其涉及一种包括功劳木醇提取物和虫草素的组合物、制剂及其应用。
背景技术
肥胖和血脂异常是引起心脑血管疾病的重要危险因素，而高血脂是肥胖最直接和最典型的并发症之一。随着人们生活水平的提高，肥胖和超重人口快速上升，肥胖成为导致人类死亡的重大因素之一，全球每年至少280万成年人因肥胖相关疾病死亡。高血脂是肥胖最典型的并发症之一，全球每年1200～1600万人死于高血脂症引发的心血管疾病。因此，降脂减肥药物和保健品的研发在科学和民生层面均具有重大意义，开发潜力极大。
目前，市场上的减肥药如西布曲明虽然有效果，但是具有引起肝功能异常等副作用。
中药具有多途径、多靶点、广谱减肥降脂、副作用少、价格低廉等优点。功劳木(MAHONIAE CAULIS)为小檗科植物阔叶十大功劳Mahonia bealei(Fort.)Carr.或细叶十大功劳Mahonia fortunnei(Lindl.)Fedde的干燥茎。苦，寒；归肝、胃、大肠经；清热燥湿，泻火解毒；用于湿热泻痢，黄疸尿赤，目赤肿痛，胃火牙痛，疮疖痈肿；可外用。虫草素是腺苷类似物，是德国的Cunningham等从蛹虫草的培养滤液中分离发现的。虫草素的三大来源天然虫草、人工合成和生物发酵。虫草素具有多种生物活性，如抗菌、抗病毒、抗炎、免疫调节、抗肿瘤和抗衰老等。
目前，缺乏以功劳木和虫草素为主要原料的降脂减肥药物和保健品。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种包括功劳木和虫草素的组合物、制剂及其应用；所述组合物能够抑制前体脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞，还能够抑制前体脂肪细胞增殖；内服和外用所述组合物具有明显的减肥功效，且无明显毒副作用。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种组合物，包括功劳木醇提取物和虫草素；所述功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:(0.5～1.5)。
优选的，所述功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:1。
优选的，所述功劳木醇提取物为用体积分数为45％～55％的乙醇水溶液提取获得。
优选的，所述功劳木醇提取物的制备方法包括以下步骤：将所述功劳木与乙醇水溶液混合浸泡后，回流提取1～2h，收集提取液，干燥获得功劳木醇提取物。
优选的，所述功劳木与乙醇水溶液的体积比为1:(8～12)。
优选的，所述浸泡的时间为1～3h。
本发明提供了包括所述组合物的制剂，所述制剂的剂型包括液体制剂、膏状制剂和固体制剂。
本发明提供了所述组合物、所述的制剂在制备减肥的药品、保健品或化妆品中的应用。
本发明提供了所述组合物、所述的制剂在制备抑制前体脂肪细胞增殖的药品、保健品或化妆品中的应用。
本发明提供了所述组合物、所述的制剂在制备抑制脂肪细胞分化和抑制脂滴的形成的药品、保健品或化妆品中的应用。
本发明的有益效果：本发明提供的组合物包括功劳木醇提取物和虫草素；所述功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:(0.5～1.5)；所述组合物能抑制3T3-L1前体脂肪细胞增殖，并且呈一定的时间、剂量依赖性。所述组合物(简称MCE-C)能抑制脂肪细胞分化，抑制分化过程中脂滴的形成。功劳木醇提取物(简称MCE)能促进虫草素对3T3-L1前体脂肪细胞增殖、分化脂滴的形成的抑制作用。功劳木醇提取物与虫草素发挥协同增益作用，使得组合物具有显著的减肥作用。经试验证明，本发明提供的组合物内服和外用具有明显的减肥功效，且无明显毒副作用。
附图说明
