CN101485463A - 一种具有多种保健功效的天然产品组方 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有多种保健功效的天然产品组方，该组方主要由下列重量份的原料药制成：灵芝提取物200～400重量份，银杏叶提取物200～400重量份，番茄红素50～150重量份；其中，灵芝提取物中灵芝多糖含量大于10％。本发明组方充分发挥银杏叶提取物、灵芝提取物、番茄红素三者的药效，且优势互补，并且组方的药效远优于单味药材提取物，具有显著的提高人体免疫调节，降低血脂的功效，适于“三高”亚健康人群服用。

Description

一种具有多种保健功效的天然产品组方

技术领域

本发明属于中药制药领域，涉及一种具有多种保健功效的天然产品组方。

背景技术

随着我国人民生活水平的提高，高糖、高脂、高盐食品越来越多地被人们摄入，高血压、高血脂、高血糖的所谓三高人群也越来越多。由“三高”诱发的心脑血管病、发病率和死亡率已居各类疾病首位。对于此三高病人及确诊三高前的亚健康人群，一般说，不须服用西药，选用合适的中药调节很有必要。

银杏树又名公孙树或白果树，为古代子遗植物，其叶和果、花粉都具有调节血脂，增进智力，改善微循环等多种作用。目前已广泛应用于药品及保健品及保健食品领域。我国为银杏资源大国，近年来银杏叶的深加工及制剂都有了长足的进步，如银杏叶片、银杏叶颗粒、银杏叶胶囊等在中老年高血脂、高血压、高血糖等“富贵病”人群中有较高声誉，服用人群广泛。

灵芝是我国一味传统中药材，历史上曾被赋予很多文化及神话色彩。现代研究表明灵芝含有灵芝多糖及三萜类有效成分，具有十分全面而且确切的保健功效，如抑制肿瘤、抗突变、抗放射、镇静安神等方面，而且安全性较高；灵芝提取物(Ganoderma lucidum extract)主要含有灵芝酸(ganoderic acid)A、B、C、E、K、R、S、T等60余种甾醇类化合物，灵芝多糖等，易于其他成分配伍，可起到减毒增效作用。

番茄红素(Tomato Lycopene)是类胡萝卜素的一种，是一种存在于自然界的天然色素。广泛存在于西瓜、葡萄、柚子、苦瓜等食品中，因最早发现于番茄中而得名。番茄红素是强效的天然氧化剂，可上调内源性抗氧化酶，并可诱导细胞间连接通讯，因而具有显著的血管内皮保护作用，肿瘤生长抑制作用等生物活性。在心脑血管疾病、肿瘤等防治以及抗疲劳、延缓衰老、保护前列腺等方面有着良好的应用前景。

至今为止，寻找一种能同时有效提高人体免疫调节，降低血脂的天然产品组方仍是科学研究的热点，本发明人经过反复研究并通过药效实验验证，终于找到具有该种功效的天然产品组方，该组方的疗效比单味药材的疗效有显著性提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能显著提高人体免疫调节，降低血脂的天然产品组方。

本发明组方及用量是经过大量实验摸索总结得出的，各组分用量在下述范围内具有较好的疗效：

一种具有多种保健功效的天然产品组方，其特征在于该组方主要由下列重量份的原料药制成：灵芝提取物200～400重量份，银杏叶提取物200～400重量份，番茄红素50～150重量份；其中，灵芝提取物中灵芝多糖含量大于10％。

本发明组方优选主要由下列重量份的原料药制成：灵芝提取物300重量份，银杏叶提取物300重量份，番茄红素100重量份；其中，灵芝提取物中灵芝多糖含量大于10％。

上述组方还可包含药学可接受的载体和赋形剂，制成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液等剂型。

上述具有多种保健功效的天然产品组方在制备能提高人体免疫调节，降低血脂的保健食品或药物中应用。

本发明所采用的银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E.，为银杏科植物银杏Ginkgo bilobaL.的干燥叶提取物，符合《中国药典》一部2005版要求，可自提或市售可得。番茄红素Tomato Lycopene也为市售可得。本发明灵芝提取物主要选用赤芝Canodermalucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.的干燥子实体即赤芝药材进行水提、过滤、浓缩，喷雾干燥即可，或者直接来源于市售的灵芝提取物(Ganoderma lucidum extract)，本发明采用的灵芝提取物中要求灵芝多糖含量大于10％。本发明所述的百分含量均为重量百分含量。

