CN109875910A - 一种具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,属于化妆品技术领域,所述复合多肽纳米囊泡,包括如下重量份的组分:再生修复活性多肽0.01~1份、抗氧化活性多肽0.01~1份、天然保湿活性因子0.1~5份、促进微循环活性成分0.01~1份、类脂壁材5~20份、胆甾醇0.1~5份、多元醇10~45份和水30~98份。本发明针对皮肤屏障不同修复机理,提供了作用于不同靶点的修复组分,同时,采用纳米囊泡包裹各种亲水、亲油性活性成份,并利用其独特的闭合脂质双层结构,显著提高修复组合物的稳定性,促进皮肤渗透量,有效控制活性成分缓释并提高修复效果。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域,具体涉及一种具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡及其制备方法和应用。
背景技术
皮肤屏障是人体皮肤重要的保护结构,皮肤屏障广义包括物理屏障、色素屏障、神经屏障、免疫屏障。皮肤屏障狭义主要指物理性屏障,主要由皮脂膜、角质层角蛋白、脂质、砖墙结构、真皮粘多糖类、粘多糖类等共同构成,可以抵御外界有害、刺激物、日光进入,同时具有保湿及调节抗炎作用。
近年来出现的敏感皮肤、皮肤耐受性差以及医美激光术后修复均是皮肤屏障薄弱或皮肤屏障受损导致的。目前针对修复皮肤屏障的产品诸多,但普遍存在以下问题:1)修复机理单一,效率低:产品仅针对角质层的修复,无法实现全效修复;2)产品稳定性差:有些具有强效修复的成分难溶且易析出,如神经酰胺、胆甾醇等;3)吸收率低:生理学活性蛋白质组分,如纤连蛋白、EGF、活性多肽,分子量高、半衰期短、结构不稳定、其在皮肤递送中的最大问题在于,这些蛋白质组分具有低的皮肤渗透率。据CIR报告显示,纤连蛋白的分子量大于20万相比EGF更为巨大,无法通过健康的肌肤屏障到达真皮层。
因此,促进活性成份渗透、提高稳定性、减少刺激、全效修复是此类化妆品在实现功效性过程中亟待解决的难题。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,所述复合多肽纳米囊泡能同时包裹多种作用于不同靶点的抗敏修复、抗氧化及促进皮肤微循环活性成份,稳定性好,功效显著,刺激性小,有优异的肤感和长久保湿效果。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,由包括如下重量份的组分制备而成:再生修复活性多肽0.01~1份、抗氧化活性多肽0.01~1份、天然保湿活性因子0.1~5份、促进微循环活性成分0.01~1份、类脂壁材5~20份、胆甾醇0.1~5份、多元醇10~45份和水30~98份;所述再生修复活性多肽包括纤连蛋白、寡肽-1、棕榈酰三肽-8、乙酰基四肽-15、棕榈酰六肽-6、六肽-9和EGF中的一种或几种;所述抗氧化活性多肽包括肌肽、脱羧肌肽、二肽-4、蓝铜胜肽和谷胱甘肽中的一种或几种。
优选地,所述天然保湿活性因子包括透明质酸钠、聚谷氨酸钠、尿囊素、氨基酸保湿剂、海藻糖、银耳多糖、生物糖胶、水茄子、角鲨烷、芦荟提取物、有机黑大豆水解液和海月水母中的一种或几种。
优选地,所述促进微循环活性成分包括精氨酸、核糖核酸、肝素、类肝素、红花甘油苷、亚麻酸、腺苷、腺苷酸、葛根素、葛根黄酮、紫檀素、橙皮苷、芍药苷、人参皂苷、米谷醇、姜酮、当药苦苷、烟酸和烟酰胺中的一种或几种。
优选地,所述类脂壁材包括氢化卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、羟基化卵磷脂和神经酰胺中的一种或几种。
优选地,所述多元醇包括甘油、二甘油、1,3-丁二醇、聚乙二醇、丙二醇、乙二醇、二丙二醇、聚丙二醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇中的一种或几种。
本发明还提供了上述技术方案所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的制备方法,包括以下步骤:
(1)将所述再生修复活性多肽、抗氧化活性多肽、天然保湿活性因子、促进微循环活性成分中的亲水性活性成分和水混合,40~75℃水浴溶解,得到水相;
(2)将所述再生修复活性多肽、抗氧化活性多肽、天然保湿活性因子、促进微循环活性成分中的亲油性活性成分、类脂壁材、胆甾醇和多元醇混合,45~70℃水浴熔融,得到油相;
(3)将所述步骤(1)得到的水相与步骤(2)得到的油相混合,微米化处理后,得到微米级分散体;
(4)将所述步骤(3)得到的微米级分散体,纳米化处理后,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡;
所述步骤(1)和步骤(2)之间无时间顺序限定。
优选地,所述步骤(4)得到的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径为50~200nm。
优选地,所述步骤(3)中微米化处理为剪切乳化。
优选地,所述步骤(4)中纳米化处理为高压均质处理或高速微射流处理。
本发明还提供了,采用上述技术方案所述的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡在制备化妆品中的应用。
