CN108402459B - 乌鳢乌鸡本草组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种乌鳢乌鸡本草组合物及其制备方法和应用。该乌鳢乌鸡本草组合物包括以下组分：乌鳢肽粉、乌鸡肽粉、小麦低聚肽、大枣粉、黄精粉、茯苓粉、香菇粉、山楂粉、胡萝卜粉、生姜粉、大豆磷脂和葡萄糖酸亚铁。该乌鳢乌鸡本草组合物可应用于特医食品领域，特别用于手术后病人的营养支撑，营养全面，极易吸收，可有效促进伤口愈合，特别是可以抑制炎症反应，并且口感好，该乌鳢乌鸡本草组合物有效克服了现有纯西式营养配方和中式传统营养汤所存在的缺陷，效果非常突出，具有重要的现实意义、社会价值和商业应用前景。

Description

乌鳢乌鸡本草组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于特医食品领域，具体涉及一种乌鳢乌鸡本草汤及其制备方法和应用。
背景技术
随着健康领域的不断发展，营养食品领域也同样发展迅速。为术后患者提供经过科学论证的营养配方，能够加快人体机能的恢复，在改善病人营养状况、促进病人康复、缩短住院时间、节省医疗费用等方面发挥了巨大作用。因此，对营养配方的研究日益增多。
特医食品是为了满足进食受限、消化吸收障碍、代谢紊乱等人群对营养素或膳食的特殊需要，以科学的客观事实为依据专门研制、生产的配方食品，可以作为一种营养补充途径，起到营养支持作用。根据不同临床需求和适用人群，可以采用不同的特医食品营养配方。术后特别是产妇产褥期恢复的一个重要方面就是饮食营养，科学的营养配方不仅能够满足术后患者的营养需求，更有利于使伤口快速复原。目前用于该人群的特医食品配方普遍为西式全营养配方，西式全营养配方以维生素、氨基酸、蛋白质等营养成分为导向进行搭配，虽然营养较为全面，但是口感并不好，术后患者的接受度和体验感均不佳，且全营养配方更多的是以满足人体基本营养元素需求为主，作用相对单一。相对于西式全营养配方，人们更倾向于采用传统的中式熬煮法得到营养汤进行营养补充，例如，对于剖腹产妇女的恢复，常采用柴鱼熬制成汤进行服用。然而，经研究发现，熬汤方式虽然看似营养，且符合人们的口味，但实际上对于有效营养成分的提取和溶解作用很小，熬制出的更多的是脂肪成分，胆固醇高，过量食用可能会导致高血脂。因此，寻求一种既能满足术后患者对营养的需求、又能快速促进伤口愈合、且符合人们口味的营养配方成为当务之急。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种营养全面、易吸收、可促进伤口愈合且可抑制炎症反应的乌鳢乌鸡本草组合物及其制备方法和应用。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种乌鳢乌鸡本草组合物，其特征在于，包括以下组分：乌鳢肽粉、乌鸡肽粉、小麦低聚肽、大枣粉、黄精粉、茯苓粉、香菇粉、山楂粉、胡萝卜粉、生姜粉、大豆磷脂和葡萄糖酸亚铁。
上述的乌鳢乌鸡本草组合物，优选的，各组分的质量份如下：乌鳢肽粉1份～20份、乌鸡肽粉1份～20份、小麦低聚肽1份～20份、大枣粉0.1份～15份、黄精粉0.1份～10份、茯苓粉0.1份～10份、香菇粉0.1份～10份、山楂粉0.1份～10份、胡萝卜粉0.1份～8份、生姜粉0.1份～5份、大豆磷脂1份～20份和葡萄糖酸亚铁0.01份～5份；其中，乌鳢肽粉和乌鸡肽粉均以纯肽粉计。
上述的乌鳢乌鸡本草组合物，更优选的，乌鳢肽粉1份～10份、乌鸡肽粉1份～10份、小麦低聚肽1份～10份、大枣粉0.5份～3份、黄精粉0.25份～2份、茯苓粉0.25份～2份、香菇粉0.5份～3份、山楂粉0.25份～2份、胡萝卜粉0.25份～2份、生姜粉0.1份～2份、大豆磷脂1份～5份和葡萄糖酸亚铁0.01份～1份。
上述的乌鳢乌鸡本草组合物，进一步优选的，乌鳢肽粉1份～5份、乌鸡肽粉1份～5份、小麦低聚肽1份～5份、大枣粉1份～2份、黄精粉0.5份～1份、茯苓粉0.5份～1份、香菇粉0.5份～2份、山楂粉0.5份～1份、胡萝卜粉0.25份～1份、生姜粉0.1份～0.5份、大豆磷脂1份～3份和葡萄糖酸亚铁0.01份～0.05份。
还可以优选为：乌鳢肽粉2.5份、乌鸡肽粉2.5份、小麦低聚肽2份、大枣粉1.5份、黄精粉0.75份、茯苓粉0.75份、香菇粉1份、山楂粉0.75份、胡萝卜粉0.5份、生姜粉0.2份、大豆磷脂2份和葡萄糖酸亚铁0.03份。
上述的乌鳢乌鸡本草组合物，优选的，所述乌鸡肽粉的制备过程如下：将乌鸡进行预处理、切分和磨浆，得到乌鸡浆液，将乌鸡浆液进行预煮、酶解和灭酶，然后经过滤、真空浓缩和干燥，得到乌鸡肽粉；
所述乌鳢肽粉的制备过程如下：将乌鳢进行预处理、切分和磨浆，得到乌鳢浆液，将乌鳢浆液进行预煮、酶解和灭酶，然后经过滤、真空浓缩和干燥，得到乌鳢肽粉。
