具体实施方式
实施例1:
取重量百分数40%的黄芪、27%的枸杞子、3%的冬虫夏草、20%的人参和10%的五味子,粉碎过80目筛,装入400mg的胶囊。
实施例2:
取重量百分数45%的黄芪、7%的枸杞子、23%的冬虫夏草、22%的人参和3%的五味子,粉碎过80目筛,制成1g的粉剂装袋。
实施例3:
取重量百分数50%的黄芪、12%的枸杞子、10%的冬虫夏草、23%的人参和5%的五味子,粉碎过80目筛,压片成500mg的片剂。
实施例4:
取重量百分数55%的黄芪、15%的枸杞子、5%的冬虫夏草、7%的人参和18%的五味子,粉碎过80目筛,装入400mg的软胶囊。
实施例5:
取重量百分数60%的黄芪、16%的枸杞子、15%的冬虫夏草、3%的人参和6%的五味子,粉碎过80目筛,加入原料体积10倍蒸馏水制成10ml每支的口服液。
实施例6:
本发明抗疲劳功能的研究
1.材料
1.1样品:由三普药业股份有限公司提供,人体推荐量为0.45×4/人/日(30mg/kg.bw)。
1.2实验动物及饲养
SPF级雄性ICR小鼠,体重19~22g,由四川省医学科学院四川省人民医院实验动物研究所提供(动物合格证号:SCXK(川)2004-16号)。饲养条件:屏障级动物房(四川省实验动物管理委员会许可证号:SYXK(川)2008-011)。
1.3主要仪器
SBA-生物传感分析仪,奥林巴斯AU400型自动生化分析仪,VIS-7200可见分光光度计,匀浆机,离心机,电子天平。以上器材由四川大学华西公共卫生学院分析测试中心提供。
2.实验方法
2.1剂量选择
将实验动物随机分为空白对照组和3个本发明试验组。受试物剂量分别为300mg/kg.bw、600 mg/kg.bw、900 mg/kg.bw(分别相当于人体推荐摄入量的10、20和30倍)。灌胃液配制:称取0.6g、1.2g和1.8g本发明样品,分别溶于40ml蒸馏水中,按20 mg/kg.bw灌胃。空白对照组动物以蒸馏水灌胃,各实验组动物以相应剂量的蒸馏水溶液灌胃,每日一次,连续灌胃30天后进行实验
2.2实验步骤
2.2.1负重游泳实验:末次给予受试物30min后,将尾部负荷5%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。箱中水深不少与30cm,水温25±1℃,记录小鼠自游泳开始至死亡的时间。
2.2.2血乳酸测定:末次给予受试物30min后,将动物置温度为30℃的水中不负重游泳10min,并于游泳前、游泳后立即、游泳后休息20min各采眼球血20μL测定乳酸含量。并按下述公式计算血乳酸曲线下面积,以判断运动后血乳酸变化情况。血乳酸曲线下面积=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min血乳酸值+2×游泳后休息20min血乳酸值)
2.2.3血清尿素氮测定:末次给予受试物30min后,将小鼠置温度为30℃的水中不负重游泳90min,休息60min后采眼球血0.5mL,血凝固后取血清用奥林巴斯AU400型自动生化分析仪测定血清尿素氮含量。
2.2.4肝糖原测定:于末次给予受试物30min处死动物,取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干,迅速称取肝脏100mg,测定肝糖原含量(蒽酮法)。
3.实验数据统计
实验数据用PEMS for Windows3.0统计软件包进行方差分析;方差不齐数据进行适当的变量转换;若变量转换后仍未达到方差齐者,用秩和检验统计。
4结果
4.1本发明对小鼠体重的影响
由表1-4可见,本发明三个剂量组合空白对照组间小鼠初始体重、实验中期体重和实验结束时体重无显著性差异(P>0.05)。表明本发明对小鼠体重无影响。
4.2本发明对小鼠负重游泳时间的影响
表5 本发明对小鼠负重游泳时间的影响()
由表5可见,本发明中剂量组和高剂量组小鼠负重游泳时间显著长于空白对照组(P<0.05)。
4.3本发明对小鼠血乳酸含量的影响
表6本发明对小鼠血乳酸含量的影响()
由表6可见,本发明各剂量组游泳后三个时点血乳酸曲线下面积与空白对照组无显著性差异(P>0.05)。
4.4本发明对小鼠血清尿素氮含量的影响
由表7可见,本发明3个剂量组血清尿素氮含量显著低于空白对照组(P<0.05,P<0.01)。
4.5本发明对小鼠肝糖原含量的影响
由表8可见,本发明低剂量组肝糖原含量显著高于空白对照组(P<0.05)。