本发明提供的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,与现有修复类化妆品相比,显示出以下优势和技术进步:
1)目前市面在售大多产品修复机理单一,本发明选择不同靶点修复活性成分合理配伍使用,并充分考虑到皮肤结构状态以及修复更新周期对皮肤屏障功能的影响,增加了抗炎症、抗氧化、促进微循环等活性成份,从根本上修复皮肤屏障,起到多靶点全效修复的作用。
2)由于皮肤自有屏障,纤连蛋白及多肽活性成分难以渗透入皮肤基底层,本发明提供的柔性脂质体结构与人体皮肤的油/角质层/水的结构非常相似,且有高效的自身形变,可穿过比其自身小数倍的皮肤孔道,能够吸附于皮肤的角质层,控制活性成分的缓慢释放并促进活性成分的有效渗透,解决吸收问题,增强修复效率。
3)本发明提供的柔性脂质体结构具有使药物靶向网状内皮系统、延长药效、降低药物毒性、提高疗效等优点,且具有优异的保湿性能和良好的肤感。采用柔性脂质体技术开发一系列高效修复、肤感优异、修复功效显著的化妆品将具有极大的商业价值和市场潜力。
附图说明
图1为实施例8得到的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡TEM照片;
图2为实施例13得到的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡体外皮肤积累透过量的比较图;
图3为实施例13得到的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡体外皮肤滞留量的比较图;
图4为实施例14得到的载体安全性的比较图。
具体实施方式
本发明提供了一种具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,由包括如下重量份的组分制备而成:再生修复活性多肽0.01~1份、抗氧化活性多肽0.01~1份、天然保湿活性因子0.1~5份、促进微循环活性成分0.01~1份、类脂壁材5~20份、胆甾醇0.1~5份、多元醇10~45份和水30~98份;所述再生修复活性多肽包括纤连蛋白、寡肽-1、棕榈酰三肽-8、乙酰基四肽-15、棕榈酰六肽-6、六肽-9和EGF中的一种或几种;所述抗氧化活性多肽包括肌肽、脱羧肌肽、二肽-4、蓝铜胜肽和谷胱甘肽中的一种或几种。
在本发明中,所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡包括重量份为0.01~1份再生修复活性多肽,优选为0.015~0.8份,更优选为0.02~0.5。本发明对所述再生修复活性多肽的种类没有特殊限定,优选纤连蛋白、寡肽-1、棕榈酰三肽-8、乙酰基四肽-15、六肽-9和蓝铜胜肽中的一种或几种。本发明对所述再生修复活性多肽的来源没有特殊限定,采用常规市售产品即可。本发明所述纤连蛋白能够再生修复表皮、真皮、皮下、纤维、神经、血管、色素等受损细胞,增强细胞活力,为修复各类肌肤问题提供坚实的基础。其它再生修复活性多肽可促进皮肤正常胶原蛋白、弹力蛋白的生成,可以作为组织重塑的激活剂,用于舒缓、修复敏感肌肤,紧致、提亮肤色、增加皮肤弹力,修复创面损伤。
在本发明中,所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡包括重量份为0.01~1份抗氧化活性多肽,优选为0.015~0.8份,更优选为0.02~0.5。本发明对所述抗氧化活性多肽的种类没有特殊限定,优选为肌肽、脱羧肌肽、二肽-4、蓝铜胜肽和谷胱甘肽中的一种或几种。本发明对所述抗氧化活性多肽的来源没有特殊限定,采用常规市售产品即可。本发明所述抗氧化活性多肽能抑制自由基产生和还原自由基链反应,清除和捕集自由基;大多数抗氧化活性多肽稳定性较差,添加到化妆品中容易失活,本发明采用柔性纳米脂质体负载抗氧化活性多肽,将其包封在载体内部,能够有效地延长抗氧化活性多肽的保存时间,提高整体稳定性。
在本发明中,所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡包括重量份为0.1~5份天然保湿活性因子,优选为0.15~4.5份,更优选为0.2~3份。本发明对所述天然保湿活性因子的种类没有特殊限定,优选为透明质酸钠、聚谷氨酸钠、尿囊素、氨基酸保湿剂、海藻糖、银耳多糖、生物糖胶、水茄子、角鲨烷、芦荟提取物、有机黑大豆水解液和海月水母中的一种或几种。本发明对所述天然保湿活性因子的来源没有特殊限定,采用常规市售产品即可。本发明所述天然保湿因子能在角质层中与水结合,并通过调节、贮存水份达到保持角质细胞间含水量的作用,使皮肤自然呈现水润状态,避免皮肤黯沉,产生细纹并变得干燥、敏感。
在本发明中,所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡包括重量份为0.01~1份促进微循环活性成分,优选为0.015~0.8份,更优选为0.02~0.5。本发明对所述促进微循环活性成分的种类没有特殊限定,优选为精氨酸、核糖核酸、肝素、类肝素、红花甘油苷、亚麻酸、腺苷、腺苷酸、葛根素、葛根黄酮、紫檀素、橙皮苷、芍药苷、人参皂苷、米谷醇、姜酮、当药苦苷、烟酸和烟酰胺中的一种或几种。本发明对所述促进微循环活性成分的来源没有特殊限定,采用常规市售产品即可。本发明所述促进微循环活性成分可以为皮肤的角质形成细胞、成纤维细胞等提供充足的氧份和营养物质,并将细胞的代谢产物和各种有害物质及时清除,减少胶原纤维的氧化,维持皮肤中各种细胞良好的功能,从而延缓皮肤灰黄无光。通过改变剂型、以柔性脂质体做药物载体、透皮促进剂等方法可以提高微循环活性成分透皮效果,使其更好地发挥作用。
