CN103734696B - 一种提高免疫力、保护脏器的软胶囊及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种提高免疫力、保护脏器的软胶囊及其制备方法,由软胶囊体和软胶囊体内的内容物组成,特点是:按重量百分比称量蜂胶15%~35%、葛根提取物10%~18%、辅酶Q1010%~15%、积雪草提取物9%~13%、绿茶提取物8%~15%、蜂王浆4%~8%、亚麻籽油5%~15%、紫苏籽油3%~7%和蜂蜡3%~7%,经过混匀、研磨、脱气,得内容物;按100∶100∶40比例称量明胶、水、甘油,升温化料,脱气,得胶囊体滤液;将胶囊体滤液和内容物按重量比:1∶2~4的比例进行压丸,再经定型干燥、洗丸、选拣、包装,即得成品。本发明软胶囊功效显著、制备简单,具有提高免疫力、降血脂、辅助护肝、调节肠道、抗衰老等多功能。
Description
技术领域
本发明涉及一种以胶囊制剂为特征的医药配置品,尤其一种具有提高免疫力、保护脏器的软胶囊及其制备方法。
背景技术
我们知道,人体所有需要的能量几乎都是ATP(三磷酸腺苷)提供的:心脏的跳动、肌肉的运动以及各类细胞的各种功能都源于ATP所产生的能量。当ATP合成不足缺失时,人体会感觉乏力,并出现心脏功能失调、肌肉酸痛、肢体僵硬、容易疲劳、免疫功能下降等现象;长时间ATP合成不足,身体的组织和器官就会部分或全部丧失其功能。ATP合成不足持续时间越长,对身体各器官的影响就越大,尤其影响最大的组织和器官是心脏和骨骼肌。因此,保证心脏和骨骼肌细胞的ATP及时合成是维护心脏和肌肉功能的重要措施。辅酶Q10是一种体内自行合成的辅酶,存在于人体细胞中,而辅酶Q10又是唯一一种能把我们日常食用的米、面、肉等营养成分转化成ATP的关键物质。人体中辅酶Q10随着年龄的增长而减少,在人体合成量低于最高值的25%,会造成ATP的合成不足,这样就造成心脏动力不足。
采用人工合成的辅酶Q10作为一种强抗氧化剂已经得到应用,用于抑制自由基对免疫细胞上受体与细胞分化和活性相关的微管系统的修饰,增强免疫系统,延缓衰老。目前,辅酶Q10制备的保健组合物或胶囊已有报道,例如2012年10月31日公布的CN102754829A中国发明专利说明书中公开的“一种含辅酶Q10的保健组合物、胶囊制剂及制备方法”,其保健组合物的配料为:2~40份的辅酶Q10、60~98份的乙酯型或甘油三酯型鱼油及0.01~10份的辅料;其将辅酶Q10和鱼油进行配方组合,能使二者充分发挥各自功效,协同起到抗疲劳作用。2010年12月1日公开的CN101897440A中国发明专利说明书中公开的“辅酶Q10复合软胶囊及其制备方法”,其囊内容物由下述原料原料按重量比组成:辅酶Q10∶乳酸锌∶亚硒酸钠∶维生素E∶玉米油=1∶(0.8-1.6)∶(0.001-0.005)∶(1.5-3.5)∶(15-25)。现有公开的含辅酶Q10的软胶囊均存在着组份少、疗效不理想的不足。
发明内容
为了克服现有技术中含辅酶Q10的软胶囊均存在着组份少、疗效不理想的不足,本发明提供一种组份科学、搭配合理、疗效好的提高免疫力、保护脏器的软胶囊及其制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种提高免疫力、保护脏器的软胶囊,其是由软胶囊体和封入软胶囊体内的内容物组成,其特征在于:所述的内容物是由下列组分按重量百分比组成:蜂胶15%~35%、葛根提取物10%~18%、辅酶Q1010%~15%、积雪草提取物9%~13%、绿茶提取物8%~15%、蜂王浆4%~8%、亚麻籽油5%~15%、紫苏籽油3%~7%和蜂蜡3%~7%,其组分的重量百分比之和为100%;所述的软胶囊体是由明胶、水、甘油按100∶100∶40的比例制成;所述的软胶囊体与所述的内容物的重量比为:1∶2~4。
所述内容物是由下列重量百分比的组分组成:蜂胶25%、葛根15%、辅酶Q1013%、积雪草提取物10%、绿茶提取物10%、蜂王浆5%、亚麻籽油10%、紫苏籽油6%和蜂蜡6%。
所述的蜂胶中含总黄酮不低于15%;所述的葛根提取物中所含有的葛根素不低于4%。