上述的乌鳢乌鸡本草组合物，优选的，所述乌鸡肽粉的制备过程中，所述酶解步骤如下：将预煮后的乌鸡浆液中先加入木瓜蛋白酶进行第一次酶解，木瓜蛋白酶的酶活力为40万U/g～80万U/g，木瓜蛋白酶的质量为加木瓜蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.1％，第一次酶解的时间为1h～4h，然后加入复合蛋白酶进行第二次酶解，复合蛋白酶的酶活力为20万U/g～40万U/g，复合蛋白酶的质量为加入复合蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.2％，第二次酶解的时间为1h～4h，再加入风味蛋白酶进行第三次酶解，风味蛋白酶的酶活力为20万U/g～40万U/g，风味蛋白酶的质量为加风味蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.1％，第三次酶解的时间为1h～3h，所述第一次酶解、第二次酶解和第三次酶解的温度均为45℃～60℃；所述灭酶的温度为90℃～100℃，所述灭酶的时间为5min～20min；
所述乌鳢肽粉的制备过程中，所述酶解步骤如下：将预煮后的乌鳢浆液中先加入木瓜蛋白酶进行第一次酶解，木瓜蛋白酶的酶活力为40万U/g～80万U/g，木瓜蛋白酶的质量为加木瓜蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.1％，第一次酶解的时间为1h～4h，然后加入复合蛋白酶进行第二次酶解，复合蛋白酶的酶活力为20万U/g～40万U/g，复合蛋白酶的质量为加入复合蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.2％，第二次酶解的时间为1h～4h，再加入风味蛋白酶进行第三次酶解，风味蛋白酶的酶活力为20万U/g～40万U/g，风味蛋白酶的质量为加风味蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.1％，第三次酶解的时间为1h～3h，所述第一次酶解、第二次酶解和第三次酶解的温度均为45℃～60℃；所述灭酶的温度为90℃～100℃，所述灭酶的时间为5min～20min。
上述的乌鳢乌鸡本草组合物，优选的，所述乌鸡肽粉的制备过程中，所述磨浆采用胶体磨磨片进行，所述胶体磨磨片的缝隙为0.1mm～1mm，所述预煮的温度为90℃～120℃，所述预煮的时间为5min～20min，所述过滤采用40～60目筛，所述真空浓缩前，先添加麦芽糊精，所述真空浓缩包括第一阶段真空浓缩和第二阶段真空浓缩，所述第一阶段真空浓缩的温度为60℃～70℃，所述第一阶段真空浓缩的时间为60min～90min，所述第二阶段真空浓缩的温度为70℃～80℃，所述第二阶段真空浓缩的时间为30min～60min，所述干燥为喷雾干燥或真空冷冻干燥，所述喷雾干燥的温度为180℃～200℃，所述真空冷冻干燥的温度为-10℃～-50℃，真空1.3Pa～13Pa；
所述乌鳢肽粉的制备过程中，所述磨浆采用胶体磨磨片进行，所述胶体磨磨片的缝隙为0.1mm～1mm，所述预煮的温度为90℃～120℃，所述预煮的时间为5min～20min，所述过滤采用40～60目筛，所述真空浓缩前，先添加麦芽糊精，所述真空浓缩包括第一阶段真空浓缩和第二阶段真空浓缩，所述第一阶段真空浓缩的温度为60℃～70℃，所述第一阶段真空浓缩的时间为60min～90min，所述第二阶段真空浓缩的温度为70℃～80℃，所述第二阶段真空浓缩的时间为30min～60min，所述干燥为喷雾干燥或真空冷冻干燥，所述喷雾干燥的温度为180℃～200℃，所述真空冷冻干燥的温度为-10℃～-50℃，真空度为1.3Pa～13Pa。
上述的乌鳢乌鸡本草组合物，优选的，所述乌鳢乌鸡本草组合物还包括糊精和调味剂，所述调味剂为甜酸味调味剂或咸鲜味调味剂；
所述甜酸味调味剂包括白糖、幼砂糖、低聚果糖粉、果糖、梅子粉、盐、柠檬酸和苹果酸；
所述咸鲜味调味剂包括盐、低聚果糖粉、酵母粉、味精、生姜粉、I+G、玉米膨化粉、酱油粉、麦芽糊精和食用香精。
作为一个总的发明构思，本发明还提供一种上述的乌鳢乌鸡本草组合物的制备方法，包括将所述原料组分进行混合，得到乌鳢乌鸡本草组合物。
作为一个总的发明构思，本发明还提供一种上述的乌鳢乌鸡本草组合物或者上述的制备方法制得的乌鳢乌鸡本草组合物在特医食品领域的应用。
上述的应用，优选的，所述乌鳢乌鸡本草组合物应用于手术后病人的营养支撑。
本发明中，大枣粉、黄精粉、茯苓粉、香菇粉、山楂粉、胡萝卜粉、生姜粉等原料粉均可采用水提方式制取得到。
本发明中，乌鸡肽粉的制备过程中，更优选地，所述木瓜蛋白酶的质量为加入木瓜蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.08％，所述复合蛋白酶的质量为加入复合蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.06％，所述风味蛋白酶的质量为加入风味蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.08％。