在本发明中,所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡包括重量份为5~20份类脂壁材,优选为2~15份,更优选为3~10份。本发明对所述类脂壁材的种类没有特殊限定,优选为氢化卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、羟基化卵磷脂和神经酰胺中的一种或几种。在本发明中,所述氢化卵磷脂优选采用富含55%~65%的磷脂酰胆碱和/或富含75%~85%的磷脂酰胆碱。本发明对所述类脂壁材的来源没有特殊限定,采用常规市售产品即可。其中,本发明所述神经酰胺作为一种新型类脂壁材,较通常的磷脂脂质体稳定,而且由于它的脂质组分近似表皮角质层脂质,故更易渗透皮肤;同时,神经酰胺在皮肤屏障功能的调控中起主导作用,能够改善皮肤脂质,起到滋养、保护皮肤的作用。
在本发明中,所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡包括重量份为0.1~5份胆甾醇,优选为1~4份,更优选为1.5~3份。本发明对所述胆甾醇的来源没有特殊限定,采用常规市售产品即可。本发明所述胆甾醇能调节脂质囊泡双分子层膜的流动性,在一定程度上能促进修复活性成份包封并提高其稳定性。
在本发明中,所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡包括重量份为10~45份多元醇,优选为15~40份,更优选为20~30份。本发明对所述多元醇的种类没有特殊限定,优选为甘油、二甘油、1,3-丁二醇、聚乙二醇、丙二醇、乙二醇、二丙二醇、聚丙二醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇中的一种或几种。本发明对所述多元醇的来源没有特殊限定,采用常规市售产品即可。本发明所述多元醇能够调节非离子表面活性剂界面层的HLB值,从而使形成的磷脂双分子层结构更有弹性。
在本发明中,所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡包括重量份为30~98份水。本发明所述水优选为纯化水。
本发明还提供了上述技术方案所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的制备方法,包括以下步骤:
(1)将所述再生修复活性多肽、抗氧化活性多肽、天然保湿活性因子、促进微循环活性成分中的亲水性活性成分与水混合,40~75℃水浴溶解,得到水相;
(2)将所述再生修复活性多肽、抗氧化活性多肽、天然保湿活性因子、促进微循环活性成分中的亲油性活性成分、类脂壁材、胆甾醇和多元醇混合,45~70℃水浴熔融,得到油相;
(3)将所述步骤(1)得到的水相与步骤(2)得到的油相混合,微米化处理后,得到微米级分散体;
(4)将所述步骤(3)得到的微米级分散体,纳米化处理后,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡;
所述步骤(1)和步骤(2)之间无时间顺序限定。
本发明将所述再生修复活性多肽、抗氧化活性多肽、天然保湿活性因子、促进微循环活性成分中的亲水性活性成分与水混合,40~75℃水浴溶解,得到水相。
在本发明中,所述水浴溶解的温度为40~75℃,优选为50~70℃,更优选为55~65℃。本发明优选采用搅拌溶解,溶解至透明溶液。
本发明将所述再生修复活性多肽、抗氧化活性多肽、天然保湿活性因子、促进微循环活性成分中的亲油性活性成分、类脂壁材、胆甾醇和多元醇混合,45~70℃水浴熔融,得到油相。
在本发明中,所述油相熔融的温度为45~70℃,优选为50~65℃,更优选为55~60℃。
本发明将所述水相与油相混合,微米化处理后,得到微米级分散体。
在本发明中,所述微米化处理优选为剪切乳化。所述剪切乳化的转速优选为5000~15000rpm,更优选为5500~12000rpm;所述剪切乳化的时间优选为1~10min,更优选为2~8min。
本发明将所述微米级分散体,纳米化处理后,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
在本发明中,所述纳米化处理优选为高压均质处理或高速微射流处理。所述纳米化处理采用高压均质处理,加热温度优选为35~50℃,更优选为40~45℃;所述均质压力优选为500~1000bar,更优选为600~800bar;所述均质次数优选为1~5次,更优选为2~3次。所述纳米化处理采用高速微射流处理,所述进料温度优选为40~55℃,更优选为45~50℃;所述压力优选为60~160Mpa,更优选为80~150Mpa;所述均质次数优选为1~5次,更优选为2~4次。
本发明还提供了采用上述技术方案所述的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡在制备化妆品中的应用。
下面将结合本发明中的实施例,对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