一种提高免疫力、保护脏器的软胶囊的制备方法,其特征在于:经过下列工艺步骤:
(a)过筛:将葛根提取物、积雪草提取物、绿茶提取物分别过100目筛,备用;
(b)粉碎:将蜂胶块按照比例称量后,进行粉碎,备用;
(c)配料:按照重量百分比称量蜂胶15%~35%、葛根提取物10%~18%、辅酶Q1010%~15%、积雪草提取物9%~13%、绿茶提取物8%~15%、蜂王浆4%~8%、亚麻籽油5%~15%、紫苏籽油3%~7%和蜂蜡3%~7%,依次置于配料罐中,溶解并搅拌均匀;
(d)研磨、脱气:将步骤(c)中搅拌均匀的蜂胶、葛根提取物、辅酶Q10、积雪草提取物、绿茶提取物、蜂王浆、亚麻籽油、紫苏籽油和蜂蜡置于胶体磨中研磨三次,过100目筛,得内容物物料;再将内容物物料置于真空锅中,控制真空度-0.06Mpa,脱去物料中的气体;
(e)囊材的制作:将明胶、水、甘油按100∶100∶40比例称料,投送到化胶罐中,搅拌升温至60~75℃,待明胶全部熔化,控制真空度-0.06Mpa,减压抽真空,过80目筛,得到胶囊体滤液,放入保温容器内,备用;
(f)压丸:将步骤(e)所得到的胶囊体滤液和步骤(d)所得到的脱气后的内容物物料按照重量比:1∶2~4的比例送入压丸机中,压制出软胶囊;
(g)定型干燥:控制温度22~26℃,湿度为30~40%,静态干燥24小时后,将胶囊出丸;
(h)洗丸:将步骤(g)所得到的胶囊采用浓度为90%以上的酒精洗去胶囊表面的油渍;
(i)选拣:将洗去表面油渍的胶囊选拣去除非正型丸,得正型软胶囊;
(j)包装、成品:将步骤(i)所得到的正型软胶囊装瓶、封装,即成成品。
本发明的软胶囊具有提高免疫力和保护肝脏器官功能的,其封入软胶囊体内的内容物选用蜂胶、蜂王浆、蜂蜡、辅酶Q10、亚麻籽油、紫苏籽油进行了合理的配伍,并进一步选取了具有纯天然植物葛根、积雪草和绿茶的提取物,各种组分共同作用以达到最佳的提高免疫力效果。其中,
所选取的蜂胶是蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂。近代研究证明,蜂胶具有抗菌、消炎、止痒、抗氧化、增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能,能够分解色素、平复皱纹、减缓衰老、加快组织细胞的再生,还可强化免疫系统,增加抗体产量,显著增强细胞免疫功能与体液免疫功能;
所选取的蜂王浆是高蛋白,并含有维生素B类和乙酰胆碱等,具有抗氧化、抗辐射、抗疲劳、养容美颜等多种作用,所含的免疫球蛋白能明显的提高人体免疫力,所含的癸烯酸(10-HDA)是自然界中其它物质所没有的,具有显著的刺激机体淋巴细胞的活性、消炎杀菌、防癌抗癌等作用;
所选取的蜂蜡其主要成份有:酸类、游离脂肪酸、游离脂肪醇和碳水化合物。此外,还有类胡萝卜素、维生素A、芳香物质等,中医学上具有收涩、敛疮、生肌、止痛的功效;
所选取的葛根提取物含有多种黄酮类成分,主要活性成分为大豆素、大豆甙、葛根素、葛根素-7-木糖甙等,能够扩张血管,改善血液循环;降低心肌耗氧量,抑制癌细胞;增加冠脉流量,调整血液微循环,降低心脑血管疾病危险;提高肝细胞的再生能力,恢复正常肝脏机能;促进胆汁分泌,防止脂肪在肝脏堆积;促进新陈代谢,加强肝脏解毒功能,防止酒精对肝脏的损伤。经大量的文献证明,葛根提取物具有改善肝脏器官功能;
所选取的辅酶Q10是人体细胞新陈代谢不可或缺的辅酶,能清除自由基、抵抗氧化,令细胞充满活力,也可以改善心血管功能,是天然抗氧化剂、自由基清除剂;
所选取的积雪草提取物、绿茶提取物均采用纯天然植物提取,富含人体必需营养成分,并具有消炎抗菌等作用,增强人体免疫力,能明显刺激新生肝细胞的酶合成,改善肝脏器官的自我保护能力,防止自肠道的毒素对肝脏细胞的损坏,产生的酶能够促进损坏细胞的修复作用;
所选取的亚麻籽油、紫苏籽油是一种高不饱和度的天然油脂,所含主要成分为a-亚麻酸,最高含量高达50%~70%,是目前所发现的所有天然植物油中这种脂肪酸含量最高的,对护肝、降低胆固醇、降血脂等有显著作用。
