CN108420888A - 提高免疫力的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
系列增强免疫力的药物组合物,它包含下列重量配比的原料药:人参0.1‑5份、枸杞子0.5‑10份、川牛膝1‑20份。本发明还提供了所述药物组合物的制备方法和用途。
Description
技术领域
本发明涉及系列提高免疫力的药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术
免疫力是人体自身的防御机制,是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等);处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。现代免疫学认为,免疫力是人体识别和排除“异己”的生理反应。
免疫力低下的身体易于被感染或患癌症,各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用,在此情况下,极易招致细菌、病毒、真菌等感染,因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病。因经常患病,加重了机体的消耗,所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现,生病、打针吃药便成了家常便饭。每次生病都要很长时间才能恢复,而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良,还易诱发重大疾病。深层原因是免疫力低下或免疫力不健全。当人体免疫功能失调,或者免疫系统不健全时,下列问题就会反复发作:感冒反复发作、扁桃体炎反复发作、哮喘反复发作、支气管炎反复发作、肺炎反复发作、腹泻反复发作。所以,为保证人体正常代谢、运转,需要提高免疫力。
发明内容
本发明的目的是提供系列提高免疫力的药物组合物。
本发明的另一目的是提供该系列药物组合物的制备方法和用途。
本发明药物组合物,它是由包括下述重量配比的原料制备而成:人参0.1-5份、枸杞子0.5-10份、川牛膝1-20份。
其中,所述药物组合物是由下述重量配比的原料制备而成:人参0.5-4份、枸杞子6-10份、川牛膝9-15份;
优选所述药物组合物是由下述重量配比的原料制备而成:人参1份、枸杞子6份、川牛膝9份。
其中,所述药物组合物还包括下述重量配比的原料:黄芪0.5-10份、大枣0.5-15份;
优选还包括下述重量配比的原料:黄芪5-10份、大枣5-15份。
优选所述药物组合物是由下述重量配比的原料制备而成:人参4份、黄芪5份、枸杞子5份、川牛膝15份、大枣15份;
或,它是由下述重量配比的原料制备而成:人参1份、黄芪6份、枸杞子6份、川牛膝3份、大枣6份。
本发明还提供了一种药物组合物,它是由下述重量配比的原料制备而成:人参0.1-5份、枸杞子0.5-10份、玫瑰花1-10份、大枣0.5-10份。
优选所述药物组合物是由下述重量配比的原料制备而成:人参0.5-4份、枸杞子6-10份、玫瑰花1-5份、大枣5-8份;优选它是由下述重量配比的原料制备而成:人参1份、枸杞子6份、玫瑰花3份、大枣6份。
其中,所述药物组合物是由所述原料的原生药粉,或者水或有机溶剂提取物为活性成分,加上药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
其中,所述制剂为口服制剂或液体饮料、固体饮料、茶剂。
其中,所述所述口服制剂为口服液、合剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂或液体饮料、固体饮料、茶剂。
本发明提供了所述药物组合物的制备方式,它包括以下步骤:
a、称取各重量配比的原料药;
b、打粉或加入水或者有机溶剂提取活性成分;
c、加入辅料,即得。
本发明提供了所述药物组合物在在制备提高免疫力的药物中的用途。
本发明药物组合物配伍精当,可以提高小鼠碳廓清吞噬指数、脾淋巴细胞存活率,能够有效提高机体免疫力,可制备成为提高免疫力的药物,为临床提供了一种新的选择。
根据本发明的上述内容,按照本发明相关领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
具体实施方式
系列方一实施方式:
实施例1本发明药物组合物的制备
1.原料:人参1g、枸杞子6g、川牛膝9g。
2.制备方法a、称取各重量配比的原料药;b、打粉或加入溶媒提取活性成分;c、加入辅料,即得。
实施例2本发明药物组合物的制备
1.原料:人参0.5g、枸杞子10g、川牛膝15g.
2.制备方法:a、称取各重量配比的原料药;b、打粉或加入溶媒提取活性成分;c、加入辅料,即得。
实施例3本发明药物组合物的制备
1.原料:人参4g、枸杞子8g、川牛膝10g.
