CN103690574A - 一种含有茯苓增强免疫力的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有茯苓增强免疫力的中药组合物及其制备方法,该组合物主要由茯苓提取物和破壁灵芝孢子粉混合制成,具有增强免疫力的保健功效,疗效比单味药材有显著性提高,并且本发明组方服用量比单方使用明显降低,组合使用还能够减少单味药材的毒副作用。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及一种含有茯苓增强免疫力的中药组合物及其制备方法。
背景技术
灵芝孢子粉为灵芝成熟时从菌盖弹射的孢子,为灵芝的生殖细胞,具有灵芝的全部遗传活性物质。灵芝孢子经破壁加工后,开发成新的保健药材,它浓缩了灵芝的精华,禀天地生云之气,药效及临床应用效果更有明显提高。
灵芝孢子含有蛋白质、氨基酸类、三萜类、多糖类、腺苷类、甾醇类、生物碱类、脂肪酸类等化学物质。现代药理研究及临床试验证实,灵芝孢子粉比灵芝具有更强更全面的作用,灵芝孢子具有抗染色体突变,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖、杀伤癌细胞,拮抗环磷酰胺引起的小鼠耐力下降、血红蛋白与白细胞下降、巨噬细胞吞噬力下降和SGPT升高,抑制60Co照射引起的白细胞减少不良反应、激活并提高特异性杀伤细胞(CTL)和非特异性杀伤细胞(NK、LAK)的抗肿瘤作用、增强单核-巨噬细胞吞噬功能,并具有抗脂质过氧化反应等作用。以上总总,显示出灵芝孢子在调节免疫功能等方面的良好应用前景。从而也为“疗虚劳、益气血”,提供了新的客观依据。
茯苓P oria cocos(Schw.)W olf为常用中药,为多孔菌科卧孔菌属真菌茯苓的干燥菌核,多依附松树根生长.傍松根而生的为茯苓(别名:玉灵、茯灵、万灵桂、茯菟)。始载于《本草经》列为商品,它的菌核为球形、长圆形、卵圆形或不规则团块,茯苓主要分布在我国云南、贵州、湖北、安徽、福建、广东、广西等地。
我国食用茯苓的历史已有两千多年,《神农本草经》将茯苓列为“上品”称其“久服安魂养神,不饥延年”。茯苓性甘、淡、平.入心、脾、肾经。药理实验表明茯苓具有渗湿利尿、合胃健脾、宁心安神、抑菌、增强机体抗病能力及降低血糖的功效。茯苓治病范围相当广泛,在中医及人民生活中有着广泛的使用价值.有统计表明:在158个中医处方中,有茯苓的就占80%.茯苓与黄芩、灵芝、丹参、远志、黄精一起称为“云南六大中药”,同时也是国家卫生部、国家中药管理局颁布的“既是食品又是药品的品种名单”的一种。
茯苓中的茯苓多糖具有增强免疫功能的作用,它有抗胸腺萎缩、抗脾脏增大和抑瘤生长的作用。既可增强细胞免疫,又可增强体液免疫。有研究表明:羧甲基茯苓多糖还是免疫调节、保肝降酶、间接抗病毒、诱生和抗诱生白细胞调节素等多种生理活性,无不良毒副作用;茯苓多糖确有针对性地保护免疫器官、增加细胞免疫的功能。从而改善机体状况,增强抗感染能力;茯苓多糖在一定程度上加快造血机能的恢复,并可改善老年人免疫功能,增强体质,保护骨髓,减轻和预防化疗的毒副作用,达到扶正固本、健脾补中的作用。
至今为止,寻找一种能有效增强人体免疫力的天然产品组方仍是科学研究的热点。
发明内容
发明人经过反复探索并通过药效实验验证,终于找到以破壁灵芝孢子粉和茯苓提取物为主要原料,能有效增强人体免疫力的天然产品组方,该组方增强免疫力的功效远远强于单方使用,并且该功效非简单地二者功效之和简单叠加。
本发明的目的是通过以下方式实现的:
一种含有茯苓增强免疫力的中药组合物,该组合物主要由下列重量份的原料药制成:茯苓提取物1~2重量份,破壁灵芝孢子粉1~2重量份(破壁率在90%以上)。
该组合物优选主要由下列重量份的原料药制成:茯苓提取物1重量份,破壁灵芝孢子粉1重量份。
所述的茯苓提取物是通过以下方法制备得到的:将茯苓水提后得到的滤液依次进行微滤、超滤、浓缩得到茯苓提取物。
所述的微滤采用陶瓷膜分离,操作条件是:压力为0.25~0.45MPa,操作温度为36℃。微滤优选采用孔径0.2μm的陶瓷微滤。
所述的超滤采用采用聚砜膜分离,操作条件是:压强范围为1.05Mpa~1.25Mpa,操作温度为20℃~45℃,浓缩倍数为3~6倍。超滤采用截留分子量值为5万的聚砜膜。
所述的水提条件为加入药材15-25倍重量的水,在25℃条件下超声提取,每次30-40分钟,提取2-3次.