本发明胶囊内容物的组分优势互补,清除自由基、活化细胞、添加纯天然植物提取物、促进机体再生,充分发挥组分间的协同增效作用,有效地提高了人体的免疫力及改善机体肝脏器官的修复作用。与现有技术相比,本发明的提高免疫力、保护脏器的软胶囊,其组分科学、搭配合理,提高免疫力效果好,并具有保护脏器之功能;其制备方法工艺合理,可操作性强,易实现规模化生产。
具体实施方式
下面结合本发明的实施例对本发明做进一步描述。
实施例1
一种提高免疫力、保护脏器的软胶囊的制备方法,经过下列工艺步骤:
(a)过筛:选取市售的葛根提取物、积雪草提取物、绿茶提取物分别过100目筛,备用;
(b)粉碎:将蜂胶块进行粉碎,备用;
(c)配料:按照重量百分比称量蜂胶25kg、葛根提取物15kg、辅酶Q1013kg、积雪草提取物10kg、绿茶提取物10kg、蜂王浆5kg、亚麻籽油10kg、紫苏籽油6kg和蜂蜡6kg,置于配料罐中,溶解并搅拌均匀;其中,蜂胶中含总黄酮不低于15%;葛根提取物中所含有的葛根素不低于4%;
(d)研磨、脱气:将步骤(c)中搅拌均匀的蜂胶、葛根提取物、辅酶Q10、积雪草提取物、绿茶提取物、蜂王浆、亚麻籽油、紫苏籽油和蜂蜡置于胶体磨中研磨三次,过100目筛,得内容物物料;再将内容物物料置于真空锅中,控制真空度-0.06Mpa,脱去物料中的气体;
(e)囊材的制作:称量明胶13.2kg、水13.2kg、甘油5.3kg投送到化胶罐中,搅拌升温至75℃,待明胶全部熔化,控制真空度-0.06Mpa,减压抽真空,过80目筛,得到胶囊体滤液,放入保温桶内,备用;
(f)压丸:将步骤(e)所得到的胶囊体滤液和步骤(d)所得到的脱气后的内容物物料送入压丸机中,压制出软胶囊;
(g)定型干燥:控制温度26℃,湿度为30%,静态干燥24小时后,将胶囊出丸;
(h)洗丸:将步骤(g)所得到的胶囊采用浓度为90%以上的酒精洗去胶囊表面的油渍;
(i)选拣:将洗去表面油渍的胶囊选拣去除非正型丸,得正型软胶囊;
(j)包装、成品:将步骤(i)所得到的正型软胶囊装瓶、封装,即成成品。
本实施例中,软胶囊体内的内容物的重量百分比分别为:蜂胶25%、葛根提取物15%、辅酶Q1013%、积雪草提取物10%、绿茶提取物10%、蜂王浆5%、亚麻籽油10%、紫苏籽油6%和蜂蜡6%;软胶囊体是由明胶、水、甘油按100∶100∶40的比例制成,软胶囊体与软胶囊体内的内容物重量比为:1∶3.15。本发明所得的软胶囊组分合理,剂量科学,提高免疫力效果好,并具有美容、抗衰老、保护脏器的功能;其制备方法工艺合理,可操作性强,易实现规模化生产。
实施例2
一种提高免疫力、保护脏器的软胶囊的制备方法,经过下列工艺步骤:
(a)过筛:选取市售的葛根提取物、积雪草提取物、绿茶提取物分别过100目筛,备用;
(b)粉碎:将蜂胶块进行粉碎,备用;
(c)配料:按照重量百分比称量蜂胶35kg、葛根提取物10kg、辅酶Q1015kg、积雪草提取物9kg、绿茶提取物8kg、蜂王浆8kg、亚麻籽油5kg、紫苏籽油7kg和蜂蜡3kg,置于配料罐中,溶解并搅拌均匀;其中,蜂胶中含总黄酮不低于15%;葛根提取物中所含有的葛根素不低于4%;
(d)研磨、脱气:将步骤(c)中搅拌均匀的蜂胶、葛根提取物、辅酶Q10、积雪草提取物、绿茶提取物、蜂王浆、亚麻籽油、紫苏籽油和蜂蜡置于胶体磨中研磨三次,过100目筛,得内容物物料;再将内容物物料置于真空锅中,控制真空度-0.06Mpa,脱去物料中的气体;
(e)囊材的制作:称量明胶10.4kg、水10.4kg、甘油4.2kg投送到化胶罐中,搅拌升温至65℃,待明胶全部熔化,控制真空度-0.06Mpa,减压抽真空,过80目筛,得到胶囊体滤液,放入保温桶内,备用;
(f)压丸:将步骤(e)所得到的胶囊体滤液和步骤(d)所得到的脱气后的内容物物料送入压丸机中,压制出软胶囊;
(g)定型干燥:控制温度24℃,湿度为40%,静态干燥24小时后,将胶囊出丸;
(h)洗丸:将步骤(g)所得到的胶囊采用浓度为90%以上的酒精洗去胶囊表面的油渍;
(i)选拣:将洗去表面油渍的胶囊选拣去除非正型丸,得正型软胶囊;
(j)包装、成品:将步骤(i)所得到的正型软胶囊装瓶、封装,即成成品。