图1为功劳木醇提取物的提取工艺流程图；
图2为功劳木对3T3-L1细胞抑制增殖时间依赖性分析；
图3为不同浓度功劳木醇提取物对3T3-L1细胞增殖的影响(48h)；
图4为功劳木醇提取物与虫草素联用对3T3-L1细胞增殖的影响(48h)。
图5为油红O染色脂滴显微镜图片，其中A为虫草素作用组；B为功劳木醇提取物作用组；C为虫草素和功劳木醇提取物联合作用组。
具体实施方式
本发明提供了一种组合物，包括功劳木醇提取物和虫草素；所述功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:(0.5～1.5)。
在本发明中，所述功劳木醇提取物和虫草素的质量比优选为1:1。在本发明，所述功劳木醇提取物优选为用体积分数为45％～55％的乙醇水溶液提取获得，更优选为用体积分数为50％的乙醇水溶液提取获得。在本发明中，所述功劳木醇提取物的制备方法包括以下步骤：将所述功劳木与乙醇水溶液混合浸泡后，回流提取1～2h，收集提取液，干燥获得功劳木醇提取物。在本发明中，所述功劳木在与乙醇水溶液混合前优选的进行粉碎，本发明对粉碎后功劳木的粒度没有特殊限定，常规粉碎即可。在本发明中，所述功劳木与乙醇的体积比优选为1:(8～12)，更优选为1:10；在本发明中，所述浸泡的时间优选为1～3h，更优选为2h；在本发明中，所述浸泡的温度优选为室温。在本发明中，所述浸泡结束后，进行回流提取，所述回流提取的时间优选为1.5h，所述回流提取的温度优选为100℃。本发明在所述回流提取后，收集提取液，优选的进行过滤；所述过滤优选的采用双层200目绢布进行。在本发明中，所述干燥前优选的还包括旋蒸浓缩的步骤，将过滤后的提取液进行旋蒸浓缩获得浓缩液；所述旋蒸浓缩的温度优选为60℃，所述旋蒸浓缩的时间优选为1～2h。在本发明中，所述干燥优选为真空干燥，本发明对所述真空干燥的具体参数没有特殊限定，采用常规的真空干燥参数即可。本发明对所述虫草素的来源没有特殊限定，采用本领域常规的虫草素来源即可。在本发明中，所述虫草素采用市售虫草素或者自制虫草素均可；所述自制虫草素优选的通过生物提取、液体发酵培养、固体培养基培养或者化学合成的方法制备获得。
本发明提供了包括所述组合物的制剂，所述制剂的剂型包括液体制剂、膏状制剂和固体制剂。在本发明中，所述制剂优选的还包括辅料，本繁忙对所述辅料的具体种类没有特殊限定，采用具体制剂剂型所需的辅料即可，在本发明具体实施过程中，所述辅料包括糊精、硬脂酸、单甘脂、棕榈酸异丙脂、防腐剂、乳化剂、甘油、丁二醇、丙二醇、三乙醇胺、玉米淀粉和麦芽糊精中的一种或多种。
在本发明中，所述包括组合物的制剂能够制备为口服片剂、口服液和固体饮料等口服药品或保健品也能够制备为膏霜、乳液、油膏、面膜、洗面乳、啫喱、水剂等化妆品。
本发明提供了所述组合物、所述的制剂在制备减肥的药品、保健品或化妆品中的应用。
本发明提供了所述组合物、所述的制剂在制备抑制前体脂肪细胞增殖的药品、保健品或化妆品中的应用。
本发明提供了所述组合物、所述的制剂在制备抑制脂肪细胞分化和抑制脂滴的形成的药品、保健品或化妆品中的应用。
在本发明中，所述组合物、所述的制剂能抑制3T3-L1前体脂肪细胞增殖，并且呈一定的时间、剂量依赖性，能抑制脂肪细胞分化，抑制分化过程中脂滴的形成。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
功劳木醇提取物的制备方法：
1.称取50g功劳木，粉碎、50目过筛，装入500mL圆底烧瓶，加入10倍体积的50％(体积分数)乙醇溶液室温(25℃)浸泡2h。
2.将圆底烧瓶置于加热套中，加热100℃并回流提取1.5h，收集提取液。
3.将提取液用双层200目绢布过滤，将过滤液倒入旋转蒸发仪中，60℃，旋蒸浓缩至膏状，收集浓缩液，置于4℃冰箱冷藏保存。
