CN113413419A - 含大枣外泌体的卵巢保养的组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物医药领域。具体地，本发明涉及含大枣外泌体的卵巢保养的组合物及其制备方法。本发明提供含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，所述组合物包含大枣外泌体、苦瓜外泌体、酸枣仁外泌体、功效原料和辅料。本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物具有很好的保养卵巢、提高卵巢功能、改善内分泌水平的效果。

Description

含大枣外泌体的卵巢保养的组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医药领域。具体地，本发明涉及含大枣外泌体的卵巢保养的组合物及其制备方法。
背景技术
卵巢是女性重要的内分泌腺体之一，其主要功能是分泌女性激素和产生卵子。近年来，随着女性社会压力的不断加大，心理、睡眠、不良的生活方式以及环境污染等多种因素影响，卵巢早衰的发病率正在逐年升高。女性不孕多与卵巢有关，一旦卵巢早衰或功能低下，就会导致人体各个部位快速衰老。卵巢功能低下有一个发生和发展的过程，开始激素水平可能是正常的，卵泡刺激素(FSH)刚开始也可能是正常的，后来逐渐出现异常。卵巢的疾病主要在月经期体现出来，常表现为月经不正常，不正常月经有着许多不同的呈现方式，如经期提前、经期延后、经血量过多、经血量稀少、经期不规则等。
不过，卵巢功能不良不是不可逆的，只要不到衰竭的程度，是可以通过积极治疗明显改善临床症状的。目前，治疗卵巢早衰主要是通过激素治疗，患者常需要少量的雌激素，或雌、孕激素周期治疗。然而激素治疗虽然可在表面上消除更年期综合症，但是停药后多数人易复发，而且激素的副作用也同样给患者身心带来很大的负担。此外，还有通过药物调节内分泌进行治疗，从而达到改善症状的效果。然而是药三分毒，尤其是一些中药材，长期服用会使身体脏器负荷重，影响身体代谢。
在古代医学很早就提出“未病先防、即病防变”，近年来，药食同源原料逐步兴起，大量研究资料表明，补充滋阴补肾、补血、补阳、疏肝、健脾、和胃的药食同源中药成分，可有效保护和改善女性卵巢早衰、改善卵巢储备功能下降、卵巢低反应等，采用女性温和补肾的众多有益成分，发挥滋补肝肾、补肾填精、滋阴润肺、养气补血、生津止渴等作用，起到增加卵巢反应性，保护和改善卵巢功能，促进卵泡发育的作用，对卵巢储备功能下降、卵巢低反应、卵巢早衰等人群均可获益。
因此，开发一种创新的药食同源组合物，将其应用于预防和改善卵巢疾病的产品中，具有重要的意义和广阔的市场前景。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：
第一方面，本发明提供一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，所述组合物包含大枣外泌体、苦瓜外泌体、酸枣仁外泌体、功效原料和辅料。
在优选的实施方式中，所述大枣外泌体为大枣外泌体冻干粉。
在优选的实施方式中，所述苦瓜外泌体为苦瓜外泌体冻干粉。
在优选的实施方式中，所述酸枣仁外泌体为酸枣仁外泌体冻干粉。
在优选的实施方式中，所述功效原料选自山楂粉、荷叶粉、黑木耳粉、冬瓜籽粉和大豆蛋白粉中的一种或多种。
在优选的实施方式中，所述辅料选自木糖醇、乳糖、D-甘露糖醇、硬脂酸镁、薄膜包衣剂和麦芽糊精中的一种或多种。
第二方面，提供一种含大枣外泌体的卵巢保养的产品，所述产品包含本发明所述的组合物。
第三方面，提供大枣外泌体在卵巢保养中的用途。
在优选的实施方式中，所述大枣外泌体为大枣外泌体冻干粉。
第四方面，提供含大枣外泌体的组合物在卵巢保养中的用途。
在优选的实施方式中，所述大枣外泌体为大枣外泌体冻干粉。
第五方面，提供大枣外泌体在制备卵巢保养的产品中的用途。
在优选的实施方式中，所述大枣外泌体为大枣外泌体冻干粉。
第六方面，提供包含大枣外泌体的组合物在制备卵巢保养的产品中的用途。
在优选的实施方式中，所述大枣外泌体为大枣外泌体冻干粉。
在优选的实施方式中，所述大枣外泌体冻干粉的重量份数为3-15。
