CN103463628B

CN103463628B - 一种用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物及其制剂

Info

Publication number: CN103463628B
Application number: CN201310338270.9A
Authority: CN
Inventors: 张芝庭; 张涛涛
Original assignee: GUIZHOU SHENQI DRUG RESEARCH INSTITUTE
Current assignee: GUIZHOU SHENQI DRUG RESEARCH INSTITUTE
Priority date: 2013-08-05
Filing date: 2013-08-05
Publication date: 2016-04-06
Anticipated expiration: 2033-08-05
Also published as: CN103463628A

Abstract

本发明公开了一种用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物及其制剂，该组合物包含以下重量百分比的组分：DHA10-40份，蜜蜂唾液酶1.1-2.0份，还包括人脂肪干细胞作为药物组合物的载体，所述的药物组合物可以根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体，按照药学领域的常规方法，制备成片剂、胶囊剂、糖浆剂或口服剂，相比传统的靶向方法具有更强的主动性和靶向性，能够使原药的功效显著增强。

Description

一种用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物及其制剂

技术领域

本发明涉及一种治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物，具体涉及一种DHA和蜜蜂唾液酶混合，用人脂肪干细胞作为载体的药物组合物及其制剂。

背景技术

DHA即二十二碳六烯酸，是一种对人体非常重要的多不饱和脂肪酸，属于Omega-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员。DHA是神经系统细胞生长及维持的一种主要元素，是大脑和视网膜的重要构成成分，在人体大脑皮层中含量高达20%，在眼睛视网膜中所占比例最大，约占50%。人的记忆、思维能力取决于控制信息传递的脑细胞、突触等神经组织的功能，即信息在神经系统内的传递范围、方向和作用。DHA在神经组织中约占其脂肪含量的25%，突触是控制信息传递的关键部位，是由突触膜和间隙组成，DHA有助于其结构完整、功能发挥。DHA具有影响胎儿大脑发育、促进视网膜光感细胞成熟、增进大脑细胞发育等作用，还可以用于癌症、心血管病以及炎症、老人痴呆等病症的治疗。

蜜蜂唾液酶是源于蜜蜂唾液中的多种酶类的总称，除了蜜蜂的胃以外，主要存在于蜂蜜和蜂胶中。蜜蜂唾液酶的主要作用主要体现在蜜蜂采蜜酿蜜的过程中，工蜂利用巢脾内的唾液酶，将花蜜、植物分泌物进行转化、脱水、贮存至成熟，从而得到各种蜂蜜。正因为蜂蜜中含有酶，才使各种口味和类型的蜂蜜具有药食两用的特殊功能。这些酶是蜜蜂在酿蜜过程中添加进去的，来源于蜜蜂唾液，主要是蔗糖酶，这种酶能把花蜜中的蔗糖转化成葡萄糖和果糖；另外还有淀粉酶、葡萄糖氧酶、还原酶、转化酶、磷酸酶、类蛋白酶等。蜜蜂可以根据采集的花蜜不同而分泌出不同作用的唾液酶，从而使得酿造出的蜂蜜及蜂胶等产物含有不同的营养物质和药用成分。

本发明是在前期试验基础上将人脂肪干细胞作为药物组合物的载体，具有靶向运输车的作用，使药物成分像子弹一样追踪并杀死目标物，相比传统的靶向方法具有更强的主动性和靶向性，能够使原药的功效显著增强。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用人脂肪干细胞作为载体的药物组合物用途治疗或预防治疗老年痴呆。将人脂肪干细胞作为药物组合物的载体使药物成分像子弹一样追踪并杀死目标物，相比传统的靶向方法具有更强的主动性和靶向性，能够使原药的功效显著增强。