2.制备方法:a、称取各重量配比的原料药;b、打粉或加入溶媒提取活性成分;c、加入辅料,即得。
系列方二实施方式:
实施例1本发明药物组合物的制备
1.原料:人参1g、黄芪6g、枸杞子6g、川牛膝3g、大枣6g。
2.制备方法a、称取各重量配比的原料药;b、打粉或加入溶媒提取活性成分;c、加入辅料,即得。
实施例2本发明药物组合物的制备
1.原料:人参0.5g、黄芪10g、枸杞子8g、川牛膝6g、大枣5g。
2.制备方法:a、称取各重量配比的原料药;b、打粉或加入溶媒提取活性成分;c、加入辅料,即得。
实施例3本发明药物组合物的制备
1.原料:人参4g、黄芪5g、枸杞子5g、川牛膝15g、大枣15g。
2.制备方法:a、称取各重量配比的原料药;b、打粉或加入溶媒提取活性成分;c、加入辅料,即得。
系列方三实施方式:
实施例1本发明药物组合物的制备
1.原料:人参1g、枸杞子6g、玫瑰花3g、大枣6g。
2.制备方法a、称取各重量配比的原料药;b、打粉或加入溶媒提取活性成分;c、加入辅料,即得。
实施例2本发明药物组合物的制备
1.原料:人参0.5g、枸杞子10g、玫瑰花1g、大枣8g。
2.制备方法:a、称取各重量配比的原料药;b、打粉或加入溶媒提取活性成分;c、加入辅料,即得。
实施例3本发明药物组合物的制备
1.原料:人参4g、枸杞子8g、玫瑰花5g、大枣5g.
2.制备方法:a、称取各重量配比的原料药;b、打粉或加入溶媒提取活性成分;c、加入辅料,即得。
以下通过具体的动物实验评价本发明的有益效果:
参照中华人民共和国卫生部出版《保健食品检验与评价技术规范》2003年版,通过正常或免疫功能低下的模型动物进行试验,测定动物的体重、脏器/体重比值测定、细胞免疫功能测定、体液免疫功能测定、单核-巨细胞功能测定、NK细胞活性测定细胞毒性测定判断组方是否具有增强免疫功能的作用。
1材料和方法
1.1试验组分
1.1.1试验样品
样品1:人参1g、枸杞子6g、川牛膝9g
样品2:人参0.5g、枸杞子10g、川牛膝15g
样品3:人参4g、枸杞子8g、川牛膝10g
样品4:人参1g、黄芪6g、枸杞子6g、川牛膝3g、大枣6g
样品5:人参0.5g、黄芪10g、枸杞子8g、川牛膝6g、大枣5g
样品6:人参4g、黄芪5g、枸杞子5g、川牛膝15g、大枣15g
样品7:人参1g、枸杞子6g、玫瑰花3g、大枣6g
样品8:人参0.5g、枸杞子10g、玫瑰花1g、大枣8g
样品9:人参4g、枸杞子8g、玫瑰花5g、大枣5g
2实验动物
BALB/c小鼠,550只,雄性,6-8周龄。由成都达硕实验动物有限责任公司,实验动物生产许可证号:SCXK(川)2013-030。实验动物使用许可证号:SYXK(川)2015-127。
3.实验环境
屏障系统,室温为20℃~26℃,相对湿度(40~70)%RH,换气次数10~20次/小时,压强梯度≥10pa,12/12小时明暗交替照明。饲料:SPF维持鼠料,由四川省医学科学院.四川省人民医院实验动物研究所提供,饲料生产许可证号为:SCXK(川)2015-01。
4.仪器与试剂
电子天平、全波长酶标仪、生物安全柜、细胞计数仪、二氧化碳培养箱、离心机、显微镜、自动生化仪、生理盐水、刀豆蛋白A(ConA)、MTT试剂、RPMI1640培养液、新生牛血清、青链霉素混合液、异丙醇、DMSO、红细胞裂解液、二硝基氟苯(DNFB)、绵羊红细胞(SRBC)、印度墨汁、Na2CO3、鸡红细胞.YAC-l细胞、乳酸脱氢醇(LDH)检测试剂盒等。
5.方法
5.1体重以及淋巴器官脏器/体重比值测定实验和小鼠碳廓清实验
