CN108338098A - 一种富硒大头鱼的养殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于养殖技术领域,具体涉及一种富硒大头鱼的养殖方法,包括步骤(1)选址:选择交通方便、水源充足、水源干净无污染的地方建立鱼塘;(2)建池:池塘深3‑5米,四周使用石头铺平成池壁,使用高锰酸钾溶液对池壁进行消毒,暴晒2‑5天后,铺一层厚5‑8厘米的砂石于鱼塘底部,并种上水草,放水深3‑4米;(3)放养:选择健康无病害的鱼苗放养于鱼塘中,达到密度为400‑500尾/亩;(4)鱼塘管理:包括饲料投放、疾病预防、养殖密度控制;(5)成鱼打捞。本发明的养殖出来的大头鱼硒元素含量有所提高,且产量相比普通养殖方法提高1000‑2000公斤/亩。
Description
【技术领域】
本发明属于养殖技术领域,具体涉及一种富硒大头鱼的养殖方法。
【背景技术】
大头鱼又称鳙鱼,可入药,其味甘、性温,主入目及大肠,具有暖胃、祛头眩、益脑髓、补虚劳、疏肝解郁、健脾利肺、祛风寒、益筋骨的之功效。可辅助治疗治咳嗽、水肿、肝炎、眩晕、肾炎、小便不大头鱼利和身体虚弱等症。适宜体质虚弱,脾胃虚寒,营养不良之人食用。且具有较高的经济价值,对人体有提高智商、增强记忆、补充营养、延缓衰老的作用。
随着时代的变迁,人们对食物的要求越来越高,为了跟上时代的进步,促使大头鱼的销量不降低,提高硒元素的大头鱼的养殖方式将是一种更好的提高大头鱼的经济价值的方法。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种富硒大头鱼的养殖方法,本发明的养殖出来的大头鱼硒元素含量有所提高,且产量相比普通养殖方法提高1000-2000公斤/亩。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
一种富硒大头鱼的养殖方法,包括以下具体步骤:
(1)选址:选择交通方便、水源充足、水源干净无污染的地方建立鱼塘;
(2)建池:池塘深3-5米,四周使用石头铺平成池壁,使用高锰酸钾溶液对池壁进行消毒,暴晒2-5天后,铺一层厚5-8厘米的砂石于鱼塘底部,并种上水草,放水深3-4米;
(3)放养:选择健康无病害的鱼苗放养于鱼塘中,达到密度为400-500尾/亩;
(4)鱼塘管理:包括饲料投放、疾病预防、养殖密度控制;
1)饲料投放:当鱼苗放养前两个月,投放饲料A 0.2-0.3千克/尾,每日三次;两个月后投放饲料A 0.3-0.5千克/尾,每日三次;当鱼放养第八个月后开始投喂饲料A 0.5-1.0千克/尾,每日三次;在第二年捕鱼采卖的前3天开始,投喂饲料A 0.3-0.4千克/尾,每日三次;
2)疾病预防:当鱼苗放养前投放防病液对鱼苗进行试养3-5天后,再投放鱼塘中饲养;在放养期间间隔3-4个月后投放防病液于鱼塘内,投放的量为0.5-5.0毫升/立方米;
3)养殖密度控制:放养期间随着大头鱼体重的增加,控制鱼的养殖密度为350-400尾/亩;
4)水质控制:定期进行鱼塘的水质抽检,控制鱼塘的含氧量为5-8毫克/升,鱼塘控制1米深处的水温为22-25℃;
所述饲料A由以下重量百分数原料制备得到:膨化玉米粉10-15%、豆粕8-15%、黄粉虫6-12%、发酵料20-30%、富硒大豆5-15%、矿质元素5-10%、甜高粱5-10%、酒糟10-15%、复合维生素3-8%;
所述发酵料由以下原料制备得到:象草20-30重量份、毒麦20-30重量份、假高粱20-30重量份、薇甘菊提取物20-30重量份、混合发酵菌5-8重量份;
所述混合发酵菌由以下原料混合得到:纤维素酶2-5重量份、乳杆菌3-8重量份、双歧杆菌1-3重量份、胶质芽胞杆菌1-5重量份;
所述防病液由以下原料制备得到:侧金盏花提取物50-80mg/l、猪殃殃提取30-80mg/l、秦皮提取物50-90mg/l、茵陈提取物80-110mg/l、大红袍提取物75-100mg/l、连翘提取物70-90mg/l、鱼腥草提取物45-75mg/l、大黄提取物45-75mg/l;
(5)成鱼打捞:在放养第二年后,将鱼塘的水放至1米深后进行打捞买卖。
在本发明中进一步说明,所述复合维生素包括1-5重量份叶酸、2-3重量份维生素A、1-3重量份维生素B1、1-3重量份维生素B2、2-5重量份维生素B6、1-5重量份维生素B12、3-5重量份维生素C、1-3重量份维生素D3、1-3重量份维生素E、1-2重量份烟酰胺、1-2重量份泛酸钙。
在本发明中进一步说明,所述纤维素酶的活菌数为2-4亿cfu/g、乳杆菌的活菌数为10-20亿cfu/g、双歧杆菌的活菌数为3-6亿cfu/g、胶质芽胞杆菌的活菌数为5-10亿cfu/g。
在本发明中进一步说明,所述发酵料是由以下方法制备得到的:
第一步,将新鲜的薇甘菊全株清洗干净,加入2-5倍体积的水搅碎打浆5-10分钟装入锥形瓶中,接着加入0.1-0.2%(w/v)的碳酸氢钠溶液调节pH至5-6得到混合浆液,再加入浆液2-3%体积的混合蛋白酶于锥形瓶中57-62℃下进行摇床酶解20-35分钟,过100目筛后,采用离心机进行离心2-5分钟即可得到薇甘菊提取物;
第二步,将新鲜的假高粱清洗干净后加入密封高压蒸汽锅,然后通入300-500℃的蒸汽进行蒸煮5-10分钟,接着将凉至常温、自然通风晾干水、加入烘干机38-40℃进行烘干至含水率15-20%即可;
