CN102860495B

CN102860495B - 一种具有提高免疫力、耐缺氧作用的保健食品及其制备方法

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Publication number: CN102860495B
Application number: CN201210379656.XA
Authority: CN
Inventors: 张国清; 邹存生; 吴留强; 夏彬
Original assignee: S&P PHARMA Co Ltd
Current assignee: S&P Pharma Co., Ltd.
Priority date: 2012-10-09
Filing date: 2012-10-09
Publication date: 2015-06-03
Anticipated expiration: 2032-10-09
Also published as: CN102860495A

Abstract

本发明公开了一种具有提高免疫力、耐缺氧作用的保健食品，由以下重量百分数的组分组成：40~60%的黄芪、10~30%的枸杞子、5~25%的冬虫夏草、5~25%的人参和1~5%的鹿茸。同时，本发明还公开了上述保健食品的制备方法。本发明采用天然中药为原料，在达到提高免疫力、耐缺氧作用的同时，不会产生副作用，适合各个年龄段人群；同时，本发明制备方法简单，不会引起各原料性质的变化，可以长期保存。

Description

一种具有提高免疫力、耐缺氧作用的保健食品及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种具有提高免疫力、耐缺氧作用的保健食品及其制备方法。

背景技术

免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物（病毒、细菌等），处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。免疫功能失调或低下时，会降低机体对抗感染的能力，降低识别和清除自身衰老的组织细胞能力，降低杀伤和清除异常突变细胞在体内的能力，导致人体抗病力与自愈力的下降。而现代社会，生活节奏的加快，竞争压力的增大，每日紧张的工作和学习会使机体处于透支状态，如得不到及时的休息和调整，日积月累，就会抑制免疫功能；同时，紧张的工作和学习让更多的人不得不食用方便快餐，造成体内营养素的失衡，如果机体长期处于这种状态，会使机体免疫力下降，最终导致机体的亚健康状态。

此外，社会发展日益迅速，人们生活压力也普遍加大，生活节奏加快，竞争日益激烈，强力劳动及大运动量者、在缺氧环境中作业者、肿瘤患者、抵抗力低下者、血脂偏高者容易产生缺氧。

因此，摄入提高免疫力保健食品和耐缺氧保健食品是很需要的，当然，如果能提供一种既具有提高免疫力又有耐缺氧作用的保健食品则更为实用。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种具有提高免疫力、耐缺氧作用的保健食品。

本发明的另一目的在于提供上述保健食品的制备方法。

技术方案：为了达到上述目的，本发明具体是这样来实现的：一种具有提高免疫力、耐缺氧作用的保健食品，由以下重量百分数的组分组成：40~60%的黄芪、10~30%的枸杞子、5~25%的冬虫夏草、5~25%的人参和1~5%的鹿茸。

其中，所述冬虫夏草优选天然冬虫夏草、拟青霉菌蝙蝠蛾菌丝体或中国被毛孢菌丝体。

其中，所述保健食品的剂型可以采用胶囊、粉剂、软胶囊剂或片剂。

制备上述具有提高免疫力、耐缺氧作用的保健食品的方法，包括以下步骤：

（1）按配方量取各原料，粉碎，过80目筛；

（2）将过筛后的各原料混合，制备成胶囊、粉剂、软胶囊剂、片剂或口服液。

有益效果：本发明采用天然中药为原料，在达到提高免疫力、耐缺氧作用的同时，不会产生副作用，适合各个年龄段人群；同时，本发明制备方法简单，不会引起各原料性质的变化，可以长期保存。