第七方面，提供一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法，所述方法包含以下步骤：
S1.将大枣外泌体、苦瓜外泌体、酸枣仁外泌体、功效原料和辅料加入混合机中混合10-20min，得到原料混合物；
S2.向原料混合物中加入85-95％乙醇混合，然后过10-30目筛网，得到湿颗粒；
S3.将湿颗粒置于40-80℃烘箱中1-5h，得到干燥颗粒，然后过10-20目筛网，得到整粒；
S4.在整粒外加硬脂酸镁，总混25-35min。
第八方面，提供另一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法，所述方法包含以下步骤：
S1.将大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉、功效原料和辅料加入混合机中混合10-20min，得到原料混合物；
S2.向原料混合物中加入85-95％乙醇混合，然后过10-30目筛网，得到湿颗粒；
S3.将湿颗粒置于40-80℃烘箱中1-5h，得到干燥颗粒，然后过10-20目筛网，得到整粒；
S4.在整粒外加硬脂酸镁，总混25-35min。
第九方面，本发明提供一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，所述组合物包含大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉、山楂粉、荷叶粉、黑木耳粉、冬瓜籽粉、大豆蛋白粉、木糖醇、乳糖、D-甘露糖醇、硬脂酸镁、薄膜包衣剂、麦芽糊精。
在优选的实施方式中，所述薄膜包衣剂选自聚乙烯醇和/或蜂蜡。
第十方面，本发明提供植物外泌体冻干粉的制备方法，所述方法包含以下步骤：
S1.将200-250mL灭菌PBS加入200-250g新鲜植物中，使用破碎机破碎15min，得到植物匀浆；
S2.将步骤S1中得到的植物匀浆于4℃，4500×g离心20min，去除较大残渣，此时溶液分为三层，上层为较轻的残渣，中间层为具有各植物颜色的透明溶液，下层为少量沉淀；
S3.将步骤S2中得到的中间层液体于4℃，10000×g离心60min，保留上层液体，即得到植物外泌体提取液；
S4.将步骤S3得到的植物外泌体提取液，与甘露醇复配，形成均一溶液，并将溶液注入模具中，预冻0.5-3h，然后转入冻干机中，在0.01-10mbar，-50℃-4℃的条件下冷冻干燥5-10h，即得到植物外泌体冻干粉。
在优选的实施方式中，所述植物外泌体冻干粉为大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉。
第十一方面，本发明提供一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，按照重量份数，所述组合物包含3-15份大枣外泌体冻干粉、2-15份苦瓜外泌体冻干粉、1-12份酸枣仁外泌体冻干粉、1-10份山楂粉、0.1-5份荷叶粉、0.1-5份黑木耳粉、0.1-5份冬瓜籽粉、0.5-10份大豆蛋白粉、2-12份木糖醇、5-15份乳糖、2-10份D-甘露糖醇、0.1-1份硬脂酸镁、0.1-1份聚乙烯醇、5-15份麦芽糊精。
第十二方面，本发明提供一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，按照重量份数，所述组合物包含5份大枣外泌体冻干粉、8份苦瓜外泌体冻干粉、6份酸枣仁外泌体冻干粉、5份山楂粉、1份荷叶粉、1份黑木耳粉、1份冬瓜籽粉、5份大豆蛋白粉、10份木糖醇、7份乳糖、6份D-甘露糖醇、0.5份硬脂酸镁、0.5份聚乙烯醇、6份麦芽糊精。
本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的服用方法为：每日1-2次，每次2片，饭后半小时服用。
在本发明中，大枣外泌体：枣，蔷薇目鼠李科枣属植物，被列为“五果”(栗、桃、李、杏、枣)之一。大枣可以补中益气，养血安神，可以治疗贫血，湿盛有热者慎用。枣富含蛋白质、脂肪、糖类、胡萝卜素、B族维生素、维生素C、维生素P以及钙、磷、铁和环磷酸腺苷等营养成分。其中维生素C的含量在果品中名列前茅，有维生素王之美称，具有养颜治疗失眠之功效。大枣所含有的环磷酸腺苷，是人体细胞能量代谢的必需成分，能够增强肌力、消除疲劳、扩张血管、增加收缩力、改善心肌营养。可用于治疗脾虚食少，乏力便溏，妇人脏躁等症。
