CN101491343A - 一种增强人体免疫力的保健品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种增强人体免疫力的保健品及其制备方法，该保健品含有的组分及其重量份为：50～200份人参提取物，30～300份黄芪提取物，30～200份淫羊藿提取物，10～80份巴戟天提取物。该保健品的制备方法包括步骤：(1)过筛；(2)将步骤(1)中各组分按照一定重量份置于混合机内均匀混合；(3)加水混合制成软材，制粒；(4)将步骤(3)中颗粒置烘箱内，80℃以下烘干，整粒。本发明的保健品为肾阳虚引起的免疫功能低下而设。人参、黄芪、淫羊藿和巴戟天四药合用，补肾之中皆补五脏，使肾精得充而虚损易复。

Description

一种增强人体免疫力的保健品及其制备方法

技术领域

本发明属于保健品领域，尤其涉及一种增强人体免疫力的保健品及其制备方法。

背景技术

随着生活节奏的加快，大部份人忽视或无暇顾及对自身体质的保养，造成免疫力降低，容易被各种细菌、病毒所侵扰，以至于形成各种疾病。

另外，我国逐步进入老龄化社会，老龄人口越来越多，在老龄人健康方面的投入也会越来越大。这部份人群中的大多数因为患有各种疾病、体质差而需要经常服药以维持健康。众所周知，老龄人的各种细胞功能逐步退化，由此而引发机体其他功能相继逐渐衰退，特别是肾脏功能，由此而引发机体其他功能相继逐渐衰退。

因此，需要研究开发可增强人体免疫力的保健品，尤其是防治肾阳虚引起的免疫功能低下的保健品。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种增强人体免疫力的保健品，旨在解决人体免疫力降低的问题。

本发明实施例的另一目的在于提供一种上述增强人体免疫力的保健品的制备方法。

本发明实施例提供的增强人体免疫力的保健品，含有的组分及其重量份如下：

人参提取物                50～200份

黄芪提取物            30～300份

淫羊藿提取物          30～200份

巴戟天提取物          10～80份

本发明实施例提供的增强人体免疫力的保健品的制备方法，包括如下步骤：

(1)将淀粉或微晶纤维素，以及人参提取物、黄芪提取物、淫羊藿提取物、巴戟天提取物分别过60～200目筛；

(2)将步骤(1)中各组分按照如下重量份置于混合机内均匀混合：

人参提取物            50～200份

黄芪提取物            30～300份

淫羊藿提取物          30～200份

巴戟天提取物          10～80份

淀粉或微晶纤维素      50～300份

(3)加入步骤(2)所得混合物总重量1～10％的水混合制成软材，10～30目筛制粒；

(4)将步骤(3)中颗粒置烘箱内，80℃以下烘干，用10～30目筛整粒。

上述技术方案，为肾阳虚引起的免疫功能低下而设。由于阳之生有赖阴、气之助，故本配方中又配以补气之药。配方中淫羊藿辛温入肾，巴戟天辛微温，也入肾，二味具为补肾阳，强筋骨。善补阳者，必用气送，则阳得气助，而无有不达。故再用人参、黄芪大补元气，调补五脏，强精通脉，有气中求阳之功。四药合用，补肾之中皆补五脏，使肾精得充而虚损易复。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供一种增强人体免疫力的保健品，含有的组分及其重量份如下：

人参提取物            50～200份

黄芪提取物            30～300份

淫羊藿提取物          30～200份

巴戟天提取物          10～80份

优选含量为：

人参提取物            50～150份

黄芪提取物            30～100份

淫羊藿提取物          30～100份

巴戟天提取物          10～50份

更优选方案为：

人参提取物            75～90

黄芪提取物            50～70

淫羊藿提取物          45～55

巴戟天提取物          20～30

上述实施例中，还含有重量份为的50～300淀粉或微晶纤维素。优选为100～150的淀粉。

上述实施例中，人参提取物是以人参为原料，经乙醇提取浓缩成稠膏，再用的乙醇醇降除杂，浓缩，喷雾干燥等工艺精制得到，有效成份为人参皂苷；黄芪提取物主要是以黄芪为原料，由乙醇回流提取除掉脂溶性成分，药渣用乙醇进一步回流提取除掉脂溶性成分、药渣水提，浓缩，乙醇沉降得多糖沉淀，干燥等工艺制得，有效成份为黄芪多糖；淫羊藿提取物以淫羊藿为原料，由乙醇提取、浓缩，水沉降，去渣，浓缩，喷雾干燥等工艺制得，有效成份为淫羊藿苷；巴戟天提取物是以巴戟天为原料，由乙醇回流去杂，水煮后再经乙醇沉降精制得到，主要成份为巴戟天多糖。而且，根据“卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知(卫法监发[2002]51号)规定”人参、黄芪、淫羊藿、巴戟天不能在普通食品中使用，但可以在保健食品中使用。另外，淀粉常作为食品添加剂用于食品中，也是一种常用的药用辅料，食用安全可靠。