本发明的有益效果：本配方选用银杏叶提取物、灵芝提取物、番茄红素，充分发挥三者的药效，且优势互补，并且组方的药效远优于单味药材提取物，具有显著的提高人体免疫调节，降低血脂的功效，适于一般“三高”亚健康人群服用。同时，根据中医相关理论，在此方中，灵芝扶正固本，为君药，银杏叶调经活血，为臣药，而番茄红素可起到使药久效，三方相配，相得益彰，广泛适用于亚健康人群。

本发明组方为确定配方合理性，对该组方配比进行了药效学初步研究。

实验材料：本发明组方样品中的灵芝提取物，银杏叶提取物以及对照组灵芝提取物，银杏叶提取物均按照实施例1方法制备得到。其中，样品组按照800mg/人.日给药时，包含本发明组方700mg(包含灵芝提取物300mg，银杏叶提取物300mg，番茄红素100mg)和淀粉100mg。

实验方法及结果：

1、提高免疫力初步药效学实验(小鼠碳廓清试验)

①取体重18～22g的雌性昆明种小鼠，随机分为4组，每组10只，分组及给药方法见下表，每日灌胃，连续30日。

②每鼠尾静脉注入三倍稀释的印度墨汁(0.1mg/10g体重)，注入2分钟及10分钟分别以内眦静脉从取血20μl，并将其加到2ml0.1％Na₂CO₃中，用分光光度计在600nm波长处测得密度值。同时将小鼠处死，取肝脏、脾脏称重。

③数据处理

用校正的吞噬指数a表示小鼠碳廓清能力，用方差分析进行数据统计。

可以看出，选用样品组800mg/人.日，对小鼠碳廓清的能力明显高于灵芝提取物300mg/人.日及800mg/人.日。

2、调节血脂初步药效学实验

①选取雄性健康大鼠50只，体重100～150g之间，随机分为5组，每组10只大鼠，其中1～4组以高脂饲料饲养，5组以基础饲料饲养。2组每日灌胃49.5mg/kg.bw银杏叶提取物(相当于人体服用量300mg/人.日银杏叶提取物)，3组每日灌胃132mg/kg.bw银杏叶提取物(相当于800mg/人.日银杏叶提取物)，4组每日灌胃132mg/kg.bw样品组(相当于800mg/人.日样品，其中本发明组方700mg(包含灵芝提取物300mg，银杏叶提取物300mg，番茄红素100mg)和淀粉100mg)。

②10日后，将大鼠断尾取血测定TC、TG值(TC总胆固醇，TG总甘油三脂)。

③结果及数据分析

④可以看出，选用样品组，降血脂功效远优于单纯的银杏叶提取物。

具体实施方式

以下通过药效学实验进一步阐述本发明药物的有益效果。

试验例1  本发明组方样品增强免疫力功能动物实验

1 材料和方法

1.1 样品：本发明组方样品，由南京中科集团提供，批号20040516，置阴凉干燥处保存，供实验用。按人体日摄入量800mg(包含灵芝提取物300mg，银杏叶提取物300mg，番茄红素100mg，淀粉100mg)取用。

1.2 试验动物：选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的F1代健康雄性小鼠120只及BALB/C健康雄性小鼠80只，实验动物生产许可证号为SCXK(沪)2003-0002，合格证号：0005561、0005563。作以下随机分组：

I组：F1代小鼠40只，18.5～22.7g，分为4组，每组10只，进行二硝基氟苯诱导小鼠DTH试验；

II组：BALB/C小鼠40只，17.0～21.7g，分组4组，每组10只，进行小鼠抗体生成细胞及半数溶血值(HC₅₀)试验；

III组：BALB/C小鼠40只，17.1～21.4g，分组4组，每组10只，进行小鼠ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化、NK细胞活性试验。

