CN102526477B - 一种增强免疫力的药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种增强免疫力的药物组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种增强免疫力药物组合物及其制备方法和应用。本发明的增强免疫力药物组合物包括以下组分：刺五加、黄芪、枸杞、黄精、蛹虫草子实体。通过动物实验证明了本发明增强免疫力药物组合物对小鼠体重增长无不良影响，符合对增强免疫力保健食品的评判标准，具有增强免疫力的功能。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物，特别涉及一种具有增强免疫力功能的药物组合物，属于中药组合物领域。
背景技术
伴随着社会的进步、竞争的激烈，机体免疫力低下人群日趋庞大，因此人们对提高机体免疫力的产品需求量与日俱增。而增强机体免疫力的产品已经不满足于生化类产品，更多地青睐于植物和中药提取物的产品。
例如专利申请号为200910067904.5的专利公开了一种具有增强免疫力、抗辐射功能的保健食品，包括人参多糖，刺五加提取物，昆布，蜂乳，氯化血红素，Vc，叶酸。其具有增强免疫力和抗辐射功能，它适用于以免疫功能低下为主要症候的亚健康人群，年老体衰，久病虚弱，以及接触辐射的工作者和正在进行化疗、放疗的癌症患者，以及进行化疗、放疗后导致免疫功能低下，白细胞、血红细胞下降等毒副作用的患者。
又如专利申请号为200710176607的发明涉及一种具有改善体力疲劳功能的保健食品及其制备方法，包括人参、刺五加和制淫羊藿。其用于易疲劳者和免疫力低下者，但不适用于少年儿童。
专利申请号为200610010082.3的发明涉及一种缓解疲劳增强免疫力的保健品及其制备方法，含有刺五加、黄芪、红景天苷及其苷元酪醇和酸枣仁。
但是以上现有的增强免疫力的产品或多或少地存在诸如所需原料种类繁杂并含有人参等昂贵材料，总体吸收效果差，食用既不方便又影响吸收的缺陷，且现有的加工工艺粗糙，不能有效释放多种营养物质互补、强化营养作用的能力。而且部分的营养品只适用于特定的人群。
发明内容
本发明的目的在于提供一种增强免疫力药物组合物，并通过动物实验评价该增强免疫力药物组合物的功能。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种增强免疫力药物组合物，包括以下组分：刺五加、黄芪、枸杞、黄精、蛹虫草子实体。
其中，各组份的重量份为：刺五加79.2-118.8份、黄芪79.2-118.8份、枸杞65.6-98.4份、黄精65.6-98.4份、蛹虫草子实体26.4-39.6份。
优选的，各组份的重量份为：刺五加89.1-108.9份、黄芪89.1-108.9份、枸杞73.8-90.2份、黄精73.8-90.2份、蛹虫草子实体29.7-36.3份。
更优选的，各组份的重量份为：刺五加99份、黄芪99份、枸杞82份、黄精82份、蛹虫草子实体33份。
本发明所述的增强免疫力药物组合物可将原料按照药物常规制剂方法制备成任何一种临床上适宜的制剂。
其中，所述制剂是颗粒剂、胶囊剂或片剂。
本发明还提供将所述增强免疫力药物组合物制成颗粒剂的方法，具体为：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质，按照所述配比混合均匀，得到原料药混合物；
将所得原料药混合物与食用级乙醇混合，10-30目造粒；
将造好的颗粒在50-55℃下干燥，以颗粒剂工艺要求控制颗粒的含水量；
将干燥后的颗粒选取10-20目筛网整粒，按照颗粒剂常规比例加入常规颗粒剂辅料混合均匀，然后装袋，得到颗粒剂。
本发明还提供了一种将所述增强免疫力药物组合物制成胶囊剂的方法，具体为：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质；按照所述配比混合均匀，得到原料药混合物；
将所得原料药混合物与食用级乙醇混合，20-35目造粒；
将造好的颗粒放入冷烘箱，吹风干燥，待颗粒松散分散时，将其加热至50-55℃继续烘干，使颗粒含水量符合常规胶囊剂含水量；
将干燥后的颗粒冷却，并与常规胶囊剂辅料混合均匀，然后装入胶囊，得到胶囊剂。
本发明还提供了一种将所述增强免疫力药物组合物制成片剂的方法，具体为：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质，按照所述配比混合均匀，得到原料药混合物；
将所得原料药混合物与食用级乙醇混合，10-30目造粒；
将造好的颗粒在50-55℃下干燥，以常规片剂工艺要求控制颗粒的含水量；
将干燥后的颗粒选取10-20目筛网整粒，按照常规比例加入常规片剂辅料混合均匀，然后压片，得到片剂。
其中上述各种制剂的制备方法中，可将所用原料药替换为原料药的提取物，例如刺五加、黄芪、枸杞、黄精各自的提取物，例如但不限于按《中华人民共和国药典》(2010版)制备的提取物或市售的中药提取物产品。
本发明通过动物实验评价了所述药物组合物的增强免疫力功能，证明了本发明的药物组合物可用于制备增强免疫力的药物。
具体实施方式
本发明提供的增强免疫力药物组合物，包括刺五加、黄芪、枸杞、黄精、蛹虫草子实体。本发明所用到的原料药均可从普通药物材商店购买得到，其规格符合国家药物材标准即可；也可将购买的原料药用常规方法进行提取，将所得提取物作为原料，例如按《中华人民共和国药典》(2010版)制备的提取物。