具体实施方式

实施例1：

取重量百分数40%的黄芪、30%的枸杞子、5%的冬虫夏草、20%的人参和5%的鹿茸，粉碎过80目筛，装入400mg的胶囊。

实施例2：

取重量百分数45%的黄芪、17%的枸杞子、10%的冬虫夏草、25%的人参和3%的鹿茸，粉碎过80目筛，制成1g的粉剂装袋。

实施例3：

取重量百分数50%的黄芪、14%的枸杞子、25%的冬虫夏草、10%的人参和1%的鹿茸，粉碎过80目筛，压片成500mg的片剂。

实施例4：

取重量百分数55%的黄芪、25%的枸杞子、13%的冬虫夏草、5%的人参和2%的鹿茸，粉碎过80目筛，装入400mg的软胶囊。

实施例5：

取重量百分数60%的黄芪、10%的枸杞子、11%的冬虫夏草、15%的人参和4%的鹿茸，粉碎过80目筛，加入原料体积10倍蒸馏水制成10ml每支的口服液。

实施例6：

本发明增加免疫力功能实验研究

1.材料

1.1样品：由三普药业有限公司提供。

1.2实验动物

昆明种小鼠160只，全雌，体重18-22g。

2.实验方法

2.1剂量选择

受试物设400mg/kg.BW、800mg/kg.BW、1200 mg/kg.BW三个剂量组（分别相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍、30倍），分别称取10.00g、20.00g、30.00g受试物加蒸馏水至250ml混匀，冷藏保存，用完再配，另设食用植物油阴性对照组，每组40只动物。分为免疫一组、二组、三组、四组，其中一组用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；二组用于NK细胞活性测定及淋巴细胞转化实验；三组用于抗体生成细胞实验、血清溶血素测定和迟发型变态反应；四组用于小鼠碳廓清实验。小鼠按10 mg/kg.BW体重一次经口灌胃，连续给予30天，每周称一次体重，调整灌胃体积。

2.2实验步骤

2.2.1小鼠碳廓清试验：连续灌胃30天后，于小鼠尾静脉注射用4倍生理盐水稀释的印度墨汁，按0.1ml/10g墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min分别从内眦静脉丛取血20μl，加到2mlNa₂CO₃溶液中，以Na₂CO₃溶液作空白对照，用723分光光度计在600nm处测定光密度值。取血后处死小鼠，取肝、脾称重，计算吞噬指数。

2.2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）：连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射20%的鸡红细胞悬液1ml,30分钟后，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml,转动鼠板1分钟，吸出腹腔洗液1ml,平均滴于2张载玻片上，置湿盒37℃30分钟，取出在生理盐水漂洗、晾干、固定，4%GiemsaPBS染色3分钟，蒸馏水漂洗晾干，镜检。计算吞噬百分率及吞噬指数。

2.2.3迟发型变态反应（DTH）（足跖增厚法）：灌胃30天后，给小鼠腹腔注射2%压积SRBC（0.2ml/每鼠）致敏4天后，测量左后足跖厚度，然后再测量部位皮下注射20%（v/v）SRBC（20μl/每鼠），于注射后24h测量左后足跖厚度，同一位测量三次，取平均值，以攻击前后足跖厚度差值（足跖肿胀度）来表示DTH的程度。

2.2.4ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验（MTT法）：首先进行脾细胞悬液的制备。将细胞浓度调整为3×10⁶个/ml，然后将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μlConA液，另一孔作对照，置5%CO₂孵箱37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μl/孔继续培养4h，培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，使紫色结晶完全溶解，然后将每孔液体移入比色杯中，用723分光光度仪于570nm波长处比色测定光密度值。

2.2.5抗体生成细胞检测（Jernr改良玻片法）：连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射2%压积SRBC0.2ml,将免疫5天半后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏放在盛有Hank’s液的平皿内，制成脾细胞悬液。将琼脂糖配成1%水溶液，水浴煮30min，与等量双倍Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加10%（用S_A缓冲液配制）压积SRBC50μl，脾细胞悬液各20μl做两个平行样，迅速混匀后，倾倒于琼脂糖薄层玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，然后将补体加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h，计数溶血空斑数。

2.2.6血清溶血素测定（血凝法）：在连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射2%SRBC0.2ml免疫，继续灌胃5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置1h，剥离，2000r/min离心10min，收集血清，用生理盐水将血清作倍比稀释，每份稀释12孔，将不同稀释度的血清置于血凝板中，每孔100μl，再加入0.5%SRBC悬液100μl，混匀，置湿盒37℃3h后观察结果，记录每孔的凝集程度。计算抗体积数。