苦瓜外泌体：苦瓜，葫芦科苦瓜属植物，苦瓜性味甘苦寒凉，能清热、除烦、止渴。苦瓜能够增强皮肤活力，使皮肤变得细腻健美，具有养颜嫩肤的作用；苦瓜粗提取物含类似胰岛素物质，有明显的降血糖作用；富含维生素C，是超强的抗氧化剂，预防坏血病、防止动脉粥样硬化，保护心脏；减少脂肪堆积、滋润干燥皮肤、美白和保湿作用。
酸枣仁外泌体：酸枣仁，《本草纲目》将其列为上品。甘、酸，平。归肝、胆、心经，具有养心补肝、宁心安神、敛汗生津的功效。用于治疗虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴等证。现代研究表明，酸枣仁具有镇静催眠、镇痛、抗惊厥、降血脂、抗血小板聚集、增强免疫、降血压、抗缺氧、抗心肌缺血、抗心率失常、抗衰老、抗辐射等作用。
山楂粉：山楂是中国特有的药果兼用树种，主要含有山楂酸、柠檬酸、脂肪分解酸、维生素C、黄酮、碳水化合物等成分，具有扩张血管、改善微循环、降血脂、降血压、强心、抗心律不齐等作用，同时也是健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药，对胸膈脾满、疝气、血淤、闭经等症有很好的疗效。山楂内的黄酮类化合物牡荆素，是一种抗癌作用较强的药物，其提取物对抑制体内癌细胞生长、增殖和浸润转移均有一定的作用。
荷叶粉：苦，平，归肝、脾、胃经。清暑化湿，升发清阳，凉血止血。用于暑热烦渴、暑湿泄泻、脾虚泄泻、血热吐痰、便血崩漏。荷叶中富含荷叶黄酮，具有减肥降脂、抗氧化、抗惊厥、保肝等作用。
黑木耳粉：黑木耳，性味甘平，具有清肺润肠、滋阴补血、活血化瘀、明目养胃等功效。能用于治疗崩漏、痔疮、血痢、贫血及便秘等症状。同时它所含有的发酵素和植物碱可促进消化道和泌尿道腺体分泌，并协同分泌物催化结石，对胆结石、肾结石等有明显的化解作用。关于黑木耳的现代药用研究，最先发现它有显著抑制血小板凝聚的作用，从而引起世人关注。主治女子漏下赤白、血病腹内结块、肿痛，还可以治愈鼻出血、肠风泻血，利五脏，宜肠胃气，排毒气。黑木耳干品中蛋白质、维生素和铁的含量很高，其蛋白质中含有多种氨基酸，尤以赖氨酸和亮氨酸的含量最为丰富。
冬瓜籽粉：冬瓜籽的药用价值很高，有清肺去痰之功，无副作用。冬瓜籽所含有的植物油中的亚油酸等物质，是润泽皮肤的美容剂。不饱和脂肪酸可以使容颜红润光泽，皮肤细嫩柔润，头发乌黑光亮。所以冬瓜籽具有相当高的美容价值。现代营养研究发现，冬瓜籽含皂甙0.68％，尿素、尿素分解酶、脂肪油、瓜氨酸、组氨酸、蛇麻脂醇，甘露醇，β-谷甾醇等成分，尤其以维生素B1含量相当丰富。这些成分可以有效地降低血液中脂肪和胆固醇含量，对防治心血管疾病有积极意义。
大豆蛋白粉：大豆中含有丰富的大豆异黄酮。异黄酮主要有大豆苷元、染料木素、黄豆黄素3类，及葡萄糖苷、乙酰葡萄糖苷、丙二酰葡萄糖苷。各种大豆中异黄酮类的含量为1200-4216μg/g，以葡萄糖苷和丙二酰葡萄糖苷为主，含量分别为207-1698μg/g和999-2518μg/g。大豆异黄酮是一种植物化学素，属植物黄酮类，主要来源于豆科植物的荚豆类，大豆中的含量较高，为0.1％-0.5％。由于是从植物中提取，与雌激素有相似结构，因此大豆异黄酮又称植物雌激素。大豆异黄酮的雌激素作用影响到激素分泌、代谢生物学活性、蛋白质合成、生长因子活性，是天然的癌症化学预防剂。大豆异黄酮可弥补卵巢早衰女性荷尔蒙分泌不足的缺陷，提高卵巢功能。
木糖醇：人体糖类代谢的中间体，在体内缺少胰岛素影响糖代谢情况下，无须胰岛素促进，木糖醇也能透过细胞膜，被组织吸收利用，促进肝糖原合成，供细胞以营养和能量，且不会引起血糖值升高，消除糖尿病人服用后的三多症状(多食、多饮、多尿)，是最适合糖尿病患者食用的营养性的食糖代替品。木糖醇也可以用于减肥产品中，为人体提供能量，合成糖元，减少脂肪和肝组织中的蛋白质的消耗，使肝脏受到保护和修复，减少人体内有害酮体的产生，不会因食用而为发胖忧虑，与普通的白砂糖相比，具有热量低的优势-每克木糖醇仅含有2.4卡路里热量，比其他大多数碳水化合物的热量少40％，因而木糖醇可被应用于各种减肥食品中，作为高热量白糖的代用品。
