CN107912773A - 一种用于缓解体力疲劳的制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于缓解体力疲劳的制剂,该制剂主要由覆盆子1~10份、黄精1~8份、玉竹1~8份、酸枣仁1~6份、枸杞0~3份和红枣0~3份组成,该制剂由上述组分的水提物和或醇提物作为活性成份与附加剂组成颗粒状制品或粉状制品。本发明用于缓解体力疲劳的制剂基于上述天然植物的特定功效和医药价值,运用自然植物,将传统的养生方法与医学理论相结合,具有缓解体力疲劳和提高精力的保健功能,可滋阴补肾、益气镇痛,保持或增强卵巢功能。本发明对多种原因引起的疲劳和亚健康人群具有明显的抗疲劳效果,无明显不良反应,无依赖性;工艺简便易行,生产成本可控,有利于工业化生产,并可根据需要制成多种剂型。
Description
技术领域
本发明属于食品技术领域,具体的说是涉及一种用于缓解体力疲劳的制剂。
背景技术
疲劳是机体过用或超限而引起的功能降低并出现机体不适的状态,主现为神疲乏力、头晕目眩、失眠多梦、耳鸣健忘、腰酸背痛、头发脱落、须发早白及妇女早衰等症状。疲劳发生后如果得不到及时恢复,逐渐积累,会导致过劳,机体发生内分泌紊乱、免疫力下降,甚至出现器质性病变,严重可威胁健康。现代医学证明,过度疲劳会导致人体内环境恶化,自由基增多,细胞衰老,器官功能衰退。而人体细胞过早衰老,器官功能过早衰退等是导致人衰老的重要根源。
目前,市售的抗疲劳的化学药物和生物制品如苯丙胺类、甲氯芬酯、莫达菲尼、咖啡因、多抗甲素等在延缓疲劳发生和消除疲劳方面有较好的效果,但是出现了许多不良反应,如心血管的不良影响、干扰睡眠、精神紊乱、成瘾性等,造成临床运用局限。中国传统中医药重视调动人体自身的免疫力,达到抗疲劳能力,在对抗疲劳,提高精力,抗衰老方面有着得天独厚的优势,同时具有安全有效,毒副作用小的特点。因此,研发出具有毒副作用小、疗效良好、可长期服用等优点,能缓解体力疲劳、提高精力的中药保健食品将具有巨大的市场发展潜力。
现代中医认为,疲劳为一个病名,有其病因病机,是临床上常见病、多发病,是必须重视的新病种,归于亚健康范畴,涉及五脏六腑,主要以脾、肝、肾为主。疲劳其症主要表现为气血两虚、脾胃虚弱、肾精亏虚、阴虚内热,因此治疗疲劳和衰老应以“补虚”为主,宜用具有气血双补、健脾和胃、补肾填精、滋阴清热等功效的中药或中药组方。
中医学认为,肾为先天之本,又为五脏阴阳之根,肾主藏精,肾精通过肾阳蒸化肾阴产生肾气,肾气能资助、促进、协调全身脏腑之阴阳,并决定了人体的生长、发育、生殖、衰老,死亡的生命过程。每一过程的生长发育或衰退情况,尤其是妇女的经、带、胎、产等特殊生理过程的正常与否,都取决于肾精及肾气的盛衰盈亏。中医理论认为,肾虚主要体现在腰膝酸痛、腿软、耳鸣耳聋、齿发脱落、失眠多梦、潮热盗汗、性功能减退、男子兼见遗精、女子经少、经闭或早衰等方面,其症状与现代医学理论中疲劳或慢性疲劳综合征的症状基本一致,都是人生理机能衰退的表现。因此,要想缓解体力疲劳、提高精力、养生保健及防止衰老等,都应从补养肾精肾气入手调理。
本发明按照中医理论合理配伍覆盆子、黄精、玉竹、酸枣仁、枸杞、红枣等6种药食同源药材。组方有同补气神、调和阴阳、益气扶正、补肝肾的功效,可缓解慢性肾脏病变及各种疾病引起的肾气虚之证,缓解体力疲劳,提高人体精力,预防早衰,促进人体各项功能恢复。本发明中覆盆子补肾固精壮阳缩尿,养肝明目为君药。黄精、玉竹补气养阴润肺,益肾健脾,生津止渴为臣药。酸枣仁养心补肝,宁心安神;枸杞滋补肝肾,益精明目;红枣补中益气,养血安神,三者共为佐药。全方诸药合用,共奏补肾健脾,养心补肝,益气扶正以祛邪,邪去正自安而病情缓解乃至向愈。目前尚无与本发明相同组方及其制剂的文献报道。
发明内容
本发明为了克服现有技术存在的不足,提供一种用于缓解体力疲劳的制剂,该制剂具有显著的缓解体力疲劳的效果,能够滋阴补肾、益气镇痛、保持或增强卵巢功能,能够广泛适用于绝大多数人群。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:一种用于缓解体力疲劳的制剂,其主要由下述重量份的原料组成:覆盆子1~10份、黄精1~8份、玉竹1~8份、酸枣仁1~6份、枸杞0~3份和红枣0~3份。
作为本发明的优选实施方式,用于缓解体力疲劳的制剂主要由下述重量份的原料组成:覆盆子4~8份、黄精3~5份、玉竹3~5份、酸枣仁2~4份、枸杞1~2份和红枣1~2份。
作为本发明的最佳实施方式,用于缓解体力疲劳的制剂主要由下述重量份的原料组成:覆盆子6份、黄精4份、玉竹4份、酸枣仁3份、枸杞2份和红枣2份。
本发明用于缓解体力疲劳的制剂由覆盆子、黄精、玉竹、酸枣仁、枸杞和红枣的水提物和或醇提物作为活性成份与药学上能够接受的附加剂组成药物组合物,所述药物组合物为颗粒状制品或粉状制品。
附加剂为膳食营养补充剂、填充剂、防腐剂、防腐剂及矫味剂的混合物中的一种或多种以任意比例混合而成的混合物。填充剂为符合中国食品法规要求的辅料。