经发明人研究，人参提取物可以增强免疫活性细胞的功能。人参皂苷和人参多糖可使网状内皮系统的吞噬功能增强。人参在升高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数的同时，也增加其细胞面积。巨噬细胞面积的增加，使受体数及靶细胞的接触面积增加，因而提高了吞噬功能。人参对实验动物能促进抗体和补体的生成，促进淋巴细胞转化。人参能提高天然杀伤细胞(NKC)的活性，促进干扰素(IFN)和白细胞间素(1L-2)的产生，人参花皂苷在体外实验中对天然杀伤细胞NKC-IFN-IL-2调节网起正调节作用。人参总皂苷对环核苷酸含量的影响随机体免疫反应水平不同而呈双相调节作用。实验证明，人参能使免疫受抑制动物免疫功能低下得以恢复，能对抗辐射引起的免疫功能下降，它还有抑制结核杆菌生长作用。

经发明人研究，人参之所以可提高小鼠的非特异性免疫力，是因为人参中含有的主要成份Rg1，对大鼠具有免疫促进作用。目前很多感染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病，都是辅助T细胞在分化时，Th1/Th2的比例失衡造成的，而Rg1从某种程度上可以纠正这种失衡。在以Th2为主要免疫途径的BALB/c小鼠中，当用Rg1预处理后接种念珠菌，免疫途径由Th2改为Th1，从而使小鼠对抗念珠菌病(Rg1本身对念珠菌无作用)；并且在用抗IFN-γ的抗体后，小鼠即使用Rg1预处理，仍不能对抗念珠菌病，更证实了Rg1激活Th1免疫途径。

经发明人研究，还发现黄芪及部份提取物能提高小鼠血浆cAMP含量，从而调节免疫平衡，加速淋巴细胞转化，增加T细胞功能，还可抑制自身抗体引起的免疫性疾病。对异种移植物宿主反应的动物模型试验，显示出全部逆转因环磷酰胺而造成的免疫抑制现象。黄芪在恶性肿瘤治疗中，有提高巨噬细胞吞噬率及T淋巴细胞转化作用，表明提高了细胞免疫功能。对细胞免疫功能降低的肝炎病人可增强细胞免疫，改善肝功能，对慢性支气管炎病人有升高IgM、IgG作用，表明黄芪是一种免疫调节剂。发明人还发现去除黄芪总黄酮后，黄芪中其它功能成份具有明显调节机体免疫功能的效能。而且，黄芪多糖促进脾细胞增殖反应，对亚适量ConA和LPS诱导脾细胞增殖反应也有显著促进作用，对脾细胞干扰素-γ和腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α的产生有显著促进作用。表明黄芪多糖显著增强小鼠免疫功能。

淫羊藿，又名仙灵脾，其药用历史悠久，李时珍在《本草纲目》中称其有“益精气，坚筋骨，补腰膝，强心力”之功效。现代药理实验研究表明，淫羊藿能增加心脑血管血流量，促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具抗衰老，抗肿瘤等功效。现代化学成份研究显示，淫羊藿的主要有效成份是淫羊藿总黄酮(totflavonoids of Epimedium，TFE)和淫羊藿多糖(EPS)。淫羊藿总黄酮(TFE)是从小蘖科淫羊藿属(Epimedium L)植物的茎叶中提取的总黄酮类成份，主要含有淫羊藿苷(icariine)和淫羊藿次苷等，药理研究发现，淫羊藿总黄酮是淫羊藿促进免疫功能，参与骨代谢，抗肿瘤，增强心血管活动等功能的有效成份。