乳糖：除供给人体能源外，乳糖还具有与其它糖类所不同的生理意义。乳糖在人体胃中不被消化吸收，可直达肠道。在人体肠道内乳糖易被乳糖酶分解成葡萄糖和半乳糖，以被吸收。半乳糖是构成脑及神经组织的糖脂质的一种成分，对婴儿的智力发育十分重要，它能促进脑苷和黏多糖类的生成。乳糖能促进人体肠道内某些乳酸菌的生成，能抑制腐败菌的生长，有助于肠的蠕动作用。
相对于现有技术，本发明的有益效果在于：
本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物中使用的特定的功效原料可通过补充植物雌激素，刺激卵泡发育来直接作用卵巢功能。雌激素血浓度的高低可促进或抑制促性腺激素的释放，从而间接影响卵巢功能，可弥补卵巢早衰女性荷尔蒙分泌不足的缺陷，提高卵巢功能。同时可通过补充黄酮类物质，通过清除卵巢中自由基延缓卵巢衰老进而达到卵巢保养的作用，黄酮还具有诱导肿瘤细胞凋亡，对多囊卵巢囊肿有抵御作用。此外，黑木耳中高含量的蛋白质、维生素、铁和冬瓜籽中高含量的亚油酸等物质，可主治女子漏下赤白、血病腹内结块、改善贫血、润泽皮肤。
本发明使用的特定的功效原料与本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物中使用的大枣外泌体、苦瓜外泌体、酸枣仁外泌体复配后可通过调节雌激素、清除衰老细胞、刺激新细胞再生、清除卵巢自由基、增强免疫力等改善女性卵巢功能，此外还可达到美容养颜效果。具体的，大枣外泌体冻干粉中高含量高浓度的环磷酸腺苷可调节和刺激人体的新陈代谢，卵巢中老死细胞很快被消除，促使新细胞迅速生成，并能增强骨髓造血功能，增强血液中红细胞的含量；大枣外泌体中含丰富的糖类物质(葡萄糖、果糖、蔗糖等)和维生素(维生素C、胡萝卜素、和磺酸等)，具有较强的补养作用，可改善卵巢功能衰退带来的气色差现象，同时这些物质能提高人体免疫功能，增强抗病能力，抵抗卵巢的病变，进而实现预防或改善卵巢问题的作用。具体的，苦瓜外泌体冻干粉中苦瓜苷可与体内多余的酸性物质结合，减少酸性物质对卵巢带来的刺激，还具有改善卵巢细胞活性的作用，对卵巢的恢复有重大作用。具体的，酸枣仁外泌体冻干粉中高纯度酸枣仁皂苷A增加γ-氨基丁酸受体的表达，进而通过补充受体，起到促进入睡的作用，好的睡眠质量可间接起到延缓或改善细胞衰老、改善气色作用。
同时，本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，其携带和服用方便、解决了药食同源口感不好的问题。
本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法，工艺简单、耗能低，在制备过程中，未涉及加热等易破坏有效成分的工艺，有效的保护了功效成分和营养成分；同时也未涉及提取等易残留溶剂的工艺，安全可行。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚的呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
实施例1
本实施例提供一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，按照重量份数，所述组合物包含3份大枣外泌体冻干粉、2份苦瓜外泌体冻干粉、1份酸枣仁外泌体冻干粉、1份山楂粉、0.1份荷叶粉、0.1份黑木耳粉、0.1份冬瓜籽粉、0.5份大豆蛋白粉、2份木糖醇、5份乳糖、2份D-甘露糖醇、0.1份硬脂酸镁、0.1份聚乙烯醇、5份麦芽糊精。
本实施例提供植物外泌体冻干粉的制备方法，所述方法包含以下步骤：
S1.将200mL灭菌PBS加入200g新鲜植物中，使用破碎机破碎15min，得到植物匀浆；
S2.将步骤S1中得到的植物匀浆于4℃，4500×g离心20min，去除较大残渣，此时溶液分为三层，上层为较轻的残渣，中间层为具有各植物颜色的透明溶液，下层为少量沉淀；
S3.将步骤S2中得到的中间层液体于4℃，10000×g离心60min，保留上层液体，即得到植物外泌体提取液；
S4.将步骤S3得到的植物外泌体提取液，与甘露醇复配，形成均一溶液，并将溶液注入模具中，预冻1h，然后转入冻干机中，在5mbar，-30℃的条件下冷冻干燥6h，即得到植物外泌体冻干粉；