膳食营养补充剂为矿物质、维生素、纳豆、蛋白质粉中的任意一种或两种以任意比例混合而成的混合物;矿物质为硒、锌、钙、镁、钾、铁、铬、锰中的一种或多种以任意比例混合而成的混合物;维生素为β-胡萝卜素、维生素B1、维生素B6、维生素C、维生素D、维生素E中的任意一种或多种以任意比例混合而成的混合物;蛋白质粉为大豆分离蛋白、乳清蛋白、豌豆蛋白、胶原蛋白中的任意一种或多种以任意比例混合而成的混合物。
本发明用于缓解体力疲劳的制剂的制备方法,具体包括如下步骤:
a、按组方份数比取覆盆子、黄精、玉竹、酸枣仁、枸杞及红枣,加水煎煮3次,每次1小时,制得提取液;步骤a中第一次煎煮加水量为上述原药料总重量的8~12倍,后两次加水量为上述原药料总重量的6 ~10倍。进一步优选地,第一次加水量为12倍,后两次加水量为10倍;
b、收集上述提取液,滤过,将3次的提取液合并,滤液浓缩至需要浓度,冷却至室温,提取方法采用水提醇沉法,缓慢加入浓度为95%的乙醇并快速搅拌,使含醇量为50%,密封放置12h,离心得上清液,回收乙醇;
c、收集上述上清液,经60℃减压干燥至干膏,粉碎即制得植物提取物;
d、取上述植物提取物,加入附加剂,混匀,用80%乙醇制成软材,过10目药筛,60℃干燥,整粒、分装。
在本发明粉状制品的制备方法中,步骤c为:收集上清液,加入附加剂,定容成一定体积,滤过、分装和灭菌。灭菌方法可以是煮沸灭菌法,也可以是流通蒸汽灭菌法或热压灭菌法。
覆盆子:甘能补益,酸能收敛,性温而不燥热,补肾阳而无伤阴之弊,固脱而无凝滞之害,补而能固,有益下封藏之功,善治肾虚不固之证。覆盆子作为补肾固精壮阳的代表药,在临床上常用于治疗神经衰弱,遗精滑精,早泄阳萎,遗尿尿频,虚劳,目暗昏花等证。药理实验证明,覆盆子具有抗诱变,抗炎,抗氧化,改善学习记忆能力,延缓衰老,增强免疫等作用。
黄精:甘,平。归脾、肺、肾经。具有补气养阴,健脾,润肺,益肾的功效。用于治疗脾胃气虚,体倦乏力,胃阴不足,口干食少,肺虚燥咳,劳嗽咳血,精血不足,腰膝酸软,须发早白,内热消渴等证,是中医常用滋补药物之一。现代研究表明,黄精具有抗病原微生物(细菌、真菌、病毒等),降血脂,降血糖,降血压,抗衰老,抗肿瘤,抗疲劳,抗辐射,耐缺氧,抗氧化活性,增强免疫,拮抗环磷酰胺引起的白细胞下降,强中性粒细胞吞噬作用,扩张冠状动脉,增加冠脉血流量等作用。
玉竹:《神农本草经》列为上品。甘,微寒。归肺、胃经。具有养阴润燥,生津止渴的功效。用于治疗肺胃阴伤,燥热咳嗽,咽干口渴,内热消渴等证。现代研究表明,玉竹具有提高免疫力,强心,降血糖,降血脂,延长动物寿命等作用。
酸枣仁:《本草纲目》将其列为上品。甘、酸,平。归肝、胆、心经。具有养心补肝,宁心安神,敛汗,生津的功效。用于治疗虚烦不眠,惊悸多梦,体虚多汗,津伤口渴等证。现代研究表明,酸枣仁具有镇静催眠,镇痛,抗惊厥,降血脂,抗血小板聚集,增强免疫,降血压,抗缺氧,抗心肌缺血,抗心率失常,抗衰老,抗辐射等作用。
枸杞:始载于《神农本草经》被列为上品。甘,平。归肝、肾经。具有滋补肝肾,益精明目的功效。用于治疗虚劳精亏,腰膝酸痛,眩晕耳鸣,阳萎遗精,内热消渴,血虚萎黄,目昏不明等证。
红枣:始载于《神农本草经》被列为上品。甘,温。归脾、胃、心经。具有补中益气,养血安神的功效。用于治疗脾虚食少,乏力便溏,妇人脏躁等证。
本发明提供的颗粒状制品、粉状制品,包含药学上可接受的附加剂,包括填充剂、防腐剂、膳食营养补充剂中的任意一种、两种及以上以任意比例混合而成的混合物。其中填充剂为符合中国食品法规要求的辅料。包括但不仅限于乙醇、糊精、淀粉、蔗糖、葡萄糖、蜂蜜、甘露醇、木糖醇、甜菊素、乳糖、果糖、蛋白糖、麦芽糖醇、阿斯巴甜、食品用香精香料、枸橼酸,可单独使用,也可组合使用。
防腐剂为符合国家标准规定的常用辅料,包括但不仅限于薄荷油、桂皮醛、桉叶油、苯甲酸、苯甲酸钠、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、山梨酸,可单独使用,也可组合使用。
本发明的功能食品,是通过将上述配方组成的原料经过提取或其他方式加工,制成中间原料,需要时加入食品可用可接受的附加剂,按照制剂学的常规技术制成。所述的中间原料可以通过分别提取原料得到,也可以通过共同提取原料得到,也可以通过其他方式得到,如粉碎、压榨、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酮提、层析等方法得到,这些中间原料可以是浸膏形式,可以是干浸膏,也可以是流浸膏,根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。
本发明采用覆盆子、黄精、玉竹、酸枣仁、枸杞及红枣的提取物混合物作为原料,制成颗粒状制品或粉状制品。颗粒状制品或粉状制品具有缓解体力疲劳,提高精力的保健功能,可滋阴补肾、益气镇痛,保持或增强卵巢功能。本发明对多种原因引起的疲劳和亚健康人群具有明显的抗疲劳效果,无明显不良反应,无依赖性;工艺简便易行,生产成本可控,有利于工业化生产,可根据需要制成多种剂型。