5.1.1剂量选择及制备
样品组:取样品1-9,分别煎煮制备成含浸膏50mg/mL样品,备用。
阴性对照:组给予等体积蒸馏水。
5.1.2给药方式及剂量
小鼠经检疫后,连续经口灌胃给药30天,每天给药1次,每只小鼠给药容积为20ml/kg.bw。每周称所有动物体重1次,结束时处死小鼠,解剖动物,取出胸腺和脾脏,称重并计算脏器/体重比值。脏器/体重比值(%)=脏器重量/动物体重×100%
5.1.3实验方法
小鼠碳廓清实验:未次给予受试动物样品或蒸馏水后,称体重,从小鼠尾静脉10ml/kg注入稀释4倍的印度墨汁,注入后2、10min,分别从内眦静脉丛取血20uL,并立即加到2mL 0.1%Na2CO3溶液中。以0.1%Na2CO3溶液作空白对照.酶标仪检测600nm波长处的OD值。将小鼠处死,取肝脏和脾脏,称重,计算吞噬指数。
5.1.4数据分析
应用SPSS17.0软件进行分析处理。以(X±SD)表示,动物体重、脏体指数,均采用单因素方差(One-way ANOVA)分析,方差齐者,LSD检验。
5.1.5结果
5.1.5.1各组小鼠体重测定结果分析:
表1各组方对小鼠体重的影响
实验结果表明:各样品组对小鼠在整个试验过程中,体重与阴性对照相比,差异无统计学意义(P>0.05)。
5.1.5.2各组小鼠淋巴器官脏器/体重比值测定结果分析:
表2各组方对小鼠淋巴器官脏器/体重比值的影响
实验结果表明:各样品组对小鼠胸腺/体重比值、脾脏/体重比值与阴性对照相比,差异无统计学意义(P>0.05)。
5.1.5.3小鼠碳廓清实验结果分析表
表3各组方对小鼠碳廓清功能的影响
注:与阴性对照组比较*P<0.05;**P<0.01
实验结果表明:样品组1、2、3、4、6、8、9可提高小鼠碳廓清吞噬指数,与阴性对照组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01),实验结果阳性。
5.3细胞免疫功能测定
5.3.1剂量选择及制备
样品组:取样品1-9,分别加入完全培养液制备成50mg/mL样品,再梯度稀释成25mg/mL、10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL备用。
阴性对照组:RPMI1640完全培养液对照组
空白对照:RPMI1640完全培养液对照组
5.3.2实验方法
小鼠经检疫后,连续经口灌胃给药30天,每天给药1次,每只小鼠给药容积为20ml/kg.bw。小鼠灌胃30天后,无菌取脾,磨碎后200目纱网过滤,用不完全RPMI1640培养液5mL冲洗过滤,400g离心5min后加入红细胞裂解液5mL混匀孵育5min,加入含10%新生牛血清的1640培养液终止反应,离心后得小鼠脾淋巴细胞悬液,台盼蓝染色计数(活细胞>95%),含血清的1640完全培养液调整细胞浓度至5×106/mL。24孔细胞培养板每孔加入脾淋巴细胞悬液500μL,再加入不同浓度的样品溶液各500μL,并设置阴性对照、空白对照,各组设3个复孔。培养板置于37℃,5%CO2培养箱中培养(72±4)h后取出,于各孔加入100μL酸性异丙醇,吹打混匀后,转移至96孔板中,用酶标仪检测OD值。
5.3.3试验数据
采用方差分析处理试验结果。
5.3.4结果
采用MTT法检测不同组方对脾淋巴细胞的细胞毒性。表4-6结果为不同组方的细胞毒性OD值,表7-9为不同组方的体外细胞活率。
表4各组方对脾淋巴细胞毒性的影响(OD值)
注:与阴性对照组比较*P<0.05;**P<0.01
表5各组方对脾淋巴细胞毒性的影响(OD值)-2