第三步,将毒麦、象草粉碎后与第一、二步处理后得到的材料,接着加入混合发酵菌进行建堆发酵5-8天后即可,发酵期间控制发酵堆的中心位置不大于55℃。
在本发明中进一步说明,所述混合蛋白酶是由3-8重量份木瓜蛋白酶、2-5重量份菠萝蛋白酶、1-5重量份无花果蛋白酶、1-3重量份枯草杆菌蛋白酶组成。
在本发明中进一步说明,所述摇床的速率为100-150r/min,所述离心机的离心转速为1500-2000r/min。
在本发明中进一步说明,所述侧金盏花提取物是由以下方法制备得到的:将侧金盏花洗净粉碎,加入50-65%(v/v)乙醇溶液于50-60℃下进行加热回流提取10-20分钟,取提取液减压浓缩直至无乙醇味,接着加入5-10倍体积的醋酸溶液调节pH至4.5-5.5,于55℃下,100-120赫兹高压脉冲电场脉冲处理2×10-6-3×10-6S,提取20-30分钟,得到粗提液,接着使用乙酸乙酯进行分层萃取,取乙酸乙酯部减压浓缩,喷雾干燥即可得到侧金盏花提取物,提取物中主含有总香豆素67.26-94.12mg/g;
所述猪殃殃提取物是由以下方法制备得到的:将猪殃殃洗净后加入适量的硅藻土进行研钵研磨成浆,接着加入50-65%(v/v)乙醇溶液于40-50℃下进行加热回流提取5-10分钟,过滤取滤液,将滤液通过减压浓缩回收乙醇直至无醇味,接着加入稀盐酸调节pH至4.0-5.0后过滤取上清液,接着加入纤维素酶于45-50℃下水浴酶解20-30分钟,接着加入氢氧化钠调节pH至中性,过滤取沉淀即可得到猪殃殃提取物,提取物中主含有总生物碱58.25-95.64mg/g。
在本发明中进一步说明,所述秦皮提取物是由以下方法制备得到的:将秦皮在压力3-5MPa下进行超微粉碎后过10-20目筛,加入10-20倍水回流提取于50-60℃下提取20-30分钟得到提取液,然后加入提取液体积1.2-1.5倍的石油醚进行萃取,取石油醚部接着用水浴蒸馏回收石油醚,接着加入80-85%(v/v)乙醇溶液进行醇提1-2小时,接着用大孔树脂进行吸附分离洗脱,洗脱依次用体积浓度为20%、40%、60%、80%和90%的乙醇-水体系洗脱液进行梯度洗脱,每个梯度的乙醇-水溶液洗脱体积为5-6BV,洗脱流速为3-4BV/h,减压浓缩得到膏状物,干燥即可得到秦皮提取物,提取物中主含有内酯25.36-47.36mg/g、总苷75.68-98.48mg/g;
所述茵陈提取物是由以下方法制备得到的:将茵陈洗净后加入白油、硅藻土研磨成浆,然后加入80-85%(v/v)乙醇溶液回流提取3次,每次提取的温度为60-70℃、提取的时间为30-40分钟,合并3次提取的提取液,加入活性炭脱色后过滤去除活性炭,接着加水稀释后加入正丁醇振荡摇晃后静置5-10分钟,接着取正丁醇部分用硅胶柱色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱,在40:1洗脱部分,用丙酮进行5次重结晶得到茵陈提取物主含有滨蒿内酯15.68-20.37mg/g;所述茵陈:白油:硅藻土的重量比为2-3:0.05-0.07:0.1-0.2。
在本发明中进一步说明,所述大红袍提取物是由以下方法制备得到的:将大红袍干燥在压力3-5MPa下进行超微粉碎后过50-100目筛,使用3-5倍体积、温度为100-120℃的水恒温浸泡大红袍茶粉5-10分钟得到汤茶,接着加入醋酸调节pH至2.0-3.0,使用65-75%(v/v)乙醇溶液回流提取取提取液,接着按照体积比为1:1的比例加入乙酸乙酯进行摇荡20-30分钟后静置萃取,将乙酸乙酯部分用硅胶柱色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱,在40:1洗脱部分,用丙酮进行5次重结晶得到大红袍提取物主含有茶多酚228.68-268.24mg/g;
所述连翘提取物是由以下方法制备得到的:将连翘粉碎后,加入80-85%(v/v)乙醇溶液在超声波辅助条件下,于80-90℃下进行回流提取30-40分钟,一共回流提取3次,合并3次提取液进行减压浓缩、低温蒸干得到原体积1.12倍的浸膏,即可得到连翘提取物主含有表儿茶素22.34-28.64mg/g。
在本发明中进一步说明,所述鱼腥草提取物是由以下方法制备得到的:将鱼腥草加入10-20倍的水煎煮50-60分钟,过滤取滤液,减压蒸发浓缩至原体积1.02-1.05倍即可得到鱼腥草活性成分的鱼腥草提取物;
大黄提取物是由以下方法制备得到的:将大黄加入10-20倍的水煎煮50-60分钟,过滤取滤液,减压蒸发浓缩至原体积1.02-1.05倍即可得到大黄活性成分的大黄提取物。
综上所述,由于采用了上述技术方案,本发明的有益效果是:
1.本申请中的饲料营养全面均衡,能够提供大头鱼生长所需的营养元素,而不会因为缺少营养元素而生长缓慢,添加的发酵料中利用了有害的杂草变废为宝,是一种能资源利用杂草的一种新处理方式,但是毒麦本身作为杂草因为它含有毒麦碱,会对大头鱼的脑部起到麻痹的效果影响大头鱼的生长,因此需要降解它的毒麦碱含量,假高粱在进行发酵中会酶解产生氢氰酸大头鱼食用后会引起脑、心血管等系统的机能障碍,因此不能直接发酵后食用需要进一步的进行处理降解假高粱的氰化物,本申请人经过研究发现,通过本申请的技术处理方法,能迅速的将有毒物质进行脱毒降解了本身的毒性,减少在发酵释放的量,且在发酵过程中由于有温度有微生物作用产生的化学反应会引起一系列的性质变化,产生一些促进吸收的营养物质和促进动物生长的因子,至今还尚未有一个详细的报道其中的原理,因此在发酵前对原料进行脱毒是非常有必要的,经过研究发现经过脱毒后使得发酵过程中有毒物质释放量减少但并未彻底,通过复配的微生物进行降解大大降低有毒物质的含量,增加了饲料的安全性,且发现有毒物质降解后饲料的有机物含量有所提高;通过本申请的配方饲料硒元素含量达到200μg/g,在进行饲养中大头鱼吸收硒元素营养物质,经过检测相比较使用本申请的饲料饲养的大头鱼的相比市场上的大头鱼硒元素含量提高了18.56-19.47μg/只。