2.2.7NK细胞活性测定（乳酸脱氢酶LDH测定法）：连续灌胃30天后，颈椎脱臼处死动物，取出脾脏，撕碎，过200目筛网后，用Hank’s液洗3次，用完全RPMI1640培养液配成2×10⁷个/ml细胞悬液。将各只小鼠的细胞悬液取300μl分3孔置于96孔培养板中，每孔100μl，每孔加靶细胞（YAC-1细胞，4×10⁵个/ml）100μl,同时做靶细胞自然释放孔（靶细胞100μl+培养液100μl）及最大释放孔（靶细胞100μl+2.5%Triton100μl）各8孔，37℃5%CO₂培养4小时，取出1500r/min离心5min。将各孔上清液100μl置于另一培养板中，每孔再加入100μl基质液，10分钟后加1mol/L的HCL30μl终止反应，在490nm处测定OD值，计算NK细胞活性率。

3.试验数据统计

试验数据采用SPSS10.0 for Windows软件包处理。对照组与剂量组的数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用Dunnett’sT3法进行两两比较（P>0.05为非显著性差异，P<0.05为显著性差异）。

4.结果

4.1本发明对小鼠体重的影响见表1-4。

表1 各组小鼠的初始体重（）

表2 各组小鼠的中期体重（）

表3 各组小鼠的结束体重（）

表4 本发明对小鼠体重增重的影响（）

由表1-4可见，本发明免疫一组、免疫二组、免疫三组及免疫四组小鼠的初始体重与阴性对照组相比，经方差齐性检验，方差齐（P〉0.05），且方差分析结果（P〉0.05），说明各组小鼠与阴性对照组之间的初始体重是均衡的。三个剂量组小鼠试验中期、末期的体重以及试验期间小鼠体重的增长与阴性对照组相比，经统计学处理，无显著性差异（P〉0.05），即本发明对小鼠的体重增长无影响。

4.2本发明对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

表5 本发明对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清功能的影响（）

由表5可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的碳廓清能力与阴性对照组相比，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05）。

表6 本发明对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响（）

由表6可见，连续灌胃30天后，三个剂量组动物的吞噬率和吞噬指数与阴性对照组相比，经统计学处理，中、高剂量组吞噬指数有显著性差异(P<0.05)。

由表5、表6可见，本发明对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能试验结果阳性。

4.3本发明对小鼠细胞免疫的影响

表7 本发明对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响（）

由表7可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的足跖肿胀度与阴性对照组相比，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05）

表8 本发明对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响（）

由表8可见，连续灌胃小鼠30天后，三个剂量组小鼠的淋巴细胞增殖能力与阴性对照相比，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05）。

由表7、表8可见本发明对小鼠细胞免疫试验结果为阴性。

4.4本发明对小鼠体液免疫的影响

表9 本发明对小鼠抗体生成细胞的影响（）

由表9可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的溶血空斑数与阴性对照相比，经统计学处理，低、中剂量组有显著性差异（P<0.05）。

表10 本发明对小鼠血清溶血素的影响（）

由表10可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的抗体积数与阴性对照组相比，经统计学处理，低剂量组有极显著性差异（P<0.05）

由表9、表10可见，本发明对小鼠体液免疫试验结果呈阳性。

4.5本发明对小鼠NK细胞活性的影响

表11 本发明对小鼠NK细胞活性的影响（）

由表11可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠NK细胞活性与阴性对照相比，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05）。本发明对小鼠的NK细胞活性试验结果显阴性。

5.总结

本发明连续灌胃小鼠30天后，对小鼠体重无明显影响；对小鼠的细胞免疫试验结果阴性；对小鼠的NK细胞试验结果阴性；对小鼠的体液免疫试验，三个剂量组的溶血空斑数与阴性对照组比较，低、中剂量组差异均有显著性（P<0.05），试验结果阳性；对小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能试验，三个剂量组小鼠的吞噬率和吞噬指数与阴性对照组比较，中、高剂量组差异有显著性（P<0.05），试验结果阳性。

