CN101708048A

CN101708048A - 一种保健食品及其制备方法

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Publication number: CN101708048A
Application number: CN200910216211A
Authority: CN
Inventors: 杨建光
Original assignee: SICHUAN KELUN XINGUANG MENICINE CO Ltd
Current assignee: SICHUAN KELUN XINGUANG MENICINE CO Ltd
Priority date: 2009-11-13
Filing date: 2009-11-13
Publication date: 2010-05-19
Anticipated expiration: 2029-11-13
Also published as: CN101708048B

Abstract

本发明公开了一种保健食品及其制备方法，其重量百分比组成为燕窝0.01％-99.99％、人参花蕾0.01％-99.99％；燕窝经传统方法净化、干燥后用气流粉碎机将其粉碎，得到5-400nm的超微细粉末；人参花蕾采用传统方法净化、提取、干燥后用粉碎机粉碎，取60-120目的细粉；将燕窝超微细粉末和人身花蕾细粉按比例充分混合均匀后包装，经检验合格后即得到成品。本发明成分简单，服用量少，疗效可靠，服用方便，同时具有增强免疫力、缓解体力疲劳、祛黄褐斑和改善皮肤水分的保健功能，无毒副作用。

Description

一种保健食品及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种同时具有增强免疫力、缓解体力疲劳、祛黄褐斑、改善皮肤水分四种功效的保健食品及其制法，尤其是一种由燕窝与人参花蕾为原料制备而成的保健食品及其制备方法，属于食品和药品领域。

背景技术

从生理学、免疫学、病理学及药理学等的相关知识可知道：①免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)；处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。现代免疫学认为，免疫力是人体识别和排除“异己”的生理反应。随着现代社会的竞争加剧，节奏加快，现代人长期处于紧张的生活环境，工作压力大及过度疲劳，加上不正常的生活饮食习惯，造成免疫力普遍减弱并导致内分泌、神经系统、消化系统失调，免疫力逐渐降低、加之老龄化人群越来越多，如何增强免疫力，成为全社会都关注的问题。

从国家食品药品监督管理局基础数据库查询得知，申报保健功能为增强免疫力的保健品有1080个，如德辉牌灵芝孢子粉胶囊、维妥立牌蜂胶软胶囊、同仁堂牌人参乌鸡口服液(桔子口味)、天树牌蜂胶软胶囊、参灵草牌参灵草口服液等。其中多为中药保健品，其处方用原料主要有灵芝、蜂胶、阿胶、西洋参、人参、枸杞子、蜂蜜、葡萄籽、茯苓、黄芪、松花、制何首乌、当归、三七、铁皮石斛、大豆蛋白、大蒜油、氨基酸、维生素等。

本发明采用燕窝和人参花蕾组合物用于治疗增强免疫力，目前未见报道，经试验证实该保健食品可以起到增强免疫力之功效的作用。

②疲劳是机体生理过程中不能将机能维持在一特定水平上和/或不能维持预定的运动强度的一种生理现象，是一种处于疾病和健康之间的亚健康状态，严重影响人们的生活质量。疲劳有多种多样，体力疲劳一般表现为四肢乏力、肌肉酸痛、关节屈伸轻度障碍或有牵引性疼痛等；脑力疲劳由用脑过度而起，因大脑血液和氧气供应不足，致使脑细胞的生理功能降低，表现为头昏脑胀、记忆力下降和注意力不集中等；心里疲劳也称精神疲劳，是受到强烈或持久的劣性精神刺激而引起的消极心理，如忧郁、焦虑、沮丧、愤怒等，主要表现为精神涣散、情绪低落、食欲不振等。

千百年来，人类对于抗疲劳的保健食品或药品的探讨从未停止，尤其近年来现代社会生活节奏加快，竞争日益激烈，环境日益恶化，疲劳已成为人们很普遍的状态，抗疲劳的保健食品和药品种类亦越来越多。

从国家食品药品监督管理局基础数据库查询得知，申报保健功能为抗疲劳/缓解体力疲劳的保健品有782个，如一洲牌洋参胶囊、“白兰氏”灵芝鸡精、益美高牌小麦胚芽油胶囊、红牛维生素功能饮料、衍宗牌保元胶囊、哈药牌力之源口服液、启元牌杞珍参葆颗粒、必邦牌山茱霍参胶囊等。其中多为中药保健品，其处方用原料主要有西洋参、人参、灵芝、花旗参、当归、枸杞子、三七、鸡、白芍、阿胶、黄芪、绞股蓝、甘草、红景天、巴戟天、五味子、山药、山茱萸、小麦胚芽油、熟地黄、红枣、党参、茯苓、花旗参、刺五加、氨基酸、牛磺酸等。

