CN103751228B

CN103751228B - 治疗老年痴呆的药物及其制备方法

Info

Publication number: CN103751228B
Application number: CN201410039644.1A
Authority: CN
Inventors: 张芝庭; 张涛涛
Original assignee: GUIZHOU SHENQI DRUG RESEARCH INSTITUTE
Current assignee: GUIZHOU SHENQI DRUG RESEARCH INSTITUTE
Priority date: 2014-01-27
Filing date: 2014-01-27
Publication date: 2016-04-20
Anticipated expiration: 2034-01-27
Also published as: CN103751228A

Abstract

本发明所述治疗老年痴呆的药物由人造干细胞、人胎膜、千层塔提取物、DHA与辅料制成。所述治疗老年痴呆的药物具有抗衰老、增强记忆的作用，疗效确切、副作用小，且用药力专性平和，适合长期服用。

Description

治疗老年痴呆的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗老年痴呆的药物及其制备方法，属于药品技术的领域。

技术背景

阿尔茨海默病（Alzheimerdisease，AD），又叫老年性痴呆，是一种中枢神经系统变性病，起病隐袭，病程呈慢性进行性，是老年期痴呆最常见的一种类型。主要表现为渐进性记忆障碍、认知功能障碍、人格改变及语言障碍等神经精神症状，严重影响社交、职业与生活功能。其患病率随年龄增高而增高，在65岁以上人群中约为5%,85岁以上人群中约20%。本病常散发，女性多于男性，女性患者的病程常较男性患者长。随着人口的老龄化，AD的发病率逐年上升，严重危害老年人的身心健康和生活质量，给病人带来极大的痛苦，给家庭和社会带来沉重的负担，已成为严重的社会问题，引起各国政府和医学界的普遍关注。阿尔茨海默病病因尚未阐明，研究认为，其发病可能与遗传和环境因素有关。由于AD的病因和发病机制尚不明确，目前没有特效方法逆转和阻止病情进展。国内外批准用于阿尔茨海默病治疗的药物主要有胆碱酯酶抑制剂和谷氨酸受体拮抗剂两类，胆碱酯酶抑制剂一般耐受良好，但常见胃肠道不良反应如恶心、腹泻和呕吐，有时可能会导致部分患者停药。谷氨酸受体拮抗剂为了减低不良反应发生，需注意逐渐加量达到维持剂量：自每日5mg（半片，晨服）起，每周递增5mg剂量，每日最大剂量20mg,使用较麻烦。其他药物，如吡拉西坦、尼麦角林、司来吉兰、长春西汀、维生素E和己酮可可碱等也治疗AD的报道，但疗效尚未得到证实。中草药制剂包括银杏叶提取物和石杉碱甲，银杏叶提取物用于治疗AD的报道相互矛盾。目前倾向于无效。石杉碱甲是中草药中分离得到的石杉碱类生物碱，是一种天然的胆碱酯酶抑制剂，在我国已经在临床使用，但其疗效有待进一步证实。因此一款疗效确切、副作用小的用于治疗老年痴呆的药物必将深受患者欢迎。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗老年痴呆的药物及其制备方法。本发明所述治疗老年痴呆的药物具有抗衰老、增强记忆的作用，能有效治疗老年痴呆，且疗效确切、副作用小。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案实现：

一种治疗老年痴呆的药物，按照重量组份计算，由人造干细胞10-50份、人胎膜10-50份、千层塔提取物10-50份、DHA5-20份及辅料制备而成。

具体地说，前述治疗老年痴呆的药物按照重量组份计算，由人造干细胞30份、人胎膜30份、千层塔提取物30份、DHA10份及辅料制备而成。

前述治疗老年痴呆的药物的制备方法为：按照下述步骤进行制备：

A、称取人造干细胞20倍量的卵磷脂、5倍量的胆固醇，置圆底烧瓶中，加入干细胞30-70倍量的无水乙醇溶解，30℃-50℃水浴旋转蒸发除去无水乙醇，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜，备用；取干细胞放入含有干细胞完全培养液的溶液中，移至上述有薄膜的旋转蒸发仪中，水化20-40min后，冰水浴探头超声10-20min，即得干细胞脂质体混悬液，混悬液-25℃～-10℃冷冻20-30小时，然后在室温下解冻后再次于-25℃～-10℃冷冻20-30小时，如此反复冻融3次，经冷冻干燥、粉碎后即得干细胞脂质体，备用；