本实施例中,软胶囊体内的内容物的重量百分比分别为:蜂胶35%、葛根提取物10%、辅酶Q1015%、积雪草提取物9%、绿茶提取物8%、蜂王浆8%、亚麻籽油5%、紫苏籽油7%和蜂蜡3%;软胶囊体是由明胶、水、甘油约按100∶100∶40的比例制成,软胶囊体与软胶囊体内的内容物重量比为:1∶4。本发明所得的软胶囊组分合理,提高免疫力效果好,并具有保护脏器功能;其制备方法工艺合理,可操作性强,易实现规模化生产。
实施例3
一种提高免疫力、保护脏器的软胶囊的制备方法,经过下列工艺步骤:
(a)过筛:选取市售的葛根提取物、积雪草提取物、绿茶提取物分别过100目筛,备用;
(b)粉碎:将蜂胶块进行粉碎,备用;
(c)配料:按照重量百分比称量蜂胶15kg、葛根提取物18kg、辅酶Q1010kg、积雪草提取物13kg、绿茶提取物15kg、蜂王浆4kg、亚麻籽油15kg、紫苏籽油3kg和蜂蜡7kg,置于配料罐中,溶解并搅拌均匀;其中,蜂胶中含总黄酮不低于15%;葛根提取物中所含有的葛根素不低于4%;
(d)研磨、脱气:将步骤(c)中搅拌均匀的蜂胶、葛根提取物、辅酶Q10、积雪草提取物、绿茶提取物、蜂王浆、亚麻籽油、紫苏籽油和蜂蜡置于胶体磨中研磨三次,过100目筛,得内容物物料;再将内容物物料置于真空锅中,控制真空度-0.06Mpa,脱去物料中的气体;
(e)囊材的制作:称量明胶15kg、水15kg、甘油6kg投送到化胶罐中,搅拌升温至60℃,待明胶全部熔化,控制真空度-0.06Mpa,减压抽真空,过80目筛,得到胶囊体滤液,放入保温桶内,备用;
(f)压丸:将步骤(e)所得到的胶囊体滤液和步骤(d)所得到的脱气后的内容物物料送入压丸机中,压制出软胶囊;
(g)定型干燥:控制温度22℃,湿度为35%,静态干燥24小时后,将胶囊出丸;
(h)洗丸:将步骤(g)所得到的胶囊采用浓度为90%以上的酒精洗去胶囊表面的油渍;
(i)选拣:将洗去表面油渍的胶囊选拣去除非正型丸,得正型软胶囊;
(j)包装、成品:将步骤(i)所得到的正型软胶囊装瓶、封装,即成成品。
本实施例中,软胶囊体内的内容物的重量百分比分别为:蜂胶15%、葛根提取物18%、辅酶Q1010%、积雪草提取物13%、绿茶提取物15%、蜂王浆4%、亚麻籽油15%、紫苏籽油3%和蜂蜡7%;软胶囊体是由明胶、水、甘油按100∶100∶40的比例制成,软胶囊体与软胶囊体内的内容物重量比为:1∶2.8。本发明所得的软胶囊组分合理,剂量科学,提高免疫力效果好,并具有保护脏器的保健功能;其制备方法工艺合理,可操作性强,易实现规模化生产。
下面采用动物试验来说明本发明的软胶囊具有提高免疫力、保护脏器的功能。
1、材料和方法
1.1、受试样品:按照本发明实施例一提供的提高免疫力、保护脏器软胶囊生产工艺,生产出500mg/粒软胶囊样品。按照人体推荐摄入量为每日2次,每次2粒,即人体每日推荐量为2.0g/60kg.bw(33.33mg/kg.bw)。
1.2、试验动物与组分:实验动物由山东大学动物实验中心提供的健康SPF昆明种小鼠,生产许可证号为SCXK(鲁)20090001。将实验动物随机分为4个免疫大组,每大组55只。
1.3、实验环境条件:实验环境为屏障环境。环境温度22℃±2℃,相对湿度50%±10%。实验动物环境设施合格证号为鲁动环字H2002100112号。
1.4、剂量选择与受试物给与方式:根据人体推荐量(33.33mg/日/kg.bw),按相当于人体推荐量的5倍、10倍、30倍确定小鼠的低、中、高剂量分别为:0.17g/kg.bw、0.33g/kg.bw、1g/kg.bw,经口每日一次灌胃给予小鼠受试物,灌胃体积按10mL/kg.bw。灌胃前用玉米油溶解并稀释受试物,对照组分别以等体积的蒸馏水和玉米油代替受试物,连续给予30d后测各项免疫指标。
1.5、主要仪器与试剂
主要仪器:动物天平、分析天平、洁净工作台、游标卡尺(精密度0.01mm)、微量注射器(25μL)、CO2培养箱、恒温水浴、离心机、紫外分光光度计、酶联免疫检测仪、光学显微镜、微量加样器(20~200μL、100~1000μL)。无菌手术器械、200目筛网、玻璃平皿、纱布、试管、血细胞计数器、平底细胞培养板、U型细胞培养板、计时器、血色素吸管、玻片架。