2.本申请的防病药液中8种提取物各为不同的活性部位提取部,各司其职、相辅相成,协同作用起到防治大头鱼指环虫的目的,通过本申请的原料提取物中的物质中含有生物碱、酚类、鞣质类、酚酸类、苷类,通过本申请人试验配比,各个原料的活性成分相辅相成后达到协同增效、且能解除碱性物质的毒性的解毒作用,复配后达到98%以上的防治大头鱼指环虫的发病和毒杀的作用,减少了指环虫的病害,从而提高了产量,产量达到6542-7145公斤/亩。
【具体实施方式】
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进,因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
实施例1:
一种富硒大头鱼的养殖方法,包括以下具体步骤:
(1)选址:选择交通方便、水源充足、水源干净无污染的地方建立鱼塘;
(2)建池:池塘深3米,四周使用石头铺平成池壁,使用高锰酸钾溶液对池壁进行消毒,暴晒2天后,铺一层厚5厘米的砂石于鱼塘底部,并种上水草,放水深3米;
(3)放养:选择健康无病害的鱼苗放养于鱼塘中,达到密度为400尾/亩;
(4)鱼塘管理:包括饲料投放、疾病预防、养殖密度控制;
1)饲料投放:当鱼苗放养前两个月,投放饲料A 0.2千克/尾,每日三次;两个月后投放饲料A 0.3千克/尾,每日三次;当鱼放养第八个月后开始投喂饲料A 0.5千克/尾,每日三次;在第二年捕鱼采卖的前3天开始,投喂饲料A 0.3千克/尾,每日三次;
2)疾病预防:当鱼苗放养前投放防病液对鱼苗进行试养3天后,再投放鱼塘中饲养;在放养期间间隔3个月后投放防病液于鱼塘内,投放的量为投放的量为0.5毫升/立方米;
3)养殖密度控制:放养期间随着大头鱼体重的增加,控制鱼的养殖密度为350尾/亩;
4)水质控制:定期进行鱼塘的水质抽检,控制鱼塘的含氧量为5毫克/升,鱼塘控制1米深处的水温为22℃;
所述饲料A由以下重量百分数原料制备得到:膨化玉米粉10%、豆粕15%、黄粉虫12%、发酵料20%、富硒大豆15%、矿质元素5%、甜高粱10%、酒糟10%、复合维生素3%(1重量份叶酸、2重量份维生素A、1重量份维生素B1、1重量份维生素B2、2重量份维生素B6、1重量份维生素B12、3重量份维生素C、1重量份维生素D3、1重量份维生素E、1重量份烟酰胺、1重量份泛酸钙);
所述发酵料由以下原料制备得到:象草20重量份、毒麦20重量份、假高粱20重量份、薇甘菊提取物20重量份、混合发酵菌5重量份;
所述混合发酵菌由以下原料混合得到:活菌数为2亿cfu/g的纤维素酶2重量份、活菌数为10亿cfu/g的乳杆菌3重量份、活菌数为3亿cfu/g的双歧杆菌1重量份、活菌数为5亿cfu/g的胶质芽胞杆菌1重量份;
所述防病液由以下原料制备得到:侧金盏花提取物50mg/l、猪殃殃提取30mg/l、秦皮提取物50mg/l、茵陈提取物80mg/l、大红袍提取物75mg/l、连翘提取物70mg/l、鱼腥草提取物45mg/l、大黄提取物45mg/l;
(5)成鱼打捞:在放养第二年后,将鱼塘的水放至1米深后进行打捞买卖。
上述的发酵料是由以下方法制备得到的:
第一步,将新鲜的薇甘菊全株清洗干净,加入2倍体积的水搅碎打浆5分钟装入锥形瓶中,接着加入0.1%(w/v)的碳酸氢钠溶液调节pH至5得到混合浆液,再加入浆液2%体积的由3重量份木瓜蛋白酶、2重量份菠萝蛋白酶、1重量份无花果蛋白酶、1重量份枯草杆菌蛋白酶组成混合蛋白酶于锥形瓶中57℃下进行以速率为100r/min摇床酶解20分钟,过100目筛后,采用离心机进行转速为1500r/min的离心2分钟即可得到薇甘菊提取物;
第二步,将新鲜的假高粱清洗干净后加入密封高压蒸汽锅,然后通入300℃的蒸汽进行蒸煮5分钟,接着将凉至常温、自然通风晾干水、加入烘干机38℃进行烘干至含水率15%即可;
第三步,将毒麦、象草粉碎后与第一、二步处理后得到的材料,接着加入混合发酵菌进行建堆发酵5天后即可,发酵期间控制发酵堆的中心位置不大于55℃。
所述防病液中,侧金盏花提取物是由以下方法制备得到的:将侧金盏花洗净粉碎,加入50%(v/v)乙醇溶液于50℃下进行加热回流提取10分钟,取提取液减压浓缩直至无乙醇味,接着加入5倍体积的醋酸溶液调节pH至4.5,于55℃下,100赫兹高压脉冲电场脉冲处理2×10-6S,提取20分钟,得到粗提液,接着使用乙酸乙酯进行分层萃取,取乙酸乙酯部减压浓缩,喷雾干燥即可得到侧金盏花提取物,提取物中主含有总香豆素67.26mg/g;
所述猪殃殃提取物是由以下方法制备得到的:将猪殃殃洗净后加入适量的硅藻土进行研钵研磨成浆,接着加入50%(v/v)乙醇溶液于40℃下进行加热回流提取5分钟,过滤取滤液,将滤液通过减压浓缩回收乙醇直至无醇味,接着加入稀盐酸调节pH至4.0后过滤取上清液,接着加入纤维素酶于45℃下水浴酶解20分钟,接着加入氢氧化钠调节pH至中性,过滤取沉淀即可得到猪殃殃提取物,提取物中主含有总生物碱58.25mg/g。