本发明的中药保健食品还在缓解体力疲劳、提高精力和延缓衰老方面有很大的用途。患有慢性疲劳综合征或久劳久病的人群大多肝肾虚弱,气血不足,宜组合补肾固精、养阴柔肝 、补气活血中药。该保健食品按中医药理论科学组方,安全无副作用。本方以覆盆子为君药,重补肾气,固精养髓,以祛疲提神,治疗肾伤疲劳证。臣以补气养阴益肾之黄精,养阴生津润燥之玉竹,共奏补气滋阴、润肺健脾之功,以祛疲养神,治疗脾肺伤疲劳证。佐用酸枣仁养心补肝、宁心安神,红枣补中益气,养血安神,以祛疲益神,治疗心伤疲劳证;酸枣仁滋补肝肾、益精明目,以祛疲醒神,治疗肝伤疲劳证。诸药合用,补润得当,气充脉复,脏腑调和,疲劳自解。
本发明的有益效果是:本发明基于上述天然植物的特定功效,采用具有医疗价值的药食同源的植物,运用自然植物,将传统的养生方法与医学理论相结合,着眼于缓解体力疲劳、提高精力、延缓衰老等,将覆盆子、黄精、玉竹、酸枣仁、枸杞和红枣6种药食同源植物优化复配。一方面,补虚固元,滋养机体,虚得补,正则旺,疲劳自除;另一方面,补肾壮阳,荣筋养髓,脑有所养,骨骼得健,疲劳可消。本发明的还具有以下优点:口感好,安全有效,适合大多数人群长期饮用;原料皆来源于药食同源中药或天然食物,安全有效,无不良作用,营养全面。
附图说明
图1是本发明颗粒状制品对热板法致痛小鼠的镇痛作用的示意图;
图2是本发明颗粒状制品对冰醋酸致痛小鼠的镇痛作用的示意图;
图3是本发明颗粒状制品对小鼠耳廓肿胀的影响的示意图;
图4是本发明吸光度A值与伊文思蓝渗出量之间的线性相关性图;
图5是本发明颗粒状制品对小鼠毛细血管通透性的影响的示意图;
图6是本发明颗粒状制品对小鼠足趾肿胀的影响的示意图;
图7是本发明颗粒状制品对小鼠游泳时间的影响的示意图;
图8是本发明颗粒状制品对阴道上角化细胞的影响的示意图;
图9是本发明吸光度OD值与孕酮P量(ng/mL)之间的线性相关性图;
图10是本发明颗粒状制品对雌鼠孕酮P含量的影响的示意图;
图11是本发明颗粒状制品对雌鼠体重、子宫和卵巢重量及脏器指数的影响的示意图;
图12是本发明子宫切片显微图,HE染色×2倍;
其中:a、空白组;b、颗粒状制品低剂量组;c、颗粒状制品中剂量组;d、颗粒状制品高剂量组;e、定坤丹组;
图13是本发明卵巢切片显微图;
其中:a、卵巢切片全视野图(×1倍);b、空白组(×10倍);c、颗粒状制品低剂量组(×10倍);d、颗粒状制品中剂量组(×10倍);e、颗粒状制品高剂量组(×10倍);f、定坤丹组(×10倍);g、卵泡形态(×40倍);
图14是本发明颗粒状制品对雌鼠各级卵泡总数和黄体数目的影响的示意图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1:粉状制品
配方:覆盆子60g、黄精40g、玉竹40g、酸枣仁30g、枸杞10g、红枣10g和苯甲酸钠0.6g。
制备方法:取覆盆子、黄精、玉竹、酸枣仁、枸杞、红枣,加水煎煮3次,每次1小时,第一次加水量为上述原料总量的12倍,后两次加水量为上述原料总量的10倍。收集提取液,滤过,将三次的提取液合并,滤液浓缩至一定浓度,冷却至室温,缓慢加入95%乙醇并快速搅拌,使含醇量为50%,密封放置12h,离心得上清液,加入附加剂,定容成一定体积,滤过。分装。灭菌。
实施例2:颗粒状制品
配方:覆盆子60g、黄精40g、玉竹40g、酸枣仁30g、枸杞10g、红枣10g、糊精40g、蔗糖 80g和80%乙醇 10mL。
制备方法:取覆盆子、黄精、玉竹、酸枣仁、枸杞、红枣,加水煎煮3次,每次1小时,第一次加水量为上述原料总量的12倍,后两次加水量为上述原料总量的10倍。收集提取液,滤过,将三次的提取液合并,滤液浓缩至一定浓度,冷却至室温,缓慢加入95%乙醇并快速搅拌,使含醇量为50%,密封放置12h,离心得上清液,经60℃减压干燥至干膏,粉碎,加入附加剂,混匀,过80目筛(五号筛),采用干法制粒,均匀喷入适量的80%乙醇,制成“手捏成团,指压即散”的软材,再以挤压的方式通过10目药筛,制成均匀的颗粒,迅速将制备得的颗粒置于60℃的烘箱中,干燥3小时。取干燥颗粒,以10目(一号筛)和65目(四号筛)进行整粒。分装。
实施例3:粉状制品
配方:覆盆子60g、黄精40g、玉竹40g、酸枣仁30g、枸杞20g、红枣15g和尼泊金乙酯0.5g。制备方法同实施例1。
实施例4:颗粒状制品
配方:覆盆子60g、黄精40g、玉竹40g、酸枣仁30g、枸杞20g、红枣15g、糊精90g、甜菊素0.04g 和80%乙醇 10mL。制备方法同实施例2。
本发明中药制剂的缓解体力疲劳,提高精力,保持或增强卵巢功能,益气镇痛的功效可通过以下4种药效学实验证明:实验Ⅰ:热板法和扭体法的镇痛实验;实验Ⅱ:二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、二甲苯致小鼠耳廓肿胀法和角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀试验的抗炎实验;实验Ⅲ:小鼠游泳的抗疲劳试验;实验Ⅳ:促排卵实验。
实验Ⅰ:热板法和扭体法的镇痛实验。
1.1实验样品与试剂