本发明采用燕窝和人参花蕾组合物用于治疗增强免疫力，目前未见报道，经试验证实该保健食品可以起到抗疲劳之功效。

③黄褐斑也称为肝斑，是面部黑变病的一种，是发生在颜面的色素沉着，目前以中医药对症治疗为主。黄褐斑的发生于肝、脾、肾三脏失调有关，中医分型有肝郁气滞型，治宜疏肝解郁、调理气血；肝脾不和型，治宜调理肝脾、化痰祛痰；肾气不足型，治宜补肾调经、养血活血；淤血不畅型，治宜活血化瘀、行气疏肝。

从国家食品药品监督管理局基础数据库查询得知，申报保健功能为祛黄褐斑的保健品有172个，如百合康牌葡萄籽大豆提取物软胶囊、联合邦利牌葡萄籽天然维E软胶囊、修正牌蜂胶花粉胶囊、典奥牌珍籽荟胶囊、素彩牌依采胶囊、科尔维牌科尔维胶囊、神威牌当归红花软胶囊、姆益牌芦荟蜂花胶囊、好丰妍牌好丰妍胶囊、京润牌珍珠红花胶囊、玉坤牌樱桃参花酒、丹杞玫瑰牌丹杞玫瑰胶囊、东阿阿胶牌葆妍口服液、朵肤牌祛斑胶囊等。其中多为中药保健品，其处方用原料主要有葡萄籽提取物、维生素E、维生素C、明胶、珍珠粉、花粉、蜂胶、芦荟、当归、白芷、大豆异黄酮、黄芪、白芍、红花、菟丝子、茯苓、益母草、灵芝、海狗油、桑叶、阿胶、蜂蜜、党参、丹参、西洋参、人参等。

本发明采用燕窝和人参花蕾组合物用于祛黄褐斑，目前未见报道，经试验证实该保健食品可以起到祛黄褐斑之功效。

④皮肤是覆盖于整个体表的一个重要的而且是最大的器官，由表皮、真皮、皮下组织三层组成。皮肤覆盖全身，它使体内各种组织和器官免受物理性、机械性、化学性和病原微生物性的侵袭。皮肤具有两个方面的屏障作用：一方面防止体内水分，电解质和其他物质的丢失；另一方面阻止外界有害物质的侵入。

无论季节、年龄、肤质，几乎所有的肌肤问题都与皮肤干燥缺水、皮肤自我保护盒修护机制降低相关。可以说，增加皮肤水分是美容护肤的基础和根本。皮肤失去水分后，表皮细胞会干燥、脱屑；干燥的皮肤失去保护能力，容易受细菌及有害物质的侵入；失去水分的皮肤会干燥粗糙、形成细纹、色素沉着，引发诸多肌肤问题。

现代人生活节奏快，压力大，睡眠不佳，缺乏保养，加上长期生活在空调环境中，导致皮肤水分失去平衡，缺水干燥的情况非常普遍。目前，对于改善皮肤干燥没有十分有效的方法。

从国家食品药品监督管理局基础数据库查询得知，申报保健功能为改善皮肤水分的保健品有31个，如美澳健牌胶原蛋白维C片、杰瑞婷牌胶原蛋白维E颗粒、怡生安康牌胶原蛋白粉、神火牌靓影软胶囊、维美健牌鱼蛋白片、加华牌润丽姿片、群乐牌赛萝芷软胶囊、全天牌水盈口服液、德通宝牌靓晶晶软胶囊、兰若雅牌舒丽美片、寿源堂牌美美胶丸、森林之雨牌美容口服液、美源牌田田珍珠口服液等。其中多为中药保健品，其处方用原料主要有胶原蛋白粉、维生素C、维生素E、阿胶、珍珠粉、葡萄糖酸锌、鲨鱼软骨提取物、哈蟆油、大豆异黄酮、葡萄籽提取物、大豆油、蜂蜡、明胶、甘油、大豆低聚糖、银耳、羟脯氨酸、蜂胶、蜂蜜、芦荟、乌梅、山药、昆布、阿胶、玉竹、月见草油、鱼油、玉竹、灵芝等。

本发明采用燕窝和人参花蕾组合物用于改善皮肤水分，目前未见报道，经试验证实该保健食品可以起到改善皮肤水分之功效。

不难看出，目前已有的保健品大多作用单一，不能达到相辅相成，因而难以获得满意效果。

发明内容

本发明旨在克服上述缺陷，提供一种同时具有增强免疫力、缓解体力疲劳、祛黄褐斑、改善皮肤水分四种功效的保健食品及其制备方法。

本发明采用的具体技术方案如下：

一种保健食品，其特征在于由下述重量百分比的原料制成：

燕窝 0.01％-99.99％

人参花蕾 0.01％-99.99％

该药用保健食品的制备方法包含如下工艺步骤：

①燕窝采传统方法进行净化、干燥，然后用气流粉碎机将其粉碎，得到5-400nm的超微细粉末含量为93％以上，备用；

②人参花蕾采用传统方法进行净化、提取、干燥，然后用粉碎机粉碎至60-120目，过筛，取筛下的细粉，备用；

③在常温、相对湿度控制在＜30％的环境下，将步骤①获得的燕窝超微细粉末和步骤②获得的人参花蕾细粉按重量比充分混合均匀后，填充胶囊制成胶囊剂或直接制成片剂、颗粒剂或丸剂，经检验合格后即得成品。