刺五加及其提取物：《中华人民共和国药典》(2010版一部)记载：刺五加为五加科植物刺五加的干燥根及根茎。其味辛、微苦、性温，归脾、肾、心经。《本草纲目》称刺五加为“本经上品”，能“补中益气，坚筋骨，强意志，久服轻身耐老”。中医认为它能同时补益先天之本肾脏和后天之本脾脏.即益气健脾，补肾安神。近代研究表明，其与人参同属于五加科，亲缘关系较近，含有的有机化学成分也具有一定联系，且素有“小人参”之美誉，国内外已将刺五加作为与人参具有相似作用的天然植物应用于临床。刺五加根茎含有多种苷类及糖类，其主要标志性成分是刺五加多糖(ASPS)和刺五加苷，此外，还含刺五加皂甙、异嗪皮啶、丁香甙、胡萝卜甙和芝麻素等。其中刺五加多糖的药理作用广泛，参与人体细胞的各种生命过程及生理功能的调节，具有增强免疫力、抗癌、抗病毒等生理功能，并以独特的活性和低毒性的特点使其在临床应用中具有很大的潜力。
黄芪及其提取物：《中华人民共和国药典》(2010版一部)记载：黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，其味甘，性温，归肺脾经，是常用的“扶正固本，补益中气”的益气中药，具有益气补虚之功效。化学成分复杂，含有多糖、多种皂甙、黄酮以及氨基酸、亚油酸、生物碱等。黄芪提取物是以黄芪干燥的根为原料提取的产品，其主要标志性成分为黄芪多糖(APs)。
枸杞及其提取物：《中华人民共和国药典》(2010版一部)记载：枸杞子为茄科植物宁夏枸杞的成熟果实，味甘，性平，归肝、肾经。是我国传统的滋补中药，始载于《神农本草经》，并被列为上品。明朝李时珍在《本草纲目》中记载枸杞有“坚筋骨，......，补精气诸不足，明日安神，令人长寿”等功效。近年的医学研究表明，枸杞中含多种营养成分和微量元素及高含量的多糖，枸杞多糖(LBP)是枸杞子提取物的标志性成分，大量的试验研究表明LBP能在多条途径、多个层面对发挥增强免疫力的作用。
黄精及其提取物：《中华人民共和国药典》(2010版一部)记载：黄精为百合科植物黄精、滇黄精或多花黄精的干燥根茎，味甘、性平，归脾、肺、肾经，具有健脾、润肺、益肾等功能。始载于《名医别录》，按药材形状不同，分别习称为“鸡头黄精”、“姜形黄精”、“大黄精”。《名医别录》将其列为上品，称黄精“补中益气，......久服轻身延年不饥”。化学成分研究表明，黄精含有菸酸、醌类、粘液质、生物碱、淀粉、糖类、氨基酸及微量元素。黄精多糖是黄精化学组成的一个重要部分，是黄精主要生物学活性成分之一。
蛹虫草子实体：蛹虫草[Cordyceps militaris(L.ex Fr.)Link]，又称蛹草、北虫草、北冬虫夏草，是虫草属真菌寄生于鳞翅目昆虫蛹体后形成的虫菌复合体。属于子囊菌类的麦角菌目，麦角菌科，虫草属真菌。与冬虫夏草化学成分相似甚至高于冬虫夏草，被认为是冬虫夏草的优秀替代品之一，其成分主要含虫草酸、虫草素、虫草多糖，具有提高免疫力，抑菌、抗炎等功效。
本发明组合物采用的刺五加、黄芪属于卫法监发[2002]51号《卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知》中附件2(可用于保健食品的物品名单)内的材料，枸杞子、黄精属于卫法监发[2002]51号《卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知》中附件1(既是食品又是药品的物品名单)内的材料，均可以用于保健食品。蛹虫草子实体为卫生部批准的新资源食品(2005年第3号)。本发明中优选采用刺五加提取物、黄芪提取物、枸杞提取物、黄精提取物和蛹虫草子实体相配合，能起到很好的增强免疫力的作用。
下面结合实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。在本发明实施例中所用的刺五加、黄芪、枸杞、黄精等原料药购买自药店；所用的刺五加提取物、黄芪提取物、枸杞提取物和黄精提取物分别购自西安三江生物工程有限公司，货号分别为：20090310、20090317、20090323、20090325；蛹虫草子实体购自珠海市先康生物科技有限公司，货号为20090301。
实施例1
称取以下重量的原料药：
刺五加475.2g，黄芪475.2g，枸杞393.6g，黄精393.6g，蛹虫草子实体158.4g。
制备方法：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质，将原料药混合均匀；
将原料药混合物与重量含量为75％的食用级乙醇造粒，10目造粒；
在50-55℃下干燥，依据中华人民共和国药典二部2010版的方法测定其含水量，控制其含水量为5％；
将干燥后的颗粒选取10目筛网整粒，然后加入微粉硅胶和硬脂酸镁作为辅料，混合均匀后装袋，得到颗粒剂。
实施例2
称取以下重量的原料药：
刺五加提取物593.32g，黄芪提取物593.32g，枸杞提取物494.44g，黄精提取物494.44g，蛹虫草子实体197.78g。
制备方法：
将上述原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质，将原料药混合均匀；
将原料药混合物与重量含量为90％的食用级乙醇混合，20目造粒；
放入冷烘箱，打开吹风，当颗粒表面发白时，用铲子翻动，然后加热至30-35℃，过20-60分钟后再翻动，继续烘干；
待颗粒松散分散时，将其加热至50-55℃烘干，依据中华人民共和国药典二部2010版的方法测定其含水量，控制其含水量为按重量计5％；
将干燥后的颗粒冷却后加入二氧化硅和硬脂酸镁，混匀，装入0#胶囊，得到胶囊剂。
实施例3
称取以下重量的原料药：
刺五加594.0g，黄芪594.0g，枸杞492.0g，黄精492.0g，蛹虫草子实体198.0g。
制备方法：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质，将原料药混合均匀；
将原料药混合物与重量含量为87％的食用级乙醇混合，10目造粒；
