CN109642222A

CN109642222A - 食物芽孢杆菌dna酶变体

Info

Publication number: CN109642222A
Application number: CN201780043263.2A
Authority: CN
Inventors: L.贝尔; L.H.奥斯特加德; A.H.约翰森; K.戈里; T.H.布利克; G.阿贝尔; S.克罗格斯加德; J.E.尼尔森; L.吉格
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 2016-07-13
Filing date: 2017-07-12
Publication date: 2019-04-16
Also published as: JP2019523336A; US20190211284A1; US11447723B2; EP3950941A3; EP3485011A1; WO2018011277A1; CA3027272A1; US20220282187A1; US20190256831A1; US11352592B2; EP3485011B1; JP2021048863A; US10774293B2; JP6858850B2; CN109415708A; US20200362272A1; EP3950941A2; WO2018011276A1; EP3485010A1; CA3027272C

Abstract

本发明涉及多肽变体以及用于获得变体的方法。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞；以及使用这些变体的方法。

Description

食物芽孢杆菌DNA酶变体

序列表的引用

本申请含有处于计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。

发明背景

技术领域

本发明涉及相对于亲本DNA酶在一种或多种特性方面表现出改变的新颖DNA酶变体，这些特性包括：洗涤性能、洗涤剂稳定性和/或储存稳定性。本发明的变体适合用于在清洁过程和洗涤剂组合物(如衣物洗涤组合物和餐具洗涤组合物(包括手洗和自动餐具洗涤组合物))中使用。本发明还涉及编码这些变体的分离的DNA序列、表达载体、宿主细胞以及用于产生和使用本发明的DNA酶变体的方法。

背景技术

为了节省能源和保护环境，许多清洁过程降低了温度。此外，许多苛刻的洗涤剂组分(如强漂白剂)已被替换，并且短的清洁过程变得越来越流行。当温度降低时，替换漂白剂，并且当清洁和洗涤过程缩短时，微生物(如细菌)具有更好的生长条件。在许多自然、工业和医疗环境中，微生物一般附着于表面而生存，由包括生物聚合物和大分子的细胞外物质进行囊化。所得的粘液囊化微生物层被称为生物膜，该生物膜经常被细胞外聚合物(EPS)的基质包围。EPS是一般由细胞外DNA、蛋白质、和多糖组成的聚合物团块

有机物(如生物膜和EPS)的存在可能意味着衣物洗涤物品变得粘稠并且污垢可能粘附到粘稠区域。当脏的衣物洗涤物品与不太脏的衣物洗涤物品一起洗涤时，洗涤液中存在的污垢倾向于粘附到衣物洗涤物品(例如通过再沉积)，特别是在衣物洗涤物品如上描述是粘稠的情况下。其结果是，该衣物洗涤物品在洗涤后比洗涤前更“脏”。

国际专利申请WO 2011/098579(纽卡斯尔大学(Newcastle UNIV.))和WO 2014/087011(诺维信公司(Novozymes A/S))涉及脱氧核糖核酸酶化合物的用途。为了在清洁过程中有用，如衣物洗涤酶这样的DNA酶需要在洗涤剂组合物中稳定并且与标准洗涤剂组分如表面活性剂、助洗剂、漂白剂等相容。

本发明提供了适合用于在组合物(如清洁组合物(例如洗涤剂组合物))中使用的此类酶。

发明内容

本发明涉及DNA酶亲本的变体，其中DNA酶亲本属于GYS-进化枝，并且其中亲本DNA酶包含一个或两个基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)。

本发明进一步涉及DNA酶变体，该DNA酶变体与SEQ ID NO:1中所示多肽相比，在对应于以下位置的一个或多个位置处包括改变：SEQ ID NO:1的1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽的整个长度具有至少80％、至少85％、至少90％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性，但与SEQ ID NO:1中所示多肽具有小于100％的序列同一性，其中该变体具有DNA酶活性。