所述成品按人参花蕾总皂苷重量和燕窝净重计：

人参花蕾总皂苷为0.01-1000mg，

燕窝净重为1-10000mg。

本发明的有益效果：成分简单，服用量少，疗效可靠，服用方便，同时具有增强免疫力、缓解体力疲劳、祛黄褐斑和改善皮肤水分的保健功能。

具体实施方式

实施例1

②人参花蕾采用传统方法进行净化、提取、干燥，然后用粉碎机粉碎至100目，过筛，取筛下的细粉，备用；

③在常温、相对湿度控制在小于30％的环境下，将步骤①获得的燕窝超微细粉末和步骤②获得的人参花蕾细粉按比例充分混合均匀后填充胶囊制成胶囊剂，规格为300mg/粒，经检验合格后即为成品。

人参花蕾细粉 100g(相当于人参总皂苷0.2Kg)

燕窝超微细粉 2900g

共制成 95000粒

经检验，平均装量为305mg/粒，每粒胶囊含有人参花蕾有效成分以总皂苷计为2mg/粒。

实施例2(功能学试验中做对照用)

在常温、相对湿度控制在＜30％的环境下，取实施例1中步骤①获得的燕窝超微细粉末直接填充胶囊制成胶囊剂，规格为290mg/粒，共制得200粒。

实施例3(功能学试验中做对照用)

在常温、相对湿度控制在＜30％的环境下，取实施例1中步骤②获得的人参花蕾细粉直接填充胶囊制成胶囊剂，规格为10mg/粒，共制得200粒。

实施例4安全性毒理学试验

急性毒性试验

试验依据：《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)

1、材料和方法

1.1受试样品：取实施例1制备的胶囊内容物为受试样品，用蒸馏水配制成所需浓度的灌胃液。

1.2试验动物：昆明种小鼠和SD大鼠各20只，雌雄各半，小鼠体重18g～22g，大鼠体重180g～210g。

1.3急性毒性试验：昆明种小鼠和SD大鼠各20只，雌雄各半。按照霍恩氏(Horn)法进行，大、小鼠均设10.0g/Kg.BW一个剂量组。均以2ml/100g.BW于动物空腹状态下一次性经口灌胃，灌胃后观察两周内死亡动物数及一般健康情况，求出LD₅₀，判断毒性分级。

2、试验结果

见表-1。给予动物受试物10.0g/Kg.BW一次经口灌胃后，两周内均无动物死亡，亦无明显的中毒表现或不良反应。即本受试物对雌雄性昆明种小鼠和SD大鼠的急性经口LD₅₀均大于10.0g/Kg.BW，属实际无毒类。

表-1受试物(实施例1样品)对小鼠的急性毒性

功能学研究

试验例1增强免疫力功能的试验研究

试验依据：《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)

1、材料和方法

1.2试验动物：雄性小鼠360只，体重为18～22g，随机分为5批，每批72只。

免疫I组：雄性小鼠72只，随机分为6组，每组12只，进行小鼠ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化、NK细胞活性试验；

免疫II组：雄性小鼠72只，随机分为6组，每组12只，进行二硝基氟苯诱导小鼠DTH实验；

免疫III组：雄性小鼠72只，随机分为6组，每组12只，进行小鼠半数溶血值(HC₅₀)试验；

免疫IV组：雄性小鼠72只，随机分为6组，每组12只，进行小鼠碳廓清试；

免疫V组：雄性小鼠72只，随机分为6组，每组12只，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验；

1.3剂量选择：

人体推荐剂量为2粒/次，2次/日，早晚各一次，即每日20mg/Kg。小鼠剂量相当于人体推荐剂量的10倍，即每日摄入量200mg/Kg为低剂量组，再按照低剂量的2倍和3倍各设一个剂量组，即400mg/(Kg.d)为中剂量组，600mg/(Kg.d)为剂量组。等量蒸馏水为阴性对照组。另设两个对照组，燕窝对照组：取实施例2制备的胶囊内容物，用蒸馏水配制成所需浓度的灌胃液，最终剂量为燕窝193mg/(Kg.d)，该剂量与上述低剂量(200mg/(Kg.d))中的燕窝剂量相同。人参花蕾对照组：取实施例3制备的胶囊内容物，用蒸馏水配制成所需浓度的灌胃液，最终剂量为人参7mg/(Kg.d)，该剂量与上述低剂量(200mg/(Kg.d))中的人参剂量相同。