依据《保健食品检验与评价技术规范》2003年版可以判定，本发明对动物具有增加免疫力的功能。

实施例7：

本发明提高耐缺氧受力功能动物实验

1 样品和方法

1.1 样品由三普药业股份有限公司提供。

1.2 实验动物雄性昆明种小鼠120只，体重18~20g。

1.3 剂量选择人体每日推荐量为50ml/60kg·BW，本实验采用2倍浓缩液，设4.17ml/60kg·BW、8.33ml/60kg·BW、12.50ml/60kg·BW三个剂量组（分别相当于人体推荐量的10、20、30倍）。分别量取2倍浓缩液52.1ml、104.2ml、156.3ml，各加蒸馏水定容至250ml混匀，冰柜保存，用完再配，另设蒸馏水对照组。实验分为一、二、三组，每组40只动物。

1.4 实验方法

1.4.1 以蒸馏水作溶剂配制受试物，按20ml/60kg·BW每天一次经口灌胃小鼠，连续给予30天。

1.4.2 常压耐缺氧试验将试验一组各剂量组的动物末次给予受试物后1小时，将各剂量组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250ml磨口瓶内（每瓶1只），用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。

1.4.3 亚硝酸钠中毒存活试验将试验二组各剂量组的动物末次给予受试物后1小时，将各剂量组小鼠按220mg/60kg·BW剂量腹腔注射亚硝酸钠（注射量为0.1ml/10g），立即计时，记录动物存活时间。

1.4.4急性脑缺血性缺氧试验将试验三组各剂量组的动物末次给予受试物后1小时，将各剂量组小鼠自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。

1.5试验数据统计试验数据统计采用SPSS 11.0 for windows软件包处理，数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用Dunnett'sT3法进行两两比较。

2 结果

2.1 本发明对小鼠体重的影响

由表12、13、14可见，各剂量组及对照组动物的初始体重经统计学处理，方差齐（P〉0.05），且方差分析结果（P〉0.05），表明各组动物的初始体重是均衡的。三个剂量组动物的中期体重和结束时体重与对照组比较，经统计学处理，均无显著性差异（P〉0.05）。

表12 服用本发明各组小鼠初始体重（）

表13 服用本发明各组小鼠中期体重（）

表14 服用本发明各组小鼠结束体重（）

2.2 本发明对小鼠常压耐缺氧时间的影响

由表15可见，三个剂量组的小鼠常压耐缺氧时间与对照组比较，经统计学处理，均无显著性差异（P〉0.05）。

表15服用本发明对小鼠常压耐缺氧时间的影响（）

2.3 本发明对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

由表16可见，三个剂量组的小鼠亚硝酸钠中毒存活时间与对照组比较，经统计学处理，低、中、高剂量组的中毒存活时间延长均有显著性差异（P〈0.05）。

表16 服用本发明对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响（）

2.4 本发明对小鼠急性脑缺血性缺氧时间的影响

由表17可见，三个剂量组的小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间与对照组比较，经统计学处理，低、中、高剂量组的急性脑缺血性缺氧存活时间延长均有显著性差异（P〈0.05）。

表17 服用本发明对小鼠急性脑缺血性缺氧时间的影响（）

3 小结

本发明连续30天经口灌胃给予雄性小鼠后，可见动物生长良好，体重持续增长。常压耐缺氧试验结果为阴性；低、中、高剂量组能明显延长亚硝酸钠中毒存活时间，亚硝酸钠中毒存活试验结果为阳性；低、中、高剂量组能明显延长小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间，对急性脑缺血性缺氧试验结果为阳性，按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的规定，本发明对动物具有提高缺氧耐受力功能。

Claims

1.一种具有提高免疫力、耐缺氧作用的保健食品，其特征在于，取重量百分数50％的黄芪、14％的枸杞子、25％的冬虫夏草、10％的人参和1％的鹿茸，粉碎过80目筛，压片成500mg的片剂。