用外源性皮质酮(CORT)造成大鼠下丘脑-垂体-肾上腺一胸腺(HPAT)轴抑制模型，观察补肾助阳要药淫羊藿对受抑大鼠的调节作用。结果表明，模型大鼠垂体、肾上腺、胸腺重量明显减轻；下丘脑室核小细胞区促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)阳性细胞及正中隆起CRF阳性神经纤维及垂体前叶促肾上腺皮质激素(ACTH)阳性细胞明显减少，胞体变小，染色变淡，肾上腺及胸腺小体明显减少；血浆ACTH皮质酮以及淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性、IFN-Y诱生能力明显降低，淫羊藿灌胃[10g/(kg·d)，连续14d]能有效改善皮质酮对HPAT轴形态与功能的抑制，与模型组比较，下丘脑室室核和正中隆起的CRF及神经纤维明显增多，肾上腺皮质束状带增宽，结构完整；胸腺皮质萎缩减轻，胸腺细胞数量增多。血浆ACTH、CORT含量明显上升，NK细胞活性及IFN-Y诱生能力显著提高。提示淫羊藿对实验性HPAT轴抑制大鼠有显著的改善作用，从而调节神经内分泌免疫的功能。

巴戟天是茜草科植物巴戟天的干燥根，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效，用于阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨痿软等症，巴戟天是历代医家补肾常用的药物之一，对内分泌系统、免疫系统及神经系统等通过不同的途径发挥一定的作用，毒理实验证明它是一种安全的药物。

发明人采用环磷酸胺(CTX)兔疫抑制模型法在小鼠兔疫抑制模型上，灌胃巴戟天水提液对抗CTX引起的兔疫抑制，使外周血中自细胞明显上升；给小鼠灌胃戟天水提液10天，能促进单核吞噬细胞系统对刚果红的廓清率(统计概率P＜0.05)；小鼠灌胃戟天水提液10天，能增强腹腔巨噬细胞吞噬红细胞的能力(统计概率P＜0.01)。表明戟天水提液对小鼠兔疫功能有一定的促进作用，具有增强细胞兔疫的功效。

实验显示，巴戟天多糖能增加幼年小鼠胸腺重量，明显提高小鼠巨噬细胞吞噬百分率，并能明显提高小鼠RFC的形成。

人参、淫羊藿对所测定的免疫功能指标都有明显的增强作用，人参、淫羊藿共同灌胃，则可以使淋巴细胞转化率、补体活性、巨噬细胞的吞噬功能3项指标超过单独使用两种药物，说明两者具有一定的协同效应。

本发明实施例的保健品剂型为胶囊，包括硬胶囊、软胶囊等，优选硬胶囊中肠溶胶囊。肠溶胶囊一般能在肠液的环境中迅速崩解，在一般环境下不易吸潮，能防止水份的渗透，能有效保证产品的重量；胶囊剂可以掩盖其内容物不良滋味，携带和食用方便。而且，人参皂苷的部份有效成份是在肠道菌群的作用下分解成能被吸收的物质，然后被肠道吸收，而这些成份容易在胃酸环境中部份被分解，显然，按照常规的服用方法，很多有效成份在被肠道吸收前已经被胃酸破坏，从而达不到效果。制成肠溶制剂，则能避免有效成份被胃酸破坏。

本发明实施例提供的增强人体免疫力的保健品的制备方法，包括如下步骤：

(1)将淀粉或微晶纤维素，以及人参提取物、黄芪提取物、淫羊藿提取物、巴戟天提取物分别过60～200目筛；

(2)将步骤(1)中各组分按照如下重量份置于混合机内均匀混合：

人参提取物            50～200份

黄芪提取物            30～300份

淫羊藿提取物          30～200份

巴戟天提取物            10～80份

淀粉或微晶纤维素        50～300份

(3)加入步骤(2)所得混合物总重量1～10％的水混合制成软材，10～30目筛制粒；

(4)将步骤(3)中颗粒置烘箱内，80℃以下烘干，用10～30目筛整粒。

上述人参提取物是以人参为原料，经70％乙醇提取浓缩成稠膏，再用85％的乙醇醇降除杂，浓缩，喷雾干燥制得；上述黄芪提取物是以黄芪为原料，由95％乙醇回流提取除掉脂溶性成分，药渣用80％乙醇进一步回流提取除掉脂溶性成分、药渣水提，浓缩，60％乙醇沉降得多糖沉淀后干燥制得；上述淫羊藿提取物以淫羊藿为原料，由70％乙醇提取、浓缩，水沉降，去渣，浓缩，喷雾干燥制得；上述巴戟天提取物是以巴戟天为原料，由80％乙醇回流去杂，水煮后再经80％乙醇沉降制得。