1.4试验方法：

依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中增强免疫力功能检验方法。试验设6个组，即3个试验组、1个阴性对照组、1个燕窝对照组和1个人参花蕾对照组，每组12只小鼠。采用灌胃法，每天以0.2ml/10g.BW的容量给小鼠灌胃不同剂量的受试物，阴性对照组给予等量蒸馏水。每天1次，连续30天，末次给样1h后进行各项免疫指标的测定。

1.4.1ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)

各组动物连续灌胃30天，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成单细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank’s液洗3次，每次离心10min(1000r/min)，然后将细胞悬浮于1mlRPMI1640完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，调整细胞浓度为5×10⁶个/ml。将细胞悬液分两孔加入24培养板中，每孔1ml，一孔加75μlConA液，另一孔作对照，置于5％CO₂37％℃孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸取上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5MG/ML)50μl/孔，继续培养4h。；培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后将溶解液直接移入比色皿中，风光光度计在波长570nm测定OD值。

用家ConA孔的OD值减去不加ConA孔的OD值代表淋巴细胞的增值能力，受试组的OD差值显著高于对照组的OD差值，可判定该项试验结果阳性。

1.4.2二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型变态反应(DTH)(耳肿胀法)

各剂量组连续灌胃30天，每鼠用剪刀将腹部毛剪去，范围约3cm×3cm，用1％DNFB溶液50μl均匀涂抹致敏。5日后用1％DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击，同时用不含1％DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠左耳(两面)作对照。攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下制剂8mm耳片，称重。

用左右耳重量之差表示DTH的程度。受试组的重量差值显著高于对照组的重量差值，可判定该项试验结果阳性。

1.4.3血清溶血素测定

各剂量组连续灌胃30天，制备2％(V/V)的绵羊红细胞(SRBC)悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫，4天后摘除眼球取血于离心管内，放置1h，2000r/min离心10min，分离并收集血清。血清200倍稀释后，按检验方法测定样品管及SRBC半数溶血时的光密度值。

溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示，按下列公式计算，受试组的HC₅₀显著高于对照组的HC₅₀，可判定该项试验结果阳性。

1.4.4小鼠碳廓清试验

各剂量组连续灌胃30天，每鼠尾静脉注入3倍稀释的印度墨汁(0.1ml/10g.BW)，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2min及10min分别从眼内眦静脉丛取血20μl，并将其加到2ml0.1％Na₂CO₃溶液中，用分光光度计在600nm波长处测光密度值，以Na₂CO₃溶液作空白对照。

将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重。

以吞噬指数表示小鼠碳廓清的能力。按下式计算吞噬指数a。受试组的吞噬指数显著高于对照组的吞噬指数，可判定该项试验结果阳性。

1.4.5小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)

各剂量组连续灌胃30天，制备20％(V/V)的鸡红细胞悬液，每只鼠腹腔注射1ml，间隔30min，颈椎脱臼处死小鼠，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1min，然后吸出腹腔洗液1ml，平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃温箱孵育30min，然后于生理盐水中漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％(V/V)Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。

油镜下计数巨噬细胞，每张片计数100个，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数。

受试组的吞噬百分率或吞噬指数与对照组比较，差异均有显著性，方可判定该项试验结果阳性。

1.4.6NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法)

各组动物连续灌胃30天，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成单细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，弃上清液将细胞浆弹起，加入0.5ml灭菌水洗20秒，裂解红细胞后再加入0.5ml2倍Hank’s液及8mlHank’s液，离心10min(1000r/min)，用1ml含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1％冰醋酸稀释后计数，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个/ml。

实验前24h将靶细胞(YAC-1细胞)传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/ml。取YAC-1细胞和脾细胞各100μl(效靶比50∶1)加入U型96孔培养板中，YAC-1细胞自然释放孔加入RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个/ml和培养液各100μl，YAC-1细胞最大稀释孔加YAC-1细胞和1％NP40各100μl，上述各项均设三个平行孔，于37℃、50％CO₂培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清液100μl置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，反应5min，每孔加入1mol/L的HCl30μl，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)。

按下式计算NK细胞活性吗，受试组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，即可判定该项试验结果阳性。

1.5饲养条件：小鼠在温度为18-22℃、相对湿度45-65％的环境中饲养。

1.6数据分析：试验数据采用t检验进行统计。

2、试验结果

①细胞免疫功能试验表明，在脾淋巴细胞转化试验中，三个剂量组OD差值均显著高于阴性对照组(低剂量组和中剂量P＜0.05，高剂量P＜0.01)，呈阳性结果；迟发型变态反应试验表明，耳肿程度与阴性对照组比较，三个剂量组差异显著(低剂量组和中剂量P＜0.05，高剂量P＜0.01)，呈阳性结果。