1.3 剂量：每人(按60kg体重计)每日推荐摄入量为800mg，相当于13.2mg/d/kg.bw。分别设计三个剂量组即66mg/d/kg.bw、132mg/d/kg.bw、396mg/d/kg.bw，另设0mg/d/kg.bw组以无菌水代替受试物，经口每日一次给予小鼠相应剂量的受试物，连续灌胃30d后测各项增强免疫力功能指标。小鼠灌胃量为0.1ml/10g.bw。

1.4 主要试剂：DNFB、SRBC、豚鼠血清、RPMI1640、ConA、MTT、异丙醇、SA缓冲液、都氏试剂、YAC-1细胞、LDH基质液。

1.5 主要仪器：打孔器、T1000型电子天平、JA2003型电子天平、722型分光光度计、超净工作台、酶标仪、二氧化碳培养箱。

1.6 试验方法：按《保健食品检验与评价技术规范-2003版》之增强免疫力功能检验方法进行。

1.6.1 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)

各剂量组动物连续灌胃30d，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成单个细胞悬液，经200目筛网过滤，用Hank’s液洗3次，每次离心10min(1000r/min)，然后将细胞悬浮于1ml RPMI1640完全培养液中，台酚蓝染色计数活细胞数(应在95％以上)，调整细胞浓度为3×10⁶个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μlConA液，另一孔作为对照，置5％CO₂、37℃孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/m)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解.。将溶解液移入96孔培养板中，波长570nm，酶标仪测定光密度值。

1.6.2 二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型变态反应(耳肿胀法)：

各剂量组动物连续灌胃30d。每鼠用剪刀将腹部毛剪去，范围约3cm×3cm，用10mg/mlDNFB溶液50μl均匀涂抹致敏。5日后用10mg/mlDNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击，同时用不含DNFB的溶液10μl均匀涂抹于小鼠左耳(两面)作对照。攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm耳片，称重。同时取小鼠脾脏、胸腺并称重，计算脏/体比值。

1.6.3 血清溶血素测定：

各剂量组动物连续灌胃30d。制备2％(v/v)的绵羊红细胞(SRBC)悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫，4d后摘除眼球取血于离心管内，放置1h，2000r/min离心10min，分离并收集血清。血清200倍稀释后，按检验方法测定样品管及SRBC半数溶血的光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示。

1.6.4 抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)

各剂量组动物连续灌胃30d，每只鼠腹腔注射器2％(v/v)的SRBC悬液0.2ml进行免疫，4d后小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，放在盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成细胞悬液，经200目筛网过滤，离心(1000r/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮于5ml RPMI1640培养液中，计数细胞数，调整细胞浓度为5×10⁶个/ml。将表层培养基加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2～7.4两倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl10％(v/v，用SA液配制)SRBC，20μl脾细胞悬液(5×10⁶个/ml)，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入CO₂培养箱中孵育1.5h，然后将制备好的补体1∶10稀释后加入到玻片架凹槽内，继续孵育1.5h后，计数溶血空斑数。

1.6.5 NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法)

各剂量组动物连续灌胃30d，颈椎脱臼处死小鼠，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的水平皿中，研磨脾脏，制成单细胞悬液，经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，弃上清将细胞浆弹起，加入0.5ml灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5ml2倍Hank’s液及8ml Hank’s液，离心10min(1000r/min)，用1ml含10％小牛血清RPMI1640完全培养液重悬，用1％冰乙酸稀释后计数，台酚蓝染色计数活细胞(应在95％以上)，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个/ml。

试验前24h将靶细胞(YAC-1细胞)传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/ml。取YAC-1细胞和脾细胞各100μl(效靶比50：1)加入U型96孔培养板中，YAC-1细胞自然释放孔加YAC-1细胞和培养液各100μl，YAC-1细胞最大释放孔加YAC-1细胞和1％NP40各100μl，上述各项均设三个平行孔，于37℃、5％CO₂培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清液100μl置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，反应5min，每孔加入1mol/L的HCl30μl，在酶标仪490nm处测定光密度值。

1.6 饲养条件：小鼠在温度为18～22℃、相对湿度为40～70％的屏障系统中饲养。实验动物使用许可证号：SYXK(苏)2002-0014。小鼠辐照无菌饲料由江苏省协同医药生物工程有限公司提供。