本发明进一步涉及DNA酶亲本的变体，其中该变体包含一个或两个基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)，其中该变体与SEQ ID NO 1相比包括一个或多个取代，其中该取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性，但与SEQ ID NO:1中所示多肽具有小于100％的序列同一性，其中该变体具有DNA酶活性。在一个方面，该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽相比具有至少一个改进的特性。在一些方面，与具有SEQ ID NO:1中所示多肽的DNA酶相比，该改进的特性是如半衰期改进因子HIF测量的增加的稳定性。

本发明的一个方面涉及清洁组合物(例如洗涤剂组合物)，该组合物包含根据本发明的变体。一个方面涉及这种组合物在清洁过程(如衣物洗涤或硬质表面清洁(如洗碗))中的用途。

一个方面涉及用于获得DNA酶变体的方法，该方法包括：

a)向亲本DNA酶中引入在一个或多个位置处的改变，这些位置对应于以下位置：SEQ ID NO 1的1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中该变体具有DNA酶活性，

b)并且回收该变体。

一个方面涉及用于获得DNA酶变体的方法，该方法包括向亲本DNA酶中引入在一个或多个位置处的改变，其中该改变是取代并且其中该取代选自下组，该组由以下组成：与SEQ ID NO:1中所示多肽相比的T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W。

在一个方面，DNA酶亲本属于GYS-进化枝，并且其中亲本DNA酶包含一个或两个基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)。

本发明的一个方面涉及根据本发明的DNA酶变体用于深度清洁物品的用途，其中该物品是纺织品或硬质表面。

本发明还涉及编码这些变体的分离的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞；以及产生这些变体的方法。本发明进一步涉及包含此类变体的洗涤剂组合物。

序列

SEQ ID NO:1：从食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:2：从堀越氏芽孢杆菌(Bacillus horikoshii)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:3：从芽孢杆菌属物种(Bacillus sp)-62520获得的成熟多肽

SEQ ID NO:4：从堀越氏芽孢杆菌获得的成熟多肽

SEQ ID NO:5：从堀越氏芽孢杆菌获得的成熟多肽

SEQ ID NO:6：从芽孢杆菌属物种-16840获得的成熟多肽

SEQ ID NO:7：从芽孢杆菌属物种-16840获得的成熟多肽

SEQ ID NO:8：从芽孢杆菌属物种-62668获得的成熟多肽

SEQ ID NO:9：从芽孢杆菌属物种-13395获得的成熟多肽

SEQ ID NO:10：从霍耐克芽孢杆菌(Bacillus horneckiae)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:11：从芽孢杆菌属物种-11238获得的成熟多肽

SEQ ID NO:12：从芽孢杆菌属物种-62451获得的成熟多肽

SEQ ID NO:13：从芽孢杆菌属物种-18318获得的成熟多肽

SEQ ID NO:14：从病研所芽孢杆菌(Bacillus idriensis)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:15：从藻居芽孢杆菌(Bacillus algicola)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:16：从环境样品J获得的成熟多肽

SEQ ID NO:17：从越南芽孢杆菌(Bacillus vietnamensis)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:18：从花津滩芽孢杆菌(Bacillus hwajinpoensis)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:19：从胶质类芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:20：从印度芽孢杆菌(Bacillus indicus)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:21：从黄海芽孢杆菌(Bacillus marisflavi)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:22：从路西法芽孢杆菌(Bacillus luciferensis)获得的成熟多肽

SEQ ID NO:23：从黄海芽孢杆菌获得的成熟多肽

SEQ ID NO:24：从芽孢杆菌属物种SA2-6获得的成熟多肽

SEQ ID NO:25：基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N]

SEQ ID NO:26：基序ASXNRSKG

定义

术语“辅助材料”意指针对希望的具体类型的洗涤剂组合物和产品形式(例如，液体、颗粒、粉末、棒、糊、喷雾、片剂、凝胶、或泡沫组合物)选择的任何液体、固体或气体材料，这些材料还优选地与用于该组合物中的DNA酶变体酶相容。在一些方面，颗粒组合物处于“压缩”形式，而在其他方面，液体组合物处于“浓缩”形式。

术语“等位基因变体”意指占据相同染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然地产生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽没有变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。