试剂:绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、刀豆蛋白A(ConA)、补体(豚鼠血清)、Hank’s液、青链霉素、SA缓冲液、琼脂糖、MTT、小牛血清、PRMI1640培养液、PBS缓冲液、乳酸钠、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯磷酸盐、氧化型辅酶I、1%冰醋酸、1mol/LHCl、0.1%NP40(v/v)、酸性异丙醇(96mL异丙醇加4mL1mol/L的HCl)、YAC-1细胞、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液、印度墨汁、1g/LNa2CO3、鸡红细胞、甲醇、丙酮Giemsa染液等。
1.6、实验方法:
1.6.1、脏器体重比值测定:小鼠称重后脱臼处死,取其胸腺、脾脏,去尽筋膜,用滤纸吸干脏器表面血污并称重,计算胸腺体重比值与脾脏体重比值。所得数据,用PEMS统计软件进行方差分析。
1.6.2、迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法):取羊血,脱去纤维,用生理盐水洗涤3次,每只小鼠经腹腔注射2%(v/v,用生理盐水配制)压积SRBC0.2mL,致敏后4天,测量左足后跖部厚度,同一部位测量三次,取平均值。然后在测量部位皮下注射20%压积SRBC20μL,于注射后24h测量左后足跖部厚度,以攻击前后足跖厚度之差值来表示DTH的程度。
所得数据为计算资料,用PEMS统计软件进行方差分析,若受试物组攻击前后足跖厚度的差值高于对照组,且差异有显著性(P<0.05),可判定该受试物有提高小鼠迟发型变态反应能力的作用。
1.6.3、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法):无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中,制成细胞悬液。用Hank’s液洗涤2次,每次1000rpm离心10min。然后将细胞悬液浮于1mLRPMI1640的完全培养液中,计数活细胞数,调整细胞浓度为3×106个/mL。将细胞悬液分两孔加入培养板中,每孔1mL,在其中一孔加75μLConA液,另一孔作为对照,置于5%CO2、37℃孵箱培养68h,每孔加入50μLMTT,继续培养4h。每孔加入1mL酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解,然后将液体移入比色杯中,用紫外分光光度计,在570nm波长处测定其光密度值(OD值)。计算试验孔OD值和对照孔OD值之差,以此表示淋巴细胞的增殖能力。
所得数据为计算资料,用PEMS统计软件进行方差分析,若受试物组淋巴细胞的增殖能力高于对照组,且差异有显著性(P<0.05),可判定该受试物有提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力的作用。
1.6.4、抗体生成细胞测定(Jerne改良玻片法):取羊血,脱去纤维,用生理盐水洗涤3次,每只小鼠经腹腔注射2%(v/v,用生理盐水配制)压积SRBC0.2mL,将SRBC免疫5天后的小鼠处死,取脾,制成细胞悬液。将10g/L琼脂加热溶解后,与等量双倍Hank’s液混合,分装小试管,每管0.5mL,再向管内加10%(v/v,用SA液配制)压积SRBC50μL、脾细胞悬液25μL,迅速混匀后,倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上,待琼脂凝固后,将玻片水平扣放在片架上,放入CO2培养箱孵育1.5h,然后将补体加入玻片架凹槽内,继续温育1.5h后,技术溶血空斑数。
所得数据为计算资料,用PEMS统计软件进行方差分析,若受试物组溶血空斑数高于对照组,且差异有显著性(P<0.05),可判定该受试物有增加小鼠抗体细胞数的作用。