1.7 数据分析：用SPSS10.0软件对各实验原始数据进行方差齐性检验，满足“方差齐”要求的数据资料，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足“正态方差齐”要求后，用转换所得的数据进行统计处理。

2 结果

2.1 本发明组方样品对小鼠体重的影响

由表1可见，各组小鼠的初始体重比较，差异均无显著性(p>0.05)。表明小鼠的初始体重在各组间较为均衡。经口给予小鼠不同剂量的本发明组方样品30d，经统计检验各剂量组体重增长值满足正态分布和方差齐性的要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表2、表3结果可见66mg/kg.bw、132mg/kg.bw、396mg/kg.bw组与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(p>0.05)。即本发明组方样品对小鼠的体重增长无影响。

表1 各组小鼠的初始体重(x±SD)

表2 各组小鼠的中期体重(x±SD)

表3 本发明组方对小鼠体重的影响(x±SD)

2.2 本发明组方对胸腺、脾脏器官的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明组方样品30d，所测定的胸/体比、脾/体比值进行方差齐性检验，满足方差齐性的要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表4结果可见，66mg/kg.bw、132mg/kg.bw、396mg/kg.bw组与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(p>0.05)。

表4 本发明组方样品对胸腺、脾脏器官的影响(x±SD)

2.3 本发明组方样品对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明组方样品30d，将加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值进行正态分布、方差齐性检验，满足正态分布要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表5结果可见，66mg/kg.bw、132mg/kg.bw、396mg/kg.bw组小鼠加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值显著高于0mg/kg.bw组。

表5 本发明组方样品ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响(x±SD)

2.4 本发明组方样品对DNFB诱导小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明组方样品30d，所测定值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表6结果可见，132mg/kg.bw、396mg/kg.bw组小鼠耳壳增重显著大于0mg/kg.bw组。

表6 本发明组方样品对DNFB诱导小鼠DTH的影响(x±SD)

2.5 本发明组方样品对小鼠血清半数溶血素形成(HC₅₀)的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明组方样品30d，所测定值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表7结果可见，396mg/kg.bw组小鼠血清HC₅₀含量显著高于0mg/kg.bw组。

表7 本发明组方样品对小鼠血清半数溶血素(HC₅₀)形成的影响(x±SD)

2.6 本发明组方样品对抗体生成细胞(溶血空斑数)的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明组方样品30d，所测定值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表8结果可见，396mg/kg.bw组小鼠溶血空斑数显著高于0mg/kg.bw组。

表8 本发明组方样品对溶血空斑数的影响(x±SD)

2.7 本发明组方样品对NK细胞活性的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明组方样品30d，所测定值经sin^-1X^1/2转化后进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表9结果可见，132mg/k.g.bw、396mg/kg.bw组小鼠NK细胞活性显著高于0mg/kg.bw组。

表9 本发明组方样品对NK细胞活性的影响

3 结论

本发明组方样品以66mg/kg.bw、132mg/kg.bw、396mg/kg.bw连续给样30d，结果显示：

(1)细胞免疫功能：66mg/kg.bw、132mg/kg.bw、396mg/kg.bw组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化显著高于0mg/kg.bw组；132mg/kg.bw、396mg/kg.bw组DNFB诱导小鼠DTH显著高于0mg/kg.bw组。

(2)体液免疫功能：396mg/kg.bw组溶血空斑数显著高于0mg/kg.bw组；174mg/kg.bw组血沮HC₅₀形成显著高于0mg/kg.bw组。

(3)NK细胞活性：132mg/kg.bw、396mg/kg.bw组NK细胞活性显著高于0mg/kg.bw组。

因此本发明组方样品具有增强免疫力功能，且效果显著。

试验例2  本发明组方样品辅助降血脂功能动物实验

1 材料与方法

1.1 样品：样品组，由南京中科集团提供，批号20040516，人体日摄入量：800mg/天/人(包含灵芝提取物300mg，银杏叶提取物300mg，番茄红素100mg，淀粉100mg)，即13.33mg/kgBW/d(成人体重以60kg计)。受试物用色拉油配置成所需浓度的灌胃液。