上述实施例还包括将步骤(4)所得颗粒送检，取合格颗粒，在胶囊填充机上灌装步骤，以及之后的胶囊外包步骤。该胶囊每粒0.35g。

上述实施例中混合机采用江苏瑰宝制药机械厂生产的GHJ-500V型混合机或者江苏瑰宝制药机械厂生产的CH-200型曹式混合机；采用江苏瑰宝制药机械厂生产的YK-160型摇摆式颗粒机制粒；采用无锡华星药化设备公司生产的FZG型真空干燥机进行干燥；胶囊充填机采用北京航天成机电设备厂生产的QJC-800型全自动胶囊充填机；数粒/片机采用天津中药机械厂生产的BP100-A型全自动数粒/片机。

本发明的保健品为肾阳虚引起的免疫功能低下而设。由于阳之生有赖阴、气之助，故本配方中又配以补气之药。配方中淫羊藿辛温入肾，巴戟天辛微温，也入肾，二味具为补肾阳，强筋骨。善补阳者，必用气送，则阳得气助，而无有不达。故再用人参、黄芪大补元气，调补五脏，强精通脉，有气中求阳之功。四药合用，补肾之中皆补五脏，使肾精得充而虚损易复。

本品服用剂量为一日两次，每次两粒，在保证服用方便的同时，更重要的是保证了保健效果。加上制成易于服用、无其它异味、便于携带的胶囊剂型，适宜现代社会高节奏的需要。

实施例1

按如下步骤制备本发明的增强人体免疫力的保健品：

(1)取淀粉、人参提取物、黄芪提取物、淫羊藿提取物、巴戟天提取物分别过100目筛；

(2)取过筛后人参提取物50g，黄芪提取物30g，淫羊藿提取物30g，巴戟天提取物10g，淀粉50g置于混合机内均匀混合。

(3)加入步骤(2)所得混合物总重量5％的水混合制成软材，20目筛制粒；

(4)将步骤(3)中颗粒置烘箱内，80℃以下烘干，用20目筛整粒。

(5)将步骤(4)中所得颗粒送检，取合格颗粒，在胶囊填充机上以每粒0.35g灌装，随后将胶囊外包。

实施例2

本实施例基本步骤与实施例1相同，主要不同在于步骤(2)中所选取材料的重量不同，本实施例中选取人参提取物75g，黄芪提取物50g，淫羊藿提取物45g，巴戟天提取物20g，淀粉120g。

实施例3

本实施例基本步骤与实施例1相同，主要不同在于步骤(2)所选取材料的重量不同，本实施例中选取人参提取物80g，黄芪提取物60g，淫羊藿提取物50g，巴戟天提取物25g，淀粉135g。

实施例4

本实施例基本步骤与实施例1相同，主要不同在于步骤(2)所选取材料的重量不同，本实施例中选取人参提取物150g，黄芪提取物100g，淫羊藿提取物100g，巴戟天提取物50g，淀粉200g。

实施例5

本实施例基本步骤与实施例1相同，主要不同在于步骤(2)所选取材料的重量不同，本实施例中选取人参提取物90g，黄芪提取物70g，淫羊藿提取物55g，巴戟天提取物30g，150g微晶纤维素。

配方筛选(500粒)：

按照上述实施例3的方案，500粒胶囊应取人参提取物40g、黄芪提取物30g、淫羊藿提取物25g、巴戟天提取物12.5g，选取适量的辅料，过筛混合均匀，以适量的水搅拌制软材，过20目制粒，干燥，整粒，装入胶囊。以制粒难易、崩解时间长短、装量差异等指标对辅料种类、用量等参数进行筛选确定。

筛选辅料为：淀粉、糊精、微晶纤维素和磷酸氢钙，配方筛选见表1(单位：g)。

表1

	配方1	配方2	配方3	配方4
					人参提取物	40	40	40	40
黄芪提取物	30	30	30	30
					淫羊藿提取物	25	25	25	25
巴戟天提取物	12.5	12.5	12.5	12.5
					淀粉(g)	67.5	——	8.0	——
糊精(g)	——	67.5	——	——
					磷酸氢钙(g)	——	——	67.5	——
微晶纤维素(g)	——	——	——	67.5
					制粒情况	软材较适合，容易过筛制湿颗粒，颗粒硬度一般，细	制得的软材太粘，无法过筛制湿颗粒	软材粘性较差，易过筛制粒，颗粒松散，硬度较大，细粉少	软材较适合，容易过筛制湿颗粒，硬度适宜
干颗粒重量(g)	170.5	——	172.0	171.5
					平均装量(g/粒)	0.3505	——	0.3824	0.3566
装量差异	符合规定	——	不符合规定	符合规定
					装囊数量(粒)	475	——	440	475
崩解时限(min)	28	——	30	30