本发明的另一目的是提供了该药物组合物的制剂。

本发明的药物组合物及其制剂是通过以下技术方案来实现的：

该组合物包含以下重量百分比的组分：DHA10-40份，蜜蜂唾液酶1.1-2.0份，还包括人脂肪干细胞，作为药物组合物的载体。

更进一步的，包含以下重量百分比的组分：DHA为25份，蜜蜂唾液酶为1.6份。

蜜蜂唾液酶是将重量比的原料：夜宁糖浆20-60份、DHA5-15份、水35-75份，混合搅拌制成蜜蜂采食蜜，喂食蜜蜂后收集得到。

本发明治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物，制备方法包括以下步骤：

（1）药物混合溶液的制备：首先收集蜜蜂唾液酶，和DHA按处方比例混合，溶于药学上可接受的介质中，充分混合；

（2）人脂肪干细胞的分离培养：采用分离、纯化、培养的方法获得人脂肪干细胞，并将其重悬在药学上可接受的介质中；

（3）药物制剂的制备：将上述药物混合溶液与人脂肪干细胞重悬液混合，即得发明产物。

更进一步的，步骤（1）中的蜜蜂唾液酶的收集具体步骤为用夜宁糖浆、DHA和水混合搅拌制成蜜蜂采食蜜，喂食蜜蜂后收集得到的蜜蜂唾液酶。

更进一步的，步骤（1）、（2）中的药学上可接受的介质选自缓冲液、生理盐水、平衡盐溶液或其组合；步骤（2）中采用质量与体积比为0.1-0.3%的混合胶原酶对脂肪组织进行消化，用含有10-15%胎牛血清、10³-10⁵U/mlLIF的MCDB-201培养液对提取分离后的干细胞进行培养；步骤（3）中药物混合溶液与人脂肪干细胞培养液的比例为1:1～3。

更进一步的，步骤（2）中的混合胶原酶由Ⅰ型胶原酶和Ⅳ型胶原酶组成，所述混合胶原酶的质量与体积比为1%的母液配制方法为：100mlD-Hanks平衡盐溶液中加入0.7gⅠ型胶原酶、0.3gⅣ型胶原酶。

更进一步的，制备方法包括以下步骤：

（1）取处方量DHA、蜜蜂唾液酶溶于磷酸盐缓冲液中，制备成浓度为5-15mg/ml的混合溶液；

（2）取采集的脂肪组织，剔除肉眼可见的血管和纤维部分，剪碎，用pH值为7.2-7.4的D-Hanks平衡盐液洗涤多次，去除残留的血液，加入与脂肪组织等体积的0.2-0.4%（m/v）混合胶原酶，均匀震荡消化40-80分钟，再置于离心机中离心4-10分钟，去除表层脂肪，将底层细胞用pH值为7.2-7.4的D-Hanks平衡盐液反复清洗，经100目筛网过滤，滤液离心5-10分钟，弃去上清液，将获得的干细胞按照2-3×10⁴/cm²的密度接种于培养瓶，加入10mL含有10-15%胎牛血清、10³-10⁵U/mlLIF的MCDB-201培养液中进行培养，每隔1-2天更换新鲜的培养液，待细胞生成达到80%融合，在培养瓶中加0.25%胰酶-EDTA进行消化，按1:3传代，获得传代培养后的人脂肪干细胞；将2×10⁵个脂肪干细胞重悬在200μl等渗磷酸盐缓冲液中，得到浓度为1.0×10⁶/ml的干细胞悬液；

（3）将上述药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按照1:1～5的比例混合，即得发明产物。

本发明的药物组合物可以根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体，按照药学领域的常规方法，制备成片剂、胶囊剂、糖浆剂或口服液。

更进一步的，口服剂型为片剂、胶囊剂、糖浆剂或口服液。

本发明所述益神健脑的药物中，DHA具有增进大脑细胞发育以及癌症、心血管病、炎症、老人痴呆等病症的治疗作用；蜜蜂唾液酶中含有蔗糖酶、淀粉酶、葡萄糖氧酶、还原酶、转化酶、磷酸酶、类蛋白酶等多种酶。本发明研究人员在研究的过程中，发现在用夜宁糖浆和DHA混合喂食蜜蜂后获得的蜜蜂唾液酶，比普通的蜜蜂唾液酶中含有对人体有益的酶更多，并增强了原夜宁糖浆的治疗作用；这些酶与DHA混合制备成药剂后，作用协同相加，增强了其在提高免疫力、延缓衰老、养心安神的功效，对失眠、多梦、神经衰弱、健忘等症状具有良好的治疗效果。

本发明的有益效果是：可提高人体免疫力、延缓衰老、促进脑部发育、改善睡眠等作用，对改善发育不良、食欲降低、失眠、多梦、神经衰弱、健忘等症状具有良好的效果，相比之前申请专利的药物组合物，具有更好的治疗效果。