1.2 动物及分组：雄性SD大鼠40只，清洁级，体重150～200g，由中国科学院上海实验动物中心提供，许可证号：SCXK(沪)2003—0003；动物使用许可证号：SYXK(苏)2002—0057。动物适应环境5d后，取尾血，测定血清总胆固醇(TCH)、血清甘油三酯(TG)和血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL—CH)。按TCH值随即分为高脂对照组及低、中、高三个剂量组，分别给予色拉油及本发明组方样品内容物67.7mg/kg BW/d、133.3mg/kg BW/d、333.4mg/kgBW/d(三个剂量组分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍和20倍)。灌胃容量为10ml/kgBW。动物单笼饲养，自由摄取高脂饲料。连续灌胃30d，取尾血，测定血清TCH、血清TG和血清HDL—CH水平。

1.3 高脂饲料：按卫生部发布的《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》中的方法配制，基础饲料78.8％、胆固醇1％、胆盐0.2％。

1.4 检测方法：血清TCH和HDL—CH测定采用胆固醇氧化酶—过氧化物酶法测定，使用由上海荣升生物技术有限公司生产的试剂盒测定，批号分别为20040922、20040903；血清TG测定采用GPO—PAP法测定，使用浙江东瓯生物工程有限公司生产的试剂盒进行测定，试剂盒批号为2004400212。

1.5 仪器：电子天平(SL—1001型，0.1g，上海民桥电子仪器厂)、分光光度计(722型，上海第三分析仪器厂)。

1.6 数据统计处理方法：采用SAS统计软件对各实验组数据进行方差分析，用Dunnett’s t检验进行各剂量组与高脂对照组的比较。

2 结果

2.1 本发明组方样品内容物对大叔体重的影响：试验期间各组动物体重的变化见表10。方差分析结果表明，动物体重各组间无显著性差异(P>0.05)。

表10 本发明组方样品内容物对大鼠体重(g)的影响(均值±标准差)

2.2 本发明组方样品内容物对大鼠血清TCH含量的影响：本发明组方对各组动物血清中TCH的影响如表11所示，经方差分析结果显示，试验前各组动物血清TCH的检测值无显著性差异(F＝0.14，P>0.05)；试验后各组动物血清TCH水平差异有非常显著意义(F＝9.97，P<0.0001)，经Dunnett’s t检验，本发明高剂量组动物血清TCH水平与高脂对照组比较差异有显著意义(P<0.05)。结果表明本发明组方样品内容物在266.7mg/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的20倍)剂量时，具有降低试验大鼠血清TCH的作用。

表11 本发明组方样品内容物

a单因素方差分析，各组间有非常显著性差异(F＝9.97，P<0.0001)

^*Dennett’s t检验，与高脂对照组比较差异有显著意义(P<0.05)

2.3 本发明组方样品内容物对大鼠血清TG含量的影响：本发明对各组动物血清中TG的影响见表12。表12结果显示，经方差分析试验前各组动物血清TG的检测值无显著性差异(F＝0.04，P>0.05)；试验后各组动物血清TG水平差异有非常显著意义(F＝9.08，P<0.0001)，经Dennett’s t检验，本发明样品中、高剂量组动物血清TG水平与高脂对照组比较差异有显著意义(P<0.05).结果表明本发明样品在133.3mg/kg BW/d、266.7mg/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)剂量时，具有降低试验大鼠血清TG的作用。

表12 本发明组方样品内容物对大鼠血清TG(mol/L)的影响(均值±标准差)

a单因素方差分析，各组间有非常显著性差异(F＝9.97，P<0.0001)

^*Dennett’s t检验，与高脂对照组比较差异有显著意义(P<0.05)

2.4 本发明组方样品内容物对大鼠血清HDL—CH含量的影响：本发明样品对各组动物血清中HDL—CH的影响见表13。

表13 本发明组方样品内容物对大鼠血清HDL—CH(mol/L)的影响(均值±标准差)

表13结果显示，经方差分析试验前、试验后各组动物血清HDL—CH水平均无显著性差异(F值分别为0.06和0.99，P>0.05)。结果表明本发明样品在66.7mg/kg BW/d、133.3mg/kgBW/d、266.7mg/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、20倍)剂量时，对实验大鼠血清HDL CH的水平未见明显影响。