本发明中，乌鳢肽粉的制备过程中，更优选地，所述木瓜蛋白酶的质量为加入木瓜蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.08％，所述复合蛋白酶的质量为加入复合蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.06％，所述风味蛋白酶的质量为加入风味蛋白酶后的浆液总质量的0.01％～0.08％。
本发明的主要创新点在于：
1、组方原理：申请人钻研了大量民间传统滋补药膳的配伍经验以及现代营养学营养理念，科学组方，兼顾中西，方中乌鳢、乌鸡利用现代生物技术制成小分子肽，加上小麦低聚肽可提供营养全面的蛋白营养，其它本草成份不仅提供了维生素，微量元素营养，还通过各自独特的活性成份产生了协同增效作用，本方不仅具有伤口愈合的作用，更重要的是，还具有抑制炎症的独特作用。
2、本发明的乌鳢乌鸡本草组合物是一种以乌鳢、乌鸡等为原料，中国、加拿大医药专家团队研制出的专门针对术后伤口愈合人群的定向营养剂。通过给小鼠灌胃乌鳢乌鸡本草汤固体饮料来观察小鼠的伤口愈合情况，结果表明乌鳢乌鸡本草汤固体饮料不仅能够促进伤口愈合，更是能够有效抑制炎症。本发明采用的乌鳢、乌鸡肽粉含有多种氨基酸，如谷氨酸(Glu)、丙氨酸(Ala)、赖氨酸(Lys)等共16种，其中乌鳢中所含必需氨基酸占总氨基酸的38.60％，乌鸡中所含必需氨基酸占总氨基酸的38.70％。矿物质含量丰富，且含有6种维生素及大量的蛋白质。在人体手术后或产妇产褥期食用，有生肌活血，加速伤口愈合和抑制炎症反应的作用。
3、传统营养学认为蛋白质被人体分解为氨基酸后才为人体吸收，但研究发现，食物中的蛋白质在进入人体的消化系统后，被各器官分泌的酶类物质反应分解，最终70％分解为分子量更小的肽而直接被人体吸收，具有＜30％被分解成氨基酸形式吸收，两者共同作用于机体，成为生命的能源物质。人体对肽具有如下吸收特点：(1)不需消化，直接吸收；(2)吸收快速；(3)吸收时，多肽不被破坏；(4)小分子多肽具有100％被人体吸收和特点；(5)具有主动吸收的特点；(6)优先被人体吸收的特点；(7)人体对小分子多肽的吸收，具有不需要耗费人体能量，增加消化道特别是胃肠功能负担的特点；(8)多肽在人体表现出载体作用，可将平常人所食的营养物质，特别是钙等对人体有益的微量元素，吸附、粘连、装载在本体上；(9)多肽可在人体起运输工具的作用。本发明将乌鳢、乌鸡原料通过多肽形式进行配伍，结合小麦低聚肽，与西式全营养配方相比，达到了同样的全营养需求，并且显著提高了口感和服用舒适度，同时避免了中式熬煮方式所带来的营养缺陷。
本发明中，乌鳢乌鸡本草组合物可以制备成常用的药物剂型，如片剂、口服液、汤药、胶囊、颗粒等。当制成乌鳢乌鸡本草汤时，食用规格为：成人型30g/袋，儿童型20g/袋。食用方法：开水冲泡，就餐时食用。
以下是本发明采用的各配方成份详解，以下成份是可商购得到的，但这些成分的筛选过程、配伍方式和协同效果均是本发明所特有的：
乌鳢：俗称乌鱼、黑鱼(华北)、生鱼(广东)、财鱼(湖南、湖北)、Fe、Zn含量高，味甘性寒、能补脾益气、利水。
乌鸡：我国独特的药食同源品种，既可单独食用又可配药入复方，补肝肾，益气血，退虚热，治心腹痛等功效。乌鸡黑色素中含有Fe、Mg、Zn、Ca等多种金属元素，是吲哚型的不规则高聚物及吲哚类前体物质。乌鸡具有清洁人体血液和清除血液中垃圾之功能，能调节人体免疫功能，对气血亏虚引起的月经紊乱及老年人虚损性疾病，有很好补益作用：此外，乌鸡含有大量的维生素A、微量元素硒，它们具有清除体内自由基、抗衰老和抑制癌细胞生长的功效。
大枣：味甘、性温、无毒、入心、脾、胃经、有补气血、益脾胃、通九窍、和百药、润肤养颜、强志逸年等养生保健作用，药食同源，含16种氨基酸，其中8种人体不能合成的必需氨基酸，幼儿体内不能合成的两种氨基酸，精氨酸和粗氨酸，多种微量元素，维生素。
主要活性成分(有机酸三萜类物质，多糖，黄酮，腺苷和皂苷类，生物碱，甾醇)。
作用：1、抗衰老，补血，养血；2、具有CAMP样作用(抑癌作用)；3、抗变态反应；4、抗肿瘤；5、免疫增强作用；6、增加肌肉力量、抗疲劳；7、保肝；8、降压，镇静安神，抗惊厥。
黄精：是一种传统的滋补中药，药食同源，中医认为黄精补气养阴，健脾，润肺，益肾。其作用为：1、抗肿瘤；2、抗衰老；3、增强免疫功能；4、降低血糖；5、降血脂和抗动脉粥样硬化作用；6、肮骨质疏松作用，促进骨折愈合；7、抗缺氧性神经细胞坏死和凋亡作用。
茯苓：茯苓的药性缓和，补而不峻，利而不猛，既能扶正，又可祛邪。其中多糖、三萜类物质的作用：1、抗肿瘤；2、保肝、3、利尿、4、抗衰老；5、降血脂。
香菇：民间“山珍”之称，甘、平、无毒，大益胃气，富含香菇多糖、多种氨基酸，微量元素，微生素，香菇多糖有增强免疫力和抗癌作用。