将0.01%纤连蛋白、0.05%寡肽-1、0.5%肌肽、0.1%透明质酸、0.2%聚谷氨酸钠、0.1%烟酰胺、0.01%EGF与余量的水混合,在55℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将0.01%乙酰基四肽-15、1%角鲨烷、2%大豆卵磷脂、10%丙二醇、10%甘油、2%1,2-己二醇、5%神经酰胺、0.1%胆甾醇于55℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相加至油相中,混合完成后,在转速为5500rpm的条件下高速剪切乳化5min,得到微米级分散体;
将微米级分散体在转速为12000rpm的条件下高速剪切乳化1min,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
对上述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,结果具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为192.3nm、PDI为0.223。
实施例2
将1%纤连蛋白、0.01%寡肽-1、0.5%聚谷氨酸钠与余量的水混合,在45℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将3%大豆卵磷脂、2%蛋黄卵磷脂、0.2%腺苷、0.1%棕榈酰三肽-8、0.02%六肽-9、0.05%二肽-4、8%丙二醇、15%甘油、5%1,2-戊二醇、0.2%胆甾醇于45℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相加至油相中,混合完成后,在转速为6500rpm的条件下高速剪切乳化3min,得到微米级分散体;
将微米级分散体在温度35℃、均质压力500bar下均质2次,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
对上述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,结果具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为128.2nm、PDI为0.215。
实施例3
将0.01%寡肽-1、0.5%透明质酸钠、0.1%腺苷、0.2%核糖核酸与余量的水混合,在50℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将5%大豆卵磷脂、3%氢化卵磷脂、15%丙二醇、12%甘油、12%神经酰胺、0.2%胆甾醇、0.2%乙酰基四肽-15、0.02%六肽-9、0.1%二肽-4,于50℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相加至油相中,混合完成后,在转速为8000rpm的条件下高速剪切乳化8min,得到微米级分散体;
将微米级分散体在温度45℃、均质压力900bar下均质2次,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
对上述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,得该具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为86.4nm、PDI为0.213。
实施例4
将1%寡肽-1、1%透明质酸钠、0.2%肌肽、0.5%烟酰胺、与余量的水混合,在65℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将4%羟基化卵磷脂、6%蛋黄卵磷脂、20%丙二醇、5%二丙二醇、15%甘油、0.5%角鲨烷、0.8%胆甾醇、0.1%乙酰基四肽-15、0.01%棕榈酰六肽-6、0.08%二肽-4于50℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相加至油相中,混合完成后,在转速为1000rpm的条件下高速剪切乳化5min,得到微米级分散体;
采用高速微射流技术,将微米级分散体在50℃、180Mpa下均质3次,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
对具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,结果具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为98.2nm、PDI为0.237。
实施例5
将0.5%纤连蛋白、0.5%寡肽-1、0.5%聚谷氨酸钠、0.2%烟酰胺、0.1%肌肽与余量的水混合,在60℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将2%羟基化卵磷脂、5%神经酰胺、15%丙二醇、5%1,3-丁二醇、10%甘油、2%角鲨烷、1%胆甾醇、0.1%乙酰基四肽-15、0.1%蓝铜胜肽于50℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将油相加至水相中,混合完成后,在转速为1200rpm的条件下高速剪切乳化4min,得到微米级分散体;
将微米级分散体在转速为12000rpm的条件下高速剪切乳化3min,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡;