注：以上均20目筛制湿颗粒，80℃干燥，20目筛整粒。

配方筛选结果：发明人筛选了淀粉、糊精、磷酸氢钙、微晶纤维素等辅料作为本品的稀释剂，结果糊精制得的软材较粘，无法过筛制湿颗粒，不适合作为本品的稀释剂；磷酸氢钙均作为本品的稀释剂所得的颗粒较结，颗粒流动性不好，装量差异偏重。以淀粉和微晶纤维素为稀释剂，易制粒，颗粒硬度适中，流动性好，都可以选用，但考虑到微晶纤维素市场价格较淀粉高很多，生产成本较高，因此发明人优选淀粉作为本品的稀释剂。

三批放大样品制备

依照上述配方及工艺，生产三批放大样品以验证工艺参数，三批样品制备情况及检测数据见表2。

表2

批号	080601	080602	080603
				投料	1万粒	1万粒	4万粒
人参提取物(kg)	0.8	0.8	3.2
				黄芪提取物(kg)	0.6	0.6	2.4
淫羊藿提取物(kg)	0.5	0.5	2.0
				巴戟天提取物(kg)	0.25	0.25	1.0
淀粉(kg)	1.35	1.35	5.4
				理论干颗粒量(kg)	3.5	3.5	14
实得干颗粒量(kg)	3.45	3.44	13.80
				干颗粒收率(％)	98.57	98.28	98.57
理论产量(万粒)	1	1	3
				成品量(万粒)	0.9760	0.9830	2.9640
成品收率％	97.6	98.3	98.8
				水份％	4.26	4.68	4.35
人参皂苷含量(g/100g)	1.169	1.188	1.210
				淫羊藿苷含量(g/100g)	1.248	1.241	1.257

崩解时限(min)

28

27

28

结论：三批胶囊各项数据比较稳定，说明此制备工艺可行。

增强免疫力功能试验报告

该报告由湖北省疾病预防控制中心根据申请人提供的上述批号为080603的样品进行检测得出的结论。检测依据为《保健食品检验与评价技术规范》2003年版(功能学评价检验方法)

检测结论：

以人群推荐日摄入量0.0233g/kg BW扩大10、20、30倍设置低、中、高三个剂量组，即0.233、0.467、0.700g/kgBW，另设阴性对照组。采用SPF级昆明种小鼠，连续灌胃给予，30天后开始检测有关指标。实验结果以P＜0.05判断为显著性差异，各剂量组与阴性对照组比较，结果显示：

1)各剂量组小鼠体重、淋巴器官/体重比值差异均无显著性；

2)高剂量组明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力，差异有显著性；

3)高剂量组明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应，差异有显著性；

4)高剂量组明显升高小鼠血清溶血素含量，差异有显著性；

5)高剂量组明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能，差异有显著性；

6)高剂量组明显增强小鼠碳廓清能力，差异有显著性；

7)高剂量组明显增强抗体生成细胞能力，差异有显著性；

8)高剂量组明显增强小鼠NK细胞活性，差异有显著性；

按照增强免疫力功能作用评价程序规定，该受试物具有增强免疫力功能作用。

报告内容：

1材料与方法

1.1样品来源及处理

申请人提供的上述批号为080603的样品，人群推荐日摄入量为1.4g/60kgBW(即0.0233g/kg BW)。样品配制：准确称取受试物1.165、2.335、3.500g，分别用蒸馏水定容至100mL，作低、中、高剂量组小鼠灌胃用。

1.2实验动物及环境

SPF级昆明种雌性小鼠，18-22g，由湖北省实验动物研究中心提供。实验动物生产许可证号：SCXK(鄂)2003-0005；实验动物使用许可证号：SYXK(鄂)2003-0014。动物饲养室温度为20-25℃，湿度为40-70％。

1.3剂量分组

按人群推荐日摄入量0.0233g/kg BW扩大10、20、30倍设置低、中、高三个剂量组，即0.233、0.467、0.700g/kg BW，共分四个实验组，每实验组包括阴性对照组、低、中、高剂量组，各剂量组实验动物数为10只。免疫实验一组进行迟发型变态反应和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；免疫实验二组进行淋巴器官/体重比值测定和碳廓清实验；免疫实验三组进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定；免疫实验四组进行血清溶血素的测定和抗体生成细胞检测。小鼠连续灌胃30天后开始试验。各实验组均按0.20ml/10gBW容量经口灌胃给予。