3 结论

3.1 经灌胃给予大鼠66.7mg/kg BW/d、133.3mg/kg BW/d、266.7mg/kg BW/d本发明配方样品(相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、20倍)时，对实验大鼠的体重未见明显影响。

3.2 经灌胃给予大鼠266.7mg/kg BW/d本发明配方样品(相当于人体推荐摄入量的20倍)时，具有降低试验大鼠血清总胆固醇的作用。

3.3 经灌胃给予大鼠133.3mg/kg BW/d、266.7mg/kg BW/d本发明配方样品(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)时，具有降低试验大鼠血清甘油三酯的作用。

3.4 经灌胃给予大鼠66.7mg/kg BW/d、133.3mg/kg BW/d、266.7mg/kg BW/d本发明配方样品(相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、20倍)时，对实验大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇的水平未见显著性影响。

根据《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》中“辅助降血脂功能检验方法”动物实验的判定标准，可判定本发明配方样品对实验大鼠具有降血脂功能的作用。

试验例3  抗突变试验(修改的Ames试验)

1 材料

1.1 受试样品：本发明样品组，由南京中科集团提供，批号20040516。人体日摄入量：800mg/天/人(包含灵芝提取物300mg，银杏叶提取物300mg，番茄红素100mg，淀粉100mg)。

1.2 菌株：经鉴定基因型符合要求的TA100，菌株过夜培养液细胞浓度均在10⁹个/ml或以上。

1.3 S9：由Aroclor 1254诱导的大鼠肝匀浆，S9混合液中S9浓度为10％。

1.4 剂量：称取样品500mg，用二甲基亚砜(DMSO)定容至10ml，37℃提取过夜，离心取上清液，并以此连续用DMSO作2倍稀释，共设5个剂量组。致突变物叠氮钠对照组和DMSO溶剂对照组。设平行样3个，共测2次。

1.5 主要仪器与试剂：低温调整离心机、低温水箱(-80℃)、恒温培养箱，震荡恒温水浴、蒸汽压力锅、匀浆器等。阳性物：叠氮钠(NaN₃)、二氨基芴(2-AF)分析纯。

2 方法

2.1 抗突变试验：0.1ml受试物、0.1ml致突变物与0.1ml菌液共同加入0.5mlS-9混合液(磷酸缓冲液0.2mol/L，PH7.4)，于37℃水浴预培养20min，取该悬液10μl，作10⁶稀释做细菌存活试验，其余一并加入2ml融化的(45℃水浴)顶层培养基，迅速倾入底层培养基，平放固化，37℃培养48h，计数菌落数。

2.2 存活试验：取适量的预培养过的细菌悬液，用磷酸缓冲液(PH7.0)作10⁵倍稀释后，取0.1ml稀释液加入2ml融化的顶层培养基，倾入营养肉汤平皿，37℃培养24h，计数活菌数。

2.3 计数各平皿菌落数，按下列公式计算相对菌落形成率、相对菌落及抑制率，按X²检验进行统计学处理。

2.3.1 相对菌菌形成率计算：

A(％)＝B/C×100％

A—相对菌落形成率；B—受试样品组菌落数(存活试验)；C—溶剂对照组菌落数(存活试验)

2.3.2 相对菌落数计算：

D＝E/A

D—相对菌落数；E—各组实际回变菌落数(抗突变试验)

2.3.3 抑制率计算

F(％)＝(G-H)/(G-I)×100％

F—抵制率；G—阳性对照组相对菌落数；H—受试样品组相对菌落数；I—溶剂对照组实际菌落数。

3 结果：受试物在加与不加S9的条件下，抑制致突变物对TA100菌株的致突变作用见表14，15。

由表14，15可见，在加与不加S9的条件下，受试物在2500μg/皿-5000μg/皿的受试浓度范围，相对菌落与NaN₃及2-AF诱导的TA100相对菌落数相比均明显减低，并具有剂量-反应关系，且可重复，表明受试物对修改的Ames试验抗突变阳性。

表14 受试样品抑制NaN₃诱导TA100(-S9)回复突变的作用(x±s)