对上述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,结果具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为68.3nm、PDI为0.209。
实施例6
将0.08%纤连蛋白、0.5%寡肽-1、1%聚谷氨酸钠、1%透明质酸、0.3%烟酰胺、0.5%肌肽与余量的水混合,在70℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将2%氢化卵磷脂、8%大豆卵磷脂、15%丙二醇、5%1,2-己二醇、10%甘油、0.1%肝素、0.3%神经酰胺、0.3%胆甾醇、0.5%乙酰基四肽-15于60℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相与油相混合,混合完成后,在转速为8500rpm的条件下高速剪切乳化6min,得到微米级分散体;
采用高速微射流技术,在温度设置为55℃、压力65Mpa下均质4次,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
对上述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,结果具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为156.4nm、PDI为0.302。
实施例7
将0.05%寡肽-1、0.8%肌肽、1%聚谷氨酸钠、0.4%烟酰胺与余量的水混合,在75℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将2%氢化卵磷脂、8%蛋黄卵磷脂、20%丙二醇、15%1,3-丁二醇、10%甘油、1%角鲨烷、1%神经酰胺、5%胆甾醇、0.05%乙酰基四肽-15,于75℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相与油相混合,混合完成后,在转速为9000rpm的条件下高速剪切乳化8min,得到微米级分散体;
将微米级分散体在温度45℃、均质压力8000bar下均质3次,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
对上述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,结果具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为93.2nm、PDI为0.264。
实施例8
将0.05%寡肽-1、2%芦荟提取物、0.5%银耳多糖、0.5%米谷醇、0.5%精氨酸与余量的水混合,在60℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将3%大豆卵磷脂、6%羟基化卵磷脂、10%聚乙二醇、10%乙二醇、5%聚丙二醇5、0.5%角鲨烷、0.8%神经酰胺、3%胆甾醇、0.02%棕榈酰三肽-8、0.1%棕榈酰六肽-6、0.2%六肽-9、0.3%二肽-4于55℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相与油相混合,混合完成后,在转速为8000rpm的条件下高速剪切乳化10min,得到微米级分散体;
将微米级分散体在温度50℃、均质压力6000bar下均质4次,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
利用透射电子显微镜观察得到复合多肽纳米囊泡的微观形貌,具体如图1所示。由图1可以看出,在透射电镜下复合多肽纳米囊泡基本呈圆形,平均粒径为102.2nm,PDI为0.281,粒径比较均匀。
实施例9
将0.5%纤连蛋白、0.1%寡肽-1、1%氨基酸保湿剂、1%海月水母与余量的水混合,在50℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将2%羟基化卵磷脂、4%神经酰胺、0.2%紫檀素、0.5%姜酮、15%乙二醇、10%甘油、1%角鲨烷、2%胆甾醇、0.01%棕榈酰三肽-8、0.02%棕榈酰六肽-6、0.2%蓝铜胜肽、0.01%二肽-4于70℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相与油相混合,混合完成后,在转速为90000rpm的条件下高速剪切乳化4min,得到微米级分散体;
将微米级分散体在转速为800bar的条件下高压均质3次,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
对上述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,结果具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为62.8nm、PDI为0.313。
实施例10
将0.5%纤连蛋白、0.1%寡肽-1、1%肌肽、1%生物糖胶、0.5%水茄子与余量的水混合,在42℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将2%羟基化卵磷脂、1%氢化卵磷脂、0.5%人参皂苷、2%二丙二醇、10%甘油、15%乙二醇、2.5%胆甾醇、0.01%棕榈酰三肽-8、0.5%棕榈酰六肽-6、0.01%蓝铜胜肽,于70℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相与油相混合,混合完成后,在转速为10000rpm的条件下高速剪切乳化4min,得到微米级分散体;