本发明将破壁灵芝孢子粉和茯苓提取物混合均匀加入药学上允许的辅料制成药学规定的剂型。所述的剂型优选为胶囊。
本发明中药组合物在制备增强免疫力的的保健食品或药物中的应用。所述的保健食品为补充膳食营养的保健食品。
本发明对茯苓提取工艺进行了优化,通过正交化工艺对提取温度、提取料水比例、提取次数等均作出严格规定。对粗提取物进行采用孔径0.2μm的陶瓷微滤膜进行膜过滤分离后,再采用截留分子量值为5万的聚砜膜分离浓缩,获得了分子量为10000-50000的小分子活性多糖成分,拦截了淀粉、树胶、果胶、粘液质、蛋白质等无效的可溶性大分子,最终做到最大限度地保留了茯苓药材中的最精华成分。而且全过程都避免了长时间高温处理,减少了对功效成分的破坏。采用上述工艺,大大提升了茯苓提取物中有效成分的含量。
本发明使用的破壁灵芝孢子粉和茯苓提取物的物化指标如下表所示:
表1茯苓提取物理化指标
项目 | 指标 |
多糖(以葡萄糖计),% ≥ | 15.0 |
水分,% ≤ | 10.0 |
灰分,% ≤ | 10.0 |
菌落总数,CFU/g ≤ | 1000 |
大肠菌群,MPN/100g ≤ | 40 |
表2破壁灵芝孢子粉理化指标
项目 | 指标 |
多糖(以葡萄糖计),% ≥ | 1.0 |
水分,% ≤ | 10.0 |
灰分,% ≤ | 10.0 |
以下通过药效实验进一步说明本发明的效果:
样品:按照实施例1方法制备得到的胶囊(以下简称茯灵胶囊),规格:0.35g/粒,性状为棕色粉末。
试验动物及分组:选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的清洁级BI/F1代健康雄性小鼠。
小鼠按体重随机分为3个大组,其中I组小鼠50只,分为5个剂量组,每组10只,进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化;Ⅱ组小鼠50只,分为5个剂量组,每组10只,进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验;Ⅲ组小鼠50只,分为5个剂量组,每组10只,进行NK细胞活性试验。
剂量:茯灵胶囊的人体推荐剂量2.0g/人/日(胶囊内容物、以60kg体重计),设1.00g/kg·bw孢子粉、1.00g/kg·bw茯苓提取物、1.00g/kg·bw茯灵胶囊和0.8g/kg·bw茯灵胶囊四个剂量组,另设1g/kg·bw组以食用油作为阴性受试样品。
实验方法:
1、ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验——MTT法:
各剂量组动物连续灌胃1个月后,颈椎脱臼法处死动物,无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中,研磨脾脏,制成单个细胞悬液,经200目筛网过滤,用Hank’s液洗2次,每次离心10min(1000r/min),然后将细胞悬浮于1mL RPMI1640完全培养液中,台酚蓝染色计数活细胞数(均在95%以上),用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为3×106个/mL。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1mL,一孔加75μL ConA液,另一孔作为对照,置37℃、5%CO2培养箱中培养72h。培养结束前4h,每孔轻轻吸去上清液0.7mL,加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液,同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1mL酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解。将溶解液移入96孔培养板中,用酶标仪在波长570nm下测定各样品管光密度值。
用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力,受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值,可判定该项实验结果阳性。
2、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验——半体内法:
各剂量组动物连续灌胃1个月,制备20%(v/v)的鸡红细胞悬液,每只鼠腹腔注射1mL,间隔30min,颈椎脱臼处死小鼠,将其仰位固定于鼠板上,正中剪开腹壁皮肤,经腹腔注入生理盐水2mL,转动鼠板1min,然后吸出腹腔洗液1mL,平均分滴于2片载玻片上,放入垫有湿纱布的搪瓷盒内,移置37℃恒温培养箱孵育30min,然后,于生理盐水中漂洗,晾干,以1:1丙酮甲醇溶液固定,4%(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色3min,再用蒸馏水漂洗晾干,封片,光镜下观察。
受试样品组的吞噬百分率或吞噬指数与对照组比较,差异均有显著性,方可判定该项实验结果阳性。
3、NK细胞活性测定——乳酸脱氢酶测定法:
各剂量组动物连续灌胃1个月,颈椎脱臼处死小鼠,无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中,研磨脾脏,制成单细胞悬液,经200目筛网过滤,用Hank’s液洗2次,每次离心10min(1000r/min),弃上清将细胞浆弹起,加入0.5mL灭菌水20秒,裂解红细胞后再加入0.5mL2倍Hank’s液及8mL Hank’s液,离心10min(1000r/min),用含10%小牛血清RPMI1640完全培养液重悬,1%冰乙酸稀释后计数,台酚蓝染色计数活细胞数(均在95%以上),用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL。
试验前24h将靶细胞(YAC-1细胞)传代培养,应用前以Hank’s液洗3次,用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL。取YAC-1细胞和脾细胞各100μL(效靶比50:1)加入U型96孔培养板中,YAC-1细胞自然释放孔加YAC-1细胞和培养液各100μL,YAC-1细胞最大释放孔加YAC-1细胞和1%NP40各100μL,上述各项均设三个平行孔,于37℃、5%CO2培养箱中培养4h,然后将96孔培养板以1500r/min离心5min,每孔吸取上清液100μL置平底96孔培养板中,同时加入LDH基质液100μL,反应10min,每孔加入1mol/L的HCl30μL,在酶标仪490nm处测定光密度值。
受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性,方可判定该项实验结果阳性。
结果判定:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性,可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。
结果
1、茯灵胶囊对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响
经口给予小鼠相同剂量的灵芝孢子粉、茯灵提取物和茯灵胶囊粉末1个月后,加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值经方差齐性检验,不满足方差齐性要求,用秩和检验进行统计处理。由表3结果可见,茯灵胶囊粉末组加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值显著高于阴性及各组分实验组。
2、茯灵胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数的影响
经口给予小鼠相同剂量的灵芝孢子粉、茯灵提取物和茯灵胶囊粉末1个月后,吞噬指数、吞噬百分率经sin-1P1/2(P为吞噬百分率,用小数表示)转化后经方差齐性检验,满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表4结果可见,茯灵胶囊组吞噬率及吞噬指数显著高于阴性及各组分实验组。
3、茯灵胶囊对小鼠NK细胞活性的影响
经口给予小鼠相同剂量的灵芝孢子粉、茯灵提取物和茯灵胶囊粉末1个月后,NK细胞活性经sin-1P1/2(P为NK细胞活性,用小数表示)转化后进行方差齐性检验,不满足方差齐性要求,用秩和检验进行统计处理。由表5结果可见茯灵胶囊粉末组NK细胞活性显著高于阴性及各组分实验组。
结论:经口给予小鼠相同剂量的灵芝孢子粉、茯灵提取物和茯灵胶囊粉末1个月后,结果显示:
细胞免疫功能:ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验中茯灵胶囊粉末组加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值显著高于阴性及各组分实验组;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬实验中茯灵胶囊组吞噬率及吞噬指数显著高于阴性及各组分实验组。;NK细胞活性:小鼠NK细胞活性测定实验中茯灵胶囊粉末组NK细胞活性显著高于阴性及各组分实验组。