1.6.5、小鼠血清溶血素的测定:取羊血,脱去纤维,用生理盐水洗涤3次,每只小鼠经腹腔注射2%(v/v,用生理盐水配制)压积SRBC0.2mL,免疫5天后摘除小鼠眼球,取血于离心管内,放置1h,将凝固血与管壁剥离,离心(2000rpm,10min),收集血清。用生理盐水置约1h,将凝固血与管壁剥离,离心(2000rpm,10min),收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释,将不同稀释度血清分别置于微量血凝试验板内,每孔100μL,再加入0.5%SRBC悬液100μL,混匀,置于湿盒内,于37℃温箱孵育3h,记录血球凝集程度。计算抗体积数。
血清凝集度分为5级,按以下标准判定。0级:SRBC全部下沉,集中在孔底部形成致敏的圆点状,四周液体清晰;I级:SRBC大部分沉积在孔底部形成圆点状,四周有少量凝集的SRBC;II级:凝集的SRBC在孔底部形成薄层,中心可以明显见到一个疏松的红点;III级:凝集的SRBC均匀地铺散在孔底成一薄层,中心隐约可见一个红点;IV级:凝集的SRBC在孔底成一薄层,凝块有时成卷折状。
所得数据为计算资料,用PEMS统计软件进行方差分析,若受试物组血清溶血素抗体积数高于对照组,且差异有显著性(P<0.05),可判定该受试物有增加小鼠血清溶血素水平的作用。
1.6.6、小鼠碳廓清实验:小鼠尾静脉注射1∶5稀释的印度墨汁,待墨汁注入,立即计时,注入墨汁后2min、10min,分别从內眦静脉取血20μL,并将其加入2mLNa2CO3溶液中。用紫外分光光度计在600nm波长处测光密度值,以Na2CO3溶液作空白对照。将小鼠处死,取其肝脏和脾脏称重。按下式计算吞噬指数a:
K=(lgOD1–lgOD2)/(t2–t1),a=体重÷(肝重+脾重)×k1/3;
所得数据为计算资料,用PEMS统计软件进行方差分析,若受试物组的吞噬指数高于对照组,且差异有显著性(P<0.05),可判定该受试物有增加小鼠单核-巨噬细胞的碳廓清能力的作用。
1.6.7、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法):小鼠腹腔注射20%压积鸡红细胞悬液1mL,间隔30min,脱臼处死,取腹腔巨噬细胞洗液1mL,滴于载玻片上,放入垫有湿纱布的搪瓷盒内,移入37℃孵箱温育30min后,于生理盐水中漂洗,晾干。以1∶1丙酮甲醇固定,4%Giemsa-磷酸缓冲液染色,再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数,每片计数100个巨噬细胞,按下式计算吞噬率和吞噬指数:
吞噬率%=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100;
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数;
所得数据为计算资料,若受试物组的吞噬率或吞噬指数明显高于0.000g/kg.bw组,且差异有显著性(P<0.05),可判定该受试物有增加小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的作用。
1.6.8、小鼠NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDT测定法):试验前24h将YAC-1细胞进行传代培养,用前以Hank’s液洗三次,用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL。将小鼠脱臼处死,无菌取脾,制备脾细胞悬液,用Hank’s液洗三次,每次1000rpm离心10min。再用2mL含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬,用台酚兰染色计数,调整细胞浓度为2×107个/mL,使效靶比为50∶1。
