CN102871119A - 一种具有耐缺氧作用的保健食品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有耐缺氧作用的保健食品，包括以下重量百分比的组分：40~60%的枸杞子提取物、20~40%的菊花提取物、5~10%的叶黄素和5~10%的β-胡萝卜素。本发明提供的保健食品，具有起到耐缺氧的作用；对视疲劳和飞蚊症等症状，也具有一定疗效；同时，还具有提高免疫力的作用。本发明提供的制备方法简单方便，适合大规模生产。

Description

一种具有耐缺氧作用的保健食品及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种具有耐缺氧作用的保健食品及其制备方法。 

背景技术

社会发展日益迅速，人们生活压力也普遍加大，生活节奏加快，竞争日益激烈，强力劳动及大运动量者、在缺氧环境中作业者、肿瘤患者、抵抗力低下者、血脂偏高者容易产生缺氧。 

中国传统注重药食同源，因此保健品越来越多地受到现代人的青睐。如何向消费者提供一种中药制备的具有耐缺氧保健功能的食品成为当今医药领域的一大课题。 

发明内容

发明目的：本发明的目的在于提供一种具有耐缺氧作用的保健食品。 

本发明的另一目的是提供上述保健食品的制备方法。 

技术方案：为了达到上述发明目的，本发明具体是这样来实现的：一种具有耐缺氧作用的保健食品，包括以下重量百分比的组分：40~60%的枸杞子提取物、20~40%的菊花提取物、5~10%的叶黄素和5~10%的β-胡萝卜素。 

上述保健食品中一种最优的组分，由重量百分数为40~60%的枸杞子提取物、20~40%的菊花提取物、5~10%的叶黄素、5~10%的β-胡萝卜素和10~30%的越橘提取物组成。 

其中，上述枸杞子提取物是由枸杞子水提，将提取液浓缩，干燥，粉碎过筛而得到。 

其中，上述菊花提取物是由菊花水提，将提取液浓缩，干燥，粉碎过筛而得到。 

其中，上述越橘提取物是由越橘鲜果用70%的乙醇提取，取乙醇提取物用乙酸乙酯萃取，将萃取物干燥，粉碎过筛而得到。 

此外，本发明同时还具有提高免疫力的作用。 

本发明保健品适宜做成片剂、合剂、散剂、颗粒剂或胶囊。 

制备上述的具有耐缺氧作用的保健食品的方法，包括以下步骤： 

（1）将各原料分别过80目筛； 

（2）称取原料总质量60~80%的玉米油和2~5%的蜂蜡加热熔化并搅拌均匀，放至室温； 

（3）将步骤（1）和步骤（2）物料混合20~30分钟，研磨，静置抽真空至无气泡，加压出料，过筛； 

（4）将所得混合物料装入胶囊。 

其中，静止抽真空的真空度控制在在0.06~0.08Mpa，研磨的速度为2400~2600r/min。 

有益效果：本发明提供的保健食品，具有起到耐缺氧的作用；对视疲劳和飞蚊症等症状，也具有一定疗效；同时，还具有提高免疫力的作用。本发明提供的制备方法简单方便，适合大规模生产。 

具体实施方式

实施例1： 

保健食品（质量百分数）：40%的枸杞子提取物、40%的菊花提取物、10%的叶黄素和10%的β-胡萝卜素。 

制备方法：将上述原料分别过80目筛；称取原料总质量60%的玉米油和2%的蜂蜡加热熔化并搅拌均匀，放至室温；将物料混合20分钟，研磨，静置抽真空至无气泡，加压出料，过筛，最后料装入胶囊。

实施例2： 

保健食品（质量百分数）：50%的枸杞子提取物、40%的菊花提取物、5%的叶黄素和5%的β-胡萝卜素。 

制备方法：将上述原料分别过80目筛；称取原料总质量70%的玉米油和4%的蜂蜡加热熔化并搅拌均匀，放至室温；将物料混合25分钟，研磨，静置抽真空至无气泡，加压出料，过筛，最后料装入胶囊。 