所述秦皮提取物是由以下方法制备得到的:将秦皮在压力3MPa下进行超微粉碎后过10目筛,加入10倍水回流提取于50℃下提取20分钟得到提取液,然后加入提取液体积1.2倍的石油醚进行萃取,取石油醚部接着用水浴蒸馏回收石油醚,接着加入80%(v/v)乙醇溶液进行醇提1小时,接着用大孔树脂进行吸附分离洗脱,洗脱依次用体积浓度为20%、40%、60%、80%和90%的乙醇-水体系洗脱液进行梯度洗脱,每个梯度的乙醇-水溶液洗脱体积为5BV,洗脱流速为3BV/h,减压浓缩得到膏状物,干燥即可得到秦皮提取物,提取物中主含有内酯25.36mg/g、总苷75.68mg/g;
所述茵陈提取物是由以下方法制备得到的:将茵陈洗净后加入白油、硅藻土研磨成浆,然后加入80%(v/v)乙醇溶液回流提取3次,每次提取的温度为60℃、提取的时间为30分钟,合并3次提取的提取液,加入活性炭脱色后过滤去除活性炭,接着加水稀释后加入正丁醇振荡摇晃后静置5分钟,接着取正丁醇部分用硅胶柱色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱,在40:1洗脱部分,用丙酮进行5次重结晶得到茵陈提取物主含有滨蒿内酯15.68mg/g;所述茵陈:白油:硅藻土的重量比为2:0.05:0.1。
所述大红袍提取物是由以下方法制备得到的:将大红袍干燥在压力3MPa下进行超微粉碎后过50目筛,使用3倍体积、温度为100℃的水恒温浸泡大红袍茶粉5分钟得到汤茶,接着加入醋酸调节pH至2.0,使用65%(v/v)乙醇溶液回流提取取提取液,接着按照体积比为1:1的比例加入乙酸乙酯进行摇荡20分钟后静置萃取,将乙酸乙酯部分用硅胶柱色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱,在40:1洗脱部分,用丙酮进行5次重结晶得到大红袍提取物主含有茶多酚228.68mg/g;
所述连翘提取物是由以下方法制备得到的:将连翘粉碎后,加入80%(v/v)乙醇溶液在超声波辅助条件下,于80℃下进行回流提取30分钟,一共回流提取3次,合并3次提取液进行减压浓缩、低温蒸干得到原体积1.12倍的浸膏,即可得到连翘提取物主含有表儿茶素22.34mg/g。
所述鱼腥草提取物是由以下方法制备得到的:将鱼腥草加入10倍的水煎煮50分钟,过滤取滤液,减压蒸发浓缩至原体积1.02倍即可得到鱼腥草活性成分的鱼腥草提取物;
大黄提取物是由以下方法制备得到的:将大黄加入10倍的水煎煮50分钟,过滤取滤液,减压蒸发浓缩至原体积1.02倍即可得到大黄活性成分的大黄提取物。
实施例2:
一种富硒大头鱼的养殖方法,包括以下具体步骤:
(1)选址:选择交通方便、水源充足、水源干净无污染的地方建立鱼塘;
(2)建池:池塘深5米,四周使用石头铺平成池壁,使用高锰酸钾溶液对池壁进行消毒,暴晒5天后,铺一层厚8厘米的砂石于鱼塘底部,并种上水草,放水深4米;
(3)放养:选择健康无病害的鱼苗放养于鱼塘中,达到密度为500尾/亩;
(4)鱼塘管理:包括饲料投放、疾病预防、养殖密度控制;
1)饲料投放:当鱼苗放养前两个月,投放饲料A0.3千克/尾,每日三次;两个月后投放饲料A 0.5千克/尾,每日三次;当鱼放养第八个月后开始投喂饲料A 1.0千克/尾,每日三次;在第二年捕鱼采卖的前3天开始,投喂饲料A 0.4千克/尾,每日三次;
2)疾病预防:当鱼苗放养前投放防病液对鱼苗进行试养5天后,再投放鱼塘中饲养;在放养期间间隔4个月后投放防病液于鱼塘内,投放的量为5.0毫升/立方米;
3)养殖密度控制:放养期间随着大头鱼体重的增加,控制鱼的养殖密度为400尾/亩;
4)水质控制:定期进行鱼塘的水质抽检,控制鱼塘的含氧量为8毫克/升,鱼塘控制1米深处的水温为25℃;
所述饲料A由以下重量百分数原料制备得到:膨化玉米粉15%、豆粕8%、黄粉虫6%、发酵料30%、富硒大豆5%、矿质元素10%、甜高粱5%、酒糟15%、复合维生素6%(5重量份叶酸、3重量份维生素A、3重量份维生素B1、3重量份维生素B2、5重量份维生素B6、5重量份维生素B12、5重量份维生素C、3重量份维生素D3、3重量份维生素E、2重量份烟酰胺、2重量份泛酸钙);
所述发酵料由以下原料制备得到:象草30重量份、毒麦30重量份、假高粱30重量份、薇甘菊提取物30重量份、混合发酵菌8重量份;
所述混合发酵菌由以下原料混合得到:活菌数为4亿cfu/g的纤维素酶5重量份、活菌数为20亿cfu/g的乳杆菌8重量份、活菌数为6亿cfu/g的双歧杆菌3重量份、活菌数为10亿cfu/g的胶质芽胞杆菌5重量份;
所述防病液由以下原料制备得到:侧金盏花提取物80mg/l、猪殃殃提取80mg/l、秦皮提取物90mg/l、茵陈提取物110mg/l、大红袍提取物100mg/l、连翘提取物90mg/l、鱼腥草提取物75mg/l、大黄提取物75mg/l;
(5)成鱼打捞:在放养第二年后,将鱼塘的水放至1米深后进行打捞买卖。
上述的发酵料是由以下方法制备得到的:
第一步,将新鲜的薇甘菊全株清洗干净,加入4倍体积的水搅碎打浆8分钟装入锥形瓶中,接着加入0.15%(w/v)的碳酸氢钠溶液调节pH至5.5得到混合浆液,再加入浆液2.5%体积的由5重量份木瓜蛋白酶、3重量份菠萝蛋白酶、3重量份无花果蛋白酶、2重量份枯草杆菌蛋白酶组成混合蛋白酶于锥形瓶中60℃下进行以速率为100r/min摇床酶解25分钟,过100目筛后,采用离心机进行转速为2000r/min的离心5分钟即可得到薇甘菊提取物;