取靶细胞和脾细胞各100μL,加入U型培养板,靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL,靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μL,上述各项均设三个平行孔,5%CO2、37℃培养箱培养4h,将培养板以1500rpm离心5min,每孔取上清液100μL置于酶标板中,同时加入LDH基质液100μL,反应3min,然后每孔加入1mol/L的HCl30μL终止反应,用酶标仪在490nm处测定OD值。按下式计算NK细胞活性:
NK细胞活性%=(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100;
LDH基质液的配制:乳酸锂5×10-2mol/L
硝基氯化四氮唑6.6×10-4mol/L
吩嗪二甲酯硫酸盐2.8×10-4mol/L
氧化型辅酶I1.3×10-3mol/L
将上述试剂溶于0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液中。
所得数据为计算资料,用PEMS统计软件进行方差分析,NK细胞活性需按X=Sin-1(P)1/2进行数据转换,式中P为NK细胞活性,用小数表示,若受试物组的NK细胞活性高于对照组,且差异有显著性(P<0.05),可判定该受试物有增加小鼠NK细胞活性能力的作用。
1.7、实验数据统计:实验数据用PEMS统计软件对各个实验原始数据进行方差齐性检验,满足“方差齐”要求的数据资料用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理;对方差不齐的数据资料进行适当的变量转换,待满足“方差齐”要求后,用转换所得的数据进行统计处理。
1.8、结果判定:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性,可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或者任一实验的一个以上剂量组结果阳性,可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或者任一实验的一个以上剂量组结果阳性,可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或者任一实验的一个以上剂量组结果阳性,可判定单核-巨噬细胞功能测定结果阳性。NK细胞活性实验的一个以上剂量组结果阳性,可判定NK细胞活性测定结果阳性。
2、结果
2.1、软胶囊对小鼠体重的影响:见表1
表1软胶囊对小鼠体重的影响 ()
由表1可见,小鼠初始体重各剂量组与对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,体重增长值在溶剂对照组及各剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),即软胶囊对小鼠体重无影响。
2.2、软胶囊对小鼠脏器体重比值的影响:见表2、表3.
表2软胶囊对小鼠脾脏体重比值的影响()
由表2可见,经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,经统计学处理,其脾脏体重比值在溶剂对照组及各剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),即软胶囊对小鼠脾脏体重比值无影响。
表3软胶囊对小鼠胸腺体重比值的影响 ()
由表3可见,经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,经统计学处理,其胸腺体重比值在溶剂对照组及各剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),即软胶囊对小鼠胸腺体重比值无影响。
2.3、软胶囊对小鼠细胞免疫功能的影响
2.3.1、软胶囊对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响:见表4.
