CN101757059A - 从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种以植物全草为原料,产品无毒副作用、安全性高、成本廉价、可产业化生产的从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法,是取干燥多枝柽柳茎叶或干燥花花柴茎叶或干燥琵琶柴茎叶,剪碎研磨后放入提取器中,加入体积与干燥多枝柽柳茎叶或干燥花花柴茎叶或干燥琵琶柴茎叶质量比为8~30ml/g的醇-水或丙酮-水溶液浸泡,加热回流提取,提取温度为达至沸腾温度,提取次数为1~3次,每次提取时间为1.0~3.0h;向提取物中加入体积与提取物质量比为5~30ml/g的水进行二次提取,提取温度为达致沸腾温度,提取次数为1~3次,每次提取时间为1.0~3.0h;收集合并冷却后的提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得植物提取物。
Description
技术领域:
本发明涉及一种α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的提取方法,尤其是一种以植物(多枝柽柳茎叶或花花柴茎叶或琵琶柴茎叶)为原料,产品无毒副作用、安全性高、成本廉价、可产业化生产的从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法。
背景技术:
糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是一种多病因的代谢性疾病群,主要与胰岛素产生和作用异常有关,可引起糖、脂肪、蛋白质代谢紊乱,以血糖增高和尿糖为特征,进而导致多个系统、多个脏器损害的综合征,是人类患心脑血管疾病、致盲、截肢和肾衰的主要原因。目前已研制出多种新型降血糖化学药物应用于临床,如改善葡萄糖耐受性及胰岛素应答水平的胰岛素分泌促进剂(二肽基肽酶DPP-IV抑制剂)、改善葡萄糖代谢剂(双胍类药物)、可有效改善机体聚醇代谢,预防和延缓病症发生的醛糖还原酶抑制剂(吡咯啶环类物质)以及胰岛素增敏剂。其中胰岛素增敏剂已成为目前口服降糖药物的研发热点,可增加人体组织对胰岛素的敏感性,特别是α-葡萄糖苷酶抑制剂,如阿卡波糖,其作用机制为竞争性地抑制α-葡萄糖苷酶,在碳水化合物消化的最后一步抑制双糖降解为单糖,延缓碳水化合物在肠道的消化,延迟来自双糖、低聚糖及多糖的葡萄糖吸收,有效推迟并减轻糖尿病人餐后血糖升高的时间及进程,是糖尿病人常用的控制血糖的药物。
虽然现有抗糖尿病种类较多,但均为化学药物,存在着作用途径单一,甚至具有严重的不良反应,如导致低血糖、乳酸酸中毒等,长期服用伴有药效降低的可能。
柽柳又名西河柳,为柽柳科植物柽柳Tamarix chinensis Lou r1的干燥细嫩枝叶。具有疏风解表、透疹解毒之功效,主治风热感冒、麻疹初起、皮肤瘙痒、风湿痹痛等病症;民间用来治疗癌症;临床上用于治疗慢性气管炎和类风湿性关节炎等。
花花柴Karelinia caspia(Pall.)Less.系菊科(Compositae)花花柴属(KareliniaLess.)多年生草本植物,又称胖姑娘、胖娃娃草。是生长于盐生荒漠和盐生沼泽中的一种盐生植物,已被公认为最有效的泌盐植物之一。有关其药用价值的文献未见报道,仅有用其作为饲料。
琵琶柴Reaumuria soongonica(PalL)Maxim.,又称枇杷柴、红沙、红虱、海葫芦根,系柽柳科琵琶柴属小灌木植物,主要分布于陕西、甘肃、青海、新疆、内蒙古和东北地区,具有治疗湿疹、皮炎等功效。
迄今为止还没有关于从上述三种植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂相关报道。
发明内容:
本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题,提供一种以植物为原料,产品无毒副作用、安全性高、成本廉价、可产业化生产的从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法。
本发明的技术解决方案是:一种从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法,其特征在于按如下步骤进行:
a.取干燥多枝柽柳茎叶或干燥花花柴茎叶或干燥琵琶柴茎叶,剪碎研磨后放入提取器中,加入体积与多枝柽柳茎叶或花花柴茎叶或琵琶柴茎叶质量比为8~30ml/g的醇-水或丙酮-水溶液浸泡,加热回流提取,提取温度为达至沸腾温度,提取次数为1~3次,每次提取时间为1.0~3.0h,弃去提取液并将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入体积与提取物质量比为5~30ml/g的水进行二次提取,提取温度为达致沸腾温度,提取次数为1~3次,每次提取时间为1.0~3.0h;
c.收集合并冷却后的提取液,减压浓缩,冷冻干燥得植物提取物。
所述a步骤的醇-水溶液或丙酮-水溶液的浓度为70%~100%,所述醇为甲醇、乙醇或丙醇。