1.4试验方法

1.4.1ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验

方法：无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，调整细胞浓度为3×10⁶个/mL。将每一份脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，一孔加75μL ConA液(相当于7.5μg/mL)，另一孔作为对照，置5％CO₂，37℃CO₂孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3个平行孔(100μL/孔)，用酶标仪以570nm波长测定光密度值。

1.4.2二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型变态反应(DTH)

方法：耳肿胀法。用1％DNFB(以1∶1的丙酮麻油溶液配制)致敏小鼠后，第5天再用DNFB攻击右耳，24h后处死动物剪下左右耳壳用打孔器取下直经8mm的耳片，称重，以左右耳的重量之差来表示DTH的程度。

1.4.3血清溶血素的测定

方法：血凝法。取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min。将压积SRBC用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫。4～5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min

离心10min，收集血清。

凝集反应：用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝实验板内，每孔100μL，再加入100μL 0.5％(v/v)SRBC悬液，混匀，放入湿润的平盘内并加盖，于37℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。根据血清凝聚程度的级别计算出抗体积数。

1.4.4腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验

方法：半体内法。制备20％的鸡红细胞悬液；每只鼠腹腔注射1mL该悬液，30min后处死动物，将其仰位固定于鼠板上，开腹，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min，然后，吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，37℃温育30min；育毕用生理盐水漂洗，晾干，以1∶1的丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：

1.4.5小鼠碳廓清试验

方法：按体重从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁(10mL/kg)，待墨汁注入，立即计时注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并立即将其加到2mL0.1％Na₂CO₃溶液中。各吸0.1mL于96孔酶标板中，用酶标仪在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na₂CO₃溶液作阴性对照。

将小鼠处死.取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重。

以吞噬指数表示小鼠碳廓清的能力。按下式计算吞噬指数a。受试样品组的吞噬指数显著高于对照组，可判定该项实验结果阳性。

$K=\frac{{\mathrm{LgOD}}_1-{\mathrm{lgOD}}_2}{t_2-t_1}$

1.4.6抗体生成细胞检测

取脱纤维的羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min，每只鼠经腹腔注射2％(v/v)SRBC 0.2mL。将SRBC免疫4～5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，放在盛装有Hank’s液的小平皿内，轻轻磨碎脾脏，制成细胞悬液，经200目筛网过滤，离心

(1000/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮在5mL RPMI1640培养液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5×10⁶个/mL。

空斑的测定：将表层培养基(1g琼脂糖加双蒸水至100mL)加热溶解后，放入45～50℃水浴保温，与等量pH7.2～7.4、2倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加50μL 10％SRBC(v/v，用SA缓冲液配制)，20μL脾细胞悬液(5×10⁶个/mL)，迅速混匀，倾倒于己刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1∶8)加入玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。

1.4.7NK细胞活性测定

方法：乳酸脱氢酶(LDH)测定法。

靶细胞的传代(YAC-1细胞)：

实验前24h将靶细胞进行传代培养。用前以Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/mL。

脾细胞悬液的制备(效应细胞)：

无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL2倍Hank’s液及8mLHanks液，1000r/min，10min离心，用1mL含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1％冰醋酸稀释后计数(活细胞数应在95％以上)，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，最后用RPMl1640完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个/mL。

NK细胞活性检测：

取靶细胞和效应细胞各100μL(效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板中：靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL；上述各项均设三个平行孔，于37℃、5％CO₂培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，根据室温不同反应3～10min，每孔加入1mol/L的HCL 30μL，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)。

按下式计算NK细胞活性，受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，即可判定该项实验结果阳性。

2结果

2.1本发明实施例的增强人体免疫力的保健品对小鼠体重的影响：见表3、表4、表5、表6，各实验组小鼠试验前后体重与对照组比较P＞0.05，表明该保健品对小鼠体重无明显影响。

表3  实验一组试验前后小鼠体重记录(x±S)

各组与阴性对照组比较p＞0.05

表4  实验二组试验前后小鼠体重记录(x±S)

各组与阴性对照组比较p＞0.05

表5  实验三组试验前后小鼠体重记录(x±S)

各组与阴性对照组比较p＞0.05

表6  实验四组试验前后小鼠体重记录(x±S)

各组与阴性对照组比较p＞0.05

2.2本实施例的保健品对动物淋巴器官/体重比值的影响：见表7。各组小鼠胸腺/体重比值和脾脏/体重比值与阴性对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

表7  对小鼠淋巴器官/体重比值的影响(x±S)