其中，所述植物外泌体冻干粉为大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉。
本实施例含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法包含以下步骤：
S1.将大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉、山楂粉、荷叶粉、黑木耳粉、冬瓜籽粉、大豆蛋白粉、木糖醇、乳糖、D-甘露糖醇、硬脂酸镁、聚乙烯醇和麦芽糊精加入混合机中混合15min，得到原料混合物；
S2.向原料混合物中加入95％乙醇混合，然后过10目筛网，得到湿颗粒；
S3.将湿颗粒置于50℃烘箱中3h，得到干燥颗粒，然后过10目筛网，得到整粒；
S4.在整粒外加硬脂酸镁，总混30min；
S5.进行压片；
S6.将聚乙烯醇用80％乙醇溶解后，对压片进行包衣；
S7.对包衣好的压片进行装瓶。
实施例2
本实施例提供一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，按照重量份数，所述组合物包含15份大枣外泌体冻干粉、15份苦瓜外泌体冻干粉、12份酸枣仁外泌体冻干粉、10份山楂粉、5份荷叶粉、5份黑木耳粉、5份冬瓜籽粉、10份大豆蛋白粉、12份木糖醇、15份乳糖、10份D-甘露糖醇、1份硬脂酸镁、1份聚乙烯醇、15份麦芽糊精。
本实施例提供植物外泌体冻干粉的制备方法，所述方法包含以下步骤：
S1.将200mL灭菌PBS加入200g新鲜植物中，使用破碎机破碎15min，得到植物匀浆；
S2.将步骤S1中得到的植物匀浆于4℃，4500×g离心20min，去除较大残渣，此时溶液分为三层，上层为较轻的残渣，中间层为具有各植物颜色的透明溶液，下层为少量沉淀；
S3.将步骤S2中得到的中间层液体于4℃，10000×g离心60min，保留上层液体，即得到植物外泌体提取液；
S4.将步骤S3得到的植物外泌体提取液，与甘露醇复配，形成均一溶液，并将溶液注入模具中，预冻1h，然后转入冻干机中，在5mbar，-30℃的条件下冷冻干燥6h，即得到植物外泌体冻干粉；
其中，所述植物外泌体冻干粉为大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉。
本实施例含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法包含以下步骤：
S1.将大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉、山楂粉、荷叶粉、黑木耳粉、冬瓜籽粉、大豆蛋白粉、木糖醇、乳糖、D-甘露糖醇、硬脂酸镁、聚乙烯醇和麦芽糊精加入混合机中混合15min，得到原料混合物；
S2.向原料混合物中加入95％乙醇混合，然后过10目筛网，得到湿颗粒；
S3.将湿颗粒置于50℃烘箱中3h，得到干燥颗粒，然后过10目筛网，得到整粒；
S4.在整粒外加硬脂酸镁，总混30min；
S5.进行压片；
S6.将聚乙烯醇用80％乙醇溶解后，对压片进行包衣；
S7.对包衣好的压片进行装瓶。
实施例3
本实施例提供一种含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，按照重量份数，所述组合物包含5份大枣外泌体冻干粉、8份苦瓜外泌体冻干粉、6份酸枣仁外泌体冻干粉、5份山楂粉、1份荷叶粉、1份黑木耳粉、1份冬瓜籽粉、5份大豆蛋白粉、10份木糖醇、7份乳糖、6份D-甘露糖醇、0.5份硬脂酸镁、0.5份聚乙烯醇、6份麦芽糊精。
本实施例提供植物外泌体冻干粉的制备方法，所述方法包含以下步骤：
S1.将200mL灭菌PBS加入200g新鲜植物中，使用破碎机破碎15min，得到植物匀浆；
S2.将步骤S1中得到的植物匀浆于4℃，4500×g离心20min，去除较大残渣，此时溶液分为三层，上层为较轻的残渣，中间层为具有各植物颜色的透明溶液，下层为少量沉淀；
S3.将步骤S2中得到的中间层液体于4℃，10000×g离心60min，保留上层液体，即得到植物外泌体提取液；