注:与阴性对照组比较*P<0.05;**P<0.01
表6各组方对脾淋巴细胞毒性的影响(OD值)-3
注:与阴性对照组比较*P<0.05;**P<0.01
表7各组方对细胞存活率的影响-1
表8各组方对细胞存活率的影响-2
表9各组方对细胞存活率的影响-3
实验结果表明:样品组对脾淋巴细胞存活率的影响总的趋势均为:在一定范围内随着样品浓度的增大,脾细胞存活率呈上升趋势。与阴性对照组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01),实验结果阳性。
5.4ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)
5.4.1剂量选择及制备
样品组:取样品1-9,分别加入完全培养液制备成5mg/mL样品,再梯度稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL备用。
阴性对照组:RPMI1640完全培养液对照组
空白对照:RPMI1640完全培养液对照组
5.4.2实验步骤
小鼠经检疫后,连续经口灌胃给药30天,每天给药1次,每只小鼠给药容积为20ml/kg.bw。小鼠灌胃30天后,无菌取脾,研磨制备单细胞悬液,手机细胞悬液,400g离心5min,弃上清,加5mL红细胞裂解液,混匀,4℃孵育5min,加入含10%FCS的RPMI1640完全培养液终止反应,400g离心5min,弃上清,加入完全培养液调整细胞浓度为2×106个/mL。将细胞悬液加入96孔培养板,200μL/孔,设6个复孔。阳性对照组加入ConA至终浓度为5μg/mL,置于37℃,5%CO2培养箱中培养(72±4)h后取出,600g离心5min,弃上清,加入MTT液(5mg/mL),50μL/孔,继续培养约6小时,加入DMSO,150μL/孔,振荡平板至紫色结晶完全溶解,在570nm处测定吸光度值(OD)。参照波长为630nm。
5.4.3数据分析
试验数据采用方差分析处理试验结果。
5.4.4结果
各组配方对ConA诱导下T淋巴细胞增殖反应的影响结果:
表10各组配方对ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验的影响
注:与阴性对照组比较*P<0.05;**P<0.01
表11各组配方对ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验的影响
注:与阴性对照组比较*P<0.05;**P<0.01
表12各组配方对ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验的影响
注:与阴性对照组比较*P<0.05;**P<0.01
实验结果表明:与阴性对照组比较,阳性对照组能够显著诱导小鼠淋巴细胞转化,样品组在高浓度时均见诱导小鼠淋巴细胞转化的趋势。说明其能增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),实验结果阳性。
5.5二硝基氟苯诱导的小鼠DTH实验(耳肿胀法)
5.5.1剂量选择及制备
样品组:取样品1-9,分别煎煮制备成含浸膏50mg/mL样品,备用。
阴性对照:组给予等体积蒸馏水。
5.5.2实验步骤
小鼠经检疫后,连续经口灌胃给药30天,每天给药1次,每只小鼠给药容积为20ml/kg.bw。小鼠灌胃30天后,用l%DNFB致敏小鼠5d后,再用1%DNFB刺激右耳,24h后处死动物剪下左右耳壳。用打孔器取下直径8mm的耳片后分別称重,以左右耳的重量之差来反映DTH的程度.