“生物膜”可以由其中细胞在表面(如纺织品、餐具或硬质表面)上彼此粘连在一起的任何组的微生物产生。这些粘附细胞经常包埋在细胞外聚合物(EPS)的自身产生的基质内。生物膜EPS是一般由细胞外DNA、蛋白质、和多糖组成的聚合物团块。生物膜可以形成在活的或非活的表面上。在生物膜中生长的微生物细胞与同一有机体的浮游细胞(相比之下，浮游细胞是可以在液体介质中漂浮或浮游的单个细胞)在生理上是不同的。生活在生物膜中的细菌通常具有与同一物种的自由漂浮细菌显著不同的特性，因为膜的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。这种环境的一个益处是增加对洗涤剂和抗生素的抗性，因为密集的细胞外基质和细胞的外层保护群落的内部。关于衣物洗涤生物膜生产细菌可以在以下物种中找到：不动杆菌属物种(Acinetobacter sp.)、气微菌属物种(Aeromicrobium sp.)、短波单胞菌属物种(Brevundimonas sp.)、微杆菌属物种(Microbacterium sp.)、滕黄微球菌(Micrococcus luteus)、假单胞菌属物种(Pseudomonas sp.)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)以及寡养单胞菌属物种(Stenotrophomonas sp.)。

术语“cDNA”意指可以通过从得自原核或真核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子反转录来制备的DNA分子。cDNA缺少可能存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工。

术语“进化枝”意指基于追溯至共同祖先的同源性特征聚集在一起的一组多肽。多肽进化枝可以被看作是系统发生树，并且进化枝是由共同祖先及其所有直系后裔组成的一组多肽。形成一组例如系统发生树中所示的进化枝的多肽经常可以享有共同的特性，并且与不在进化枝中的其他多肽相比更密切相关。

术语“编码序列”意指直接指明其多肽产物的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放阅读框决定，该开放阅读框通常以ATG起始密码子或替代起始密码子(如GTG和TTG)开始，并且以终止密码子(如TAA、TAG、和TGA)结束。编码序列可以是DNA、cDNA、合成、或重组的多核苷酸。

术语“控制序列”意指对于表达编码本发明变体的多核苷酸所必需的所有组分。每个控制序列对于编码变体的多核苷酸可以是天然的或外源的，或者彼此可以是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导子、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、和转录终止子。控制序列至少包括启动子、以及转录和翻译终止信号。这些控制序列可以提供有接头用于引入有利于将这些控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区连接的特异性限制性酶切位点。

术语“深度清洁”意指减少或去除生物膜、EPS或其部分的组分，如蛋白质、DNA、多糖、污垢或例如生物膜或EPS中存在的其他组分。

除非另外指明，否则术语“洗涤剂组合物”包括颗粒或粉末形式的通用或重垢洗涤剂，尤其是清洁洗涤剂；液体、凝胶或糊状的通用洗涤剂，尤其是所谓的重垢液体(HDL)类型；液体精细织物洗涤剂；手动餐具洗涤剂或轻垢餐具洗涤剂，尤其是高起泡类型的那些；机器餐具洗涤剂，包括用于供家庭和公共机构使用的各种片剂、颗粒、液体和冲洗助剂类型；液体清洁剂和消毒剂，包括抗菌手洗类型、清洁条、肥皂条、漱口水、义齿清洁剂、汽车或地毯香波、浴室清洁剂；洗发香波和头发冲洗剂；沐浴凝胶、泡沫浴液；金属清洁剂；以及清洁辅剂如漂白添加剂和“去污棒(stain-stick)”或预处理型。就旨在用于玷污的物体清洁的洗涤介质中的混合物而言，使用术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂配制品”。在一些方面，就洗涤织物和/或衣服而言，使用该术语(例如，“衣物洗涤洗涤剂”)。在替代方面中，该术语是指其他洗涤剂，如用于清洁餐具、刀具等的那些(例如“餐具洗涤洗涤剂”)。并不旨在使本发明限于任何特定的洗涤剂配制品或组合物。术语“洗涤剂组合物”不旨在限于含有表面活性剂的组合物。其意图是，除根据本发明的变体之外，该术语涵盖了可能含有以下的洗涤剂：例如表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂、以及增溶剂。