S4.将步骤S3得到的植物外泌体提取液，与甘露醇复配，形成均一溶液，并将溶液注入模具中，预冻1h，然后转入冻干机中，在5mbar，-30℃的条件下冷冻干燥6h，即得到植物外泌体冻干粉；
其中，所述植物外泌体冻干粉为大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉。
本实施例含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法包含以下步骤：
S1.将大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉、山楂粉、荷叶粉、黑木耳粉、冬瓜籽粉、大豆蛋白粉、木糖醇、乳糖、D-甘露糖醇、硬脂酸镁、聚乙烯醇和麦芽糊精加入混合机中混合15min，得到原料混合物；
S2.向原料混合物中加入95％乙醇混合，然后过10目筛网，得到湿颗粒；
S3.将湿颗粒置于50℃烘箱中3h，得到干燥颗粒，然后过10目筛网，得到整粒；
S4.在整粒外加硬脂酸镁，总混30min；
S5.进行压片；
S6.将聚乙烯醇用80％乙醇溶解后，对压片进行包衣；
S7.对包衣好的压片进行装瓶。
对比例1
为了进一步说明本发明的有益效果，提供对比例1，和实施例3相比，该对比例1的区别在于：未添加苦瓜外泌体冻干粉。
该对比例含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法包含以下步骤：
S1.将大枣外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉、山楂粉、荷叶粉、黑木耳粉、冬瓜籽粉、大豆蛋白粉、木糖醇、乳糖、D-甘露糖醇、硬脂酸镁、聚乙烯醇和麦芽糊精加入混合机中混合15min，得到原料混合物；
S2.向原料混合物中加入95％乙醇混合，然后过10目筛网，得到湿颗粒；
S3.将湿颗粒置于50℃烘箱中3h，得到干燥颗粒，然后过10目筛网，得到整粒；
S4.在整粒外加硬脂酸镁，总混30min；
S5.进行压片；
S6.将聚乙烯醇用80％乙醇溶解后，对压片进行包衣；
S7.对包衣好的压片进行装瓶。
对比例2
为了进一步说明本发明的有益效果，提供对比例2，和实施例3相比，该对比例2的区别在于：未添加酸枣仁外泌体冻干粉。
该对比例含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法包含以下步骤：
S1.将大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、山楂粉、荷叶粉、黑木耳粉、冬瓜籽粉、大豆蛋白粉、木糖醇、乳糖、D-甘露糖醇、硬脂酸镁、聚乙烯醇和麦芽糊精加入混合机中混合15min，得到原料混合物；
S2.向原料混合物中加入95％乙醇混合，然后过10目筛网，得到湿颗粒；
S3.将湿颗粒置于50℃烘箱中3h，得到干燥颗粒，然后过10目筛网，得到整粒；
S4.在整粒外加硬脂酸镁，总混30min；
S5.进行压片；
S6.将聚乙烯醇用80％乙醇溶解后，对压片进行包衣；
S7.对包衣好的压片进行装瓶。
对比例3
为了进一步说明本发明的有益效果，提供对比例3，和实施例3相比，该对比例3的区别在于：未添加大豆蛋白粉。
该对比例含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法包含以下步骤：
S1.将大枣外泌体冻干粉、苦瓜外泌体冻干粉、酸枣仁外泌体冻干粉、山楂粉、荷叶粉、黑木耳粉、冬瓜籽粉、木糖醇、乳糖、D-甘露糖醇、硬脂酸镁、聚乙烯醇和麦芽糊精加入混合机中混合15min，得到原料混合物；
S2.向原料混合物中加入95％乙醇混合，然后过10目筛网，得到湿颗粒；
S3.将湿颗粒置于50℃烘箱中3h，得到干燥颗粒，然后过10目筛网，得到整粒；
S4.在整粒外加硬脂酸镁，总混30min；
S5.进行压片；
S6.将聚乙烯醇用80％乙醇溶解后，对压片进行包衣；
S7.对包衣好的压片进行装瓶。
对比例4
为了进一步说明本发明的有益效果，提供对比例4，和实施例3相比，该对比例4的区别在于：将本发明的大枣外泌体冻干粉的重量份数调整为1份。
对比例5