覆盆子(广州康圣药业有限公司,批号:20160912);酸枣仁(广州康圣药业有限公司,批号:20161005);黄精(广州康圣药业有限公司,批号:20161012);玉竹(广州康圣药业有限公司,批号20160928);红枣(广州康圣药业有限公司,批号:20161125);枸杞(广州康圣药业有限公司,批号:20161103)以上药材经广东药科大学中药学院马鸿雁副教授鉴定为正品。定坤丹(山西广誉远国药有限公司,批号:139170102);阿司匹林肠溶片(拜耳医药保健有限公司,批号:BJ32400);气血康胶囊(云南白药集团文山七花有限公司,批号:WEA1345);银黄颗粒(中山市恒生药业有限公司,批号:20161007);孕酮P试剂盒(上海通蔚实业有限公司);NaCl(天津市致远化学试剂有限公司,批号:20160710);二甲苯(天津市富宇精细化工有限公司,批号:20151120);伊文思蓝(上海如吉生物科技发展有限公司,批号:150722);角叉菜胶(上海麦克林生化科技有限公司,批号:C10068972);亚甲基蓝(国药集团化学试剂有限公司,批号:20151223):4%多聚甲醛固定液(武汉谷歌生物科技有限公司,批号:20160314);冰醋酸(天津市百世化工有限公司,批号:20140808);以上试剂均为分析纯。
1.2实验动物
SPF级昆明种小鼠,雌雄兼用,体质量(20士2)g,均由南方医科大学实验动物中心提供,生产许可证号SCXK(粤)2016-0041,根据实验性质和性别分笼喂养,自由采食饮水,隔天称量体重。室温22~24℃,对湿度52%~56%。
1.3仪器与厂家
RE-2000A型真空旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);SHE-D(III)型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);202-2AB型电热恒温干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司);直径8 mm打孔器(北京众实迪创科技发展有限责任公司); KQ-300DE数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);HH-S6恒温六孔水浴锅(江苏金坛金城国胜实验仪器厂);YLS-6A智能热板仪(山东省医学科学院设备站);欧诺摇床(天津市欧诺仪器仪表有限公司);8孔移液排枪(大龙兴创实验仪器(北京)有限公司);MNT-150美耐特原点数显卡尺(上海美耐特实业有限公司);OLYMPUS CKX41倒置式生物显微镜(北京中仪光科科技发展有限公司);ELX800 通用酶标仪(美国伯腾仪器有限公司(BioTek))。
1.4样品的制备
人体体重以60kg计,小鼠每日给药量以人的9倍计,阳性对照药的小鼠给药剂量以0.2mL/10g计,受试颗粒状制品颗粒的小鼠给药剂量以0.3mL/10g计。样品的具体配制如下:
①受试样品配制:取实施例2制备得的颗粒状制品,加入生理盐水(50-60℃)溶解,必要时进行超声处理,配制成低、中、高三种浓度(100、150、225mg:1mL)的混悬液。其中,颗粒状制品中浓度组的给药剂量相当于人正常剂量的9倍。
②银黄颗粒样品(59.99mg:1mL)的配制:将银黄颗粒用研钵研碎呈粉末后,称取6g加生理盐水至100mL,临用前配制。
③阿司匹林肠溶片样品(4.5mg:1mL)的配制:将阿司匹林肠溶片用研钵研碎呈粉末后,称取0.45g加生理盐水至100mL,必要时进行超声处理,临用前配制。
④气血康胶囊样品(13.5mg:1mL)的配制:气血康胶囊去胶囊壳后,称取0.54g加生理盐水至40mL,必要时进行超声处理,临用前配制。
⑤定坤丹样品(81mg:1mL)的配制:将定坤丹用研钵研碎呈粉末后,称取3.24g加(50-60℃)生理盐水至40mL,超声处理,临用前配制。
⑥0.8%醋酸溶液:精确量取0.8mL的冰醋酸加蒸馏水定容到100mL的容量瓶中,临用前配制。
⑦0.5%伊文思蓝生理盐水:称取0.5g伊文思蓝粉末充分溶解于100mL生理盐水,经0.22μm微孔滤膜滤过,临用前配制。
⑧0.8%醋酸生理盐水:精确量取0.8mL的冰醋酸加生理盐水定容到100mL的容量瓶中,临用前配制。
⑨1%角叉菜胶悬液:临用前24h称取50mg角叉菜胶粉末溶于50mL生理盐水中,反复振摇至无难溶物凝胶状,必要时进行超声处理,置于4℃保存。
⑩5%的美蓝溶液:称取0.5g亚甲基蓝粉末充分溶解于100mL的95%乙醇溶液,临用前配制。
实验Ⅰ:小鼠的镇痛实验。
2.1.1热板法:
取健康昆明种雌性小鼠(18-22 g),将智能热板仪温度调至(55±0.5)℃,预热10分钟后,将雌性小鼠每次1只放在热板上,小鼠自放上至出现舐左后足所需时间(s)作为该鼠的痛阈值,将筛选合格(舔足时间在5s至30s )的雌性小鼠75只按随机数字表分为5组,每组15只,分别为生理盐水组(0.2 mL/10 g)、阿司匹林阳性对照组,颗粒状制品低剂量组、中剂量组、高剂量组。每组给药前重复测定痛阈值,取两次痛阈平均值作为正常痛阈值。适应性喂养3天后,按不同组别进行相应药物灌胃,每天1次,隔天称次体重,根据体重逐只给药,连续给药7天。末次给药后分别 于30min、60min、90min 测量小鼠的痛阈值,若小鼠60s内无痛反应,立即取出,按60s计算,记录结果,计算各组痛阈提高百分率,结果以 SPSS22 进行组间t 检验,以P<0.05为有统计学意义。