以下采用效果实验来进一步阐述本发明所述药物及其制剂的有益效果：

试验例对老年痴呆模型（AD）大鼠记忆的影响

1、材料和方法建议增加不采用脂肪干细胞作为载体的对比药物，表明增加载体有明显效果

1.1实验动物雄性SD大鼠，体重250-350g，6月大，贵阳医学院实验动物中心提供。

1.2药物A：取DHA5g、蜜蜂唾液酶0.8g，按照实施例6的方法制成口服液；药物B：取DHA45g、蜜蜂唾液酶2.5g，按照实施例6的方法制成口服液；药物C：采用药物A的配方，不采用脂肪干细胞作为载体的对比药物；药物D：健脑胶囊，江西广信药业有限公司生产，每粒装0.3g，批号110801。

1.3主要实验仪器Morris水迷宫（贵阳医学院药理实验室）、电子天平、数显恒温水槽、低速离心机等。

2、实验方法

2.1动物分组选取60只SD大鼠给予标准饲料，自由饮水，适应性喂养7天后，随机分为6组：正常对照组、模型组、药物A、B、C和D组，每组10只，分笼饲养。

2.2动物模型制备除正常对照组外，其余各组采用每天腹腔注射0.5%D-半乳糖50mg/kg，一日1次，连续6周。

2.3给药方法造模20天后开始给药，药物A、B、C组每日均给药13.3ml/kg（相当于临床用量10倍）灌胃一次；D组每日给予健脑胶囊0.3g/kg（相当于临床用量10倍）灌胃一次；连续给药28d。

3、观察指标

3.1跳台试验：自制跳台实验箱，箱底铺有铜栅作为刺激电极，箱内右后侧放置一个橡皮垫作为大鼠逃避电击的安全区。先放入大鼠适应5min，随后通入70V，0.5A～0.7A电流,大鼠遭到电击后正常反应是跳上平台以躲避伤害性刺激。记录大鼠从开始通电到完全上台所用的时间。24h后重测验一次以测记忆能力。

3.2Morris水迷宫试验：在水迷宫的圆形水池边缘上等距离设置东西南北4个标记，将水池等分。水池中加入奶粉使水浑浊，不见低于水面的平台，每天将大鼠从4个不同分隔固定入水中各1次，直至找到并站在平台上为止，游泳超过60s后人为将大鼠放至平台上10s进行训练。6天后正式试验，将平台位置转移到对面，记录爬上平台潜伏期的时间。

4、统计学处理：所有数据以表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

5、结果

5.1各组大鼠跳台实验及迷宫实验学习、记忆能力的检测结果见表1、表2。

表1跳台实验学习记忆能力的比较

注：与正常组相比，*P<0.01；与模型组相比#P<0.01；治疗组间比较，ΔP<0.05

表2水迷宫实验检测结果

分组	例数	造模前（s）	治疗后（s）
				正常对照组	10	5.51±0.29	5.55±0.27
模型组	10	5.43±0.25	10.82±0.29*
				药物D组	10	5.41±0.26	7.45±0.25#
药物A组	10	5.46±0.24	8.53±0.27#
				药物C组	10	5.49±0.30	9.05±0.31#Δ
药物B组	10	5.45±0.31	5.87±0.27#Δ

注：与正常组相比，*P<0.01；与模型组相比#P<0.05；治疗组间比较，ΔP<0.01

从上述结果可知，与对照组相比模型组所用时间明显增多，学习记忆能力有显著性下降(P<0.01)，说明模型建立成功；各治疗组与模型组相比，所用时间减少，学习能力均有显著性差异（#P<0.05），说明治疗有效；各治疗组相比，本发明制剂的剂量效果最佳。

5.3结论

老年痴呆症，即阿尔茨海默病(Alzheimer′sDisease，AD)在临床上首先表现为近期记忆力降低，继而呈现持续性智能衰退，其中认知功能障碍为其核心症状。通过回避性跳台和水迷宫试验，观察本发明药物及其制剂对拟AD大鼠学习记忆等认知功能的影响，结果表明发明药物及其制剂可提高AD大鼠的学习记忆能力，具有健脑作用，处方范围内效果良好，相比本申请人之前未采用干细胞作为药物载体，药效提高了8～15%。