山楂：缩积，行淤，化滞，健脾和胃，促进消化，帮助恢复胃肠功能，含多种有机酸、黄酮、糖类，蛋白质，微量元素，维生素。口服后增强胃液酸度，提高胃蛋白酶活性，促进蛋白质的消化；山楂味酸，刺激胃黏膜促进胃液分泌；山楂中含脂肪酶，能促进脂肪的消化；山楂含有维生素C等成分，口服可增进食欲；山楂对胃肠运动功能具有调节作用；山楂的黄酮类化合物牡荆素，是一种抗癌作用较强的药物，其提取物对抑制体内癌细胞生长、增殖和浸润转移均有一定的作用。
胡萝卜：富含糖类、脂肪、挥发油、胡萝卜素、维生素A、维生素B1、维生素B2、花青素、钙、铁等营养成分。有利健康长寿，间接消灭癌细胞。
生姜的作用：抗氧化，抗疲劳，肿瘤，生姜入药解百毒，止吐(减轻放、化疗后)，性味辛，热，入脾、胃、心、肺经、有温中散寒、回阳救逆，温肺化饮之功。
大豆磷脂：为人体细胞(细胞膜、核膜、质体膜)的基本成份。在促进体内脂肪代谢、肌肉生长、神经系统发育和体内抗氧化损伤等方面发挥重要的作用。
葡萄糖酸亚铁：补血，为人体补充铁元素。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本发明的乌鳢乌鸡本草组合物通过采用乌鳢肽粉、乌鸡肽粉、小麦低聚肽、本草成分、大豆磷脂和葡萄糖酸亚铁等，科学地进行中西成分的结合和协同增效，提供了全面的营养成分，口感好，易吸收，不仅可用于手术后病人的营养支撑，还可加速伤口愈合和抑制炎症反应。
附图说明
图1为本发明实施例1中490nm处吸光度与多糖浓度的关系图。
图2为本发明实施例1中乌鳢组与对照组小鼠的伤口愈合结果图，其中，A、B、C、D、E、F分别为0天、3天、5天、7天、9天和11天的观察结果。
图3为本发明实施例1中乌鳢组与对照组小鼠创伤3天时的HE染色切片结果图，HE×400，其中，A1为对照组3d，A2为乌鳢组3d。
图4为本发明实施例1中乌鳢组与对照组小鼠创伤5天时的HE染色切片结果图，HE×400，其中，B1为对照组5d，B2为乌鳢组5d。
图5为本发明实施例1中乌鳢组与对照组小鼠创伤7天时的HE染色切片结果图，HE×400，其中，C1为对照组7d，C2为乌鳢组7d。
图6为本发明实施例1中乌鳢组与对照组小鼠创伤9天时的HE染色切片结果图，HE×400，其中，D1为对照组9d，D2为乌鳢组9d。
图7为本发明实施例1中乌鳢组与对照组小鼠创伤11天时的HE染色切片结果图，HE×400，其中，E1为对照组11d，E2为乌鳢组11d。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。
以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。其中，木瓜蛋白酶购自南宁庞博生物工程有限公司，复合蛋白酶购自诺维信(中国)生物技术有限公司，风味蛋白酶购自诺维信(中国)生物技术有限公司，但不限于此。
实施例1
一种本发明的乌鳢乌鸡本草组合物，包括以下质量份的组分：乌鳢肽粉2.5份、乌鸡肽粉2.5份、小麦低聚肽2份、大枣粉1.5份、黄精粉0.75份、茯苓粉0.75份、香菇粉1份、山楂粉0.75份、胡萝卜粉0.5份、生姜粉0.2份、大豆磷脂2份和葡萄糖酸亚铁0.03份。其中，乌鳢肽粉和乌鸡肽粉均以纯肽粉计。具体地，本实施例中，1份可以为1g，但不限于此。
本实施例中，乌鸡肽粉可采用以下方法制备得到：
以鲜(冻)乌鸡为原料进行预处理、切分和磨浆，磨浆采用的胶体磨磨片的缝隙为0.5mm，得到乌鸡浆液，经100℃预煮10分钟后，向乌鸡浆液中加入酶活力为60万U/g的木瓜蛋白酶酶解2h，木瓜蛋白酶的质量为浆液总质量(包括刚加入的酶，下同)的0.04％，然后加入酶活力为40万U/g的复合蛋白酶酶解4小时，复合蛋白酶的质量为浆液总质量的0.03％，再加入酶活力为40万U/g的风味蛋白酶酶解2小时，风味蛋白酶的质量为浆液总质量的0.04％，三次酶解的温度均为50℃。酶解完成后，于95℃下灭酶10分钟，然后过50目筛过滤，向滤液中添加麦芽糊精(不添加也可以)，进行真空浓缩，真空浓缩分两个阶段，第一个阶段温度为65℃，时间为75min，第二阶段温度为80℃，时间为45min，浓缩后于190℃下进行喷雾干燥，或者于-10℃下进行真空冷冻干燥，真空5帕，得到乌鸡肽粉，为酶解生物活性肽制品，可进行包装。
本实施例中，乌鳢肽粉可采用以下方法制备得到：
以鲜(冻)乌鳢为原料进行预处理、切分和磨浆，磨浆采用的胶体磨磨片的缝隙为0.5mm，得到乌鳢浆液，经100℃预煮10分钟后，向乌鳢浆液中加入酶活力为60万U/g的木瓜蛋白酶酶解3h，木瓜蛋白酶的质量为浆液总质量(包括加入的酶，下同)的0.04％，然后加入酶活力为40万U/g的复合蛋白酶酶解4小时，复合蛋白酶的质量为浆液总质量的0.03％，再加入酶活力为40万U/g的风味蛋白酶酶解2小时，风味蛋白酶的质量为浆液总质量的0.04％，三次酶解的温度均为50℃。酶解完成后，于95℃下灭酶10分钟，然后过50目筛过滤，向滤液中添加麦芽糊精(不添加也可以)，进行真空浓缩，真空浓缩分两个阶段，第一个阶段温度为65℃，时间为75min，第二阶段温度为80℃，时间为45min，浓缩后于190℃下进行喷雾干燥，或者于-10℃下进行真空冷冻干燥，真空5帕，得到乌鳢肽粉，为酶解生物活性肽制品，可进行包装。