为了进一步说明本发明的有益效果，提供对比例5，和实施例3相比，该对比例5的区别在于：将本发明的大枣外泌体冻干粉的重量份数调整为17份。
对比例6
为了进一步说明本发明的有益效果，提供对比例6，和实施例3相比，该对比例6的区别在于：将本发明的苦瓜外泌体冻干粉的重量份数调整为1份。
对比例7
为了进一步说明本发明的有益效果，提供对比例7，和实施例3相比，该对比例7的区别在于：将本发明的苦瓜外泌体冻干粉的重量份数调整为17份。
对比例8
为了进一步说明本发明的有益效果，提供对比例8，和实施例3相比，该对比例8的区别在于：将本发明的大豆蛋白粉的重量份数调整为0.2份。
对比例9
为了进一步说明本发明的有益效果，提供对比例9，和实施例3相比，该对比例9的区别在于：将本发明的大豆蛋白粉的重量份数调整为12份。
实验1：安全性验证
受试样品：实施例1-3制备得到的样品
实验方法：
筛选雌、雄小鼠各10只，雌雄分笼饲养，体重18-22g，将本发明实施例1-3制备得到的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物碾碎成粉，并用纯净水溶解后供小鼠服用，设定高剂量组和正常组两组实验，观察14天，分别在0天、7天、14天记录相关数据，实验数据见下表1和下表2。
表1急性经口毒性正常组实验结果
Figure BDA0003082945170000131
Figure BDA0003082945170000141
表2急性经口毒性高剂量组实验结果
Figure BDA0003082945170000142
由以上结果可知：
提供本发明制备的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，正常剂量或高剂量给小鼠服用，小鼠在服用后精神状态均良好，行为均正常，体重均正常增长，均无不良反应，死亡数均为0，说明本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物是无毒安全的，属无毒级结果，符合《生物学安全性评价》要求急性毒性实验结果。
实验2：理化及微生物审评
受试样品：实施例1-3制备得到的样品
实验方法：
分别按照表3中“对照标准”列所示的标准检测各个指标。
实验数据见下表3。
表3理化及微生物审评实验结果
Figure BDA0003082945170000151
Figure BDA0003082945170000161
由以上结果可知：
经过对本发明制备的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物进行理化及微生物审评，结果显示本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的各项理化和微生物指标均符合标准要求。
实验3：功效验证
受试样品：实施例1-3、对比例1-9制备得到的待测样品
实验对象及分组：以小鼠为研究对象，选择健康雌性昆明小鼠，鼠龄8周，饲养温度22-25℃，相对湿度50-65％，每天光照12小时，按照正常昼夜生理规律进行适应性饲养，自由饮水和进食，每组小鼠12只。适应性饲养结束后进行试验，按照人体与小鼠的体重比设置实验的剂量，实验时间设置为7天，空白对照组灌胃等量的蒸馏水。
实验方法：采用Elisa法测定血清雌二醇(E2)和卵泡刺激素(FSH)的水平，将标准品、待测样品加入预先包被小鼠雌激素单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合部分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合部分。依次加入底物A和B，底物在辣根过氧化酶催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠小鼠雌激素浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据待测样品和标准品的OD值，计算E2值。FSH值的计算方法与E2类似。结果如下表4所示。
表4小鼠血清雌二醇(E2)检测值和卵泡刺激素(FSH)检测值
组别 小鼠数量 E2检测值(ng/L) FSH值(IU/L)
空白对照组 12只 50.9±1.4 9.78±0.6