表4软胶囊对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
*P<0.05
由表4可见,经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,经统计学处理,其足跖肿胀度在溶剂对照组及低剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),在中、高剂量组与水对照组间比较,差异均有显著性(P<0.05),即软胶囊对可增强小鼠的迟发型变态反应能力。
2.3.2、软胶囊对ConA诱导小鼠淋巴细胞转化实验的影响:见表5
表5软胶囊对ConA诱导小鼠淋巴细胞转化实验的影响 ()
*P<0.05
由表5可见,经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,经统计学处理,其淋巴细胞增殖能力在溶剂对照组及低剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),在中、高剂量组与水对照组间比较,差异均有显著性(P<0.05),即软胶囊对可增强小鼠的淋巴细胞转化能力。
2.4、软胶囊对小鼠体液免疫的影响
2.4.1、软胶囊对小鼠抗体生成细胞数的影响:见表6。
表6软胶囊对小鼠抗体生成细胞数的影响 ()
*P<0.05
由表6可见,经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,经统计学处理,其抗体生成细胞数在溶剂对照组及低剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),在中、高剂量组与水对照组间比较,差异均有显著性(P<0.05),即软胶囊对可提高小鼠抗体生成细胞数的作用。
2.4.2、软胶囊对小鼠血清溶血素的影响:见表7。
表7软胶囊对小鼠血清溶血素的影响 ()
*P<0.05
由表7可见,经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,经统计学处理,其抗体积数溶剂对照组及低剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),在中、高剂量组与水对照组间比较,差异均有显著性(P<0.05),即软胶囊对可提高小鼠血清溶血素水平的作用。
2.5、软胶囊对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响
2.5.1、软胶囊对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响:见表8。
表8软胶囊对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响 ()
*P<0.05
由表8可见,经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,经统计学处理,其单核-巨噬细胞碳廓清能力在溶剂对照组及低剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),在中、高剂量组与水对照组间比较,差异均有显著性(P<0.05),即软胶囊对可增强小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力。
2.5.2、软胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响:见表9、表10。
表9软胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞鸡红细胞吞噬率的影响 ()
*P<0.05
表10软胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞鸡红细胞吞噬指数的影响()
*P<0.05
由表9、表10可见,经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,经统计学处理,其腹腔巨噬细胞鸡红细胞吞噬率和吞噬指数在溶剂对照组及低剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),在中、高剂量组与水对照组间比较,差异均有显著性(P<0.05),即软胶囊对可增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力。
2.6、软胶囊对小鼠NK细胞活性的影响:见表11。
表11软胶囊对小鼠NK细胞活性的影响
*P<0.05
由表11可见,经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,经统计学处理,其NK细胞活性在溶剂对照组及低、中剂量组与水对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05),在高剂量组与水对照组间比较,差异均有显著性(P<0.05),即软胶囊对可增强小鼠NK细胞活性。
3、结论
经口给予小鼠不同剂量的软胶囊30天,对小鼠体重增长无不良影响,对小鼠脾脏体重比值和胸腺体重比值无影响,小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞吞噬能力和NK细胞活性功能测定结果均为阳性。结果表明,采用本发明所给出的工艺制备的软胶囊具有增强免疫力功能、保护脏器的作用。
Claims (1)
1.一种提高免疫力、保护脏器的软胶囊,其是由软胶囊体和封入软胶囊体内的内容物组成,所述的软胶囊体是由明胶、水、甘油按100∶100∶40的比例制成;所述的软胶囊体与所述的内容物的重量比为:1∶3.15,其特征在于:所述的内容物是由下列组分按重量百分比组成:蜂胶25%、葛根提取物15%、辅酶Q1013%、积雪草提取物10%、绿茶提取物10%、蜂王浆5%、亚麻籽油10%、紫苏籽油6%和蜂蜡6%;其中,所述的蜂胶中含总黄酮不低于15%;所述的葛根提取物中所含有的葛根素不低于4%。
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