4.将浓缩液倒入合适容器中，进行真空干燥，100℃，1h，80℃，3h，得到干燥提取物为功劳木醇提取物，称重为2.12g，提取率为4.24％。
虫草素的来源：市售。降脂减肥组合物包括功劳木醇提取物和虫草素；功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:1。
实施例2
功劳木醇提取物的制备方法：
1.称取功劳木，粉碎、50目过筛，装入500mL圆底烧瓶，加入10倍体积的50％(体积分数)乙醇溶液室温(25℃)浸泡2h。
2.将圆底烧瓶置于加热套中，加热100℃并回流提取1.5h，收集提取液。
3.将提取液用双层200目绢布过滤，将过滤液倒入旋转蒸发仪中，60℃旋蒸浓缩至膏状，收集浓缩液，置于4℃冰箱冷藏保存。
4.将浓缩液倒入合适容器中，进行真空干燥，100℃，1h，80℃，3h，得到干燥提取物，收集干燥提取物为功劳木醇提取物。
虫草素的来源：市售。
降脂减肥组合物包括功劳木醇提取物和虫草素；功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:0.5。
实施例3
功劳木醇提取物的制备方法：
1.称取功劳木，粉碎、50目过筛，装入500mL圆底烧瓶，加入10倍体积的50％(体积分数)乙醇溶液室温(25℃)浸泡2h。
2.将圆底烧瓶置于加热套中，加热100℃并回流提取1.5h，收集提取液。
3.将提取液用双层200目绢布过滤，将过滤液倒入旋转蒸发仪中，60℃旋蒸浓缩至膏状，收集浓缩液，置于4℃冰箱冷藏保存。
4.将浓缩液倒入合适容器中，进行真空干燥，100℃，1h，80℃，3h，得到干燥提取物，收集干燥提取物为功劳木醇提取物。
虫草素的来源：市售。
降脂减肥组合物包括功劳木醇提取物和虫草素；功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:1.5。
实施例4
功劳木醇提取物以及组合物对前体脂肪细胞增殖的影响
方法：
MEM培养基中添加10％胎牛血清、1％双抗构成完全培养基。小鼠3T3-L1前脂肪细胞(购自ATCC)用完全培养基放置于37℃、5％CO2饱和湿度培养箱内培养，根据细胞生长状态，每2～3d换液1次。培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞，分别添加不同剂量的功劳木醇提取物、虫草素、功劳木醇提取物和虫草素组合物处理24h、48h、72h，用MTT法检测细胞增殖。将处于对数生长期的细胞以5×104个/mL的密度接种于96孔板中，每孔100μL。培养24h后换成含0、125、250、500和1000μg/mL功劳木醇提取物、虫草素、功劳木醇提取物和虫草素组合物完全培养基并设置空白调零孔，每组平行6个复孔，分别在药物干预24h、48h、72h后，用MTT法染色，酶标仪在570nm波长下测定吸光度(A)，用空白孔调零，并按下列公式计算MCE对3T3-L1细胞增殖的抑制率。抑制率％＝(1-实验组A570/对照组A570)×100。
试验结果
使用不同浓度的MCE处理3T3-L1前脂肪细胞24h、48h、72h后，随着时间的增加，MCE对细胞增殖的抑制率升高，以MCE浓度为500μg/mL为例，24h抑制率为4.57％；48h抑制率为77.13％；72h抑制率为90.32％(图2)。相同时间内，随着MCE浓度的增加，抑制率也成上升趋势，以48h为例，浓度为125、250、500和1000μg/mL的MCE对3T3-L1前脂肪细胞的抑制率分别为2.59％、57.58％、77.13％和83.06％(图3)。以250μg/mL为例，虫草素在浓度为250μg/mL对3T3-L1前脂肪细胞的抑制率为9.98％，功劳木在浓度为250μg/mL对3T3-L1前脂肪细胞的抑制率为57.58％，虫草素(浓度为250μg/mL)和功劳木(浓度为250μg/mL)联用对3T3-L1前脂肪细胞的抑制率为83.06％(图4)。