本实施例中，乌鳢乌鸡本草组合物还包括糊精和调味剂，该调味剂可采用甜酸味调味剂或咸鲜味调味剂。当采用甜酸味调味剂时，包括白糖、幼砂糖、低聚果糖粉、果糖、梅子粉、盐、柠檬酸和苹果酸，当采用咸鲜味调味剂时，包括盐、低聚果糖粉、酵母粉、味精、生姜粉、I+G(即IMP+GMP)、玉米膨化粉、酱油粉、麦芽糊精和食用香精。糊精和调味剂各成分的加入量可根据实际需求进行调整，例如，糊精可在0.1-10份之间，调味剂中各成分可均在0.1-3份之间，但并不限于此。
本发明的乌鳢乌鸡本草组合物的制备过程是将各组分原料进行混合，可以制备成常用的药物剂型，如片剂、口服液、汤药、胶囊、颗粒等。
本发明的配方是一种独创的中西结合的全营养配方，各成分之间具有明显的协同增效作用，不仅具有用于病人手术恢复后需要的全面营养成分，还具有较好的口感和快速促进伤口愈合的作用，而更重要的是，具有抵抗炎症的作用，可从源头上抵制由炎症引起的各类病症或并发症，这一特点可明显区别于现有各种营养配方和药物组合物，可以应用于特医食品领域，特别是用于手术后病人的营养支撑，具有重要的社会价值、商用前景和现实意义。
以下是对本实施例的乌鳢乌鸡本草组合物进行的效果测定。
1、乌鳢乌鸡本草组合物中多糖含量的测定
1.1实验材料
乌鳢乌鸡本草组合物(原味)，D-无水葡萄糖对照品(批号：110833-200904，中国食品药品检定研究院)，糖化酶(无锡市雪梅酶制剂科技有限公司，50000U·g-1)，乙醇(天津大茂化学试剂有限公司，分析纯)，苯酚(天津大茂化学试剂有限公司，分析纯)，硫酸，水为高纯水，其余试剂均为分析纯。
1.2方法与结果
1.2.1多糖含量测定方法
(1)对照品溶液的配制：精密称取105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖50.2mg，加水溶解并定容于50mL量瓶中，摇匀即得，备用。
(2)样品处理：取样品m1＝0.1002g，m2＝0.1005g，m3＝1.002g，按酶∶底物＝2∶5，分别加入糖化酶42.6mg、41.3mg、40.53mg，加2mL水，调节pH至4-5，置于55℃的水浴中30min酶解糊精。反应结束后升温至100℃对糖化酶灭活，加入无水乙醇3mL涡旋混匀，放置10min，5000r·min-1离心10min，沉淀用5mL水复溶，5000r·min-1离心10min，取上清液100μL置于50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，备用。
(3)标准曲线的绘制及样品测定
精密吸取2000μL、1000μL、500μL、250μL、125μL、62.5μL对照品溶液分别置于200mL的容量瓶中，加水至刻度线，摇匀，配成10μg·mL-1、5μg·mL-1、2.5μg·mL-1、1.25μg·mL-1、0.625μg·mL-1、0.3125μg·mL-1的葡萄糖溶液。精密吸取上述溶液及样品各2mL，分别置于具塞试管中，加入5％苯酚溶液1.0mL，摇匀后迅速加入浓硫酸5.0mL，振摇2min，置沸水浴中加热15min，冷水浴中冷却30min，以蒸馏水代替对照品平行处理，作为空白对照，分别取200μL置于96孔酶标板中，用酶标仪测定葡萄糖在490nm的吸光度A值。如图1所示，以浓度C为横坐标，以吸光度A为纵坐标进行线性回归，得回归方程：A＝0.0121×C+0.1168，R2＝0.9906，结果表明葡萄糖质量浓度在0.3125～10μg·mL-1范围内与吸光度线性关系良好。
1.2.2结果计算
根据线性公式计算：
M1＝34.4353mg·g-1，
M2＝29.3985mg·g-1，
M3＝31.3423mg·g-1。
Figure BDA0001589534220000091
因此，本实施例的样品的多糖平均含量为31.725mg·g-1。
2、对乌鳢乌鸡本草组合物中乌鳢多肽、乌鸡多肽和小麦低聚肽组分的氨基酸含量进行了测定，结果如表1、2、3所示。乌鳢多肽即乌鳢肽粉，乌鸡多肽即乌鸡肽粉。
表1乌鳢多肽中的氨基酸及含量
氨基酸名称 含量(g/100g) 氨基酸名称 含量(g/100g)
天门冬氨酸 9.673 缬氨酸 4.625
谷氨酸 14.654 蛋氨酸 2.757
丝氨酸 3.825 亮氨酸 6.960
精氨酸 5.871 异亮氨酸 4.069
甘氨酸 9.139 苯丙氨酸 4.047
苏氨酸 3.869 组氨酸 3.247
脯氨酸 5.404 赖氨酸 8.406
丙氨酸 7.227 酪氨酸 3.046
上述乌鳢多肽中，分子量(注：HPLC面积归一化法测定)2000道尔顿以下为96.82％，分子量800道尔顿以下为50％)
表2乌鸡多肽中的氨基酸及含量
氨基酸名称 含量(g/100g) 氨基酸名称 含量(g/100g)
天门冬氨酸 8.108 亮氨酸 6.446
精氨酸 6.956 异亮氨酸 3.611
甘氨酸 8.728 苯丙氨酸 3.832