表15 受试样品抑制NaN₃诱导TA100(-S9)回复突变的作用(x±s)

试验例4  抗突变试验(小鼠骨髓微核试验)

1 材料

1.1 受试样品：本发明配方样品，由南京中科集团提供，批号20040516。人体日摄入量为800mg(包含灵芝提取物300mg，银杏叶提取物300mg，番茄红素100mg，淀粉100mg)。设67mg/kg.b.wt、133mg/kg.b.wt和400mg/kg.b.wt3个剂量组(相当于人体推荐量的5倍、10倍、30倍)、1个致突变物对照组和1个阴性(双蒸水)对照组。受试物用双蒸水配制。

1.2 实验动物：健康雌性ICR小鼠50只，二级，体重25-30g，上海西普尔-必凯实验有限公司提供，合格证号：SCXK(沪)2002-0006。动物环境设施合格证号：SYXK(苏)2002-0004号。动物饲料来源及证号：苏动(饲)字第95001号。试验开始和结束时称取体重。

1.3 仪器与试剂：生物显微镜、玻璃片、解剖器、环磷酰胺(CP)、小牛血清。

2 方法(抗突变试验)：受试物组预先给予受试物，每日经口灌胃，连续30d，灌胃容积均为20ml/kg b.wt。试验最后两天，受试物组及致突变物叠氮钠对照组经口给予致突变物环磷酰胺(CP，40mg/kg.b.wt)两次(间隔24h)，在给予CP1h后再给予受试物，于第二次给予致突变物后6h，处死动物，取股骨骨髓悬于小牛血清中直接涂片，固定、染色、镜检，每只动物计数1000个嗜多染红细胞，检查具微核细胞，观察嗜多染红细胞比率(PCE/NCE)。按泊松分布进行统计分析。抑制率(％)计算同本报告中小鼠睾丸染色体畸变试验。

3 结果：对体重的影响见表16，抗微核试验结果见表17。

表16 本发明配方样品对小鼠体重的影响(x±s)

由表16可见，各剂量组受试物对动物体重均无明显影响，亦未观察到明显有害作用。

表17 本发明配方样品对CP诱发小鼠骨髓细胞微核的影响(x±s)

^*与阳性对照组相比p<0.05；#与阴性对照组相比p<0.01

致突变物对照组的微核率与阴性对照组相比有极显著差异(p<0.01)。3个受试物抗突变试验组的微核率均明显低于阳性对照组，中和高剂量组微核率与致突变物对照组相比均具有显著性差异(p<0.05)，并随受试物剂量的增加，对CP诱发的微核的抑制率呈增加趋势。该受试物具有抗CP诱发的微核作用。

试验例5  抗突变试验(小鼠睾丸染色体畸变试验)

1 材料

1.1 受试样品：本发明配方样品，由南京中科集团提供，批号20040516。人体日摄入量为800mg(包含灵芝提取物300mg，银杏叶提取物300mg，番茄红素100mg，淀粉100mg)。剂量设计同本报告中抗突变试验(小鼠骨髓微核试验)。

1.2 实验动物：健康雌性ICR小鼠50只，动物来源、体重范围、环境设施、饲料来源均同本报告中抗突变试验(小鼠骨髓微核试验)。试验开始和结束时称取体重。

1.3 仪器与试剂：生物显微镜、离心机、丝裂霉素C(MMC)、秋水仙素。

2 方法：受试物组连续给予受试物，致突变物对照组和阴性对照组给双蒸水，每天一次，取材前13d受试物组及致突变物对照组经口给予丝裂霉素C(MMC，2mg/kg b.w.)一次，给MMC1h后再给予受试物。受试物组继续每天给予受试物，两对照组给双蒸水。试验第30天，于动物处死前6h腹腔注射秋水仙素5mg/kg b.w.。处死动物，取睾丸、拉开精曲细管，低渗，固定，软化，染色，镜检。按泊松分布进行统计和推断。抑制率按下式计算：

抑制率(％)＝(A-B)/(A-C)×100

A—致突变物对照组畸变率，B—受试物组畸变率，C—阴性对照组畸变率

3 结果：受试物对体重的影响见表18，睾丸染色体畸变抗突变试验结果见表19。

表18 本发明配方样品对小鼠体重的影响(x±s)