实施例3： 

保健食品（质量百分数）：60%的枸杞子提取物、20%的菊花提取物、10%的叶黄素和10%的β-胡萝卜素。 

制备方法：将上述原料分别过80目筛；称取原料总质量80%的玉米油和5%的蜂蜡加热熔化并搅拌均匀，放至室温；将物料混合30分钟，研磨，静置抽真空至无气泡，加压出料，过筛，最后料装入胶囊。 

实施例4： 

保健食品（质量百分数）：40%的枸杞子提取物、20%的菊花提取物、5%的叶黄素、5%的β-胡萝卜素和30%的越橘提取物。 

制备方法：将上述原料分别过80目筛；称取原料总质量60%的玉米油和2%的蜂蜡加热熔化并搅拌均匀，放至室温；将物料混合20分钟，研磨，静置抽真空至无气泡，加压出料，过筛，最后料装入胶囊。 

实施例5： 

保健食品（质量百分数）：50%的枸杞子提取物、30%的菊花提取物、5%的叶黄素、5%的β-胡萝卜素和10%的越橘提取物。 

制备方法：将上述原料分别过80目筛；称取原料总质量70%的玉米油和4%的蜂蜡加热熔化并搅拌均匀，放至室温；将物料混合25分钟，研磨，静置抽真空至无气泡，加压出料，过筛，最后料装入胶囊。 

实施例6： 

保健食品（质量百分数）：60%的枸杞子提取物、20%的菊花提取物、5%的叶黄素、5%的β-胡萝卜素和10%的越橘提取物。 

制备方法：将上述原料分别过80目筛；称取原料总质量80%的玉米油和5%的蜂蜡加热熔化并搅拌均匀，放至室温；将物料混合30分钟，研磨，静置抽真空至无气泡，加压出料，过筛，最后料装入胶囊。 

实施例7： 

本发明提高耐缺氧受力功能动物实验 

1 样品和方法 

1.1 样品 由无锡市天赐康生物科技有限公司提供。 

1.2 实验动物 雄性昆明种小鼠120只，体重18~20g。 

1.3 剂量选择 人体每日推荐量为50ml/60kg·BW，本实验采用2倍浓缩液，设4.17ml/60kg·BW、8.33ml/60kg·BW、12.50ml/60kg·BW三个剂量组（分别相当于人体推荐量的10、20、30倍）。分别量取2倍浓缩液52.1ml、104.2ml、156.3ml，各加蒸馏水定容至250ml混匀，冰柜保存，用完再配，另设蒸馏水对照组。实验分为一、二、三组，每组40只动物。 

1.4 实验方法  

1.4.1 以蒸馏水作溶剂配制受试物，按20ml/60kg·BW每天一次经口灌胃小鼠，连续给予30天。 

1.4.2 常压耐缺氧试验 将试验一组各剂量组的动物末次给予受试物后1小时，将各剂量组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250ml磨口瓶内（每瓶1只），用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。 

1.4.3 亚硝酸钠中毒存活试验 将试验二组各剂量组的动物末次给予受试物后1小时，将各剂量组小鼠按220mg/60kg·BW剂量腹腔注射亚硝酸钠（注射量为0.1ml/10g），立即计时，记录动物存活时间。 

1.4.4急性脑缺血性缺氧试验 将试验三组各剂量组的动物末次给予受试物后1小 时，将各剂量组小鼠自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。 

1.5试验数据统计 试验数据统计采用SPSS 11.0 for windows软件包处理，数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用Dunnett'sT3法进行两两比较。 

2 结果 

2.1 本发明对小鼠体重的影响 

由表1、2、3可见，各剂量组及对照组动物的初始体重经统计学处理，方差齐（P〉0.05），且方差分析结果（P〉0.05），表明各组动物的初始体重是均衡的。三个剂量组动物的中期体重和结束时体重与对照组比较，经统计学处理，均无显著性差异（P〉0.05）。 