苏氨酸 3.921 组氨酸 3.854
脯氨酸 5.184 赖氨酸 6.911
丙氨酸 6.579 酪氨酸 2.658
缬氨酸 4.142 谷氨酸 13.823
蛋氨酸 2.215 丝氨酸 7.620
上述乌鸡多肽中，分子量2000道尔顿以下为94.60％，分子量800道尔顿以下为50％。
表3小麦低聚肽中的氨基酸及含量
氨基酸名称 含量(g/100g) 氨基酸名称 含量(g/100g)
天门冬氨酸 3.072 胱氨酸 0.561
谷氨酸 37.878 缬氨酸 3.949
丝氨酸 4.557 蛋氨酸 1.180
组氨酸 1.603 苯丙氨酸 4.736
甘氨酸 4.037 异亮氨酸 3.563
苏氨酸 2.552 亮氨酸 5.479
精氨酸 2.764 赖氨酸 1.614
丙氨酸 2.311 脯氨酸 15.619
酪氨酸 2.795
上述小麦低聚肽中，相对分子量在1000Da以下的占比85％以上，总谷氨酸(g/100g)≥25。
由上述结果可知，本发明的乌鳢乌鸡本草组合物中采用了乌鳢肽粉、乌鸡肽粉和小麦低聚肽，这些组分基本以小分子形式存在，且含有各种人体所需的氨基酸，极易消化，可被直接吸收，且吸收速度很快，吸收过程中，多肽不易被破坏，不需要耗费人体能量，大幅减轻了消化道特别是胃肠功能的负担，同时，多肽作为载体可将平常人所食的营养物质特别是钙等对人体有益的微量元素进行吸附、粘连和装载在本体上，在人体中起到营养物质的有效运输作用。
3、乌鳢乌鸡本草组合物对小鼠创伤皮肤的影响
建立小鼠全层皮肤切除伤口模型，随机将小鼠分为对照组和乌鳢乌鸡本草组合物组(简称乌鳢组)，分别灌胃生理盐水和乌鳢乌鸡本草汤固体饮料(由乌鳢乌鸡本草组合物配制)，连续灌胃11天，通过小鼠伤口愈合的情况、大体观察，并在建模后第3、7、9、11天测量伤口大小，计算伤口面积，取伤口组织做病理切片观察乌鳢乌鸡本草汤固体饮料对小鼠皮肤伤口愈合影响。
3.1材料
3.1.1实验动物与原料
乌鳢乌鸡本草汤试制品：由深圳施之健生命科技有限公司提供，实验时以蒸馏水配成所需浓度，即将27克组合物溶解在100毫升水中。实验动物：昆明小鼠，雄性，7-8周龄，由中南大学湘雅二医院实验动物室提供，实验过程动物都得到了人性化的对待。合格证：SCXK(湘)2003—0003。
3.1.2试剂及仪器
10％水合氯醛(20170623)，无水乙醇AR(莱阳市康德化工有限公司)，甲醛AR(江苏双源化工厂)，二甲苯AR(莱阳市康德化工有限公司)，1％盐酸酒精，苏木精溶液，0.5％伊红溶液，石蜡，生理盐水。电子秤(上海寺冈电子有限公司)、JPT-5型架盘天平(江苏常熟衡器厂)、切片机，坩埚，烧杯，三角瓶，广口瓶，包埋盒，手术器械等。
3.2实验方法
3.2.1圆形伤口的制造
在较为安静的环境下进行伤口模型的制作：腹腔注射水合氯醛(10g/L、0.3mL/g)对小鼠进行麻醉，将自制直径为2.5cm的塑料圆圈染上颜色，印在小鼠背部进行定位，用无菌镊子从圆圈中心将小鼠皮肤夹起，然后用无菌剪刀沿印迹剪除背部皮肤，便能得到大小、深浅基本一致的圆形伤口。
3.2.2分组给药
取伤口造模后的30只小鼠随机分为2组，对照组和乌鳢乌鸡本草组合物组(乌鳢组)，每组15只，乌鳢组小鼠灌服1mL乌鳢乌鸡本草汤固体饮料，对照组灌服等体积的蒸馏水。采用灌胃器直接灌胃法，每天一次，连续灌胃11d后，进行各项伤口愈合指标测定和观察。
3.2.3伤口愈合观察
(1)肉眼观察
造模当天设为第0天，于造模后第0、3、7、9及11天在伤口同一水平放置钢尺以作为伤口实际面积大小的参照物，数码相机拍摄，并观察伤口变化情况。
(2)伤口形态学的变化
造模后第3、5、7、9及11天时随机取2只小鼠处死并取其伤口组织用10％中性甲醛固定24h，常规脱水，二甲苯透明和包埋组织块。5μm切片，常规HE染色，光学显微镜下观察组织学变化和肉芽组织增生情况。
3.2结果
3.2.1伤口愈合肉眼观察结果
结果观察发现，灌胃乌鳢乌鸡本草汤固体饮料实验组小鼠的伤口，比空白对照组小鼠伤口均能提前2～3d愈合，如图2和表4所示，术后第3天，乌鳢组伤口开始收缩且出现少许红晕，表明肉芽组织已在生长，对照组伤口有明显脓性分泌物；术后第5天，乌鳢组肉芽组织生长迅速，数量多，鲜红色，表面干燥未有黏性物质的渗出，对照组伤口表面仍有大量黏液物质渗出，颜色紫暗；术后第7天，乌鳢组伤口创面已基本为肉芽组织所填充，对照组伤口仅见薄层肉芽；术后第9天、11天，乌鳢组伤口创面较对照组进一步缩小。与对照组相比，乌鳢组小鼠皮肤伤口愈合面积稍小，因此认为乌鳢乌鸡本草汤固体饮料对伤口愈合有促进作用。
表4各组伤口面积测量结果
Figure BDA0001589534220000121
3.2.2伤口处形态学观察