第二步,将新鲜的假高粱清洗干净后加入密封高压蒸汽锅,然后通入400℃的蒸汽进行蒸煮6分钟,接着将凉至常温、自然通风晾干水、加入烘干机39℃进行烘干至含水率18%即可;
第三步,将毒麦、象草粉碎后与第一、二步处理后得到的材料,接着加入混合发酵菌进行建堆发酵7天后即可,发酵期间控制发酵堆的中心位置不大于55℃。
所述防病液中,侧金盏花提取物是由以下方法制备得到的:将侧金盏花洗净粉碎,加入55%(v/v)乙醇溶液于55℃下进行加热回流提取15分钟,取提取液减压浓缩直至无乙醇味,接着加入7倍体积的醋酸溶液调节pH至5,于55℃下,110赫兹高压脉冲电场脉冲处理2.5×10-6S,提取25分钟,得到粗提液,接着使用乙酸乙酯进行分层萃取,取乙酸乙酯部减压浓缩,喷雾干燥即可得到侧金盏花提取物,提取物中主含有总香豆素94.12mg/g;
所述猪殃殃提取物是由以下方法制备得到的:将猪殃殃洗净后加入适量的硅藻土进行研钵研磨成浆,接着加入60%(v/v)乙醇溶液于45℃下进行加热回流提取7分钟,过滤取滤液,将滤液通过减压浓缩回收乙醇直至无醇味,接着加入稀盐酸调节pH至4.5后过滤取上清液,接着加入纤维素酶于48℃下水浴酶解25分钟,接着加入氢氧化钠调节pH至中性,过滤取沉淀即可得到猪殃殃提取物,提取物中主含有总生物碱95.64mg/g。
所述秦皮提取物是由以下方法制备得到的:将秦皮在压力4MPa下进行超微粉碎后过15目筛,加入15倍水回流提取于55℃下提取25分钟得到提取液,然后加入提取液体积1.3倍的石油醚进行萃取,取石油醚部接着用水浴蒸馏回收石油醚,接着加入82%(v/v)乙醇溶液进行醇提1.5小时,接着用大孔树脂进行吸附分离洗脱,洗脱依次用体积浓度为20%、40%、60%、80%和90%的乙醇-水体系洗脱液进行梯度洗脱,每个梯度的乙醇-水溶液洗脱体积为5.5BV,洗脱流速为3.5BV/h,减压浓缩得到膏状物,干燥即可得到秦皮提取物,提取物中主含有内酯47.36mg/g、总苷98.48mg/g;
所述茵陈提取物是由以下方法制备得到的:将茵陈洗净后加入白油、硅藻土研磨成浆,然后加入82%(v/v)乙醇溶液回流提取3次,每次提取的温度为65℃、提取的时间为35分钟,合并3次提取的提取液,加入活性炭脱色后过滤去除活性炭,接着加水稀释后加入正丁醇振荡摇晃后静置7分钟,接着取正丁醇部分用硅胶柱色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱,在40:1洗脱部分,用丙酮进行5次重结晶得到茵陈提取物主含有滨蒿内酯20.37mg/g;所述茵陈:白油:硅藻土的重量比为2:0.06:0.2。
所述大红袍提取物是由以下方法制备得到的:将大红袍干燥在压力4MPa下进行超微粉碎后过80目筛,使用4倍体积、温度为110℃的水恒温浸泡大红袍茶粉8分钟得到汤茶,接着加入醋酸调节pH至2.5,使用70%(v/v)乙醇溶液回流提取取提取液,接着按照体积比为1:1的比例加入乙酸乙酯进行摇荡25分钟后静置萃取,将乙酸乙酯部分用硅胶柱色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱,在40:1洗脱部分,用丙酮进行5次重结晶得到大红袍提取物主含有茶多酚268.24mg/g;
所述连翘提取物是由以下方法制备得到的:将连翘粉碎后,加入82%(v/v)乙醇溶液在超声波辅助条件下,于85℃下进行回流提取35分钟,一共回流提取3次,合并3次提取液进行减压浓缩、低温蒸干得到原体积1.12倍的浸膏,即可得到连翘提取物主含有表儿茶素28.64mg/g。
所述鱼腥草提取物是由以下方法制备得到的:将鱼腥草加入15倍的水煎煮55分钟,过滤取滤液,减压蒸发浓缩至原体积1.03倍即可得到鱼腥草活性成分的鱼腥草提取物;
大黄提取物是由以下方法制备得到的:将大黄加入18倍的水煎煮55分钟,过滤取滤液,减压蒸发浓缩至原体积1.04倍即可得到大黄活性成分的大黄提取物。
实施例3:
一种富硒大头鱼的养殖方法,包括以下具体步骤:
(1)选址:选择交通方便、水源充足、水源干净无污染的地方建立鱼塘;
(2)建池:池塘深4米,四周使用石头铺平成池壁,使用高锰酸钾溶液对池壁进行消毒,暴晒4天后,铺一层厚6厘米的砂石于鱼塘底部,并种上水草,放水深3.5米;
(3)放养:选择健康无病害的鱼苗放养于鱼塘中,达到密度为450尾/亩;
(4)鱼塘管理:包括饲料投放、疾病预防、养殖密度控制;
1)饲料投放:当鱼苗放养前两个月,投放饲料A 0.25千克/尾,每日三次;两个月后投放饲料A 0.4千克/尾,每日三次;当鱼放养第八个月后开始投喂饲料A 0.7千克/尾,每日三次;在第二年捕鱼采卖的前3天开始,投喂饲料A 0.35千克/尾,每日三次;
2)疾病预防:当鱼苗放养前投放防病液对鱼苗进行试养4天后,再投放鱼塘中饲养;在放养期间间隔3个月后投放防病液于鱼塘内,投放的量为2.0毫升/立方米;
3)养殖密度控制:放养期间随着大头鱼体重的增加,控制鱼的养殖密度为380尾/亩;
4)水质控制:定期进行鱼塘的水质抽检,控制鱼塘的含氧量为7毫克/升,鱼塘控制1米深处的水温为24℃;