组别	剂量(g/kgBW)	动物数(只)	胸腺/体重比值(×10-3)	P值	脾脏/体重比值(×10-3)	P值
							阴性对照组	0.0	10	2.71±0.22	-	3.69±0.25	-
低剂量组	0.233	10	2.74±0.25	0.809	3.64±0.19	0.656
							中剂量组	0.467	10	2.71±0.33	0.999	3.64±0.40	0.760
高剂量组	0.700	10	2.67±0.36	0.788	3.67±0.34	0.905

各组与阴性对照组比较p＞0.05

2.3本实施例的保健品淋巴细胞转化实验结果：见表8。从表8可见，与阴性对照组比较，该保健品高剂量组显著性增强ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力(P＜0.01)。

表8  对细胞免疫功能的影响(x±S)

组别	剂量(g/kgBW)	动物数(只)	ConA诱导脾淋巴细胞增殖OD差值	P值	DNFB诱导DTH左右耳重量差(mg)	P值
							阴性对照组	0.0	10	0.064±0.016	-	9.38±2.74	-
低剂量组	0.233	10	0.083±0.033	0.291	11.33±3.81	0.387
							中剂量组	0.467	10	0.086±0.024	0.179	12.44±3.69	0.094
高剂量组	0.700	10	0.109±0.029	0.002	13.49±2.13	0.017

2.4本实施例的保健品对小鼠迟发型变态反应的影响：见表8。从表8可见：与阴性对照组比较，高剂量组显著性增强小鼠对DNFB诱发的DTH反应(p＜0.05)。

2.5本实施例的保健品对小鼠血清溶血素滴度水平的影响：见表9。从表9可见，与阴性对照组比较，本实施例高剂量组可显著性升高血清溶血素含量(P＜0.05)。

表9  本实施例对小鼠溶血素滴度水平的影响(x±S)

组别	剂量(g/kg BW)	动物数(只)	血清溶血素(抗体积数)	P值
					阴性对照组	0.0	10	56.4±14.3	-
低剂量组	0.75	10	63.2±14.2	0.445
					中剂量组	1.50	10	65.0±9.8	0.264
高剂量组	2.25	10	72.2±8.0	0.014

2.6本实施例的保健品腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果：见表10。从表10可见，与阴性对照组比较，高剂量组明显提高吞噬率、吞噬指数(p＜0.01、P＜0.05)。

表10  对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(x±S)

组别	剂量(g/kgBW)	动物数(只)	吞噬百分率(％)	P值	吞噬指数	P值
							阴性对照组	0.0	10	22.40±2.27	-	0.321±0.034	-
低剂量组	0.233	10	24.50±3.17	0.306	0.346±0.037	0.410
							中剂量组	0.467	10	25.20±3.29	0.122	0.351±0.034	0.270
高剂量组	0.700	10	26.70±2.91	0.007	0.378±0.057	0.012

2.7本实施例的的保健品碳廓清实验结果：见表11。从表11可见，与阴性对照组比较，高剂量组显著提高小鼠碳廓清吞噬指数(P＜0.01)。

表11  对小鼠碳廓清功能的影响(x±S)

组别	剂量(g/kg BW)	动物数(只)	吞噬指数a	P值
					阴性对照组	0.0	10	5.39±0.51	-
低剂量组	0.233	10	5.71±0.63	0.461
					中剂量组	0.467	10	5.87±0.52	0.160
高剂量组	0.700	10	6.35±0.61	0.002

2.8本实施例的保健品抗体生成细胞检测实验结果：见表12。从表12见，与阴性对照组比较，高剂量组能明显提高抗体生成细胞数量(P＜0.05)。

表12  对抗体生成细胞功能的影响(x±S)

组别	剂量(g/kg BW)	动物数(只)	溶血空斑数(/106脾细胞)	P值
					阴性对照组	0.0	10	177.0±20.58	-
低剂量组	0.233	10	193.0±29.08	0.371
					中剂量组	0.467	10	197.0±29.46	0.208
高剂量组	0.700	10	212.0±21.50	0.011

2.9本实施例的保健品NK细胞活性实验结果：见表13。从表13可见，与阴性对照组比较，高剂量组明显增强小鼠NK细胞活性(P＜0.05)。

表13  对小鼠NK细胞活性的影响(x±S)

组别	剂量(g/kg BW)	动物数(只)	细胞活性(％)	P值
					阴性对照组	0.0	10	18.77±4.48	-
低剂量组	0.233	10	22.55±5.64	0.313
					中剂量组	0.467	10	23.64±4.45	0.137
高剂量组	0.700	10	26.49±7.33	0.012