2.1.2扭体法:
取健康昆明种小鼠(18-22 g)75只,雌雄各半,按随机数字表分为5组,每组15只,分别为生理盐水组(0.2 mL/10 g)、阿司匹林阳性对照组,颗粒状制品低剂量组、中剂量组、高剂量组。适应性喂养3天后,按不同组别进行相应药物灌胃,每天1次,隔天称次体重,根据体重逐只给药,连续给药7天。均于末次给药后30min,各小鼠按0.1ml/10g的剂量腹腔注射新配制的 0.8%醋酸溶液,观察记录15min 内每只小鼠出现扭体反应(腹部收缩内凹,伸展后肢,臀部抬高,蠕行)的次数,计算镇痛百分率,结果以 SPSS22 进行组间 t 检验,以P<0.05为有统计学意义。镇痛百分率 (%)=(生理盐水对照组平均扭体次数 - 给药组平均扭体次数)/生理盐水对照组平均扭体次数×100%
实验Ⅱ:小鼠的抗炎实验。
二甲苯致小鼠耳廓肿胀法:
取健康昆明种小鼠(18-22g)105只,雌雄各半,按随机数字表分为7组,每组15只,分别空白组(0.2 mL/10 g生理盐水),模型组(0.2 mL/10 g生理盐水),银黄颗粒组,阿司匹林组,颗粒状制品低剂量组、中剂量组、高剂量组。适应性喂养3天后,采用小鼠耳肿胀抗炎法,按不同组别进行相应药物灌胃,每天1次,隔天称次体重,根据体重逐只给药,连续给药10天。末次给药后0.5h,除空白组外,其余各组均将0.02ml二甲苯均匀涂于每只小鼠左耳耳廓两面致炎,右耳不涂作为正常对照。1h后脱颈处死各小鼠,用直径 8mm 打孔器在左耳及右耳同一部位打下圆耳片,用电子天平称重,以左耳重量减去右耳重量为肿胀度,分别计算耳肿胀度及肿胀抑制率,结果以 SPSS22进行组间 t 检验,以P<0.05为有统计学意义。
肿胀抑制率(%)=(模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/(模型组平均肿胀度)×100%
二甲苯致小鼠耳廓肿胀法小鼠腹腔毛细血管通透性试验:
取健康昆明种小鼠(18-22 g)90只,雌雄各半,按随机数字表分为6组,每组15只。分别为正常组(生理盐水0.2 mL/10 g),模型组(生理盐水0.2 mL/10 g),银黄颗粒组,颗粒状制品低、中、高剂量组。适应性喂养3天后,按不同组别进行相应药物灌胃,每天1次,隔天称次体重,根据体重逐只给药,连续给药10天。最后一次给药前禁食12h,于末次给药30min后,各鼠均尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水0.1ml/10g(经微孔滤膜滤过),轻揉腹部,立即腹腔注射0.8%醋酸生理盐水0.2ml/10g(正常组不注射醋酸作为对照),30min后脱颈处死各小鼠,剖开腹腔,用5ml生理盐水冲洗次数,收集洗液10mL,3000r/min离心20min,取上清液,用纯水校零,用紫外分光光度计在590nm处测定吸收度(OD值),结果以 SPSS22进行组间 t 检验,以P<0.05为有统计学意义。
另外,根据吸光度A值推出伊文斯蓝浓度,方法:做0.5%伊文斯蓝溶液的对倍稀释并于分光光度计上590nm处比色测吸光度A值,已知浓度测定点重复测定2次,其均值作为A值,探求A值与渗出量(μg/mL)之间的线性相关性,求出各组别的伊文思蓝渗出量。给药组抑制率(%)=(模型组吸光度平均值-给药组吸光度平均值)/模型组吸光度平均值×100%。
角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀试验:
取健康昆明种小鼠(18-22 g)105只,雌雄各半,按随机数字表分为7组,每组15只,分别为空白组(生理盐水0.2 mL/10 g)、模型组(生理盐水0.2 mL/10 g)、阿司匹林组、银黄颗粒组,颗粒状制品低剂量组、中剂量组和高剂量组。适应性喂养3天后,按不同组别进行相应药物灌胃,每天1次,隔天称次体重,根据体重逐只给药,连续给药10天。末次给药后先用游标卡尺(精度0.02mm)测所有小鼠左后肢足跖的厚度,然后于左后肢足跖处皮下注射1%角叉菜胶悬液(每只0.02mL),空白组注射等量生理盐水,造成急性足跖肿胀模型。分别测定注射1%角叉菜胶悬液后30min、1h、2h、3h小鼠致炎后后足跖的厚度,以致炎后足跖厚度与致炎前后足跖的厚度之差作为肿胀度,以肿胀度作为检测指标,进行统计学分析,考察药物对角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀的影响。致炎后次日处死小鼠,取小鼠左右后足跖,精确称重,左右足跖差值为炎性肿胀度,计算小鼠足跖肿胀抑制率。结果以 SPSS22进行组间 t 检验,以P<0.05为有统计学意义。肿胀率计算公式: E(%)=(致炎后体积-致炎前体积)/致炎前体积×100%。足跖肿胀抑制率(%)=(左足重量-右足重量)/右足重量×100%
实验Ⅲ:小鼠游泳的抗疲劳试验。