B、取人胎膜,洗净,剪碎成颗粒，反复冻融2-5次，加入20-40倍量的生理盐水，上高速组织捣碎匀浆机捣碎5-10次，制成胎膜组织匀浆，加入1-3倍量的Nacl溶液超声浸提20-50min，然后经高速冷冻离心机离心沉淀，上清液超滤，减压浓缩，冷冻干燥，即得；

C、将A中所得干细胞脂质体、B中所得人胎膜提取物与千层塔提取物细粉、DHA混匀，再加入常规辅料按照常规方法可以制成不同的口服制剂。

具体地说，前述治疗老年痴呆的药物的制备方法为：按照下述步骤进行制备：

A、称取干细胞20倍量的卵磷脂、5倍量的胆固醇，置圆底烧瓶中，加入干细胞50倍量的无水乙醇溶解，40℃水浴旋转蒸发除去无水乙醇，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜，备用；取干细胞放入含有干细胞完全培养液的溶液中，移至上述有薄膜的旋转蒸发仪中，水化30min后，冰水浴探头超声15min，即得干细胞脂质体混悬液，混悬液-20℃冷冻24小时，然后在室温下解冻后再次于-20℃冷冻24小时，如此反复冻融3次，经冷冻干燥、粉碎后即得干细胞脂质体，备用；

B、取人胎膜,洗净,剪碎成1-1.5cm的颗粒，-18℃的条件下反复冻融3次，加入30倍量的生理盐水，上高速组织捣碎匀浆机，12000r/min，3min/次，捣碎8次，制成胎膜组织匀浆，加入3倍量的Nacl溶液超声浸提25min，超声功率300W，然后经高速冷冻离心机,10000r/min，离心沉淀10min，上清液超滤，减压浓缩，冷冻干燥，即得；

所述口服制剂是指片剂、胶囊剂或颗粒剂。

所述片剂这样制备：

C、将A中所得干细胞脂质体、B中所得人胎膜提取物与千层塔提取物细粉、DHA混匀，加入制成量10%的淀粉，制粒；再加入制成量0.5%的硬脂酸镁，压片，包衣，即得片剂。

所述胶囊剂这样制备：

C、将A中所得干细胞脂质体、B中所得人胎膜提取物与千层塔提取物细粉、DHA混匀，加入制成量10%的淀粉，制粒；过60目筛，装胶囊，即得胶囊剂。

所述颗粒剂这样制备：

C、将A中所得干细胞脂质体、B中所得人胎膜提取物与千层塔提取物细粉、DHA混匀，加入制成量15%的糊精，用乙醇制粒，即得颗粒剂。

本发明所述治疗老年痴呆的药物由人造干细胞、人胎膜、千层塔提取物、DHA与辅料制成。其中人胎膜，是包裹胎儿，对胎儿的生长发育起到保护、营养、呼吸、排泄作用的胚胎辅助结构。包括绒毛膜、羊膜、卵黄囊、尿囊和脐带。含有蛋白质、多肽、尿激酶及多种矿物原色和维生素，具有促生长、抗氧化、抗衰老、催乳、提高免疫等功能。千层塔为石杉科石杉属多年生草本植物蛇足石杉的全草。千层塔提取物由千层塔提取而得，有清热解毒、生肌止血、散瘀消肿的功效。治跌打损伤、瘀血肿痛、内伤出血。现代药理研究表明，千层塔提取物中所含石杉碱甲是一种乙酰胆碱酯酶的可逆抑制剂，具有选择性高、毒性低和药效时间长等特点，是目前为止国际上治疗老年痴呆较为理想的候选药物。用于重症肌无力、老年性记忆衰退和早老性痴呆症、青少年学习障碍和记忆增强。DHA即不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸，俗称脑黄金，是一种对人体非常重要的不饱和脂肪酸，属于Omega-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员。是人的大脑发育、成长的重要组成物质之一。在人体大脑皮层中含量高达20%，在眼睛视网膜中所占比例最大，约占50%。DHA是大脑细胞膜的重要构成成分，参与脑细胞的形成和发育，对神经细胞轴突的延伸和新突起的形成有重要作用，可维持神经细胞的正常生理活动，参与大脑思维和记忆形成过程，是大脑和视网膜的重要构成成分。由于随着年龄的增长，脑中的DHA就会逐渐减少，也就是说容易引起脑部功能的退化。事实上，脑细胞在二至三岁前会不断的成长，长大成人后，则会逐渐减少，根据调查，在二十至三十岁时，脑细胞会以十万个的比率逐渐减少，虽然如此，DHA仍具有使剩下的脑细胞活性化的力量，充分地提高老年人的记忆及学习能力。干细胞(stemcells,SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。简单来讲，它是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。理论上讲，任何一种中枢神经疾病都可归结为神经干细胞功能的紊乱。给阿尔茨海默病患者的脑内移植干细胞，干细胞分化形成新的神经细胞，可治愈部分患者的症状。目前干细胞主要通过移植的方式植入患者体内，并取得一定成果。发明人在实验过程中发现，干细胞必须保持细胞活性才能发挥作用，将干细胞制成传统剂型时，按照现有技术还不能保持其生物活性。发明人经大量实验研究发现，将干细胞制成脂质体，并与本发明所述药物进行组方，可以解决以上问题。本发明所述药物用药力专性平和，适合长期服用，达到了发明目的。