在上述实验过程中,使用本发明组合物的动物饮水摄食正常,外观无异常。
与现有技术比较本发明的有益效果:本发明药物组合物选用一定配比的灵芝孢子粉、茯灵提取物,能增强小鼠淋巴细胞增殖能力;增强小鼠吞噬细胞吞噬鸡红细胞及碳廓清的能力;提高NK细胞活性。因此,本发明组合物具有增强免疫力的功能,充分发挥三者的药效,优势互补,组方的药效显著优于单味药材,并且本发明组方服用量比单方使用明显降低。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明进行进一步阐述。(每重量份为1kg)
实施例1
茯苓提取物1重量份,破壁灵芝孢子粉1重量份(破壁率在90%以上)。
制备方法:将破壁灵芝孢子粉和茯苓提取物混合均匀加入胶囊剂常规辅料按照常规方法制成胶囊制剂。
茯苓提取物是通过以下方法制备得到的:将茯苓水提后得到的滤液依次进行微滤、超滤、浓缩得到茯苓提取物。水提条件为加入药材20倍重量的水,在25℃条件下超声提取,每次30分钟,提取2次。微滤采用孔径0.2μm的陶瓷微滤膜进行膜分离,操作条件是:压力为0.30~0.35MPa,操作温度为36℃。超滤采用截留分子量值为5万的聚砜膜分离,操作条件是:压强范围为1.05Mpa~1.25Mpa,操作温度为35℃,浓缩倍数为4倍。
实施例2
茯苓提取物1重量份,破壁灵芝孢子粉2重量份(破壁率在90%以上)。
制备方法:将破壁灵芝孢子粉和茯苓提取物混合均匀加入胶囊剂常规辅料按照常规方法制成胶囊制剂。
茯苓提取物是通过以下方法制备得到的:将茯苓水提后得到的滤液依次进行微滤、超滤、浓缩得到茯苓提取物。水提条件为加入药材15倍重量的水,在25℃条件下超声提取3次,每次40分钟。微滤采用孔径0.2μm的陶瓷微滤膜进行膜分离,操作条件是:压力为0.25~0.30MPa,操作温度为36℃。超滤采用截留分子量值为5万的聚砜膜分离,操作条件是:压强范围为1.05Mpa~1.25Mpa,操作温度为40℃~45℃,浓缩倍数为5倍。
实施例3
茯苓提取物2重量份,破壁灵芝孢子粉1重量份(破壁率在90%以上)。
制备方法:将破壁灵芝孢子粉和茯苓提取物混合均匀加入胶囊剂常规辅料按照常规方法制成胶囊制剂。
茯苓提取物是通过以下方法制备得到的:将茯苓水提后得到的滤液依次进行微滤、超滤、浓缩得到茯苓提取物。水提条件为加入药材20倍重量的水,在25℃条件下超声提取,30分钟,提取2次。微滤采用孔径0.2μm的陶瓷微滤膜进行膜分离,操作条件是:压力为0.40~0.45MPa,操作温度为36℃。超滤采用截留分子量值为5万的聚砜膜分离,操作条件是:压强范围为1.05Mpa~1.25Mpa,操作温度为20℃~25℃,浓缩倍数为4倍。
Claims (10)
1.一种含有茯苓增强免疫力的中药组合物,其特征是该组合物主要由下列重量份的原料药制成:茯苓提取物1~2重量份,破壁灵芝孢子粉1~2重量份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征是该组合物主要由下列重量份的原料药制成:茯苓提取物1重量份,破壁灵芝孢子粉1重量份。
3.根据权利要求1或2所述的中药组合物,其特征是所述的茯苓提取物是通过以下方法制备得到的:将茯苓水提后得到的滤液依次进行微滤、超滤、浓缩得到茯苓提取物。
4.根据权利要求3所述的中药组合物,其特征是所述的微滤采用陶瓷膜分离,操作条件是:压力为0.25~0.45MPa,操作温度为36℃。
5.根据权利要求3所述的中药组合物,其特征是所述的超滤采用聚砜膜分离,操作条件是:压强范围为1.05Mpa~1.25Mpa,操作温度为20℃~45℃,浓缩倍数为3~6倍。
6.根据权利要求3所述的中药组合物,其特征是所述的水提条件为加入药材15-25倍重量的水,在25℃条件下超声提取,每次30-40分钟,提取2-3次。
7.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征是将破壁灵芝孢子粉和茯苓提取物混合均匀加入药学上允许的辅料制成药学规定的剂型。
8.根据权利要求7所述的中药组合物,其特征是所述的剂型为胶囊。
9.权利要求1或2所述的中药组合物在制备增强免疫力的的保健食品或药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于所述的保健食品为补充膳食营养的保健食品。
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140402 |