取健康昆明种小鼠(18-22 g)75只,雌雄各半,按随机数字表分为5组,每组15只,分别为生理盐水组(0.2 mL/10 g)、气血康胶囊组,颗粒状制品低剂量组、中剂量组、高剂量组。适应性喂养3天后,按不同组别进行相应药物灌胃,每天1次,隔天称次体重,根据体重逐只给药,连续给药10天。给药1 h后将小鼠放入水深30cm,水温25℃ 的游泳箱(规格72*53*43cm)中游泳,每批8只。每一批小鼠下水之前更换干净水,测量水温。在整个实验过程中使每只小鼠四肢保持运动,如果小鼠漂浮在水面四肢不动,用木棒在其周围附近搅动。记录小鼠自游泳开始至死亡时间,作为小鼠负重游泳的力竭死亡时间(当竭力死亡时间大于200min时,以200min计)。结果以 SPSS22进行组间 t 检验,以P<0.05为有统计学意。
实验Ⅳ:小鼠的促排卵实验。
取健康昆明种未成年雌性小鼠(18-22 g)75只,随机为5组,每组15只,分别为生理盐水组(0.2 mL/10 g),定坤丹组,好要汤颗粒状制品低剂量组、中剂量组、高剂量组。适应性喂养5天后,按不同组别进行相应药物灌胃,每天1次,隔天称次体重,根据体重逐只给药,连续给药15天(3-4个周期)。按实验要求进行各项指标的考察,结果以 SPSS22进行组间 t检验,以P<0.05为有统计学意义。
2.4.1 阴道角化上皮细胞检查:
于给药第10d后,每日上午9点,各组小鼠连续每天阴道涂片1次。将无菌棉签用生理盐水浸湿后插入小鼠阴道,充分蘸取分泌物后取出,在玻片上轻轻滚动,使分泌物均匀地涂布于玻片上,自然风干,以新配置的5%美蓝溶液(95%乙醇溶液配制)染色,2h后用水漂去多余染色液,待干,置于生物显微镜下观察阴道角化上皮细胞的情况,连续涂片1个动情周期(5d)。以角化上皮细胞面积大于涂片总面积的50%作为阳性判断标准,计算阳性率。
2.4.2 血清中孕酮P放免检测:
于末次给药1h后,各组小鼠均用摘眼球法取血,将所取血液置4℃环境静置2h后,离心(3000 r/min,10min),分离血清,按照试剂盒说明书操作。测定小鼠血清中孕酮P的含量。孕酮P酶联免疫分析(ELISA)的具体操作步骤如下:
①标准品的加样:设置标准品孔和样品孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。
②加样:分别设置空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μL,然后再加带测样品10μL(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不要触及孔壁,轻轻晃动混匀。
③加酶:每孔用移液排枪加酶标试剂100μL,除空白空外。
④温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
⑤配液:用20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
⑥洗涤:小心揭开封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
⑦显色:每孔先加显色剂A50μL,再加显色剂B50μL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
⑧终止:每孔加终止液50μL,终止反应(此时蓝色立即转蓝色)。
⑨测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD)值。测定应在加终止液后15分钟内进行。
⑩计算:以标准物的浓度为横坐标,OD值为横坐标,绘制标准曲线,得出直线回归方程式,根据样品的OD值算出相应的浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
2.4.3 子宫、卵巢重量及指数测定
摘眼球取血后迅速将小鼠处死,剖开腹腔,取出子宫和两侧卵巢,剥离周围组织和脂肪,迅速以电子天平称量子宫和卵巢的湿重。并换算成脏器指数:子宫指数=子宫重量(mg)/100g体重,卵巢指数=卵巢重量(mg) /100 g体重。
2.4.4 子宫和卵巢组织形态学检查
将所取的新鲜子宫和卵巢组织标本以4%多聚甲醛固定液固定,常规脱水,浸蜡包埋,切片,HE染色。生物学显微镜检并电脑摄像,观察组织形态学变化,并记录双侧卵巢切片中各级卵泡总数和黄体数目。
实验结果及分析
图1是本发明的一个实施方式中,颗粒状制品对热板法致痛小鼠的镇痛作用的示意图。
由图1可知,给药后30min,颗粒状制品低、中、高剂量组的痛阈值提高百分率与生理盐水组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。给药后60min,颗粒状制品低剂量组、高剂量组的痛阈值提高百分率与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05);给药后90min,颗粒状制品中剂量组、高剂量组的痛阈值提高百分率与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),即颗粒状制品能不同程度地提高热板法疼痛模型小鼠痛阈值、减少疼痛反应次数,其镇痛效应具有明显的量效关系,低剂量组的镇痛作用为最差。(注:与生理盐水组比较:*P<0.05, * *P<0.01;与阿司匹林组比较:▲P<0.05, ▲▲P<0.01。)