在50-55℃下干燥颗粒，依据中华人民共和国药典二部2010版的方法测定其含水量，控制其含水量为按重量计8％；
将干燥后的颗粒选取10目筛网整粒，加入微粉硅胶混合均匀，然后压片，得到片剂。
实施例4
称取以下重量的原料药：
刺五加534.6g、黄芪534.6g、枸杞442.8g、黄精442.8g、蛹虫草子实体178.2g。
制备方法：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质；将原料药混合均匀；
将原料药混合物与重量含量为87％的食用级乙醇混合，35目造粒；
放入冷烘箱，打开吹风，当颗粒表面发白时，用铲子翻身，然后再加热至30-35℃，加热半小时后再翻身，继续烘干；
待颗粒较松散时，加热至50-55℃烘干，按照中华人民共和国药典二部2010版的方法测定其含水量，使颗粒的含水量为按重量计6％；
将干燥后的颗粒放凉后加入二氧化硅和硬脂酸镁混匀，并装入胶囊，得到胶囊剂。
实施例5
称取以下重量的原料药：
刺五加提取物435.6g、黄芪提取物435.6g、枸杞提取物360.8g、黄精提取物360.8g、蛹虫草子实体145.2g。
制备方法：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质；将原料药混合均匀；
将原料药的混合物与重量含量为75％的食用级乙醇混合，30目造粒；
放入冷烘箱，打开吹风，当颗粒表面发白时，用铲子翻身，然后再加热至30-35℃，加入半小时后再翻身，继续烘干；
待颗粒较松散时，加热至50-55℃烘干，按照中华人民共和国药典二部2010版的方法测定其含水量，控制颗粒的含水量为按重量计5％；
将颗粒放凉后加入微粉硅胶混匀，并装入胶囊，得到胶囊剂。
试验例1 本发明胶囊增强免疫力功能动物实验
1材料和方法
1)样品：实施例2制备的胶囊，400mg/粒，内容物为棕色至棕褐色粉末。
2)实验动物：选用北京维通利华实验动物技术有限公司[许可证号：SCXK(京)2006-0009]繁育的18-22g昆明种健康清洁级雌性小鼠192只，共分为四批进行实验，每批随机分为4组，每组12只。
实验一批进行脏器/体重比值测定、迟发型变态反应实验、半数溶血值(HC50)的测定和抗体生成细胞数的测定；
实验二批进行碳廓清实验；
实验三批进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；
实验四批进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定。实验动物饲养于北京联合大学应用文理学院保健食品检测中心SPF级动物室。
3)剂量：实验例2制备的胶囊，推荐剂量为成人(按60kg体重计)每日2.4g，相当于0.04g/日/kg体重。实验设人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即每日0.2g/kgBW、0.4g/kgBW、1.2g/kgBW为低、中、高剂量组。
受试物以无菌水配制，每日一次经口给予，连续灌胃33天后测各项指标。小鼠灌胃体积为0.1mL/10g鼠重。
同时设一空白对照组(0g/kgBW)，用无菌水替代受试物，每日灌胃体积与各受试物组相同。
4)主要仪器与试剂：
ES-2100A电子天平、BS223S电子天平、755分光光度计、酶标仪、二氧化碳培养箱、低速离心机、恒温水浴、显微镜、倒置显微镜、螺旋测微仪。
洁净工作台、无菌手术器械、微量注射器(25μL)、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。
绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、Hank’s液(pH 7.2-7.4)、RPMIl640培养液、小牛血清、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、1％冰醋酸、1mol/L的HCl溶液、酸性异丙醇(96mL异丙醇加1mol/L的HCl溶液4mL)、MTT、PBS缓冲液(pH 7.2-7.4)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂(碳酸氢钠1.0g，高铁氰化钾0.2g，氰化钾0.05g，加蒸馏水至1000mL)、YAC-1细胞、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH 8.2)、1％NP40、印度墨汁、0.1％Na2CO3、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。
5)实验方法：
A.脏器体重比值的测定
小鼠称重后颈椎脱臼处死，取脾脏和胸腺，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称重，计算脾脏体重比值和胸腺体重比值。
B.迟发型变态反应(DTH)实验(足跖增厚法)
取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC(2000r/min，10min)0.2mL，致敏后4d，测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。然后在测量部位皮下注射20％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC 20μL，于注射后24h测量左后足跖部厚度，以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH的程度。受试样品组的差值显著高于对照组的差值，可判定该项实验结果阳性。