采用高速微射流技术,将微米级分散体在30℃、60Mpa下均质2次,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
对上述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,结果具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为53.65nm、PDI为0.263。
实施例11
将0.2%寡肽-1、0.5%聚谷氨酸钠、1%水茄子与余量的水混合,在50℃水浴条件下搅拌溶解至透明溶液,得到水相,备用;
将2%蛋黄卵磷脂、2%氢化卵磷脂、0.2%红花甘油苷、20%丙二醇、15%1,2-己二醇、10%甘油、2%神经酰胺、1.5%胆甾醇、0.02%六肽-9、0.02%蓝铜胜肽、0.01%二肽-4于70℃水浴条件下搅拌熔融,得到油相,备用;
将水相与油相混合,混合完成后,在转速为90000rpm的条件下高速剪切乳化3min,得到微米级分散体;
将微米级分散体在转速为1000bar的条件下高压均质3次,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡。
对上述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径进行检测,结果具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡粒径为79.7nm、PDI为0.333。
实施例12
将实施例1~11制备得到的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡在密闭容器、室温条件下放置30天、60天、90天后,对样品的性状、粒径及PDI(多分散系数)进行检测,具体检测结果如表1所示。
表1具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡稳定性试验结果
由表1可以看出:本发明提供的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡无团聚、变色、分层现象,粒径在50~200nm之间,且PDI均<0.4,满足实际应用要求。样品在放置90天后也未出现团聚、变色、分层现象,样品粒径和PDI未发生显著性变化,仍然满足实际应用需求,尤其在修复活性成份浓度高的情况下仍然较稳定,未发现结晶析出现象,因此,本发明提供的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡具有良好的稳定性。
实施例13
本次试验对具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的皮肤吸收和透过性能进行验证。
体外透皮实验选用改进的Franz扩散池,以体重为160~220g雄性SD大鼠腹部皮肤为模型。扩散池参数为:有效扩散面积3.14cm2,接收池容积7.0mL,接收液为生理盐水,磁力搅拌速度为200rpm。
将完整无破损的大鼠腹部皮肤固定于接收池和供给池之间(皮肤内层面向接收池);接受池保持恒温37.0±0.5℃,分别于1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h吸取接收液0.5mL,并补充释放待测物质0.5mL,接收液使用0.22μm有机滤膜过滤。
将实施例5、9、10制备的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡以及以游离纤连蛋白为对照组的修复活性成分作为待测物质,按照上述方法进行透皮试验,具体结果如图2和3所示。
因实施例中5、9、10制备的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡均含有0.5%的纤连蛋白原液,使用高效液相色谱测定接收液中纤连蛋白的浓度,计算各时间点的累积经皮渗透量,绘制透皮吸收药-时曲线,了解纤连蛋白的体外透皮渗透效果。
按以下公式计算纤连蛋白单位面积累积透皮量:
其中:Qs为累积透皮量;S为有效扩散面积;V为接收池中生理盐水体积;Ci为第1次至上次取样时接收液中修复活性成份浓度;n为第n次取样体积;Cn为该次取样时接收液中修复活性成份浓度。
由图2可以看出,实施例5、9、10和游离纤连蛋白的12h累积透过量分别为212.57μg/cm2、224.76μg/cm2、242.43μg/cm2和99.24μg/cm2。游离纤连蛋白的皮肤累积透过量明显低于实施例5、9和10样品的皮肤累积透过量。表明具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡能够提高纤连蛋白的皮肤透过量,提高其生物利用度。
由图3可以看出,本发明实施例5、9、10和游离纤连蛋白得到的12小时滞留量分别为27.22μg/cm2、25.59μg/cm2、20.13μg/cm2和6.37μg/cm2。表明本发明提供的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡能够提高纤连蛋白的皮肤滞留量,从而提供更为显著的修复效果。