②体液免疫功能试验中，小鼠半数溶血值测定表明，三个剂量组的HC50值与阴性对照组比较均有显著差异(低剂量组P＜0.05，中剂量和高剂量P＜0.01)，呈阳性结果。

③单核-巨噬细胞功能试验表明，在小鼠碳廓清试验中，三个剂量组的吞噬指数均显著高于阴性对照组(低剂量组和中剂量P＜0.05，高剂量P＜0.01)，呈阳性结果；小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验表明，三个剂量组的吞噬百分率及吞噬指数均显著高于阴性对照组(低剂量组和中剂量P＜0.05，高剂量P＜0.01)，呈阳性结果。

④NK细胞活性测定试验表明，与阴性对照组比较，三个剂量组NK细胞的活性均显著升高(低剂量组P＜0.05，中剂量和高剂量P＜0.01)，呈阳性结果。

⑤细胞免疫功能试验表明，在脾淋巴细胞转化试验中，低剂量组(10倍)OD差值显著高于燕窝对照组和人身花蕾对照组(均P＜0.05)；迟发型变态反应试验表明，耳肿程度与燕窝对照组和人身花蕾对照组比较，低剂量组差异显著(均P＜0.05)。

⑥体液免疫功能试验中，小鼠半数溶血值测定表明，低剂量组的HC50值与燕窝对照组和人身花蕾对照组比较有显著差异(均P＜0.05)。

⑦单核-巨噬细胞功能试验表明，在小鼠碳廓清试验中，低剂量组的吞噬指数显著高于燕窝对照组和人身花蕾对照组(均P＜0.05)；小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验表明，低剂量组的吞噬百分率及吞噬指数显著高于燕窝对照组和人身花蕾对照组(均P＜0.05)。

⑧NK细胞活性测定试验表明，与燕窝对照组和人身花蕾对照组比较，低剂量组NK细胞的活性显著升高(均P＜0.05)。

本发明(实施例1制备)对小鼠免疫功能的影响总体评价见表-2。

表-2本发明(实施例1制备)对小鼠免疫功能的影响总体评价表

注：“*”表示与阴性对照组比较有显著性差异，其中*P＜0.05，**P＜0.01；

“△”表示低剂量组与燕窝对照组比较有显著性差异，其中△P＜0.05，△△P＜0.01；

“○”表示低剂量组与人参花蕾对照组比较有显著性差异，其中○P＜0.05，○○P＜0.01；

“-”表示与阴性对照组比较无显著性差异；

3、结论

根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中有关“增强免疫力”的功能学检验评价方法，由以上结果可判定本发明(实施例1制备)具有增强免疫力的功效，且与组方中同等剂量的单味原料相比具有显著差异。

试验例2缓解体力疲劳功能的试验研究

试验依据：《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)

1、材料和方法

1.2试验动物：雄性小鼠240只，体重为18～22g，分为4批，每批60只。

1.3剂量选择：同“试验例1”中的1.3项下。

1.4试验方法：依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中增强免疫力功能检验方法。试验设6个组，即3个试验组、1个阴性对照组、1个燕窝对照组和1个人参花蕾对照组，每组10只小鼠。采用灌胃法，每天以0.2ml/10g.BW的容量给小鼠灌胃不同剂量的受试物，阴性对照组给予等量蒸馏水。每天1次，连续30天。

1.4.1负重游泳实验

末次给予小鼠受试物30min后，小鼠尾根部负重小鼠体重5％的铅皮，放入水温为25℃、水深35cm的游泳箱中游泳。每箱一次放入5只小鼠。用秒表记录记录小鼠自游泳开始至力竭死亡的时间，该时间为小鼠的游泳时间。

1.4.2血清尿素氮测定

末次给予小鼠受试物30min后，将小鼠放于温度为30℃的水中游泳90min，休息60min后摘眼球采血，分离血清，采用全自动生化分析仪测定血清尿素氮。

1.4.3肝糖原测定

末次给予小鼠受试物30min后，立即处死。去肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏200mg，加入4ml5％的三氯醋酸(TCA)，每管匀浆1min，将匀浆液倒入离心管，3000转/分离心15min，将上清液转移至另一试管内。在沉淀中再加入4mlTCA，匀浆1min，再次离心15min，取上清液，并与第一次离心的上清液合并，充分混匀。取1ml上清液放入10ml离心管中，每管加入95％的乙醇4ml，充分混匀至两种液体间不留有界面。用干净塞子塞上，室温下竖直放置过夜。沉淀完全后，将试管于3000转/分离心15min。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10min。用2ml蒸馏水溶解糖原，加水时将管壁的糖原洗下，使之完全溶解。