HE染色切片结果发现：在造模当天致创后，各组创面未愈合面积之间无显著差异，创伤3d时，如图3所示，各组伤口均有大量炎性渗出物，内有浆液、中性白细胞、单核细胞、巨噬细胞、纤维素及坏死细胞碎屑，周边皮下组织充血、水肿周边皮下组织充血、水肿。创伤5d时，如图4所示，对照组炎细胞浸润，微血管扩张，乌鳢组炎性细胞明显减少，成纤维细胞数量明显增高。创伤7d时，如图5所示，对照组仍有大量炎性细胞浸润，乌鳢组可见很多新生血管和成纤维细胞增生，上皮细胞增生明显，胶原纤维含量较多，有少量炎性细胞浸润，与对照组相比病理病变程度明显降低。创伤9d时，如图6所示，乌鳢组与对照组相比，炎性细胞进一步减少。创伤11d时，如图7所示，乌鳢组与对照组相比，成纤维细胞进一步增生，表皮下大量胶原形成，基本与表皮平行生长。实验结果表明，乌鳢乌鸡本草组合物组毛细血管和成纤维细胞增生较对照组明显，说明其不仅对小鼠皮肤伤口愈合有一定的促进作用，更具有较好的减轻炎症的作用，乌鳢乌鸡本草组合物组较对照组愈合过程提前2-3d。
由上述实验可知，皮肤的切割损伤是一种常见的皮肤伤害，是一个多种细胞参与的复杂过程，包括炎症反应、血管再生、表皮细胞再生等。皮肤损伤后，首先通过凝血来填补血管的损伤处，在随后的几天，发生炎症的反应，然后是肉芽组织增生和疤痕的形成。乌鳢乌鸡本草组合物是以乌鳢、乌鸡等为主要原料，由中国、加拿大医药专家团队研制出的专门针对术后伤口愈合人群的定向营养剂。乌鳢肉含有多种氨基酸，矿物质含量丰富，且含有6种维生素及大量的蛋白质。本实验采用小鼠皮肤全层切除伤模型研究乌鳢乌鸡本草组合物对伤口愈合和抵抗炎症的作用，测定创伤3、5、7、11天时小鼠未愈合伤口面积和炎症情况，对照组和乌鳢组比较有统计学意义。本实验结果表明，与对照组相比，乌鳢乌鸡本草组合物组小鼠皮肤伤口面积小，伤口愈合时间减少，组织形态学显示乌鳢组毛细血管和成纤维细胞增生较对照组明显，并具有较好的减轻炎症的作用，二者的协同效果相比于现有技术具有突出的优势。这种生肌作用可能与乌鳢乌鸡本草组合物所提供的Va、Vc能增强机体抗感染能力，起消炎作用，多种氨基酸能促使机体迅速合成蛋白质、促进细胞生长等多项因素有关。
综上所述，乌鳢乌鸡本草组合物能有效减轻皮肤切割损伤小鼠术后5天的病理病变程度，促进肉芽组织形成和上皮细胞增生，促进小鼠术后伤口愈合，并能抑制炎症反应。
实施例2
一种本发明的乌鳢乌鸡本草组合物，包括以下质量份的组分：乌鳢肽粉5份、乌鸡肽粉5份、小麦低聚肽4份、大枣粉3份、黄精粉1份、茯苓粉1份、香菇粉1.5份、山楂粉1份、胡萝卜粉0.75份、生姜粉0.5份、大豆磷脂4份和葡萄糖酸亚铁0.1份。其中，乌鳢肽粉和乌鸡肽粉均以纯肽粉计。
实施例3
一种本发明的乌鳢乌鸡本草组合物，包括以下质量份的组分：乌鳢肽粉10份、乌鸡肽粉10份、小麦低聚肽8份、大枣粉6份、黄精粉1.5份、茯苓粉1.5份、香菇粉2份、山楂粉2份、胡萝卜粉2份、生姜粉1份、大豆磷脂4份和葡萄糖酸亚铁0.5份。其中，乌鳢肽粉和乌鸡肽粉均以纯肽粉计。
实施例4
一种本发明的乌鳢乌鸡本草组合物，包括以下质量份的组分：乌鳢肽粉20份、乌鸡肽粉20份、小麦低聚肽16份、大枣粉12份、黄精粉8份、茯苓粉8份、香菇粉8份、山楂粉8份、胡萝卜粉8份、生姜粉5份、大豆磷脂10份和葡萄糖酸亚铁1份。其中，乌鳢肽粉和乌鸡肽粉均以纯肽粉计。
实施例5
一种本发明的乌鳢乌鸡本草组合物，包括以下质量份的组分：乌鳢肽粉1份、乌鸡肽粉1份、小麦低聚肽1份、大枣粉1份、黄精粉0.5份、茯苓粉0.5份、香菇粉0.5份、山楂粉0.5份、胡萝卜粉0.25份、生姜粉0.1份、大豆磷脂1份和葡萄糖酸亚铁0.01份。其中，乌鳢肽粉和乌鸡肽粉均以纯肽粉计。
上述实施例2～5中，制备得到的乌鳢乌鸡本草组合物相比于纯西式全营养剂并未牺牲营养成分，但口感明显好很多，并且极易吸收，营养价值高，易被人们接受，该组合物在保留了西式全营养剂中所有营养成分的基础上，多糖成分得到增加，经动物实验证明，特别是HE染色切片结果发现，乌鳢乌鸡本草组合物乌鳢组毛细血管和成纤维细胞增生较对照组明显，具有较好的减轻炎症的作用，表皮下大量胶原形成，基本与表皮平行生长。由此可知，乌鳢乌鸡本草组合物不仅能够促进伤口的愈合，更具有抑制炎症的作用。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims (6)

1.一种乌鳢乌鸡本草组合物，其特征在于，包括以下组分：乌鳢肽粉、乌鸡肽粉、小麦低聚肽、大枣粉、黄精粉、茯苓粉、香菇粉、山楂粉、胡萝卜粉、生姜粉、大豆磷脂和葡萄糖酸亚铁；
所述乌鳢乌鸡本草组合物中，各组分的质量份如下：乌鳢肽粉1份～20份、乌鸡肽粉1份～20份、小麦低聚肽1份～20份、大枣粉0.1份～15份、黄精粉0.1份～10份、茯苓粉0.1份～10份、香菇粉0.1份～10份、山楂粉0.1份～10份、胡萝卜粉0.1份～8份、生姜粉0.1份～5份、大豆磷脂1份～20份和葡萄糖酸亚铁0.01份～5份；其中，乌鳢肽粉和乌鸡肽粉均以纯肽粉计；
所述乌鸡肽粉的制备过程如下：将乌鸡进行预处理、切分和磨浆，得到乌鸡浆液，将乌鸡浆液进行预煮、酶解和灭酶，然后经过滤、真空浓缩和干燥，得到乌鸡肽粉；
所述乌鳢肽粉的制备过程如下：将乌鳢进行预处理、切分和磨浆，得到乌鳢浆液，将乌鳢浆液进行预煮、酶解和灭酶，然后经过滤、真空浓缩和干燥，得到乌鳢肽粉；