所述饲料A由以下重量百分数原料制备得到:膨化玉米粉13%、豆粕10%、黄粉虫9%、发酵料26%、富硒大豆12%、矿质元素8%、甜高粱7%、酒糟12%、复合维生素3%(3重量份叶酸、3重量份维生素A、2重量份维生素B1、2重量份维生素B2、3重量份维生素B6、3重量份维生素B12、4重量份维生素C、2重量份维生素D3、2重量份维生素E、1.5重量份烟酰胺、1.5重量份泛酸钙);
所述发酵料由以下原料制备得到:象草25重量份、毒麦28重量份、假高粱27重量份、薇甘菊提取物26重量份、混合发酵菌6重量份;
所述混合发酵菌由以下原料混合得到:活菌数为3亿cfu/g的纤维素酶4重量份、活菌数为14亿cfu/g的乳杆菌6重量份、活菌数为5亿cfu/g的双歧杆菌2重量份、活菌数为7亿cfu/g的胶质芽胞杆菌4重量份;
所述防病液由以下原料制备得到:侧金盏花提取物70mg/l、猪殃殃提取60mg/l、秦皮提取物70mg/l、茵陈提取物90mg/l、大红袍提取物90mg/l、连翘提取物80mg/l、鱼腥草提取物55mg/l、大黄提取物60mg/l;
(5)成鱼打捞:在放养第二年后,将鱼塘的水放至1米深后进行打捞买卖。
上述的发酵料是由以下方法制备得到的:
第一步,将新鲜的薇甘菊全株清洗干净,加入5倍体积的水搅碎打浆10分钟装入锥形瓶中,接着加入0.2%(w/v)的碳酸氢钠溶液调节pH至6得到混合浆液,再加入浆液3%体积的由8重量份木瓜蛋白酶、5重量份菠萝蛋白酶、5重量份无花果蛋白酶、3重量份枯草杆菌蛋白酶组成混合蛋白酶于锥形瓶中62℃下进行以速率为120r/min摇床酶解35分钟,过100目筛后,采用离心机进行转速为1800r/min的离心5分钟即可得到薇甘菊提取物;
第二步,将新鲜的假高粱清洗干净后加入密封高压蒸汽锅,然后通入500℃的蒸汽进行蒸煮10分钟,接着将凉至常温、自然通风晾干水、加入烘干机40℃进行烘干至含水率20%即可;
第三步,将毒麦、象草粉碎后与第一、二步处理后得到的材料,接着加入混合发酵菌进行建堆发酵8天后即可,发酵期间控制发酵堆的中心位置不大于55℃。
所述防病液中,侧金盏花提取物是由以下方法制备得到的:将侧金盏花洗净粉碎,加入65%(v/v)乙醇溶液于60℃下进行加热回流提取20分钟,取提取液减压浓缩直至无乙醇味,接着加入10倍体积的醋酸溶液调节pH至5.5,于55℃下,120赫兹高压脉冲电场脉冲处理3×10-6S,提取30分钟,得到粗提液,接着使用乙酸乙酯进行分层萃取,取乙酸乙酯部减压浓缩,喷雾干燥即可得到侧金盏花提取物,提取物中主含有总香豆素72.40mg/g;
所述猪殃殃提取物是由以下方法制备得到的:将猪殃殃洗净后加入适量的硅藻土进行研钵研磨成浆,接着加入65%(v/v)乙醇溶液于50℃下进行加热回流提取10分钟,过滤取滤液,将滤液通过减压浓缩回收乙醇直至无醇味,接着加入稀盐酸调节pH至5.0后过滤取上清液,接着加入纤维素酶于50℃下水浴酶解30分钟,接着加入氢氧化钠调节pH至中性,过滤取沉淀即可得到猪殃殃提取物,提取物中主含有总生物碱71.24mg/g。
所述秦皮提取物是由以下方法制备得到的:将秦皮在压力5MPa下进行超微粉碎后过20目筛,加入20倍水回流提取于60℃下提取30分钟得到提取液,然后加入提取液体积1.5倍的石油醚进行萃取,取石油醚部接着用水浴蒸馏回收石油醚,接着加入85%(v/v)乙醇溶液进行醇提2小时,接着用大孔树脂进行吸附分离洗脱,洗脱依次用体积浓度为20%、40%、60%、80%和90%的乙醇-水体系洗脱液进行梯度洗脱,每个梯度的乙醇-水溶液洗脱体积为6BV,洗脱流速为4BV/h,减压浓缩得到膏状物,干燥即可得到秦皮提取物,提取物中主含有内酯31.54mg/g、总苷80.41mg/g;
所述茵陈提取物是由以下方法制备得到的:将茵陈洗净后加入白油、硅藻土研磨成浆,然后加入85%(v/v)乙醇溶液回流提取3次,每次提取的温度为℃、提取的时间为40分钟,合并3次提取的提取液,加入活性炭脱色后过滤去除活性炭,接着加水稀释后加入正丁醇振荡摇晃后静置10分钟,接着取正丁醇部分用硅胶柱色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱,在40:1洗脱部分,用丙酮进行5次重结晶得到茵陈提取物主含有滨蒿内酯17.43mg/g;所述茵陈:白油:硅藻土的重量比为3:0.07:0.2。
所述大红袍提取物是由以下方法制备得到的:将大红袍干燥在压力5MPa下进行超微粉碎后过100目筛,使用5倍体积、温度为120℃的水恒温浸泡大红袍茶粉10分钟得到汤茶,接着加入醋酸调节pH至3.0,使用75%(v/v)乙醇溶液回流提取取提取液,接着按照体积比为1:1的比例加入乙酸乙酯进行摇荡30分钟后静置萃取,将乙酸乙酯部分用硅胶柱色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱,在40:1洗脱部分,用丙酮进行5次重结晶得到大红袍提取物主含有茶多酚237.19mg/g;
所述连翘提取物是由以下方法制备得到的:将连翘粉碎后,加入85%(v/v)乙醇溶液在超声波辅助条件下,于90℃下进行回流提取40分钟,一共回流提取3次,合并3次提取液进行减压浓缩、低温蒸干得到原体积1.12倍的浸膏,即可得到连翘提取物主含有表儿茶素25.17mg/g。
所述鱼腥草提取物是由以下方法制备得到的:将鱼腥草加入20倍的水煎煮60分钟,过滤取滤液,减压蒸发浓缩至原体积1.05倍即可得到鱼腥草活性成分的鱼腥草提取物;