表1 服用本发明各组小鼠初始体重（

 ） 

表2 服用本发明各组小鼠中期体重（

 ） 

表3 服用本发明各组小鼠结束体重（

 ） 

2.2 本发明对小鼠常压耐缺氧时间的影响 

由表4可见，三个剂量组的小鼠常压耐缺氧时间与对照组比较，经统计学处 理，均无显著性差异（P〉0.05）。 

表4 服用本发明对小鼠常压耐缺氧时间的影响（

 ） 

2.3 本发明对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响 

由表5可见，三个剂量组的小鼠亚硝酸钠中毒存活时间与对照组比较，经统计学处理，出中剂量组无显著性差异外（P〉0.05），低、高剂量组的中毒存活时间延长有显著性差异（P〈0.05）。 

表5 服用本发明对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响（

 ） 

2.4 本发明对小鼠急性脑缺血性缺氧时间的影响 

由表6可见，三个剂量组的小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间与对照组比较，经统计学处理，除低剂量组无显著性差异外（P〉0.05），中、高剂量组的急性脑缺血性缺氧存活时间延长有显著性差异（P〈0.05）。 

表6 服用本发明对小鼠急性脑缺血性缺氧时间的影响（ ） 

3 小结 

本发明连续30天经口灌胃给予雄性小鼠后，可见动物生长良好，体重持续增长。常压耐缺氧试验结果为阴性；低、高剂量组能明显延长亚硝酸钠中毒存活时间，亚硝酸钠中毒存活试验结果为阳性；中、高剂量组能明显延长小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间，对急性脑缺血性缺氧试验结果为阳性，按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的规定，本发明对动物具有提高缺氧耐受力功能。 

实施例8： 

本发明提高人体免疫力的动物试验 

1.材料 

1.1样品：由无锡市天赐康生物科技有限公司提供。 

1.2实验动物 

昆明种小鼠160只，全雌，体重18-22g。 

2.实验方法 

2.1剂量选择 

受试物设400mg/kg.BW、800mg/kg.BW、1200 mg/kg.BW三个剂量组（分别相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍、30倍），分别称取10.00g、20.00g、30.00g受试物加蒸馏水至250ml混匀，冷藏保存，用完再配，另设食用植物油阴性对照组，每组40只动物。分为免疫一组、二组、三组、四组，其中一组用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；二组用于NK细胞活性测定及淋巴细胞转化实验；三组用于抗体生成细胞实验、血清溶血素测定和迟发型变态反应；四组用于小鼠碳廓清实验。小鼠按10 mg/kg.BW体重一次经口灌胃，连续给予30天，每周称一次体重，调整灌胃体积。 

2.2实验步骤 

2.2.1小鼠碳廓清试验：连续灌胃30天后，于小鼠尾静脉注射用4倍生理盐水稀释的印度墨汁，按0.1ml/10g墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min分别从内眦静脉丛取血20μl，加到2mlNa₂CO₃溶液中，以Na₂CO₃溶液作空白对照，用723分光光度计在600nm处测定光密度值。取血后处死小鼠，取肝、脾称重，计算吞噬指数。 

2.2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）：连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射20%的鸡红细胞悬液1ml,30分钟后，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml,转动鼠板1分钟，吸出腹腔洗液1ml,平均滴于2张载玻片上，置湿盒37℃30分钟，取出在生理盐水漂洗、晾干、固定，4%GiemsaPBS染色3分钟，蒸馏水漂洗晾干，镜检。计算吞噬百分率及吞噬指数。 

2.2.3迟发型变态反应（DTH）（足跖增厚法）：灌胃30天后，给小鼠腹腔注射2%压积SRBC（0.2ml/每鼠）致敏4天后，测量左后足跖厚度，然后再测量部位皮下注射20%（v/v）SRBC（20μl/每鼠），于注射后24h测量左后足跖厚度，同一位测量三次，取平均值，以攻击前后足跖厚度差值（足跖肿胀度）来表示DTH的程度。 