功劳木醇提取物以及组合物对前体脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞
方法：
将处于对数生长期的细胞以1×105个/mL的密度接种于96孔板中，每孔100μL。48h，换用含0.5mmol/LIBMX、1μmol/L地塞米松、10mg/L胰岛素，分别添加250μg/mL功劳木醇提取物、250μg/mL虫草素、250μg/mL功劳木醇提取物和250μg/mL虫草素组合物(1:1)的培养基诱导分化48h，然后换用含10mg/L胰岛素的培养基培养48h，最后换用完全培养基继续培养，每2d换液1次，培养第4天细胞分化为成熟脂肪细胞后用油红O进行染色。倒置显微镜下观察脂滴形成情况并拍照。
实验结果：
如图5所示，功劳木醇提取物MCE、虫草素、功劳木醇提取物MCE和虫草素联用均能能够抑制脂肪细胞脂滴的形成。MCE和虫草素联用，起到增益的作用，更能减少油红O染色脂滴，抑制前体脂肪细胞转化为脂肪细胞。
实施例5
安全性评价-急性经口毒性试验
1.动物分组
SPF级昆明小鼠，4-5周龄，体重19-21g。
对照组：小鼠10只，雌雄各半。
药物组：小鼠每组10只，雌雄各半。可设不同浓度药物组。
2.给药方式
1)药物的配制：水配制成不同浓度的药液。
2)小鼠禁食不禁水12h。按体重和性别随机分组。一次性灌胃给药，给药剂量为功劳木提取物1000mg/kg；虫草素500mg/kg；功劳木和虫草素组合物(1:0.5)25mg/kg；给药体积0.4mL/10g。
3)急性毒性给药：一次性灌胃给药。给药后14日内观察动物的急性毒性反应及死亡情况。
实验结果：
14天内小鼠存活状态正常，小鼠毛发，运动行为，角弓，排泄物，体重，均正常。
未发现有中毒反应。
无死亡小鼠出现。
实施例6
安全性评价-外用毒性试验
将实施例1制备得到的组合物(1:1)，研磨至细粉，过100目筛，取组合物细粉2份，用凡士林1份调为乳膏，分别涂于裸鼠四肢、背部和腹部，一日三次，用药一周。
实验结果：
7天内小鼠存活状态正常，未发现有不良反应，未发现有过敏反应。无死亡小鼠出现。
实施例7
体内降脂减肥实验
将实施例2制备得到的功劳木提取物和虫草素组合物(1:0.5)，饲喂大鼠，具体步骤如下：
SD大鼠18只，雄性，清洁级，体重180～200g，购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，实验动物使用许可证号：SCXK2015－0001。试验使用的饲料为60％高脂饲料。将18只试验动物随机分为3组，每组6只，正常对照组给予基础饲料，模型组给予高脂饲料，产品组除饲喂高脂饲料外需每天分别灌胃实施例2液体制剂(所含虫草素、功劳木提取物含量分别换算为200mg/kg和100mg/kg)。饲养30d以后，禁食12h后，称重，断尾取血，血液常温放置2h，3000r/min离心30min后收集血清，使用血脂检测试剂盒检测总胆固醇CHO、三酰甘油TG、低密度脂蛋白LDL、高密度脂蛋白HDL4项血脂指标，并将大鼠麻醉处死后，取腹腔内的白色脂肪称重，并计算脂肪系数。计算脂肪系数(体脂重量/终体重)。
实验结果：
1.降低体重
饲喂高脂饲料30天后，大鼠的平均体重为462克/只，正常饲料组大鼠的平均体重为355克/只，饲喂高脂饲料和组合物组的大鼠平均体重为365克/只(表1)。可见，功劳木提取物和虫草素组合物能显著降低高脂饮食大鼠的体重。
2.调节血脂
该组合物能降低TC、TG和LDL水平(表1)，并能降低脂肪系数，具有显著降脂减肥效果。
表1功劳木提取物和虫草素组合物对大鼠的体重和血脂调节作用