申请人进行了下列实验，可证明本发明具有有效的效果。

实验例1：干细胞脂质体制备工艺研究

经单因素试验预试，确定对包封率影响较大的因素为卵磷脂与胆固醇比值(A)，卵磷脂与干细胞比值(B)，冻融次数(C)，水化时间(D），各因素设3个水平(如表1)，选用L₉（3⁴）正交表安排实验，以包封率为指标优选干细胞脂质体制备工艺，结果见下表2。

表1因素水平表

表2正交设计表

分析结论：以总评分为指标，可得最佳提取工艺为A₂B₂C₃D₂，即卵磷脂与胆固醇比值为4:1；卵磷脂与干细胞比值为20:1；水化时间为30min；冻融3次。

实验例2：药效学研究

1.实验材料

1.1实验动物昆明种品系小鼠(20±2g)雄性、购自重庆市实验动物中心。

1.2实验药物

1.2.1本发明药物：

组方：人造干细胞30g、人胎膜30g、千层塔提取物30g、DHA10g

工艺：按照下述步骤进行制备：

B、取人胎膜,洗净,剪碎成1-1.5cm的颗粒，-18℃的条件下反复冻融3次，加入30倍量的生理盐水，上高速组织捣碎匀浆机，12000r/min，每3min/次，捣碎8次，制成胎膜组织匀浆，加入2倍量的Nacl溶液超声浸提25min，超声功率300W，然后经高速冷冻离心机10000r/min，10min离心沉淀，上清液超滤，减压浓缩，冷冻干燥，即得；

C、将A中所得干细胞脂质体、B中所得人胎膜提取物与千层塔提取物细粉、DHA混匀，即得。

1.2.2对照药物：

组方：千层塔提取物30g、DHA10g。

工艺：将千层塔提取物细粉、DHA混匀，即得。

1.2.3脑复康片：市售。

2.实验方法

2.1动物分组及给药

采用成组实验设计法，70只昆明小鼠按体重差异，随机分为空白组、模型组、脑复康组、本发明药物组、对照药物组，每组10只。采用D-半乳糖注射法建立衰老模型。空白组不给予任何药物，与模型组同时每天颈背皮下注射生理盐水0.5mL/20g，6周后给予生理盐水；模型组于每天颈背皮下注射5%D-半乳糖0.5mL/20g；6周后给予生理盐水。其余均于实验前6周开始每天颈背皮下注射5%D-半乳糖0.5mL/20g，6周后，本发明药物组每天灌胃2g/kg本发明药物，对照药物组每天灌胃2g/kg对照药物，脑复康组每天灌胃1.6g/kg脑复康片。

2.2实验方法

2.2.1小鼠的被动回避能力测试：避暗箱是由大小相同的明暗两室组成，明室为监测室，暗室为通电室，其体积为18cm*25cm*20cm，两室之间有一直径为5cm的通道。明室上方悬挂1个60W的白炽灯。暗室底部由间隔lcm的铜丝组成，通36V电压，实验开始后，首先关闭电击电源，将小鼠背朝通道放入监测箱，任其自由活动3min，使其熟悉环境。随后，进行记忆获得训练，打开电击开关将小鼠背对洞口，小鼠因嗜暗习性进入暗室，受到电击后，立即逃离暗室。24h后，再次进行测试，将小鼠重新放入监测室，小鼠第1次进入暗室的时间为潜伏期，小鼠进入的次数为错误次数。

2.2.2小鼠跳台实验：将动物放置反应箱中适应3min，然后通上36V交流电，动物受到刺激后，反应是立即跳到平台上，多数可能再次或多次跳到通电的铜栅上，受到电击后，又快速跳回平台上，如此训练5min。24h后，重新测试，为记忆保持试验，第1次跳下平台的时间记为潜伏期，5min内跳下的次数为错误次数。