术语“DNA酶”、“DNA酶变体”或“DNA酶亲本”意指具有DNA酶活性的多肽，该多肽催化DNA中磷酸二酯键的水解断裂，从而降解DNA。DNA酶属于酯酶(EC-号3.1)，水解酶的亚组。DNA酶分类为EC 3.1.21.X，其中X＝1、2、3、4、5、6、7、8或9。术语“DNA酶”和表达“具有DNA酶活性的多肽”在本申请中可以互换使用。出于本发明的目的，根据测定I或测定II中描述的程序确定DNA酶活性。在一些方面，与亲本DNA酶相比，本发明的DNA酶变体具有改进的DNA酶活性。在一些方面，与SEQ ID NO:1中所示多肽相比，本发明的DNA酶变体具有至少100％，例如至少110％、至少120％、至少130％、至少140％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％、或至少200％的DNA酶活性。

术语“酶的有效量”是指在特定应用中，例如在定义的洗涤剂组合物中实现所需的酶活性所必需的酶的量。此类有效量由本领域的普通技术人员容易地确定并且基于许多因素，如使用的具体酶、清洁应用、洗涤剂组合物的特定组成、以及是否需要液体或干燥(例如，颗粒、条)组合物等。术语DNA酶变体的“有效量”是指实现所希望水平的酶活性(例如在定义的洗涤剂组合物中)的前述DNA酶变体的量。

术语“表达”包括涉及产生变体的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。

术语“表达载体”意指包含编码变体的多核苷酸并可操作地连接至提供其表达的另外的核苷酸的线性或环形DNA分子。

术语“织物”涵盖任何纺织材料。因此，其意图是，该术语涵盖衣服，以及织物、纱线、纤维、非编织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织材料。

术语“高洗涤剂浓度”系统包括其中大于约2000ppm的洗涤剂组分存在于洗涤水中的洗涤剂。欧洲洗涤剂一般被认为是高洗涤剂浓度系统。

术语“宿主细胞”意指对用包含本发明多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行的转化、转染、转导等易感的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。

术语“改进的特性”意指与变体有关的特征，该变体与亲本相比和/或与具有SEQID NO:1的DNA酶相比、或与具有与所述变体相同的氨基酸序列但在所述指定位置中的一个或多个处不具有改变的DNA酶相比有所改进。此类改进的特性包括但不限于：稳定性，如洗涤剂稳定性、洗涤性能，例如深度清洁效果并且深度清洁效果可以包括但不限于去胶效果。

术语“改进的DNA酶活性”在本文中被定义为例如通过增加在DNA中磷酸二酯键的水解断裂改变的DNA酶活性，相对于(或与之比较)亲本DNA酶(如与具有SEQ ID NO:1的DNA酶相比)的活性，DNA酶变体显示出活性的改变。

术语“低洗涤剂浓度”系统包括其中小于约800ppm的洗涤剂组分存在于洗涤水中的洗涤剂。亚洲(例如，日本)洗涤剂典型地被认为是低洗涤剂浓度系统。

术语“改进的洗涤性能”包括但不限于术语“深度清洁效果”。与DNA酶亲本(例如SEQ ID NO:1中所示的DNA酶)相比，测量了根据本发明DNA酶变体的改进的性能例如深度清洁性能。可以将改进的性能例如深度清洁性能表达为染污的小块布样的反射值。在洗涤并冲洗之后，将小块布样摊开铺平并且允许在室温下风干过夜。在洗涤的次日评估所有洗涤的小块布样。使用具有非常小孔径的Macbeth Color Eye 7000反射分光光度计进行小块布样的光反射评估。在入射光中没有UV的条件下进行测量，并提取460nm处的反射率。阳性反应表明污垢已被除去，包括由于例如生物膜粘稠层而粘连至织物的污垢。

术语“分离的多核苷酸”意指通过人工修饰的多核苷酸。在一些方面，如通过琼脂糖电泳测定，该分离的多核苷酸是至少1％纯的、例如至少5％纯的、至少10％纯的、至少20％纯的、至少40％纯的、至少60％纯的、至少80％纯的、至少90％纯的、以及至少95％纯的。多核苷酸可以是基因组、cDNA、RNA、半合成、合成来源的，或其任何组合。