试管空白：吸2ml蒸馏水到干净离心管。

标准管：将0.5ml葡萄糖标准液(含100mg/dl葡萄糖)和1.5ml蒸馏水放入同样的离心管。

测定：将10ml蒽酮试剂用力加入各管，使其直接进入管子中央，保证充分混合好。从管子中注入蒽酮试剂起，将管子放入冷水中，达到冷水温度后，将其浸入沸水浴15min，然后意指冷水浴，冷却至室温。将管内液体移入比色皿，620nm波长，用试剂空白调零后测定样品管和标准管的吸光度。根据肝脏重量换算成肝糖原含量(以mg/g表示)

1.4.4血乳酸测定

末次给予小鼠受试物30min后，将小鼠放入水温30℃、水深35cm的游泳箱中游泳10min后取出，即刻采尾血20μl，加入盛有40μl溶血剂的试管中混匀，用生物传感分析仪测定血乳酸值。此外，采用同样的方法测定游泳前和游泳后休息20min是的血乳酸水平。

2、试验结果：试验数据采用t检验进行统计。

2.1本发明(实施例1制备)对小鼠体重的影响

由表-3可知，灌胃饲养30d后各剂量组小鼠体重的变化与阴性对照组比较，差异均没有显著性(P＞0.05)，这表明受试物不会对小鼠的正常生长产生明显影响。

表-3各组小鼠体重的变化

2.2本发明(实施例1制备)对小鼠游泳时间的影响

表-4本发明(实施例1制备)对小鼠游泳时间的影响

结果显示：1)给予不同剂量本发明30d后，高、中、低剂量组小鼠游泳时间均长于阴性对照组，差异有显著性(P＜0.05)。

2)低剂量组小鼠游泳时间均长于燕窝对照组和人参花蕾对照组，差异有显著性(P＜0.05)。燕窝对照组和人参花蕾对照组小鼠游泳时间均长于阴性对照组，但无显著性差异(P＞0.05)。

2.3本发明(实施例1制备)对小鼠血清尿素氮的影响

表-5本发明(实施例1制备)对小鼠血清尿素氮的影响

结果显示：1)给予不同剂量本发明30d后，高、中剂量组小鼠运动后的血清尿素氮均低于阴性对照组，差异有显著性(P＜0.05)；低剂量组小鼠运动后的血清尿素氮均低于阴性对照组，但无显著性差异(P＞0.05)。

2)低剂量组小鼠运动后的血清尿素氮均低于燕窝对照组和人参花蕾对照组，但无显著性差异(P＞0.05)。燕窝对照组和人参花蕾对照组小鼠运动后的血清尿素氮均低于阴性对照组，但差异无显著性(P＞0.05)。

2.4本发明(实施例1制备)对小鼠肝糖原的影响

表-6本发明(实施例1制备)对小鼠肝糖原的影响

结果显示：1)给予不同剂量本发明30d后，高、中、低剂量组小鼠的肝糖原含量明显高于阴性对照组，差异有显著性(P＜0.01)；

2)低剂量组小鼠的肝糖原含量明显高于燕窝对照组和人参花蕾对照组，差异有显著性(P＜0.05)。燕窝对照组和人参花蕾对照组小鼠的肝糖原含量明显高于阴性对照组，差异有显著性(P＜0.05)。

2.5本发明(实施例1制备)对小鼠乳酸的影响

表-7本发明(实施例1制备)对小鼠运动后乳酸升高幅度的影响

结果显示：给予不同剂量本发明30d后，各剂量组小鼠运动后血乳酸升高的幅度与阴性对照组相比无显著性差异(P＞0.05)。

表-8本发明(实施例1制备)对小鼠运动后乳酸消除幅度的影响

“-”表示与阴性对照组比较无显著性差异；

“＝”表示低剂量组与燕窝对照组比较无显著性差异；

“≡”表示低剂量组与人参花蕾对照组比较无显著性差异。

结果显示：1)给予不同剂量本发明30d后，高、中、低剂量组小鼠运动后乳酸消除幅度与阴性对照组相比有显著性差异(P＜0.05)；

2)低剂量组小鼠运动后乳酸消除幅度与燕窝对照组和人参花蕾对照组相比无显著性差异(P＞0.05)。燕窝对照组和人参花蕾对照组小鼠运动后乳酸消除幅度与阴性对照组相比无显著性差异(P＞0.05)。

3、结论

根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中有关“缓解体力疲劳”的功能学检验评价方法，由以上结果可判定本发明(实施例1制备)具有缓解体力疲劳的功效，且与组方中同等剂量的单味原料相比具有显著差异。

试验例3祛黄褐斑功能人体试食试验研究

人体试食试验依据：《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)