C.ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，制成细胞悬液。用Hank’s液洗3次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，镜检计数，调整细胞浓度为3×106个/mL。再将脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，在其中一孔加75μL ConA液(相当于7.5μg/mL)，另一孔作为对照，置5％CO2，37℃CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后将此液体移入比色杯中，在755分光光度计上比色测定，波长570nm。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增值能力。受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项实验结果阳性。
D.抗体生成细胞数的测定(Jerne改良玻片法)
取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC 0.2mL。将SRBC免疫5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，轻轻磨碎脾脏，制成细胞悬液。离心(1000r/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬液在8mL Hank’s液中。将琼脂糖加热溶解后，与等量双倍Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加10％(v/v，用SA液配制)压积SRBC 50μL、脾细胞悬液8μL，迅速混匀后，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中37℃温育1h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1∶8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。用空斑数/全脾细胞来表示。受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑数，可判定该项实验结果阳性。
E.半数溶血值(HC50)的测定
取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC 0.2mL进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为300倍，取1mL置试管内，依次加入10％(v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBC 0.5mL，补体1mL(用SA缓冲液按1∶8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温15min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清1mL，加都氏试剂至3mL。同时取10％(v/v，用SA缓冲液配制)的压积SRBC 0.25mL，加都氏试剂至4mL于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下式计算：样品半数溶血值＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数
受试样品组的HC50显著高于对照组的HC50，可判定该项实验结果阳性。
F.小鼠碳廓清实验
按体重从小鼠尾静脉注射稀释4倍的印度墨汁(0.05mL/10g)。待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并将其加到2mL 0.1％Na2CO3溶液中。用755分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na2CO3溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏称重。以碳廓清指数(a)表示小鼠碳廓清的能力，按下式计算a：
k＝(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1) a＝体重÷(肝重+脾重)×k1/3
受试样品组的碳廓清指数显著高于对照组的碳廓清指数，可判定该项实验结果阳性。
G.小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)
小鼠腹腔注射20％(v/v，用生理盐水配制)鸡红细胞(2000r/min，10min)悬液1mL，间隔30min，颈椎脱臼处死，将其仰位固定于鼠板上，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min。取腹腔巨噬细胞洗液1mL，分别滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，Gicmsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数，每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：
吞噬百分率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100
吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数
得出的吞噬百分率再按下式进行数据转换，X＝Sin-1√P，式中P为吞噬百分率，用小数表示。所得数据为计量资料，受试样品组的吞噬百分率和吞噬指数均显著高于对照组的吞噬百分率和吞噬指数，可判定该项实验结果阳性。
H.NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)
实验前24h将靶细胞YAC-1进行传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL。受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL 2倍Hank’s液及8mL Hank’s液，1000r/min，10min离心，用1mL含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，镜检计数，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL。使效靶比为50∶1。取靶细胞和效应细胞各100μL，加入U形96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL；上述各项均设三个平行孔，37℃、5％CO2培养箱中培养4h，将96孔板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，加入LDH基质液100μL，反应3-10min，然后每孔加入1mol/L的HCl溶液30μL终止反应，在酶标仪490nm处测光密度值(OD)，计算NK细胞活性：
NK细胞活性(％)＝(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100
得出的NK细胞活性按下式进行数据转换，X＝Sin-1√P，式中P为NK细胞活性，用小数表示。所得数据为计量资料，受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，可判定该项实验结果阳性。
6)数据处理
用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性，F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
7)结果判定依据
《保健食品检验与评价技术规范)》(2003版)规定：在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。
2、结果
1)本发明增加免疫力的药物组合物对小鼠体重的影响
表1各组小鼠的初始体重
由表1可见，小鼠的初始体重在四批实验动物各剂量组与0g/kgBW组间比较，差异均无显著性(P＞0.05)。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。
表2本发明实施例2胶囊对小鼠体重的影响
由表2可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，小鼠的体重在四批各剂量组与0g/kgBW组间比较，差异均无显著性(P＞0.05)。即本发明胶囊对小鼠体重无不良影响。
2)本发明增加免疫力的药物组合物对小鼠脏器/体重比值的影响
表3本发明实施例2胶囊对小鼠脾脏/体重比值的影响
| 组别 | 动物数(只) | 脾脏/体重比值(mg/g) | P值 |
| 0g/kgBW | 12 | 5.6±0.9 | -- |
| 0.2g/kgBW | 12 | 4.9±0.6 | 0.164 |
| 0.4g/kgBW | 12 | 5.3±1.0 | 0.683 |
| 1.2g/kgBW | 12 | 5.2±1.3 | 0.572 |
由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，各剂量组脾脏/体重比值与0g/kgBW组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。即本发明胶囊对小鼠的脾脏/体重比值无特别影响。
表4本发明实施例2胶囊对小鼠胸腺/体重比值的影响
| 组别 | 动物数(只) | 胸腺/体重比值(mg/g) | P值 |
| 0g/kgBW | 12 | 2.6±0.6 | -- |
| 0.2g/kgBW | 12 | 2.4±0.7 | 0.867 |
| 0.4g/kgBW | 12 | 2.4±0.5 | 0.676 |
| 1.2g/kgBW | 12 | 2.1±0.4 | 0.080 |
由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，各剂量组胸腺/体重比值与0g/kgBW组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。即本发明胶囊对小鼠的胸腺/体重比值无特别影响。
3)本发明增加免疫力的药物组合物对小鼠细胞免疫功能的影响
表5本发明实施例2胶囊对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
| 组别 | 动物数(只) | 足跖肿胀度(mm) | P值 |
| 0g/kgBW | 12 | 0.52±0.22 | -- |
| 0.2g/kgBW | 12 | 0.83±0.24* | 0.013 |
| 0.4g/kgBW | 12 | 0.80±0.21* | 0.027 |