具体实施例

需要说明的是，本制备实施例仅仅是介绍一种制备药物的方法，是为了阐释本发明，而不是限制本发明。

实施例1

处方：DHA10g，蜜蜂唾液酶1.1g；

制法：（1）蜜蜂唾液酶的收集：以下列重量比的原料按常规搅拌制得蜜蜂采食蜜后，喂食蜜蜂并收集蜜蜂唾液酶：夜宁糖浆20g，DHA5g，水75g；将蜜蜂唾液酶和DHA按处方比例混合，溶于磷酸盐缓冲液中，制备成浓度为20mg/ml的药物混合溶液。

（2）取采集的脂肪组织，剔除肉眼可见的血管和纤维部分，剪碎，用pH值为7.2-7.4的D-Hanks平衡盐液洗涤多次，去除残留的血液，加入与脂肪组织等体积的0.3%（m/v）混合胶原酶，均匀震荡消化60分钟，再置于离心机中离心5分钟，去除表层脂肪，将底层细胞用pH值为7.2-7.4的D-Hanks平衡盐液反复清洗，经100目筛网过滤，滤液离心8分钟，弃去上清液，将获得的干细胞按照2×10⁴/cm²的密度接种于培养瓶，加入10mL含有12%胎牛血清、10³U/mlLIF的MCDB-201培养液中进行培养，每隔1-2天更换新鲜的培养液，待细胞生成达到80%融合，在培养瓶中加0.25%胰酶-EDTA进行消化，按1:3传代，获得传代培养后的人脂肪干细胞；将2×10⁵个脂肪干细胞重悬在200μl等渗磷酸盐缓冲液中，得到浓度为1.0×10⁶/ml的干细胞悬液；

（3）将上述药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按照1:2的比例混合，即得发明产物。

实施例2

处方：DHA40g，蜜蜂唾液酶2.0g；

制法：（1）蜜蜂唾液酶的收集：以下列重量比的原料按常规搅拌制得蜜蜂采食蜜后，喂食蜜蜂并收集蜜蜂唾液酶：夜宁糖浆60g，DHA15g，水25g；将蜜蜂唾液酶和DHA按处方比例混合，溶于磷酸盐缓冲液中，制备成浓度为15mg/ml的药物混合溶液。

（2）取采集的脂肪组织，剔除肉眼可见的血管和纤维部分，剪碎，用pH值为7.2-7.4的D-Hanks平衡盐液洗涤多次，去除残留的血液，加入与脂肪组织等体积的0.2%（m/v）混合胶原酶，均匀震荡消化80分钟，再置于离心机中离心10分钟，去除表层脂肪，将底层细胞用pH值为7.2-7.4的D-Hanks平衡盐液反复清洗，经100目筛网过滤，滤液离心5分钟，弃去上清液，将获得的干细胞按照2-3×10⁴/cm²的密度接种于培养瓶，加入10mL含有10%胎牛血清、10⁵U/mlLIF的MCDB-201培养液中进行培养，每隔1-2天更换新鲜的培养液，待细胞生成达到80%融合，在培养瓶中加0.25%胰酶-EDTA进行消化，按1:3传代，获得传代培养后的人脂肪干细胞；将2×10⁵个脂肪干细胞重悬在200μl等渗磷酸盐缓冲液中，得到浓度为1.0×10⁶/ml的干细胞悬液；

（3）将上述药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按照1:1的比例混合，即得发明产物。

实施例3

DHA25g，蜜蜂唾液酶1.6g；

制法：（1）蜜蜂唾液酶的收集：以下列重量比的原料按常规搅拌制得蜜蜂采食蜜后，喂食蜜蜂并收集蜜蜂唾液酶：夜宁糖浆40g，DHA10g，水50g；将蜜蜂唾液酶和DHA按处方比例混合，溶于磷酸盐缓冲液中，制备成浓度为5mg/ml的药物混合溶液。

（2）取采集的脂肪组织，剔除肉眼可见的血管和纤维部分，剪碎，用pH值为7.2-7.4的D-Hanks平衡盐液洗涤多次，去除残留的血液，加入与脂肪组织等体积的0.4%（m/v）混合胶原酶，均匀震荡消化40分钟，再置于离心机中离心4分钟，去除表层脂肪，将底层细胞用pH值为7.2-7.4的D-Hanks平衡盐液反复清洗，经100目筛网过滤，滤液离心10分钟，弃去上清液，将获得的干细胞按照2-3×10⁴/cm²的密度接种于培养瓶，加入10mL含有15%胎牛血清、10³U/mlLIF的MCDB-201培养液中进行培养，每隔1-2天更换新鲜的培养液，待细胞生成达到80%融合，在培养瓶中加0.25%胰酶-EDTA进行消化，按1:3传代，获得传代培养后的人脂肪干细胞；将2×10⁵个脂肪干细胞重悬在200μl等渗磷酸盐缓冲液中，得到浓度为1.0×10⁶/ml的干细胞悬液；