1、材料和方法

1.1受试样品：取实施例1制备的胶囊作为受试样品。

1.2对照品：同批空心胶囊为空白对照；

1.3受试对象：按自愿原则选择18-65岁，有黄褐斑者。

1.4诊断标准：面部淡褐色至深褐色，界限清楚的斑片，通常对称性分布，无炎症表现及鳞屑，无痛痒等自觉症状。有一定的季节性，夏重冬轻。无明显内分泌疾病，并排除其他疾病引起的色素沉着。

1.5纳入者标准：凡生有黄褐斑的自愿受试者，经体检合格均可进行试食观察。

1.6排除标准

1.6.1年龄在18岁以下或65岁以上者，妊娠或哺乳期妇女，对本保健食品过敏者。

1.6.2合并有心血管、脑血管、肝、肾和造血系统等严重疾病及内分泌疾病，精神病患者。

1.6.3嗜酒者或吸烟者。

1.6.4短期内服用或使用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。

1.6.5未按规定服用受试样品，无法判定功效或资料不全影响疗效或安全性判断者。

1.7试验设计与分组：40例黄褐斑受试者，随机分为试食组和对照组2组，采用自身及组间两种对照形式。

1.8服用剂量及方法：

试食组服用受试样品(实施例1制备的胶囊)，每日2次(早晚各一次)，每次2粒，连续服用30d。

对照组服用同批空心胶囊，每日2次(早晚各一次)，每次2粒，连续服用30d。

所有受试者在试验期间停止服用有关黄褐斑的药物或其他保健品及化妆品。不改变原来的饮食习惯，正常饮食。

2、观察指标

2.1安全性指标

2.1.1一般状况：包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等；

2.1.2血、尿、便常规检查；

2.1.3肝肾功能检查；

2.1.4心电图，腹部B超，X线胸部透视。

2.2功效指标

2.2.1颜面部黄褐斑面积大小检测：用标尺测量受试前后整个颜面部黄褐斑的面积(cm²)。

2.2.2颜面部黄褐斑颜色深浅检测：按照中国科学院地理研究所设计研制，测绘出版社1992年出版的《实用标准色卡》(第一版)中的棕色(Y+M+BK即黄+品红+黑的叠色)色卡为黄褐斑深浅的判断标准：I度(15、20、5)，II度(30、40、10)，III度(40、60、15)。

3、试验数据统计

结果用均值±标准差(x±SD)表示，试食前后自身比较用配对t检验，组建比较用成组t检验，百分率用X²检验。

4、功效判定

4.1对试食前后黄褐斑颜色积分和面积变化进行统计，同时计算有效率。色卡I度、II度、III度分别计1分、2分和3分。

4.2功效判定标准

4.2.1有效：黄褐斑颜色下降I度，面积减少＞10％，且不产生新的黄褐斑；

4.2.2无效：黄褐斑颜色及面积无明显变化。

5、试验结果

5.1试食前一般情况

共观察40例(随机分成2组)，均为女性。2组观察前一般情况比较见表-9。分析数据可得2组各项指标相比差异无显著性，具有可比性。

表-9试食前一般情况比较

5.2黄褐斑颜色深浅变化

见表-10，试食后试食组黄褐斑颜色积分平均下降0.46±0.45度，与试食前比较差异有显著性(P＜0.01)；与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。

表-10黄褐斑颜色深浅变化

注：“*”表示自身比较有显著性差异，其中*P＜0.05，**P＜0.01；

“#”表示试食组与对照组比较有显著性差异，其中#P＜0.05，##P＜0.01

5.3黄褐斑面积大小变化

见表-11，试食后试食组黄褐斑面积平均减少0.46±0.45度，与试食前比较差异有显著性(P＜0.01)；与对照组比较差异有显著性(P＜0.01)。

表-11黄褐斑面积大小变化

注：“*”表示自身比较比较有显著性差异，其中*P＜0.05，**P＜0.01；

5.3功效评定

见表-12，与对照组相比较，试食组总有效率经X²检验差异有显著性(P＜0.01)

表-12祛黄褐斑功效比较

注：“#”表示试食组与阴性对照组比较有显著性差异，其中#P＜0.05，##P＜0.01。

5.4安全性监察

试食前后，2组血常规、尿常规、便常规、血生化指标及肝、肾功能变化不大均在正常范围，也未观察到过敏及其它不良反应，说明本品对受试者身体健康无不良反应。

6、结论

40例黄褐斑受试者，随机分为试食组和对照组各20例，分别服用本发明(实施例1制备)和同批号空白空心胶囊，每日2次(早晚各一次)，每次2粒，服用30天后结果表明：试食组连续服用本发明(实施例1制备)30天，黄褐斑颜色积分下降与试食前比较有显著性差异(P＜0.01)，与对照组比较差异也有显著性(P＜0.05)；黄褐斑面积减少与试食前比较有显著性差异(P＜0.01)，与对照组比较差异也有显著性(P＜0.01)。试食组有效18例，总有效率90.00％，与对照组(5.00％)比较有显著性差异(P＜0.01)。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中有关“祛黄褐斑”的功能学检验评价方法，由以上结果可判定本发明具有祛黄褐斑的功效。试食前后，2组血常规、尿常规、便常规、血生化指标及肝、肾功能变化不大均在正常范围，也未观察到过敏及其它不良反应，说明本品对受试者身体健康无不良反应。