| 1.2g/kgBW | 12 | 0.96±0.34* | 4.05×10-4 |
*与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表5可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，0.20g/kgBW组、0.40g/kgBW组与0g/kgBW组比较，小鼠的足跖肿胀度有显著性差异(P＜0.05)。1.2g/kgBW组与0g/kgBW组比较，小鼠的足跖肿胀度有显著性差异(P＜0.01)。即本发明胶囊在各剂量组均能提高小鼠足跖肿胀度。
表6本发明实施例2胶囊对小鼠淋巴细胞转化实验的影响
| 组别 | 动物数(只) | 淋巴细胞增殖能力(OD差值) | P值 |
| 0g/kgBW | 12 | 0.25±0.13 | -- |
| 0.2g/kgBW | 12 | 0.36±0.12 | 0.092 |
| 0.4g/kgBW | 12 | 0.35±0.10 | 0.126 |
| 1.2g/kgBW | 12 | 0.40±0.14* | 0.019 |
*与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，1.2g/kgBW组与0g/kgBW组比较，小鼠的淋巴细胞增殖能力有显著性差异(P＜0.05)。即本发明胶囊在1.2g/kgBW组能提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力。
4)本发明增加免疫力的药物组合物对体液免疫的影响
表7本发明实施例2胶囊对小鼠抗体生成细胞数的影响
| 组别 | 动物数(只) | 溶血空斑数(×103/全脾) | P值 |
| 0g/kgBW | 12 | 152±46 | -- |
| 0.2g/kgBW | 12 | 185±35 | 0.173 |
| 0.4g/kgBW | 12 | 197±38* | 0.043 |
| 1.2g/kgBW | 12 | 201±56* | 0.026 |
*与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表7可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，0.4g/kgBW组、1.2g/kgBW组与0g/kgBW组比较，抗体生成细胞数有显著性差异(P＜0.05)。即本发明胶囊在0.4g/kgBW组、1.2g/kgBW组能提高小鼠抗体生成细胞数。
表8本发明实施例2胶囊对小鼠半数溶血值(HC50)的影响
| 组别 | 动物数(只) | 样品半数溶血值 | P值 |
| 0g/kgBW | 12 | 179±35 | -- |
| 0.2g/kgBW | 12 | 188±29 | 0.770 |
| 0.4g/kgBW | 12 | 190±26 | 0.688 |
| 1.2g/kgBW | 12 | 212±21* | 0.019 |
*与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表8可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，1.2g/kgBW组与0g/kgBW组比较，小鼠的半数溶血值有显著性差异(P＜0.05)。即本发明胶囊在1.2g/kgBW组能提高小鼠半数溶血值。
5)本发明增加免疫力的药物组合物对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响
表9本发明实施例2胶囊对小鼠碳廓清能力的影响
| 组别 | 动物数(只) | 吞噬指数(a) | P值 |
| 0g/kgBW | 12 | 5.11±0.87 | -- |
| 0.2g/kgBW | 12 | 6.11±0.44* | 0.011 |
| 0.4g/kgBW | 12 | 6.33±1.04* | 0.002 |
| 1.2g/kgBW | 12 | 6.27±0.75* | 0.003 |
*与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，0.2g/kgBW组与0g/kgBW组比较，小鼠的碳廓清能力有显著性差异(P＜0.05)；0.4g/kgBW组、1.2g/kgBW组与0g/kgBW组比较，小鼠的碳廓清能力有显著性差异(P＜0.01)。即本发明胶囊在各剂量组均能提高小鼠的碳廓清能力。
表10本发明实施例2胶囊对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响
| 组别 | 动物数(只) | 吞噬率(％) | 吞噬率平方根反正弦转换值 | P值 |
| 0g/kgBW | 12 | 23±8 | 0.50±0.09 | -- |
| 0.2g/kgBW | 12 | 26±9 | 0.53±0.10 | 0.661 |
| 0.4g/kgBW | 12 | 32±10* | 0.60±0.11* | 0.027 |
| 1.2g/kgBW | 12 | 31±9 | 0.58±0.10 | 0.081 |
*与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表10可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，0.4g/kgBW组与0g/kgBW组比较，吞噬率有显著性差异(P＜0.05)。即本发明胶囊在0.4g/kgBW组能提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率。