检测项目 正常组 高脂模型组 组合物高脂组
TC均值mmol/L 1.902 3.321 2.352
TG均值mmol/L 0.651 0.933 0.702
LDL均值mmol/L 1.23 3.67 1.45
HDL均值mmol/L 3.67 1.55 2.54
终体重g 355 462 365
脂肪系数 3.71 5.84 4.01
实施例8
降脂减肥保健饮品：由下述重量份的原料制得：功劳木醇提取物10份、虫草素10份，糊精60份。
制备方法：功劳木醇提取物的提取方法参见实施例1，功劳木醇提取物MCE 10份，虫草素10份，糊精60份，喷雾干燥，热风进口温度在85-95℃，低温干燥，即得到固体保健饮品。
实施例9
减肥膏：功劳木醇提取物与虫草素质量比为1:1。
制备方法：硬脂酸6份、单甘脂2份、棕榈酸异丙脂7份、防腐剂1份、乳化剂1份，加热70℃溶解，功劳木醇提取物与虫草素组合物2份、甘油10份，在70℃条件下混合，搅拌均匀，灭菌、脱气、包装制成MCE-C减肥膏。
实施例10
精华液组成：功劳木醇提取物、虫草素、丁二醇、丙二醇、三乙醇胺。
制备方法：功劳木醇提取物5份、虫草素5份、丁二醇4份、丙二醇1份、三乙醇胺0.1份和水85份。精华液安全无刺激，瘦脸、补水美白效果显著。
实施例11
压片糖果组成：功劳木醇提取物、虫草素、玉米淀粉、麦芽糊精。
制备方法：功劳木醇提取物5份、虫草素5份、玉米淀粉3、麦芽糊精4、硬脂酸镁1份，搅拌均匀，压片，包装。
由上述实施例可知，本发明提供的组合物MCE-C能抑制前体脂肪细胞增殖、抑制脂肪细胞分化，抑制分化过程中脂滴的形成。具有显著的降脂减肥作用。经试验证明，本发明提供的组合物内服和外用皆安全，无明显毒副作用；动物实验表明该组合物能降低高脂饮食大鼠的体重，并能调节血脂，具有明显的降脂减肥功效。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种包括功劳木醇提取物和虫草素的组合物，其特征在于，所述功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:(0.5～1.5)。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述功劳木醇提取物和虫草素的质量比为1:1。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述功劳木醇提取物为用体积分数为45％～55％的乙醇水溶液提取获得。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述功劳木醇提取物的制备方法包括以下步骤：将所述功劳木与乙醇水溶液混合浸泡后，回流提取1～2h，收集提取液，干燥获得功劳木醇提取物。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述功劳木与乙醇水溶液的体积比为1:(8～12)。
6.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述浸泡的时间为1～3h。
7.包括权利要求1～6任意一项所述组合物的制剂，其特征在于，所述制剂的剂型包括液体制剂、膏状制剂和固体制剂。
8.根据权利要求1～6任意一项所述组合物、权利要求7所述的制剂在制备减肥的药品或保健品中的应用。
9.根据权利要求1～6任意一项所述组合物、权利要求7所述的制剂在制备抑制前体脂肪细胞增殖的药品或保健品中的应用。
10.根据权利要求1～6任意一项所述组合物、权利要求7所述的制剂在制备抑制脂肪细胞分化和抑制脂滴的形成的药品或保健品中的应用。
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