2.2.4ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验（MTT法）：首先进行脾细胞悬液的制 备。将细胞浓度调整为3×10⁶个/ml，然后将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μlConA液，另一孔作对照，置5%CO₂孵箱37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μl/孔继续培养4h，培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，使紫色结晶完全溶解，然后将每孔液体移入比色杯中，用723分光光度仪于570nm波长处比色测定光密度值。 

2.2.5抗体生成细胞检测（Jernr改良玻片法）：连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射2%压积SRBC0.2ml,将免疫5天半后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏放在盛有Hank’s液的平皿内，制成脾细胞悬液。将琼脂糖配成1%水溶液，水浴煮30min，与等量双倍Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加10%（用S_A缓冲液配制）压积SRBC50μl，脾细胞悬液各20μl做两个平行样，迅速混匀后，倾倒于琼脂糖薄层玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，然后将补体加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h，计数溶血空斑数。 

2.2.6血清溶血素测定（血凝法）：在连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射2%SRBC0.2ml免疫，继续灌胃5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置1h，剥离，2000r/min离心10min，收集血清，用生理盐水将血清作倍比稀释，每份稀释12孔，将不同稀释度的血清置于血凝板中，每孔100μl，再加入0.5%SRBC悬液100μl，混匀，置湿盒37℃3h后观察结果，记录每孔的凝集程度。计算抗体积数。 

2.2.7NK细胞活性测定（乳酸脱氢酶LDH测定法）：连续灌胃30天后，颈椎脱臼处死动物，取出脾脏，撕碎，过200目筛网后，用Hank’s液洗3次，用完全RPMI1640培养液配成2×10⁷个/ml细胞悬液。将各只小鼠的细胞悬液取300μl分3孔置于96孔培养板中，每孔100μl，每孔加靶细胞（YAC-1细胞，4×10⁵个/ml）100μl,同时做靶细胞自然释放孔（靶细胞100μl+培养液100μl）及最大释放孔（靶细胞100μl+2.5%Triton100μl）各8孔，37℃5%CO₂培养4小时，取出1500r/min离心5min。将各孔上清液100μl置于另一培养板中，每孔再加入100μl基质液，10分钟后加1mol/L的HCL30μl终止反应，在490nm处测定OD值，计算NK细胞活性率。 

3.试验数据统计 

试验数据采用SPSS10.0 for Windows软件包处理。对照组与剂量组的数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于 0.05，则用Dunnett’sT3法进行两两比较（P>0.05为非显著性差异，P<0.05为显著性差异）。 

4.结果 

4.1本发明对小鼠体重的影响见表7-10。 

表7 各组小鼠的初始体重（

 ） 

表8 各组小鼠的中期体重（

 ） 

表9 各组小鼠的结束体重（

 ） 

表10 本发明对小鼠体重增重的影响（

 ） 

由表7-10可见，本发明免疫一组、免疫二组、免疫三组及免疫四组小鼠初始体重与阴性对照组相比，经方差齐性检验，方差齐（P〉0.05），且方差分析结果（P〉0.05），说明各组小鼠与阴性对照组之间的初始体重是均衡的。三个剂量组小鼠试验中期、末期的体重以及试验期间小鼠体重的增长与阴性对照组相比，经统计学处理，无显著性差异（P〉0.05），即本发明对小鼠的体重增长无影响。 

4.2本发明对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响 

表11 本发明对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清功能的影响（

 ） 

由表11可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的碳廓清能力与阴性对照组相比，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05）。 

表12 本发明对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响（

 ） 

由表12可见，连续灌胃30天后，三个剂量组动物的吞噬率和吞噬指数与阴性对照组相比，经统计学处理，中、高剂量组吞噬指数有显著性差异(P<0.05)。 

由表11、表12可见，本发明对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能试验结果阳性。 

4.3本发明对小鼠细胞免疫的影响 

表13 本发明对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响（

 ） 

由表13可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的足跖肿胀度与阴性对照组相比，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05） 