实施例14
通过鸡胚绒毛膜尿囊膜试验(HET-CAM试验)评价载体安全性。实验方法:从孵化箱中取出鸡胚,置于自制的蛋架上,气室端朝上,开气室后,加少量生理盐水于蛋壳膜上使其润湿,吸去生理盐水,用弯镊小心去除内膜,保证血管膜不受损。取一定量10%具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡水溶液(实施例5、9、10)滴加至CAM膜上,观察其1~5min的内膜血管的现象,记录下来,同时用高清相机拍照并保存试验图片,同时设阴性和阳性对照,以生理盐水作为阴性对照物,以10%NaOH作为阳性对照物。结果如图4所示。
测试结果:滴加10%具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡水溶液(实施例5、9、10)于鸡胚内膜清晰地分支血管处,5min后的血管无出血、溶血和凝血等现象出现。说明本发明实施例5、9和10的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡对人体皮肤基本无刺激性,十分温和。
实施例15
细胞功效评价——促进角质形成细胞生长能力
角质形成细胞(HaCat细胞)是一种能合成角质蛋白的上皮细胞,为表皮的主体,可用于评价具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡促进HaCat细胞生长能力。将角质形成细胞用胰蛋白酶溶液消化后,接种于96孔板,细胞贴壁后,加入稀释倍数为320、160、80、40、20倍的实施例3、5、7制备的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,在450nm波长下测OD值,计算HaCat细胞的存活率,具体结果见表2。
表2 HaCat细胞存活率(%)
由表2可以看出:作用于HaCat细胞24h时,实施例3、5、7制备的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡在稀释20~320倍的范围内,HaCat细胞的存活率大于100%,还具有一定的促增殖能力。说明本发明制备得到的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,对表皮不产生刺激性,且具有一定的HaCat细胞促增殖能力。
实施例16
细胞功效评价——促进人皮肤成纤维细胞生长能力
人皮肤成纤维细胞(HSF细胞)是皮肤真皮层中主要细胞,也是细胞受损和皮肤衰老后的主要修复细胞。HSF细胞用胰蛋白酶溶液消化后,加入DMEM培养基终止消化,离心后弃上清,加入DMEM完全培养基重悬细胞,后加入稀释倍数为320、160、80、40、20倍的实施例5、9、10制备的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,分别培养24h后加CCK-8试剂,在450nm波长下测OD值,计算HSF细胞的存活率,具体结果见表3。
表3 HSF细胞存活率(%)
由表3可以看出:实施例5、9、10制备的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡在稀释20~320倍的范围内,HSF细胞的存活率均大于100%,还具有一定的促增殖能力。说明本发明制备得到的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡基本无毒性,对真皮不产生刺激性,且具有较强HaCat细胞促增殖能力。
实施例17
人体功效评价——敏感肌肤功效评价试验
实验方法:筛选出至少10名面部为敏感肌肤或者正处于过敏(发红、发痒)的人群(18~45岁)作为敏感肌肤志愿者,通过空白对照,在脸部涂抹本发明10%具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡水溶液(实施例5、7、9)后,分别在第0天、第7天和第14天进行测试,测其皮肤水分流失量和皮肤血红素值,这些指标是用来评价皮肤屏障功能及使用产品后,皮肤的修复能力。该实验共招募志愿者20名,有效志愿者为20名且数据有效。测试共进行了2周,在使用样品前后均检测皮肤水分流失量和皮肤血红素值,比较其区别,对照组用生理盐水,结果分别如表4、5所示。
表4皮肤水分流失量
结果:与对照测相比,使用样品2周后,使用实施例的皮肤水分流失明显下降,说明具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡溶液可对敏感肌肤进行锁水保湿,在保证肌肤充分锁水的情况下更好的加强皮肤屏障功能。
表5皮肤血红素值
结果:贴敷后,使用实施例的皮肤红色素的减少率明显高于对照例,说明具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡在一定程度上具有减轻皮肤损伤的症状,抑制炎性因子,且加强组合物整体的修复效果。
通过上述结果可以看出,使用本发明具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡制备的化妆品,2周后就能明显修复皮肤屏障,舒缓修复敏感处肌肤,在一定程度上减轻皮肤损伤,改善皮肤敏感及瘙痒症状。
实施例18