实施例1 12只 96.2±1.3 7.12±1.1
实施例2 12只 99.7±0.9 7.03±0.7
实施例3 12只 121.5±3.1 5.56±0.7
对比例1 12只 60.2±1.3 9.33±0.5
对比例2 12只 58.3±0.5 9.20±0.3
对比例3 12只 57.9±0.7 9.11±0.7
对比例4 12只 81.2±1.0 8.11±0.7
对比例5 12只 78.3±1.1 8.03±1.1
对比例6 12只 89.2±0.3 8.05±0.6
对比例7 12只 89.0±1.2 8.00±0.5
对比例8 12只 76.3±1.2 7.98±0.9
对比例9 12只 86.5±0.5 7.96±1.0
由以上结果可知：
使用本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物饲养小鼠，小鼠血清雌二醇(E2)检测值明显提高，且和空白对照组相比，提高差异显著，说明本发明含大枣外泌体的卵巢保养的组合物具有明显改善雌激素分泌的效果。即本发明含大枣外泌体的卵巢保养的组合物具有很好的保养卵巢、提高卵巢功能的效果。
使用本发明提供的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物饲养小鼠，实施例组均相比于空白组FSH值明显降低，FSH值高容易导致内分泌紊乱，说明本发明含大枣外泌体的卵巢保养的组合物具有明显改善内分泌水平的效果，且实施例组中，实施例3改善内分泌水平的效果最佳。即本发明含大枣外泌体的卵巢保养的组合物具有很好的改善内分泌水平的效果。
而未使用本发明配方体系的含大枣外泌体的卵巢保养的组合物饲养小鼠后，其卵巢保养和内分泌改善效果不明显。
应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。
本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。

Claims (10)

1.含大枣外泌体的卵巢保养的组合物，其特征在于，所述组合物包含大枣外泌体、苦瓜外泌体、酸枣仁外泌体、功效原料和辅料。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述功效原料选自山楂粉、荷叶粉、黑木耳粉、冬瓜籽粉和大豆蛋白粉中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述辅料选自木糖醇、乳糖、D-甘露糖醇、硬脂酸镁、薄膜包衣剂和麦芽糊精中的一种或多种。
4.含大枣外泌体的卵巢保养的产品，其特征在于，所述产品包含权利要求1-3任一项所述的组合物。
5.大枣外泌体在卵巢保养中的用途。
6.含大枣外泌体的组合物在卵巢保养中的用途。
7.大枣外泌体在制备卵巢保养的产品中的用途。
8.包含大枣外泌体的组合物在制备卵巢保养的产品中的用途。
9.根据权利要求1-3任一项所述的组合物或权利要求5-8任一项所述的用途，其特征在于，所述大枣外泌体的重量份数为3-15。
10.含大枣外泌体的卵巢保养的组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤：
S1.将大枣外泌体、苦瓜外泌体、酸枣仁外泌体、功效原料和辅料加入混合机中混合10-20min，得到原料混合物；
S2.向原料混合物中加入85-95%乙醇混合，然后过10-30目筛网，得到湿颗粒；
S3.将湿颗粒置于40-80℃烘箱中1-5h，得到干燥颗粒，然后过10-20目筛网，得到整粒；
S4.在整粒外加硬脂酸镁，总混25-35min。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2024043853A1 (en) * 2022-08-26 2024-02-29 Aye Exocure Tibbi̇ Ürünler Sanayi̇ Ve Ti̇caret Anoni̇m Şi̇rketi̇ Exosomes from bitter melon (momordica charantia)

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