表14 本发明对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响（

 ） 

由表14可见，连续灌胃小鼠30天后，三个剂量组小鼠的淋巴细胞增殖能力与阴性对照相比，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05）。 

由表13、表14可见本发明对小鼠细胞免疫试验结果为阴性。 

4.4本发明对小鼠体液免疫的影响 

表15 本发明对小鼠抗体生成细胞的影响（

 ） 

由表15可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的溶血空斑数与阴性对照相比，经统计学处理，低、中剂量组有显著性差异（P<0.05）。 

表16 本发明对小鼠血清溶血素的影响（ ） 

由表16可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠的抗体积数与阴性对照组相比，经统计学处理，低剂量组有极显著性差异（P<0.05） 

由表15、表16可见，本发明对小鼠体液免疫试验结果呈阳性。 

4.5本发明对小鼠NK细胞活性的影响 

表17 本发明对小鼠NK细胞活性的影响（

 ） 

由表17可见，连续灌胃30天后，三个剂量组小鼠NK细胞活性与阴性对照相比，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05）。本发明对小鼠的NK细胞活性试验结果显阴性。 

5.总结 

本发明连续灌胃小鼠30天后，对小鼠体重无明显影响；对小鼠的细胞免疫试验结果阴性；对小鼠的NK细胞试验结果阴性；对小鼠的体液免疫试验，三个剂量组的溶血空斑数与阴性对照组比较，低、中剂量组差异均有显著性（P<0.05），试验结果阳性；对小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能试验，三个剂量组小鼠的吞噬率和吞噬指数与阴性对照组比较，中、高剂量组差异有显著性（P<0.05），试验结果阳性。 

依据《保健食品检验与评价技术规范》2003年版可以判定，本发明对动物具有增加免疫力的功能。 

Claims (8)

1.一种具有耐缺氧作用的保健食品，其特征在于，包括以下重量百分比的组分：40~60%的枸杞子提取物、20~40%的菊花提取物、5~10%的叶黄素和5~10%的β-胡萝卜素。

2.根据权利要求1所述的具有耐缺氧作用的保健食品，其特征在于，由重量百分数为40~60%的枸杞子提取物、20~40%的菊花提取物、5~10%的叶黄素、5~10%的β-胡萝卜素和10~30%的越橘提取物组成。

3.根据权利要求1所述的一种具有耐缺氧作用的保健食品，其特征在于所述枸杞子提取物是由枸杞子水提，将提取液浓缩，干燥，粉碎过筛而得到。

4.根据权利要求1所述的一种具有耐缺氧作用的保健食品，其特征在于所述菊花提取物是由菊花水提，将提取液浓缩，干燥，粉碎过筛而得到。

5.根据权利要求2所述的一种具有耐缺氧作用的保健食品，其特征在于所述越橘提取物是由越橘鲜果用70%的乙醇提取，取乙醇提取物用乙酸乙酯萃取，将萃取物干燥，粉碎过筛而得到。

6.根据权利要求1或2所述的具有耐缺氧作用的保健食品，其特征在于，同时还具有提高免疫力的作用。

7.根据权利要求1或2所述的具有耐缺氧作用的保健食品，其特征在于，成品剂型为片剂、合剂、散剂、颗粒剂或胶囊。

8.制备权利要求1或2所述的一种具有耐缺氧作用的保健食品的方法，其特征在于它包括以下步骤：

（1）将各原料分别过80目筛；

（2）称取原料总质量60~80%的玉米油和2~5%的蜂蜡加热熔化并搅拌均匀，放至室温；

（3）将步骤（1）和步骤（2）物料混合20~30分钟，研磨，静置抽真空至无气泡，加压出料，过筛；

（4）将所得混合物料装入胶囊。