人体功效评价——受损肌肤功效评价试验
选择年龄在18~40岁的人群,实验组10例应用10%具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡水溶液(实施例5、6、7),其中,激光治疗3例,手术切口3例,面部外伤创面4例。对照组10例用生理盐水,同实验组激光治疗3例,手术切口3例,面部外伤创面4例。
用10%具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡水溶液(实施例5、6、7),激光治疗后或外伤创面直接涂抹于伤口表面,保持创面在自然通风状态,4h后重复一次。手术切口缝合后,直接用10%具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡水溶液(实施例5、6、7)的无菌纱布覆盖包扎。对照组:应用生理盐水换药,其它与实验组相同。
表6两组愈合时间比较(x±s,天)
由表6可见:实验组与对照组比较P<0.01,两组差异有显著性意义。结果表明:10%具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡水溶液(实施例5、6、7)皮肤创面表皮生长较快,创面愈合时间分别为5.67±3.15、6.33±2.13和7.24±2.71天,较对照组明显缩短,且10%具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡水溶液(实施例5、6、7)创面无不适及瘙痒感,创面均未出现瘢痕过度增生现象,说明实施例5、6和7提供的组合物具有一定创面修复能力。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,其特征在于,由包括如下重量份的组分制备而成:再生修复活性多肽0.01~1份、抗氧化活性多肽0.01~1份、天然保湿活性因子0.1~5份、促进微循环活性成分0.01~1份、类脂壁材5~20份、胆甾醇0.1~5份、多元醇10~45份和水30~98份;
所述再生修复活性多肽包括纤连蛋白、寡肽-1、棕榈酰三肽-8、乙酰基四肽-15、棕榈酰六肽-6、六肽-9和EGF中的一种或几种;
所述抗氧化活性多肽包括肌肽、脱羧肌肽、二肽-4、蓝铜胜肽和谷胱甘肽中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,其特征在于,所述天然保湿活性因子包括透明质酸钠、聚谷氨酸钠、尿囊素、氨基酸保湿剂、海藻糖、银耳多糖、生物糖胶、水茄子、角鲨烷、芦荟提取物、有机黑大豆水解液和海月水母中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,其特征在于,所述促进微循环活性成分包括精氨酸、核糖核酸、肝素、类肝素、红花甘油苷、亚麻酸、腺苷、腺苷酸、葛根素、葛根黄酮、紫檀素、橙皮苷、芍药苷、人参皂苷、米谷醇、姜酮、当药苦苷、烟酸和烟酰胺中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,其特征在于,所述类脂壁材包括氢化卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、羟基化卵磷脂和神经酰胺中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡,其特征在于,所述多元醇包括甘油、二甘油、1,3-丁二醇、聚乙二醇、丙二醇、乙二醇、二丙二醇、聚丙二醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇中的一种或几种。
6.权利要求1~5任一项所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的制备方法,包括以下步骤:
(1)将所述再生修复活性多肽、抗氧化活性多肽、天然保湿活性因子、促进微循环活性成分中的亲水性活性成分与水混合,40~75℃水浴溶解,得到水相;
(2)将所述再生修复活性多肽、抗氧化活性多肽、天然保湿活性因子、促进微循环活性成分中的亲油性活性成分、类脂壁材、胆甾醇和多元醇混合,45~70℃水浴熔融,得到油相;
(3)将所述步骤(1)得到的水相与步骤(2)得到的油相混合,微米化处理后,得到微米级分散体;
(4)将所述步骤(3)得到的微米级分散体,纳米化处理后,得到具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡;
所述步骤(1)和步骤(2)之间无时间顺序限定。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)得到的具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡的粒径为50~200nm。
8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中微米化处理为剪切乳化。
9.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中纳米化处理为高压均质处理或高速微射流处理。
10.权利要求1~5任一项所述具有皮肤修复功能的复合多肽纳米囊泡在制备化妆品中的应用。
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