3结论

1)各剂量组与阴性对照组比较，小鼠体重、淋巴器官/体重比值差异均无显著性；2)高剂量组能明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力；3)高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应；4)高剂量组能明显升高小鼠血清溶血素含量；5)高剂量组明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能；6)高剂量组明显增强小鼠碳廓清能力；7)高剂量组能明显增强抗体生成细胞能力；8)高剂量组明显增强小鼠NK细胞活性。按照增强免疫力功能作用评价程序规定，该受试物具有增强免疫力功能作用。

临床资料：

中医肾阳虚症状：腰膝酸软，畏寒肢冷，尤以下肢为甚，头目眩晕，精神萎靡，面色白，或黎黑，舌淡胖苔白，脉沉弱。或大便久泄不止，完谷不化，五更泄泻，或浮肿，腰以下为甚，按之凹馅不起，甚则腹部胀痛，心悸咳喘。选择60例中医肾阳虚病例临床观察。其中，男41例、女19例，年龄为51～82岁，平均年龄67岁，无其它严重疾病。

疗效判定：

1、显效：体质增强，四肢有力，精力充沛，脸色改善，消化、排便等方面明显改善。

2、有效：状况有所缓解，脸色、体力和消化方面均有一定程度的改善。

3、无效：症状无变化。

实验时，停服其他药物和保健营养品。服用本发明胶囊，一日两次，每次两粒，饭前服用，60天为一个疗程。30天后症状即有缓解，一个疗程后，症状有明显改善。临床实验的60人中，显效19人，有效38人，无效3人，总有效率95.00％。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1、一种增强人体免疫力的保健品，含有的组分及其重量份数比如下：

人参提取物      50～200份

黄芪提取物      30～300份

淫羊藿提取物    30～200份

巴戟天提取物    10～80份。

2、如权利要求1所述的保健品，其特征在于，含有的组分及其重量份数比如下：

人参提取物      50～150份

黄芪提取物      30～100份

淫羊藿提取物    30～100份

巴戟天提取物    10～50份。

3、如权利要求2所述的保健品，其特征在于，含有的组分及其重量份如下：

人参提取物      75～90份

黄芪提取物      50～70份

淫羊藿提取物    45～55份

巴戟天提取物    20～30份。

4、如权利要求1所述的保健品，其特征在于，还含有重量份为50～300的淀粉或微晶纤维素。

5、如权利要求4所述的保健品，其特征在于，淀粉或微晶纤维素重量份为100～150。

6、如权利要求1～5任一项所述的保健品，其特征在于，所述保健品采用剂型为胶囊。

7、如权利要求6所述的保健品，其特征在于，所述保健品剂型为肠溶胶囊。

8、一种增强人体免疫力的保健品的制备方法，包括如下步骤：

(1)将淀粉或微晶纤维素，以及人参提取物、黄芪提取物、淫羊藿提取物、巴戟天提取物分别过60～200目筛；

(2)将步骤(1)中各组分按照如下重量份置于混合机内均匀混合：

人参提取物       50～200份

黄芪提取物       30～300份

淫羊藿提取物     30～200份

巴戟天提取物     10～80份

淀粉或微晶纤维素 50～300份

(3)加入步骤(2)所得混合物总重量1～10％的水混合制成软材，10～30目筛制粒；

(4)将步骤(3)中颗粒置烘箱内，80℃以下烘干，用10～30目筛整粒。

9、如权利要求8的保健品的的制备方法，其特征在于，所述人参提取物是以人参为原料，经乙醇提取浓缩成稠膏，再用乙醇醇降除杂，浓缩，喷雾干燥制得；所述黄芪提取物是以黄芪为原料，由乙醇回流提取除掉脂溶性成分，药渣用乙醇进一步回流提取除掉脂溶性成分、药渣水提，浓缩，乙醇沉降得多糖沉淀后干燥制得；所述淫羊藿提取物以淫羊藿为原料，由乙醇提取、浓缩，水沉降，去渣，浓缩，喷雾干燥制得；所述巴戟天提取物是以巴戟天为原料，由乙醇回流去杂，水煮后再经乙醇沉降制得。

10、如权利要求8的保健品的的制备方法，其特征在于，还包括将步骤(4)所得颗粒送检，取合格颗粒，在胶囊填充机上灌装步骤，以及之后的胶囊外包步骤。