表11本发明实施例2胶囊对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响
| 组别 | 动物数(只) | 吞噬指数 | P值 |
| 0g/kgBW | 12 | 0.38±0.17 | -- |
| 0.2g/kgBW | 12 | 0.42±0.18 | 0.925 |
| 0.4g/kgBW | 12 | 0.57±0.21* | 0.047 |
| 1.2g/kgBW | 12 | 0.56±0.18 | 0.060 |
*与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表11可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，0.4g/kgBW组与0g/kgBW组比较，吞噬指数有显著性差异(P＜0.05)。即本发明胶囊在0.4g/kgBW组能提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数。
6)本发明增加免疫力的药物组合物对小鼠NK细胞活性的影响
表12本发明实施例2胶囊对小鼠NK细胞活性的影响
*与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，各剂量组NK细胞活性与0g/kgBW组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。即本发明胶囊对小鼠NK细胞活性无影响。
总结：
经口给予小鼠不同剂量的本发明实施例2胶囊33天后，与0g/kgBW组比较，该受试物在0.2g/kgBW组能提高小鼠足跖肿胀度(P＜0.05)、提高小鼠的碳廓清能力(P＜0.05)；在0.4g/kgBW组能提高小鼠足跖肿胀度(P＜0.05)、提高小鼠抗体生成细胞数(P＜0.05)、提高小鼠的碳廓清能力(P＜0.01)、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率(P＜0.05)、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数(P＜0.05)；在1.2g/kgBW组能提高小鼠足跖肿胀度(P＜0.01)、提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力(P＜0.05)、提高小鼠抗体生成细胞数(P＜0.05)、提高小鼠半数溶血值(P＜0.05)、提高小鼠的碳廓清能力(P＜0.01)。受试物对小鼠体重增长无不良影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)对增强免疫力保健食品的评判标准可知，本发明药物组合物胶囊具有增强免疫力的功能。
Claims (9)
1.一种增强免疫力药物组合物，由以下组分组成：刺五加、黄芪、枸杞、黄精、蛹虫草子实体。
2.根据权利要求1所述的增强免疫力药物组合物，其中，各组份的重量份为：刺五加79.2-118.8份、黄芪79.2-118.8份、枸杞65.6-98.4份、黄精65.6-98.4份、蛹虫草子实体26.4-39.6份。
3.根据权利要求2所述的增强免疫力药物组合物，其中，各组份的重量份为：刺五加89.1-108.9份、黄芪89.1-108.9份、枸杞73.8-90.2份、黄精73.8-90.2份、蛹虫草子实体29.7-36.3份。
4.根据权利要求3所述的增强免疫力药物组合物，其中，各组份的重量份为：刺五加99份、黄芪99份、枸杞82份、黄精82份、蛹虫草子实体33份。
5.如权利要求1-4中任一项所述的增强免疫力药物组合物，其特征在于，按照中药常规制剂方法制备成颗粒剂、胶囊剂或片剂。
6.一种制备权利要求1-4中任一项所述增强免疫力药物组合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质，按照所述配比混合均匀，得到原料药混合物；
将所得原料药混合物与食用级乙醇混合，10-30目造粒；
将造好的颗粒在50-55℃下干燥，以颗粒剂工艺要求控制颗粒的含水量；
将干燥后的颗粒选取10-20目筛网整粒，按照颗粒剂常规比例加入常规颗粒剂辅料混合均匀，然后装袋，得到颗粒剂。
7.一种制备权利要求1-4中任一项所述增强免疫力药物组合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质；按照所述配比混合均匀，得到原料药混合物；
将所得原料药混合物与食用级乙醇混合，20-35目造粒；
将造好的颗粒放入冷烘箱，吹风干燥，待颗粒松散分散时，将其加热至50-55℃继续烘干，使颗粒含水量符合常规胶囊剂含水量；
将干燥后的颗粒冷却，并与常规胶囊剂辅料混合均匀，然后装入胶囊，得到胶囊剂。
8.一种制备权利要求1-4中任一项所述增强免疫力药物组合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将每种原料药粉碎后过60目筛，去除粗粒及杂质，按照所述配比混合均匀，得到原料药混合物；
将所得原料药混合物与食用级乙醇混合，10-30目造粒；
将造好的颗粒在50-55℃下干燥，以常规片剂工艺要求控制颗粒的含水量；
将干燥后的颗粒选取10-20目筛网整粒，按照常规比例加入常规片剂辅料混合均匀，然后压片，得到片剂。
9.权利要求1-5所述的增强免疫力药物组合物在制备用于增强免疫力的药物中的应用。
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