所述乌鸡肽粉的制备过程中，所述酶解步骤如下：将预煮后的乌鸡浆液中先加入木瓜蛋白酶进行第一次酶解，木瓜蛋白酶的酶活力为40万U/g～80万U/g，木瓜蛋白酶的质量为加木瓜蛋白酶后的浆液总质量的0.01%～0.1%，第一次酶解的时间为1h～4h，然后加入复合蛋白酶进行第二次酶解，复合蛋白酶的酶活力为20万U/g～40万U/g，复合蛋白酶的质量为加入复合蛋白酶后的浆液总质量的0.01%～0.2%，第二次酶解的时间为1h～4h，再加入风味蛋白酶进行第三次酶解，风味蛋白酶的酶活力为20万U/g～40万U/g，风味蛋白酶的质量为加风味蛋白酶后的浆液总质量的0.01%～0.1%，第三次酶解的时间为1h～3h，所述第一次酶解、第二次酶解和第三次酶解的温度均为45℃～60℃；所述灭酶的温度为90℃～100℃，所述灭酶的时间为5min～20min；
所述乌鳢肽粉的制备过程中，所述酶解步骤如下：将预煮后的乌鳢浆液中先加入木瓜蛋白酶进行第一次酶解，木瓜蛋白酶的酶活力为40万U/g～80万U/g，木瓜蛋白酶的质量为加木瓜蛋白酶后的浆液总质量的0.01%～0.1%，第一次酶解的时间为1h～4h，然后加入复合蛋白酶进行第二次酶解，复合蛋白酶的酶活力为20万U/g～40万U/g，复合蛋白酶的质量为加入复合蛋白酶后的浆液总质量的0.01%～0.2%，第二次酶解的时间为1h～4h，再加入风味蛋白酶进行第三次酶解，风味蛋白酶的酶活力为20万U/g～40万U/g，风味蛋白酶的质量为加风味蛋白酶后的浆液总质量的0.01%～0.1%，第三次酶解的时间为1h～3h，所述第一次酶解、第二次酶解和第三次酶解的温度均为45℃～60℃；所述灭酶的温度为90℃～100℃，所述灭酶的时间为5min～20min；
所述乌鳢多肽中，分子量2000道尔顿以下为96.82%，分子量800道尔顿以下为50%；
所述乌鸡多肽中，分子量2000道尔顿以下为94.60%，分子量800道尔顿以下为50%。
2.根据权利要求1所述的乌鳢乌鸡本草组合物，其特征在于，乌鳢肽粉1份～10份、乌鸡肽粉1份～10份、小麦低聚肽1份～10份、大枣粉0.5份～3份、黄精粉0.25份～2份、茯苓粉0.25份～2份、香菇粉0.5份～3份、山楂粉0.25份～2份、胡萝卜粉0.25份～2份、生姜粉0.1份～2份、大豆磷脂1份～5份和葡萄糖酸亚铁0.01份～1份；
或者，乌鳢肽粉1份～5份、乌鸡肽粉1份～5份、小麦低聚肽1份～5份、大枣粉1份～2份、黄精粉0.5份～1份、茯苓粉0.5份～1份、香菇粉0.5份～2份、山楂粉0.5份～1份、胡萝卜粉0.25份～1份、生姜粉0.1份～0.5份、大豆磷脂1份～3份和葡萄糖酸亚铁0.01份～0.05份。
3.根据权利要求1所述的乌鳢乌鸡本草组合物，其特征在于，所述乌鸡肽粉的制备过程中，所述磨浆采用胶体磨磨片进行，所述胶体磨磨片的缝隙为0.1mm～1mm，所述预煮的温度为90℃～120℃，所述预煮的时间为5min～20min，所述过滤采用40～60目筛，所述真空浓缩前，先添加麦芽糊精，所述真空浓缩包括第一阶段真空浓缩和第二阶段真空浓缩，所述第一阶段真空浓缩的温度为60℃～70℃，所述第一阶段真空浓缩的时间为60min～90min，所述第二阶段真空浓缩的温度为70℃～80℃，所述第二阶段真空浓缩的时间为30min～60min，所述干燥为喷雾干燥或真空冷冻干燥，所述喷雾干燥的温度为180℃～200℃，所述真空冷冻干燥的温度为-10℃～-50℃，真空度为1.3Pa～13Pa；
所述乌鳢肽粉的制备过程中，所述磨浆采用胶体磨磨片进行，所述胶体磨磨片的缝隙为0.1mm～1mm，所述预煮的温度为90℃～120℃，所述预煮的时间为5min～20min，所述过滤采用40～60目筛，所述真空浓缩前，先添加麦芽糊精，所述真空浓缩包括第一阶段真空浓缩和第二阶段真空浓缩，所述第一阶段真空浓缩的温度为60℃～70℃，所述第一阶段真空浓缩的时间为60min～90min，所述第二阶段真空浓缩的温度为70℃～80℃，所述第二阶段真空浓缩的时间为30min～60min，所述干燥为喷雾干燥或真空冷冻干燥，所述喷雾干燥的温度为180℃～200℃，所述真空冷冻干燥的温度为-10℃～-50℃，真空度为1.3Pa～13Pa。
4.根据权利要求1或2所述的乌鳢乌鸡本草组合物，其特征在于，所述乌鳢乌鸡本草组合物还包括糊精和调味剂，所述调味剂为甜酸味调味剂或咸鲜味调味剂；
所述甜酸味调味剂包括白糖、幼砂糖、低聚果糖粉、果糖、梅子粉、盐、柠檬酸和苹果酸；
所述咸鲜味调味剂包括盐、低聚果糖粉、酵母粉、味精、生姜粉、I+G、玉米膨化粉、酱油粉、麦芽糊精和食用香精。
5.一种如权利要求1～4中任一项所述的乌鳢乌鸡本草组合物的制备方法，其特征在于，将所述原料组分进行混合，得到乌鳢乌鸡本草组合物。
6.一种如权利要求1～4中任一项所述的乌鳢乌鸡本草组合物或者如权利要求5所述的制备方法制得的乌鳢乌鸡本草组合物在制备特医食品中的应用。
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