大黄提取物是由以下方法制备得到的:将大黄加入20倍的水煎煮60分钟,过滤取滤液,减压蒸发浓缩至原体积1.05倍即可得到大黄活性成分的大黄提取物。
试验一:
对比例1:发酵料的制备方法:第一步,与实施例1相同;第二步,将毒麦、假高粱、象草粉碎后与第一步处理后得到的材料,接着加入混合发酵菌进行建堆发酵5天后即可,发酵期间控制发酵堆的中心位置不大于55℃。
对比例2:发酵料的制备方法:第一步,将新鲜的薇甘菊全株清洗干净进行水提、浓缩得到薇甘菊提取物;第二步,与实施例1相同;第三步,将毒麦、象草粉碎后与第一、二步处理后得到的材料接着加入混合发酵菌进行建堆发酵5天后即可,发酵期间控制发酵堆的中心位置不大于55℃。
对比例3:发酵料的制备方法:第一步,与实施例1相同;第二步,与实施例1相同;第三步,将毒麦、象草粉碎后与第一、二步处理后得到的材料进行建堆发酵5天后即可,发酵期间控制发酵堆的中心位置不大于55℃。
对比例4:发酵料的制备方法基本与实施例1相同,不同点是混合发酵菌由以下原料混合得到:纤维素酶、乳杆菌,活菌数和重量份数相同;
对比例5:发酵料的制备方法基本与实施例1相同,不同点是混合发酵菌由以下原料混合得到:纤维素酶、双歧杆菌,活菌数和重量份数相同;
对比例6:发酵料的制备方法基本与实施例1相同,不同点是混合发酵菌由以下原料混合得到:纤维素酶、胶质芽胞杆菌,活菌数和重量份数相同;
对比例7:发酵料的制备方法基本与实施例1相同,不同点是混合发酵菌由以下原料混合得到:乳杆菌、双歧杆菌、胶质芽胞杆菌,活菌数和重量份数相同;
对比例8:发酵料的制备方法基本与实施例1相同,不同点是混合发酵菌由以下原料混合得到:纤维素酶、乳杆菌、胶质芽胞杆菌,活菌数和重量份数相同;
对比例9:发酵料的制备方法基本与实施例1相同,不同点是混合发酵菌由以下原料混合得到:纤维素酶、双歧杆菌、胶质芽胞杆菌,活菌数和重量份数相同;
对比例10:发酵料的制备方法基本与实施例1相同,不同点是混合发酵菌由以下原料混合得到:纤维素酶、乳杆菌、双歧杆菌,活菌数和重量份数相同;
将实施例1-3、对照组1-10方式处理后的发酵料进行CN-残余浓度检测,根据发酵处理前后发酵料的含氰量计算降氰率,其中,降氰率%=(反应前发酵料中含氰浓度-反应后发酵料中含氰浓度)/反应前发酵料中含氰浓度,且每次检测均做三次平行检测,取平均值。
表1
由上表可知,对比例1与实施例1相比降氰率降低了26.2%,说明对假高粱进行特殊的处理后能降低在发酵后期产生氰化物的含量,即为假高粱本身的毒素将在发酵前能得到清除,这与试验设想前的预期相符合。对比例2与实施例1相比较降氰率降低了19%,证明了经过特殊提取的薇甘菊提取物中含有动力素(糖、蛋白质)的含量更高,在发酵期提供发酵菌一个良好的生长环境,能充分发挥菌群的分解能力;对比例3与实施例1相比较降氰率降低了了50%多,证明混合发酵菌之间具有很好的分解能力,接着为了验证这观点,做了对比例4-10的对比试验,对比例4-6的单一发酵菌液相比实施例1-3降氰能力降低了15%左右;、对比例8-10的量量混合菌液与实施例1-3相比较降氰能力降低了10%左右;由此可见采用本申请的组合发酵菌具有相辅相成相互协同降氰的能力,促使降氰能力大大提高。
试验二:
采用本发明实施例1制备的防病液对大头鱼的急性毒理学试验观察
试验在东兰县安篓东二养殖场临床实验室中进行。试验大头鱼购自河池市金城江老姐批发市场,规格10g左右,购回后暂养于水族箱中。试验水温25.0±1℃左右。水体充气,投喂少量饵料。试验维持5-7天。试验采用浸泡法,共设4个浓度梯度药物组(0.5ml/m3、1.0ml/m3、2.0ml/m3、5.0ml/m3)及1个不加药物的空白对照组,每组设3个重复,每个水族箱(0.75m×0.55m×0.6m=0.25m3)放大头鱼20尾,具体见表1。试验开始后,连续观察,记录大头鱼异常及死亡情况。
1对大头鱼的急性毒理学试验分组
表2不同药物浓度下大头鱼死亡情况
结果见表2。对照组及0.05ml/m3药物浓度组,没有大头鱼发现死亡,且活动正常0.10ml/m3组,96h后平均死亡率达到8.33%,0.20ml/m3组,累计平均死亡率26.67%,0.50ml/m3组,累计平均死亡率70.00%。
用Bliss法计算本发明实施例1对大头鱼半数致死剂量为LD50=0.34745ml/m3,其回归方程为y(Probit)=6.438+3.1321Log(D),具体见表3。按特伦堡公式(安全浓度=48hLC50*0.3/(24hLC/48hLC50))计算本申请的药液杀虫剂对大头鱼的安全浓度为0.0955ml/m3,说明本发明实施例1对大头鱼的安全性较高。
表3Bliss法计算本发明实施例1对大头鱼半数致死量
试验三:
1.1试验鱼
严重感染指环虫的大头鱼(重量300±20g)购自河池市金城江老街。并按照1:5左右的比例与未感染寄生虫的大头鱼混养感染,感染15-20天后,随机选取110尾鱼,取全鳃镜检观察统计鳃上指环虫数量,试验鱼指环虫感染率为100%,每尾鱼平均感染指环虫约50个,随机分配为11组,每组10尾鱼一个水箱,一个水箱容积为10平方米,装8平米的水。
实验组1-3分别使用实施例1-3制备得到的防病液投入,投放的量分别为0.5、2.0、5.0毫升/立方米;
对照组1-8分别使用仅仅单一含有侧金盏花提取物、猪殃殃提取、秦皮提取物、茵陈提取物、大红袍提取物、连翘提取物、鱼腥草提取物、大黄提取物的防病物质投放入水箱,投放的量分别为2.0毫升/立方米。