图2是本发明的一个实施方式中,颗粒状制品对冰醋酸致痛小鼠的镇痛作用的示意图。
由图2可知,颗粒状制品低、中、高剂量组均能显著地减少醋酸致痛小鼠的扭体次数,与生理盐水组比较差异均有统计学意义(P<0.01);能不同程度地延长扭体的潜伏期,颗粒状制品高剂量组与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.01)。从镇痛率看,其镇痛效应具有明显的量效关系。(注:与生理盐水组比较:*P<0.05, * *P<0.01;与阿司匹林组比较:▲P<0.05, ▲▲P<0.01。)
图3是本发明的一个实施方式中颗粒状制品对小鼠耳廓肿胀的影响的示意图。
由图3可知,颗粒状制品低、中、高剂量组均能明显抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀,抗炎效应与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),但组间差异不明显(P>0.05);颗粒状制品高剂量组与阿司匹林组及银黄颗粒组比较差异无统计学意义(P>0.05)。从抑制率看,颗粒状制品对耳廓肿胀的抑制率呈一定的剂量依赖关系,随剂量的增加,抑制作用有增加的趋势。(注:与模型组比较:*P<0.05, * *P<0.01;与阿司匹林组比较:▲P<0.05, ▲▲P<0.01;与银黄颗粒组相比:▼P<0.05,▼▼P<0.01。)
图4-5是本发明的一个实施方式中的示意图。其中,图4吸光度A值与伊文思蓝渗出量(μg/mL)之间的线性相关性图,图5颗粒状制品对小鼠毛细血管通透性的影响的示意图。
由图5可知,颗粒状制品低、中、高剂量组均能降低小鼠毛细血管通透性,减少腹腔液体的渗出,具有明显的抗炎作用,抗炎效应与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。颗粒状制品中剂量组、高剂量组与银黄颗粒组比较差异无统计学意义(P>0.05)。从抑制率看,颗粒状制品低剂量组的抑制率为最差,但低中高剂量组间没有明显的量效关系。(注:与空白组比较:*P<0.05, * *P<0.01;与银黄颗粒组比较:▲P<0.05, ▲▲P<0.01;与模型组相比:▼P<0.05,▼▼P<0.01。)
图6是本发明的一个实施方式中颗粒状制品对小鼠足趾肿胀的影响的示意图。
由图6可知,注射角叉菜胶致炎后30min,颗粒状制品中剂量组、高剂量组对角叉菜胶所致正常小鼠足趾肿胀有抑制作用,抗炎效应与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);致炎后2h、3h,颗粒状制品高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);致炎后24h,颗粒状制品低、中、高剂量组与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),即颗粒状制品对角叉菜胶所致正常小鼠足趾肿胀的抑制作用不明显。(注:与空白组比较:*P<0.05, * *P<0.01;与模型组比较:▲P<0.05,▲▲P<0.01。)
图7是本发明的一个实施方式中颗粒状制品对小鼠游泳时间的影响的示意图。
由图7可知,颗粒状制品低、中、高剂量组均能明显延长小鼠游泳的力竭死亡时间,抗疲劳效应与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),且组间呈明显的量效关系,随着给药剂量增加,抗疲劳效果显著增强;颗粒状制品的抗疲劳功效优于气血康胶囊组,中剂量组、高剂量组与气血康胶囊组比较差异有统计学意义(P <0.01)。(注:与生理盐水组比较:*P<0.05, * *P<0.01;与气血康胶囊组比较:▲P<0.05, ▲▲P<0.01。)
图8-14是本发明的一个实施方式中的示意图。其中,图8是颗粒状制品对雌鼠阴道上角化细胞的影响的示意图;图9是吸光度OD值与孕酮P量(ng/mL)之间的线性相关性图;图10是颗粒状制品对雌鼠孕酮P含量的影响的示意图;图11是颗粒状制品对雌鼠体重、子宫和卵巢重量及脏器指数的影响的示意图;图12是雌鼠的子宫HE切片的示意图;图13是雌鼠的卵巢HE切片的示意图;图14是颗粒状制品对雌鼠各级卵泡总数和黄体数目的影响的示意图。
颗粒状制品对雌鼠阴道上角化细胞的影响结果如下:
经涂片显微观察,空白组可观察到角化上皮细胞数量和白细胞数量呈反比的规律性变化,呈现明显的动情前期、动情期、动情后期和动情间期的周期性变化。颗粒状制品组和阳性对照组在采样时间内可观察到阴道涂片上出现成片或团块的角化上皮细胞,只有少量的白细胞,表现为阴道脱落细胞性周期延长、不规则。由图8可知,定坤丹组、颗粒状制品中剂量组和高剂量组均能不同程度地延长雌性小鼠的动情期,角化上皮细胞大于50%的阳性率与空白组比较,差异有统计学意义(P <0.05或P <0.01)。定坤丹组和颗粒状制品高剂量组比较差异无统计学意义(P >0.05)。(注:与空白组比较:*P<0.05, * *P<0.01;与定坤丹组比较:▲P<0.05, ▲▲P<0.01。)