5.5.3数据分析
试验数据采用方差分析处理试验结果。
5.5.4结果
阴性对照组以及个样品组对DNFB诱导小鼠DTH反应的结果:
表13各组方对DNFB诱导小鼠DTH反应的影响
注:与阴性对照组比较*P<0.05;**P<0.01;DNFB,二硝基氟苯;DTH,此发型变态反应
实验结果表明:样品组对DNFB诱导小鼠DTH反应的均有一定的影响样品1、2、3、7、8、9与阴性对照组比较,差异有高度统计学意义(P<0.01),该实验结果阳性。
5.6血清溶血素测定(血凝法)及抗体生成细胞检(Jerne改良玻片法)
5.6.1剂量选择及制备
样品组:取样品1-9,分别煎煮制备成含浸膏50mg/mL样品,备用。
阴性对照:组给予等体积蒸馏水。
5.6.2实验步骤
将脱纤维处理后的羊血用生理盐水洗涤3次,1500r/min离心10min。小鼠经检疫后,连续经口灌胃给药30天,每天给药1次,每只小鼠给药容积为20ml/kg.bw。每只小鼠灌胃30天后,腹腔注射2%(V/V)SRBC 0.2mL进行免疫。第5天按“血凝法”标准观察血球凝集程度进行血清溶血素的测定,计算抗体水平。随后处死小鼠,制备脾细胞悬液:调整细胞浓度为5×106个/mL。按“Jerne改良玻片法”标准进行检测,计数溶血空斑数,以空斑数/106脾细胞表示抗体生成细胞数。
5.6.3数据分析
试验数据采用方差分析处理试验结果。
5.6.4结果
阴性对照组以及个样品组对小鼠抗体生成细胞、对小鼠血清溶血素抗体水平的测定结果分析:
表14各组方对小鼠抗体生成细胞的影响
实验结果表明:各样品组溶血空斑数与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),说明其不能增强抗体生成细胞能力,判定该实验结果阴性。
表15各组方对小鼠血清溶血素抗体水平的影响
注:与阴性对照组比较*P<0.05;**P<0.01
实验结果表明:样品组除6组外,其余组对小鼠血清溶血素抗体水平有影响,均能升高清溶血素水平,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),判定该实验结果阳性。
5.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(滴片法)
5.7.1剂量选择及制备
样品组:取样品1-9,分别煎煮制备成含浸膏50mg/mL样品,备用。
阴性对照:组给予等体积蒸馏水。
5.7.2实验步骤
小鼠经检疫后,连续经口灌胃给药30天,每天给药1次,每只小鼠给药容积为20ml/kg.bw。每只小鼠灌胃30天后,每只小鼠腹腔注射2%(V/V)SRBC0.2mL。96h后颈椎脱臼处死小鼠,按“滴片法”检测,计算吞噬率和吞指数。
5.7.3数据分析
试验数据采用方差分析处理试验结果。
5.7.4结果
阴性对照组以及个样品组对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力测定的结果:
表16各组方对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
实验结果表明:样品组各组均不能提高吞噬率与吞噬指数,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),判定该实验结果阴性。
经实验证实,本系列发明的药物组合物在提高机体免疫能力方面均有不同程度的提高,均可以筛选作为临床提高免疫力的应用选择。
Claims (10)
1.一种药物组合物,其特征在于:它是由包括下述重量配比的原料制备而成:人参0.1-5份、枸杞子0.5-10份、川牛膝1-20份。
2.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于:它是由下述重量配比的原料制备而成:人参0.5-4份、枸杞子6-10份、川牛膝9-15份;
优选它是由下述重量配比的原料制备而成:人参1份、枸杞子6份、川牛膝9份。
3.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于:它还包括下述重量配比的原料:黄芪0.5-10份、大枣0.5-15份;
优选还包括下述重量配比的原料:黄芪5-10份、大枣5-15份。
4.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于:它是由下述重量配比的原料制备而成:人参4份、黄芪5份、枸杞子5份、川牛膝15份、大枣15份;
或,它是由下述重量配比的原料制备而成:人参1份、黄芪6份、枸杞子6份、川牛膝3份、大枣6份。
5.一种药物组合物,其特征在于:它是由下述重量配比的原料制备而成:人参0.1-5份、枸杞子0.5-10份、玫瑰花1-10份、大枣0.5-10份。
6.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于:它是由下述重量配比的原料制备而成:人参0.5-4份、枸杞子6-10份、玫瑰花1-5份、大枣5-8份;优选它是由下述重量配比的原料制备而成:人参1份、枸杞子6份、玫瑰花3份、大枣6份。
7.根据权利要求1-6任意一项所述药物组合物,其特征在于:它是由所述原料药的原生药粉,或者水或有机溶剂提取物为活性成分,加上药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
8.根据权利要求3所述药物组合物,其特征在于:所述制剂为口服制剂或液体饮料、固体饮料、茶剂;优选所述口服制剂为口服液、合剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂或液体饮料、固体饮料、茶剂。
9.一种权利要求1-8任意一项药物组合物的制备方法,其特征在于:它包括以下步骤:
a、称取各重量配比的原料药;
b、打粉或加入水或者有机溶剂提取活性成分;
c、加入辅料,即得。
10.权利要求1-8任意一项所述药物组合物在制备提高免疫力的药物中的用途。
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