于48h时取大头鱼全鳃制片、镜检,统计每尾大头鱼在鳃部指环虫存活数量,计算平均杀虫率,并同时进行对照试验。
杀虫率(%)=(对照组的指环虫平均存活数量-试验组的指环虫平均存活数量)/对照组的指环虫平均存活数量×100%
鱼平均死亡率(%)=(投放的鱼数量-镜检时的鱼存活数量)/投放的鱼数量×100%样品最高有效浓度,即最高杀虫率所对应的溶剂提取物浓度。
表4各个组药剂对指环虫的防治效果表
试验结果表明:采用本申请的防病药液对大头鱼的指环虫的疫病具有优异的防治效果,相比较对照组1-8单一使用的提取物相比较不仅具有更高的防治指环虫的效果,且杀虫效果更佳持久,证明了本申请的配方具有相互辅助协同的作用。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (6)
1.一种富硒大头鱼的养殖方法,其特征在于:包括以下具体步骤:
(1)选址:选择交通方便、水源充足、水源干净无污染的地方建立鱼塘;
(2)建池:池塘深3-5米,四周使用石头铺平成池壁,使用高锰酸钾溶液对池壁进行消毒,暴晒2-5天后,铺一层厚5-8厘米的砂石于鱼塘底部,并种上水草,放水深3-4米;
(3)放养:选择健康无病害的鱼苗放养于鱼塘中,达到密度为400-500尾/亩;
(4)鱼塘管理:包括饲料投放、疾病预防、养殖密度控制;
1)饲料投放:当鱼苗放养前两个月,投放饲料A 0.2-0.3千克/尾,每日三次;两个月后投放饲料A 0.3-0.5千克/尾,每日三次;当鱼放养第八个月后开始投喂饲料A 0.5-1.0千克/尾,每日三次;在第二年捕鱼采卖的前3天开始,投喂饲料A 0.3-0.4千克/尾,每日三次;
2)疾病预防:当鱼苗放养前投放防病液对鱼苗进行试养3-5天后,再投放鱼塘中饲养;在放养期间间隔3-4个月后投放防病液于鱼塘内,投放的量为0.5-5.0毫升/立方米;
3)养殖密度控制:放养期间随着大头鱼体重的增加,控制鱼的养殖密度为350-400尾/亩;
4)水质控制:定期进行鱼塘的水质抽检,控制鱼塘的含氧量为5-8毫克/升,鱼塘控制1米深处的水温为22-25℃;
所述饲料A由以下重量百分数原料制备得到:膨化玉米粉10-15%、豆粕8-15%、黄粉虫6-12%、发酵料20-30%、富硒大豆5-15%、矿质元素5-10%、甜高粱5-10%、酒糟10-15%、复合维生素3-8%;
所述发酵料由以下原料制备得到:象草20-30重量份、毒麦20-30重量份、假高粱20-30重量份、薇甘菊提取物20-30重量份、混合发酵菌5-8重量份;
所述混合发酵菌由以下原料混合得到:纤维素酶2-5重量份、乳杆菌3-8重量份、双歧杆菌1-3重量份、胶质芽胞杆菌1-5重量份;
所述防病液由以下原料制备得到:侧金盏花提取物50-80mg/l、猪殃殃提取30-80mg/l、秦皮提取物50-90mg/l、茵陈提取物80-110mg/l、大红袍提取物75-100mg/l、连翘提取物70-90mg/l、鱼腥草提取物45-75mg/l、大黄提取物45-75mg/l;
(5)成鱼打捞:在放养第二年后,将鱼塘的水放至1米深后进行打捞买卖。
2.如权利要求1所述的富硒大头鱼的养殖方法,其特征在于:所述复合维生素包括1-5重量份叶酸、2-3重量份维生素A、1-3重量份维生素B1、1-3重量份维生素B2、2-5重量份维生素B6、1-5重量份维生素B12、3-5重量份维生素C、1-3重量份维生素D3、1-3重量份维生素E、1-2重量份烟酰胺、1-2重量份泛酸钙。
3.如权利要求1所述的富硒大头鱼的养殖方法,其特征在于:所述纤维素酶的活菌数为2-4亿cfu/g、乳杆菌的活菌数为10-20亿cfu/g、双歧杆菌的活菌数为3-6亿cfu/g、胶质芽胞杆菌的活菌数为5-10亿cfu/g。
4.如权利要求1所述的富硒大头鱼的养殖方法,其特征在于:所述发酵料是由以下方法制备得到的:
第一步,将新鲜的薇甘菊全株清洗干净,加入2-5倍体积的水搅碎打浆5-10分钟装入锥形瓶中,接着加入0.1-0.2%(w/v)的碳酸氢钠溶液调节pH至5-6得到混合浆液,再加入浆液2-3%体积的混合蛋白酶于锥形瓶中57-62℃下进行摇床酶解20-35分钟,过100目筛后,采用离心机进行离心2-5分钟即可得到薇甘菊提取物;
第二步,将新鲜的假高粱清洗干净后加入密封高压蒸汽锅,然后通入300-500℃的蒸汽进行蒸煮5-10分钟,接着将凉至常温、自然通风晾干水、加入烘干机38-40℃进行烘干至含水率15-20%即可;
第三步,将毒麦、象草粉碎后与第一、二步处理后得到的材料,接着加入混合发酵菌进行建堆发酵5-8天后即可,发酵期间控制发酵堆的中心位置不大于55℃。
5.如权利要求4所述的富硒大头鱼的养殖方法,其特征在于:所述混合蛋白酶是由3-8重量份木瓜蛋白酶、2-5重量份菠萝蛋白酶、1-5重量份无花果蛋白酶、1-3重量份枯草杆菌蛋白酶组成。
6.如权利要求4所述的富硒大头鱼的养殖方法,其特征在于:所述摇床的速率为100-150r/min,所述离心机的离心转速为1500-2000r/min。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20180731 |
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