本发明是以来源广泛、价格低廉的植物为原料,利用溶剂提取法对植物全草进行提取,所得到的提取物经过α-葡萄糖苷酶活性抑制实验证明,具有显著的抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用且无毒副作用、安全性高、成本廉价,可广泛应用于制备降低糖尿病的药品及保健品中。本发明操作简单,所用溶剂均为普通化学试剂,易重复,适于大规模生产。
附图说明:
图1是本发明实施例9提取物浓度与α-葡萄糖苷酶的抑制活性对应曲线图。
具体实施方式:
实施例1:
a.准确称取干燥多枝柽柳茎叶10g,剪碎研磨后浸入100ml无水乙醇溶液中过夜,采用索氏提取器加热回流提取,提取温度为达至沸腾温度,提取次数为2次,每次提取时间为2h,弃去提取液以除去色素等小极性物质,将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入200ml纯水水煮提取,提取2次,每次2h;
c.收集合并冷却后的水煮提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得多枝柽柳茎叶提取物。
取实施例1多枝柽柳茎叶提取物,加蒸馏水定容,配制浓度为1.5625mg/mL的多枝柽柳提取物溶液,按现有技术方法进行α-葡萄糖苷酶抑制活性实验,测得抑制率为62.3%,高于阳性对照物--阿卡波糖(在相等浓度下抑制率为32.8%)。
实施例2:
a.准确称取干燥的多枝柽柳茎叶5g,剪碎研磨后放入提取器中,加入50ml丙酮溶液中浸泡,采用索氏提取器提取3次,每次1小时,提取温度为达至沸腾温度,弃去提取液以除去色素等小极性物质,将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入50ml纯水水煮提取,提取3次,每次1h;
c.收集合并冷却后的水煮提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得多枝柽柳茎叶提取物。
取实施例2多枝柽柳茎叶提取物,加蒸馏水定容,配制浓度为0.5mg/mL的多枝柽柳提取物溶液,按照现有技术方法进行α-葡萄糖苷酶抑制活性实验,测得抑制率为40%,与浓度为3.125mg/mL的阳性对照物--阿卡波糖抑制率相当。
实施例3:
a.准确称取干燥的多枝柽柳茎叶10g,剪碎研磨后放入提取器中,加入100ml70%乙醇溶液中浸泡,采用索氏提取器提取1次,每次1小时,提取温度为达至沸腾温度,弃去提取液以除去色素等小极性物质,将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入100ml纯水水煮提取,提取1次,每次3h;
c.收集冷却后的水煮提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得多枝柽柳茎叶提取物。
取实施例3的多枝柽柳茎叶提取物,加蒸馏水定容,依次稀释配制浓度分别为2、1、0.5、0.25mg/mL的多枝柽柳提取物溶液,按照现有技术方法进行α-葡萄糖苷酶抑制活性实验,测得四个浓度下的提取物对α-葡萄糖苷酶均有抑制活性,其活性存在剂量依赖关系,IC50值为1.21mg/mL(阳性对照药阿卡波糖的IC50值为6.25mg/mL)。
实施例4:
a.准确称取干燥花花柴茎叶10g,剪碎研磨后浸入100ml无水乙醇溶液中过夜,采用索氏提取器加热回流提取,提取温度为达至沸腾温度,提取次数为2次,每次提取时间为2h,弃去提取液以除去色素等小极性物质,将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入200ml纯水水煮提取,提取2次,每次2h;
c.收集合并冷却后的水煮提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得花花柴茎叶提取物。
取实施例4花花柴茎叶提取物,加蒸馏水定容,配制浓度为1.5625mg/mL的花花柴提取物溶液,按现有技术方法进行α-葡萄糖苷酶抑制活性实验,测得抑制率为48.1%,高于阳性对照物--阿卡波糖(在相等浓度下抑制率为32.8%)。
实施例5:
a.准确称取干燥的花花柴茎叶5g,剪碎研磨后放入提取器中,加入50ml丙酮溶液中浸泡,采用索氏提取器提取3次,每次1小时,提取温度为达至沸腾温度,弃去提取液以除去色素等小极性物质,将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入50ml纯水水煮提取,提取3次,每次1h;
c.收集合并冷却后的水煮提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得花花柴茎叶提取物。
取实施例5的花花柴茎叶提取物,加蒸馏水定容,配制浓度为0.5mg/mL的花花柴提取物溶液,进行α-葡萄糖苷酶抑制活性实验,测得抑制率为32%,与浓度为1.56mg/mL的阳性对照物--阿卡波糖抑制率相当。
实施例6:
a.准确称取干燥的花花柴茎叶10g,剪碎研磨后放入提取器中,加入100ml70%乙醇-水溶液中浸泡,采用索氏提取器提取1次,每次1小时,提取温度为达至沸腾温度,弃去提取液以除去色素等小极性物质,将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入100ml纯水水煮提取,提取1次,每次3h;
c.收集冷却后的水煮提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得花花柴茎叶提取物。
取实施例6花花柴茎叶提取物,加蒸馏水定容,依次稀释配制浓度分别为2、1、0.5、0.25mg/mL的花花柴提取物溶液,按现有技术方法进行α-葡萄糖苷酶抑制活性实验,测得四个浓度下的提取物对α-葡萄糖苷酶均有抑制活性,其活性存在剂量依赖关系,IC50值为1.52mg/mL(阳性对照药阿卡波糖的IC50值为6.25mg/mL)。
实施例7:
a.准确称取干燥琵琶柴茎叶10g,剪碎研磨后浸入100ml 70%的乙醇-水溶液中过夜,采用索氏提取器加热回流提取,提取温度为达至沸腾温度,提取次数为2次,每次提取时间为2h,弃去提取液以除去色素等小极性物质,将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入100ml纯水水煮提取,提取2次,每次2h;
c.收集合并冷却后的水煮提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得琵琶柴茎叶提取物。
取实施例7琵琶柴茎叶提取物,加蒸馏水定容,配制浓度为6.25mg/mL的琵琶柴提取物溶液,按照现有技术方法进行α-葡萄糖苷酶抑制活性实验,测得抑制率为62.4%,高于阳性对照物--阿卡波糖(在相等浓度下抑制率为51.2%)。
实施例8:
a.准确称取干燥的琵琶柴茎叶5g,剪碎研磨后放入提取器中,加入50ml丙酮溶液中浸泡,采用索氏提取器提取3次,每次1小时,提取温度为达至沸腾温度,弃去提取液以除去色素等小极性物质,将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入50ml纯水水煮提取,提取3次,每次1h;
c.收集合并冷却后的水煮提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得琵琶柴茎叶提取物。
取实施例8的琵琶柴茎叶提取物,加蒸馏水定容,配制浓度为0.875mg/mL的琵琶柴提取物溶液,按照现有技术进行α-葡萄糖苷酶抑制活性实验,测得抑制率为35%,略高于浓度为1.56mg/mL的阳性对照物--阿卡波糖的抑制率(其抑制率为32.8%)。
实施例9:
a.准确称取干燥的琵琶柴茎叶10g,剪碎研磨后放入提取器中,加入100ml无水乙醇溶液中浸泡,采用索氏提取器提取1次,每次1小时,提取温度为达至沸腾温度,弃去提取液以除去色素等小极性物质,将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入200ml纯水水煮提取,提取1次,每次3h;
c.收集冷却后的水煮提取液,在60℃下减压浓缩,冷冻干燥得琵琶柴茎叶提取物。
取实施例9琵琶柴茎叶提取物,加蒸馏水定容,依次稀释配制浓度分别为7、3.5、1.75、0.875mg/mL的琵琶柴提取物溶液,按照现有技术方法进行α-葡萄糖苷酶抑制活性实验(见图1),测得四个浓度下的提取物对α-葡萄糖苷酶均有抑制活性,其活性存在剂量依赖关系,IC50值为2.53mg/mL(阳性对照药阿卡波糖的IC50值为6.25mg/mL)。
本发明实施例1~9制备获得的提取物可以作为治疗和预防糖尿病及其并发症药物的各种制剂、抑制糖尿病及其并发症的保健食品以及作为降低血糖的食品添加剂等。
治疗和预防糖尿病及其并发症的药物或保健食品,可以与辅料混合形成各种形式的丸剂、散剂、片剂、膏剂,粉剂,针剂、水剂,颗粒剂、胶囊、注射剂等;保健食品形态可以是液体的比如像清凉饮料,碳酸饮料,调味品;作为添加剂,比如加入到面食类,果冻,冰淇淋,腌制品,火腿,点心中。
Claims (2)
1.一种从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法,其特征在于按如下步骤进行:
a.取干燥多枝柽柳茎叶或干燥花花柴茎叶或干燥琵琶柴茎叶,剪碎研磨后放入提取器中,加入体积与多枝柽柳茎叶或花花柴茎叶或琵琶柴茎叶质量比为8~30ml/g的醇-水或丙酮-水溶液浸泡,加热回流提取,提取温度为达至沸腾温度,提取次数为1~3次,每次提取时间为1.0~3.0h,弃去提取液,并将剩下茎叶晾干为提取物;
b.向提取物中加入体积与提取物质量比为5~30ml/g的水进行二次提取,提取温度为达致沸腾温度,提取次数为1~3次,每次提取时间为1.0~3.0h;
b.收集合并冷却后的提取液,减压浓缩,冷冻干燥得植物提取物。
2.根据权利要求1所述的从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法,其特征在于:所述a步骤的醇-水溶液或丙酮-水溶液的浓度为70%~100%,所述醇为甲醇、乙醇或丙醇。
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