由表18可见，各剂量组受试物对动物体重均无明显影响，亦未观察到明显有害作用。

表19 本发明配方样品对MMC诱发的小鼠睾丸染色体畸变的影响(x±s)

a，染色体断裂或断片；b，易位、四价体、三价体、染色体环等

^*与致突变物对照组相比p<0.05，#与致突变物对照组相比p<0.01

由表19可见，致突变物对照与阴性对照组相比各类细胞畸变率均显著升高，有显著性差异(p<0.01)，表示致突变模型建立成功。3个受试物组的畸变细胞率均低于致突变物对照组，中剂量组和高剂量组与致突变对照组相比具有显著性差异(p<0.05)，并随受试物剂量增加，对MMC诱发的小鼠精母细胞染色体畸变作用的抑制率呈增加趋势。提示受试物具有抗MMC诱发的小鼠精母细胞染色体畸变作用。

实施例1

本发明组方的颗粒剂的制备：

取灵芝提取物300g，银杏叶提取物300g，番茄红素100g，混合均匀，粉碎成细粉，加入100g淀粉做填充剂，加入乙醇做黏合剂，制成颗粒剂。其中，灵芝提取物中灵芝多糖含量为20％。

灵芝提取物的制备：取赤芝药材500g粉碎后加入赤芝药材10倍重的水提取3次，每次2小时、过滤、滤液浓缩至相对密度为1.1-1.2，喷雾干燥即得，所得灵芝提取物每300mg相当于灵芝生药材6g，灵芝提取物中灵芝多糖含量为20％。

银杏叶提取物的制备：取银杏叶500g，粉碎，加入银杏叶药材10倍重的70％乙醇加热回流提取3次，每次4小时、合并提取液，过滤、滤液回收乙醇并浓缩至适量，加于已处理好的DA201型号大孔吸附树脂柱上，依次用水及浓度为45％，65％和80％的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得。所得银杏叶提取物每300mg相当于银杏叶生药材3g。

实施例2

本发明组方的片剂的制备：

取灵芝提取物200g(购于常州中科生化有限公司，灵芝多糖含量大于10％)，银杏叶提取物200g(购于常州神马制药有限公司)，番茄红素50g(购于罗氏公司)，混合均匀，粉碎成细粉，加入乙醇做黏合剂，加入淀粉50g做填充剂，制成颗粒，干燥后，压制成片剂。

实施例3

本发明组方的胶囊剂的制备：

取灵芝提取物400g(购于常州中科生化有限公司)，银杏叶提取物400g(购于常州神马制药有限公司)，番茄红素150g(购于罗氏公司)，淀粉150g；混合均匀，粉碎成细粉，装入明胶硬胶囊制成胶囊剂。

实施例4

本发明组方的口服液的制备：

取灵芝提取物300g(购于常州中科生化有限公司)，银杏叶提取物300g(购于常州神马制药有限公司)，番茄红素100g(购于罗氏公司)，混合均匀，加入药学上可接受的辅料制成口服液。

Claims (5)

1、一种具有多种保健功效的天然产品组方，其特征在于该组方主要由下列重量份的原料药制成：灵芝提取物200～400重量份，银杏叶提取物200～400重量份，番茄红素50～150重量份；其中，灵芝提取物中灵芝多糖含量大于10％。

2、根据权利要求1所述的具有多种保健功效的天然产品组方，其特征在于该组方主要由下列重量份的原料药制成：灵芝提取物300重量份，银杏叶提取物300重量份，番茄红素100重量份；其中，灵芝提取物中灵芝多糖含量大于10％。

3、根据权利要求1或2所述的具有多种保健功效的天然产品组方，其特征在于该组方还包含药学可接受的载体和赋形剂。

4、根据权利要求3所述的具有多种保健功效的天然产品组方，其特征在于该组方制成颗粒剂、胶囊剂、片剂或口服液。

5、权利要求1、2或3所述的具有多种保健功效的天然产品组方在制备能提高人体免疫调节，降低血脂的保健食品或药物中的应用。