5.总结
本发明中、高剂量组小鼠负重游泳时间显著长于空白对照组(P<0.05);低、中、高三个剂量组血清尿素氮含量显著低于空白对照组(P<0.05,P<0.01);低剂量组肝糖原含量显著高于空白对照组(P<0.05)。依据《保健食品检验与评价技术规范》2003年版可以判定,本发明具有抗疲劳的功能。
实施例7:
本发明提高耐缺氧受力功能动物实验
1 样品和方法
1.1 样品 由三普药业股份有限公司提供。
1.2 实验动物 雄性昆明种小鼠120只,体重18~20g。
1.3 剂量选择 人体每日推荐量为50ml/60kg·BW,本实验采用2倍浓缩液,设4.17ml/60kg·BW、8.33ml/60kg·BW、12.50ml/60kg·BW三个剂量组(分别相当于人体推荐量的10、20、30倍)。分别量取2倍浓缩液52.1ml、104.2ml、156.3ml,各加蒸馏水定容至250ml混匀,冰柜保存,用完再配,另设蒸馏水对照组。实验分为一、二、三组,每组40只动物。
1.4 实验方法
1.4.1 以蒸馏水作溶剂配制受试物,按20ml/60kg·BW每天一次经口灌胃小鼠,连续给予30天。
1.4.2 常压耐缺氧试验 将试验一组各剂量组的动物末次给予受试物后1小时,将各剂量组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250ml磨口瓶内(每瓶1只),用凡士林封瓶口,盖严,使之不漏气,立即计时,以呼吸停止为指标,观察小鼠因缺氧而死亡的时间。
1.4.3 亚硝酸钠中毒存活试验 将试验二组各剂量组的动物末次给予受试物后1小时,将各剂量组小鼠按220mg/60kg·BW剂量腹腔注射亚硝酸钠(注射量为0.1ml/10g),立即计时,记录动物存活时间。
1.4.4急性脑缺血性缺氧试验 将试验三组各剂量组的动物末次给予受试物后1小时,将各剂量组小鼠自颈部逐只断头,立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。
1.5试验数据统计 试验数据统计采用SPSS 11.0 for windows软件包处理,数据经方差齐性检验,方差齐,进行方差分析,如P值小于0.05,则用Dunnett法进行两两比较;若方差不齐,则进行数据转换,仍不齐,改用秩和检验,如P值小于0.05,则用Dunnett'sT3法进行两两比较。
2 结果
2.1 本发明对小鼠体重的影响
由表9、10、11可见,各剂量组及对照组动物的初始体重经统计学处理,方差齐(P〉0.05),且方差分析结果(P〉0.05),表明各组动物的初始体重是均衡的。三个剂量组动物的中期体重和结束时体重与对照组比较,经统计学处理,均无显著性差异(P〉0.05)。
表10 服用本发明各组小鼠中期体重()
2.2 本发明对小鼠常压耐缺氧时间的影响
由表12可见,三个剂量组的小鼠常压耐缺氧时间与对照组比较,经统计学处理,均无显著性差异(P〉0.05)。
2.3 本发明对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响
由表13可见,三个剂量组的小鼠亚硝酸钠中毒存活时间与对照组比较,经统计学处理,低、中、高剂量组的中毒存活时间延长均有显著性差异(P〈0.05)。
表13 服用本发明对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响(
)
2.4 本发明对小鼠急性脑缺血性缺氧时间的影响
由表14可见,三个剂量组的小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间与对照组比较,经统计学处理,低、中、高剂量组的急性脑缺血性缺氧存活时间延长均有显著性差异(P〈0.05)。
表14 服用本发明对小鼠急性脑缺血性缺氧时间的影响(
)
3 小结
本发明连续30天经口灌胃给予雄性小鼠后,可见动物生长良好,体重持续增长。常压耐缺氧试验结果为阴性;低、中、高剂量组能明显延长亚硝酸钠中毒存活时间,亚硝酸钠中毒存活试验结果为阳性;低、中、高剂量组能明显延长小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间,对急性脑缺血性缺氧试验结果为阳性,按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的规定,本发明对动物具有提高缺氧耐受力功能。