试验例4改善皮肤水分功能人体试食试验研究

1、材料和方法

1.1受试样品：取实施例1制备的胶囊作为受试样品。

1.2对照品：同批空心胶囊为空白对照；

1.3受试对象：按自愿原则选择30-50岁，皮肤水分≤12。

1.4排除标准

1.4.1妊娠或哺乳期妇女，对本保健食品过敏者。

1.4.2合并有心血管、脑血管、肝、肾和造血系统等严重疾病和精神病患者。

1.4.3短期内服用或使用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。

1.4.4未按试验要求服用受试样品，无法判定功效或资料不全影响疗效或安全性判断者。

1.6试验设计与分组：40例受试者(皮肤水分≤12)，随机分为试食组和对照组2组，采用自身及组间两种对照形式。

1.6服用剂量及方法：

所有受试者在试验期间不得服用其它保持皮肤水分的物品及使用影响结果判定的化妆品。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。

2、功效指标

测试前额眉间皮肤的水分。

测定环境：在宽敞、通风条件良好，温度、湿度等空间环境稳定的检查室进行。

测定方法：所有测试均在恒温、恒湿的房间内进行，温度(25±1)℃，湿度(50±5)％。受试者在治疗前、治疗30d后，在安静状态下用洁净棉球蘸蒸馏水清洁被测部位，擦干后15分钟进行水分的测定，试食前后测定工作由同一台仪器、同一人操作。

3、试验数据统计

对试食前后皮肤水分变化进行统计，采用t检验。

4、功效判定标准

4.1有效：皮肤水分得到改善，并经统计学检验有显著性差异；

4.2无效：皮肤水分没有得到改善。

5、试验结果

5.1试食前一般情况

共观察40例(随机分成2组)，试食组20例，其中女16例，男4例，平均年龄37.1岁；对照组20例，其中女15例，男4例，平均年龄35.0岁。2组资料经统计学处理，差异无显著性意义(P＞0.05)，具有可比性，见表-13。

表-13试食前一般情况比较

5.2试食前后皮肤水分变化

见表-14，试食后试食组皮肤水分与试食前比较差异有显著性(P＜0.05)；与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。

表-14试食前后皮肤水分变化情况

注：“*”表示自身比较有显著性差异，其中*P＜0.05，料P＜0.01；

5.3功效评定

见表-15，与对照组相比较，试食组总有效率经X²检验差异有显著性(P＜0.01)

表-15改善皮肤水分功效比较

注：“#”表示试食组与阴性对照组比较有显著性差异，其中#P＜0.05，##P＜0.01

6、结论

40例受试者，随机分为试食组和对照组各20例，分别服用本发明(实施例1制备)和同批号空白空心胶囊，每日2次(早晚各一次)，每次2粒，服用30天后结果表明：试食组连续服用本发明(实施例1制备)30天，皮肤水分明显改善，与试食前比较有显著性差异(P＜0.05)，与对照组比较差异也有显著性(P＜0.05)。试食组有效19例，总有效率95.00％，与对照组(0.00％)比较有显著性差异(P＜0.01)。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中有关“改善皮肤水分”的功能学检验评价方法，由以上结果可判定说明本发明具有改善皮肤水分的功效。

Claims

1.一种保健食品，其特征在于由下述重量百分比的原料制成：

燕窝 0.01％-99.99％

人参花蕾 0.01％-99.99％。

2.根据权利要求1所述保健食品的制备方法，其特征在于工艺步骤如下：

③在常温、相对湿度控制在＜30％的环境下，将步骤①获得的燕窝超微细粉末和步骤②获得的人参花蕾细粉按重量比充分混合均匀后，填充胶囊制成胶囊剂，或者直接制成片剂、颗粒剂或丸剂，经检验合格后即得成品。

3.根据权利要求2所述保健食品的制备方法，其特征在于所述成品按人参花蕾总皂苷重量和燕窝净重计：

人参花蕾总皂苷为0.01-1000mg，

燕窝净重为1-10000mg。

4.一种根据权利要求1所述保健食品在用于增强免疫力、缓解体力疲劳、祛黄褐斑和改善皮肤水分4种功效方面的应用。