（3）将上述药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按照1:3的比例混合，即得发明产物。

实施例4

片剂的制备方法为：将实施例1～3的药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按的比例混合，加入130-150份可压性淀粉、70-90份微晶纤维素混匀后，用70%乙醇润湿制粒，干燥，整粒，与总量0.5%的硬脂酸镁混匀，压片，包衣，即得片剂。

实施例5

胶囊剂的制备方法为：将实施例1～3的药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按的比例混合，加入210-240份预胶化淀粉，混匀后，用8%淀粉浆制粒，干燥，整粒，与总量1.0%的硬脂酸镁混匀，装胶囊，即得胶囊剂。

实施例6

口服液的制备方法为：将实施例1～3的药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按的比例混合，加水溶解，单糖浆加至含糖量为15％，加入0.1%苯甲酸钠，煮沸溶解，加蒸馏水至全量，混匀，滤过，灌封，即得制成口服液体制剂。

实施例7

糖浆剂的制备方法为：将实施例1～3的药物混合溶液和人脂肪干细胞悬液按的比例混合，另取蔗糖入煮沸的水中使溶解均匀，过滤，制成单糖浆，将适量单糖浆加入上述药物混合物中使最终含糖量60%，加入0.4%苯甲酸钠，水浴加热溶解，加水至全量，搅匀，滤过，灌封，即得糖浆剂。

Claims

1.一种用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物，其特征在于：该组合物包含以下重量百分比的组分：DHA10-40份，蜜蜂唾液酶1.1-2.0份，还包括人脂肪干细胞作为药物组合物的载体。

2.如权利要求1所述的用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物，其特征在于：包含以下重量百分比的组分：DHA为25份，蜜蜂唾液酶为1.6份。

3.根据权利要求1或2所述的用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物，其特征在于：蜜蜂唾液酶是将重量比的原料：夜宁糖浆20-60份、DHA5-15份、水35-75份，混合搅拌制成蜜蜂采食蜜，喂食蜜蜂后收集得到。

4.如权利要求1所述的用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物，其特征在于：制备方法包括以下步骤：

(1)药物混合溶液的制备：首先收集蜜蜂唾液酶，和DHA按处方比例混合，溶于药学上可接受的介质中，充分混合；

(2)人脂肪干细胞的分离培养：采用分离、纯化、培养的方法获得人脂肪干细胞，并将其重悬在药学上可接受的介质中；

(3)药物制剂的制备：将上述药物混合溶液与人脂肪干细胞重悬液混合，即得发明产物。

5.根据权利要求4所述的用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物，其特征在于：步骤(1)中的蜜蜂唾液酶的收集具体步骤为用夜宁糖浆、DHA和水混合搅拌制成蜜蜂采食蜜，喂食蜜蜂后收集得到的蜜蜂唾液酶。

6.如权利要求4所述的用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物，其特征在于：步骤(1)、(2)中的药学上可接受的介质选自缓冲液、生理盐水、平衡盐溶液或其组合；步骤(2)中采用质量与体积比为0.1-0.3％的混合胶原酶对脂肪组织进行消化，用含有10-15％胎牛血清、10³-10⁵U/mlLIF的MCDB-201培养液对提取分离后的干细胞进行培养；步骤(3)中药物混合溶液与人脂肪干细胞培养液的比例为1:1～3。

7.如权利要求6所述的用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物，其特征在于：步骤(2)中的混合胶原酶由Ⅰ型胶原酶和Ⅳ型胶原酶组成，所述混合胶原酶的质量与体积比为1％的母液配制方法为：100mlD-Hanks平衡盐溶液中加入0.7gⅠ型胶原酶、0.3gⅣ型胶原酶。

8.如权利要求1所述的用于治疗或预防治疗老年痴呆的药物组合物的制剂，其特征在于：所述的药物组合物可以根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体，按照药学领域的常规方法，制备成片剂、胶囊剂、糖浆剂或口服液。