颗粒状制品对雌鼠孕酮P含量的影响结果如下:
由表10可知,颗粒状制品低、中、高剂量组与空白组比较,能不同程度地升高小鼠血清中孕酮P含量;颗粒状制品高剂量组与空白组比较,差异有统计学意义(P <0.01)。颗粒状制品升高孕酮P含量的效果优于定坤丹组,高剂量组与坤丹组比较,差异有统计学意义(P <0.01)。
颗粒状制品对雌鼠体重、生殖器官重量及脏器指数的影响结果如下:
由图11可知,与空白组比较,颗粒状制品低、中、高剂量组体重无明显变化,子宫重量有所增加,子宫指数稍大,但差异均无统计学意义(P>0.05);颗粒状制品高剂量组与空白组比较,卵巢重量明显增加,卵巢指数明显增大,差异有统计学意义(P<0.01)。与定坤丹组比较,颗粒状制品低、中、高剂量组的小鼠体重、子宫重量、子宫指数均无明显差异(P>0.05);颗粒状制品中、低剂量组与定坤丹组比较,卵巢重量偏小,卵巢指数偏低,差异有统计学意义(P<0.01);颗粒状制品高剂量组与定坤丹组比,两者卵巢重量和卵巢指数均无明显差异(P>0.05),即高剂量的颗粒状制品能增大小鼠的卵巢重量和卵巢指数。
颗粒状制品对子宫和卵巢形态的影响结果如下:
由图12、图13可知,空白组子宫腔内膜上皮厚度较薄,腺腔轻度扩张,血管较少;卵巢体积稍小,色泽苍白,卵泡结构不清,或囊泡呈原始状态。卵巢皮质部可见不同发育阶段的卵泡,可见少量黄体和白体形成,未见囊性卵泡,可见适量脂滴。与空白组比较,颗粒状制品低、中、高剂量组子宫外观粗大发紫,宫腔内膜上皮变厚,腺腔扩张,可见核下空泡,间质疏松;卵巢色泽更鲜艳,卵泡明显增大,卵泡未见明显的囊性扩张、细胞变形、坏死炎细胞浸润等病变;髓质未见充血、水肿及炎细胞浸润。表面见较多黄体,黄体的颗粒细胞发育良好,形态完整,排列整齐紧致,说明卵巢已有排卵。
颗粒状制品对卵巢中各级卵泡总数和黄体数目的影响结果如下:
由图14可知,与空白组相比,颗粒状制品低、中、高剂量组的卵泡总数有明显增加的趋势,但两者差异无统计学意义(P>0.05)。与空白比较,颗粒状制品低剂量组、中剂量组的黄体数目有所增加,但差异无明显差异(P>0.05),颗粒状制品高剂组的黄体数目明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。
本发明在药效实验阶段,考察了实施例2中颗粒状制品对小鼠抗炎镇痛、抗疲劳、促排卵作用的影响,结果表明本发明具有一定的抗炎镇痛作用,具有显著的抗疲劳功效,在一定程度上能升高孕酮P含量,促进子宫和卵巢发育,保持或增强生殖器官的功能,促进卵泡发育及排卵。总之,通过上述各种实验可以证明,本发明的中药保健食品具有缓解体力疲劳的保健功能,可滋阴补肾、益气镇痛,保持或增强卵巢功能。
最后应当说明的是,以上内容仅用以说明本发明的技术方案,而非对本发明保护范围的限制,本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换,均不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (6)
1.一种用于缓解体力疲劳的制剂,其特征在于:所述制剂主要由下述重量份的原料组成:覆盆子1~10份、黄精1~8份、玉竹1~8份、酸枣仁1~6份、枸杞0~3份和红枣0~3份。
2.根据权利要求1所述的用于缓解体力疲劳的制剂,其特征在于:所述制剂主要由下述重量份的原料组成:覆盆子4~8份、黄精3~5份、玉竹3~5份、酸枣仁2~4份、枸杞1~2份和红枣1~2份。
3.根据权利要求2所述的用于缓解体力疲劳的制剂,其特征在于:所述制剂主要由下述重量份的原料组成:覆盆子6份、黄精4份、玉竹4份、酸枣仁3份、枸杞2份和红枣2份。
4.根据权利要求1、2或3所述的用于缓解体力疲劳的制剂,其特征在于:所述制剂由覆盆子、黄精、玉竹、酸枣仁、枸杞和红枣的水提物和或醇提物作为活性成份与药学上能够接受的附加剂组成药物组合物,所述药物组合物为颗粒状制品或粉状制品。
5.根据权利要求4所述的用于缓解体力疲劳的制剂,其特征在于:所述附加剂为膳食营养补充剂、填充剂、防腐剂、防腐剂及矫味剂的混合物中的任意一种或多种以任意比例混合而成的混合物,所述填充剂为符合中国食品法规要求的辅料。
6.根据权利要求5所述的用于缓解体力疲劳的制剂,其特征在于:所述的膳食营养补充剂为矿物质、维生素、纳豆、蛋白质粉中的任意一种或多种以任意比例混合而成的混合物;
所述矿物质为硒、锌、钙、镁、钾、铁、铬、锰中的任意一种或多种以任意比例混合而成的混合物;
所述维生素为β-胡萝卜素、维生素B1、维生素B6、维生素C、维生素D、维生素E中的任意一种或多种以任意比例混合而成的混合物;
所述蛋白质粉为大豆分离蛋白、乳清蛋白、豌豆蛋白、胶原蛋白中的任意一种或多种以任意比例混合而成的混合物。
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