2.2.3脑中AChE活性测定：取动物左侧大脑，制成l0%脑匀浆，离心取上清。按照试剂盒的要求依次加入底物缓冲液和显色应用剂，混匀后，37℃准确反应6min，再依次加入抑制剂、透明剂、显色应用剂，混匀，放置15min，测定在412nm波长下吸光度(A值)，以蒸馏水调零比色。按下列公式计算得脑匀浆内AChE含量(μmol/mg)：

同时用考马斯亮蓝试剂盒测定脑匀浆内蛋白含量。

2.3实验结果与结论

2.3.1小鼠在给予受试药物后，各给药组的被动回避错误次数与模型组比较均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)，本发明药物组与对照药物组比较有显著性差异(P<0.05)。结果见表3。

表3各组小鼠被动回避能力比较

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；

与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；

与对照药物组比较，*P＜0.05。

以上实验研究结果表明，本发明药物组与对照药物组均有降低衰老模型小鼠的被动回避错误次数的作用；其中本发明药物组优于原工艺制剂组（P＜0.05）。

2.3.2小鼠在给予受试药物后，各给药组的跳台错误次数与模型组比较均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)，本发明药物组与对照药物组比较有显著性差异(P<0.05)。结果见表4。

表4各组小鼠跳台能力比较

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；

与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；

与对照药物组比较，*P＜0.05。

以上实验研究结果表明，本发明药物组与对照药物组均有降低衰老模型小鼠的跳台错误次数的作用；其中本发明药物组优于对照药物组（P＜0.05）。

2.3.3小鼠在给予受试药物后，各给药组小鼠脑中AChE的活性与模型组比较均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)，本发明药物组与对照药物组比较有显著性差异(P<0.05)。结果见表5。

表5各组小鼠AChE的活性比较

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；

与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；

与对照药物组比较，*P＜0.05。

以上实验研究结果表明，本发明药物组与对照药物组均有降低各给药组的AChE的作用；其中本发明药物组优于对照药物组（P＜0.05）。

具体实施方式：

实施例1：

配方：人造干细胞30g、人胎膜30g、千层塔提取物30g、DHA10g。

工艺：按照下述步骤进行制备:

用法用量：每次3-4片，每日3次。

规格：0.3g/片。

实施例2：

配方：人造干细胞50g、人胎膜50g、千层塔提取物50g、DHA20g。

工艺：按照下述步骤进行制备:

用法用量：每次3-4粒，每日3次。

规格：0.3g/粒。

实施例3：

配方：人造干细胞10g、人胎膜10g、千层塔提取物10g、DHA5g。

工艺：按照下述步骤进行制备:

用法用量：每次5-10g，每日3次。

Claims

1.一种治疗老年痴呆的药物，其特征在于：按照重量组份计算，由人造干细胞10-50份、人胎膜10-50份、千层塔提取物10-50份、DHA5-20份及辅料制备而成；所述治疗老年痴呆的药物的制备方法按照下述步骤进行制备：

C、将A中所得干细胞脂质体、B中所得人胎膜提取物与千层塔提取物细粉、DHA混匀，再加入常规辅料按照常规方法制成不同的口服制剂。

2.如权利要求1所述治疗老年痴呆的药物，其特征在于：按照重量组份计算，由人造干细胞30份、人胎膜30份、千层塔提取物30份、DHA10份及辅料制备而成。

3.如权利要求1所述治疗老年痴呆的药物的制备方法，其特征在于：按照下述步骤进行制备：

4.如权利要求3所述治疗老年痴呆的药物的制备方法，其特征在于：所述口服制剂是指片剂、胶囊剂或颗粒剂。

5.如权利要求4所述治疗老年痴呆的药物的制备方法，其特征在于：所述片剂这样制备：

C、将A中所得干细胞脂质体、B中所得人胎膜提取物与千层塔提取物细粉、DHA混匀，加入制成量10％的淀粉，制粒；再加入制成量0.5％的硬脂酸镁，压片，包衣，即得片剂。

6.如权利要求4所述治疗老年痴呆的药物的制备方法，其特征在于：所述胶囊剂这样制备：

C、将A中所得干细胞脂质体、B中所得人胎膜提取物与千层塔提取物细粉、DHA混匀，加入制成量10％的淀粉，制粒；过60目筛，装胶囊，即得胶囊剂。

7.如权利要求4所述治疗老年痴呆的药物的制备方法，其特征在于：所述颗粒剂这样制备：

C、将A中所得干细胞脂质体、B中所得人胎膜提取物与千层塔提取物细粉、DHA混匀，加入制成量15％的糊精，用乙醇制粒，即得颗粒剂。