术语“洗涤”涉及家用洗涤和工业洗涤两者并且意指用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗衣机进行或可以手动进行。

术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。在一些方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:1的氨基酸1至182。根据本发明使用的成熟多肽的N-末端基于EDMAN N-末端测序数据和完整的MS数据经实验证实。本领域已知，宿主细胞可以产生由同一多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽(即，具有不同C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。

术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有DNA酶活性的成熟多肽的多核苷酸。

术语“中洗涤剂浓度”系统包括其中约800ppm与约2000ppm之间的洗涤剂组分存在于洗涤水中的洗涤剂。北美洲洗涤剂一般被认为是中洗涤剂浓度系统。

术语“核酸构建体”意指从天然存在的基因中分离的、或以自然界中不会另外存在的方式被修饰成含有核酸片段的、或合成的单链或双链的核酸分子。当核酸构建体含有表达本发明编码序列所需要的控制序列时，术语核酸构建体与术语“表达盒”含义相同。

术语“非织物洗涤剂组合物”包括非纺织品表面洗涤剂组合物，包括但不限于用于硬质表面清洁的组合物，如餐具洗涤洗涤剂组合物(包括手动餐具洗涤组合物)、口服洗涤剂组合物、义齿洗涤剂组合物、以及个人清洁组合物。

术语“可操作地连接”意指一种构型，在该构型中控制序列相对于多核苷酸的编码序列放置在适当位置处，这样使得控制序列指导编码序列的表达。

术语“亲本”DNA酶、DNA酶亲本或前体DNA酶可以互换使用。在本发明的上下文中，“亲本DNA酶”应理解为一种DNA酶，在该DNA酶中在氨基酸序列中进行至少一次改变以产生具有与其中进行改变的DNA酶序列即亲本DNA酶小于100％相同的氨基酸序列的DNA酶变体。因此，亲本是具有与该变体相比相同的氨基酸序列但在这些指定位置中的一个或多个处不具有改变的DNA酶。应理解的是，在本发明上下文中“具有相同的氨基酸序列”的表达涉及100％序列同一性。在具体方面中，该DNA酶亲本是与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6或100％同一性的DNA酶。

本文使用的术语“相关洗涤条件”指示在洗涤剂细分市场中实际用于家用的条件，具体是洗涤温度、时间、洗涤力学、洗涤剂浓度、洗涤剂类型以及水硬度。

术语“稳定性”包括储存稳定性和在使用期间(例如在洗涤过程)中的稳定性，并且反应了作为时间函数的根据本发明的DNA酶变体的稳定性，例如当DNA酶变体置于溶液中特别是在洗涤剂溶液中时，保留多少活性。这种稳定性受到许多因素的影响，例如pH、温度、洗涤剂组合物，例如助洗剂、表面活性剂的量等等。可以如在实例2中所描述的来对DNA酶稳定性进行测量。术语“改进的稳定性”或“增加的稳定性”在本文中被定义为变体DNA酶相对于亲本DNA酶和/或相对于SEQ ID NO:1的稳定性显示在溶液中增加的稳定性。“改进的稳定性”和“增加的稳定性”包括洗涤剂稳定性。术语“洗涤剂稳定性”或“改进的洗涤剂稳定性”可以是与DNA酶亲本相比DNA酶活性的改进的稳定性。如在实例2中所描述的对DNA酶稳定性进行测量。

术语“基本上纯的变体”意指按重量计含有至多10％、至多8％、至多6％、至多5％、至多4％、至多3％、至多2％、至多1％、和至多0.5％与该基本上纯的变体天然或重组相关的其他多肽物质的制剂。优选地，该变体按存在于制剂中的总多肽物质的重量计是至少92％纯的，例如至少94％纯的、至少95％纯的、至少96％纯的、至少97％纯的、至少98％纯的、至少99％纯的、至少99.5％纯的、以及100％纯的。本发明的变体优选地处于基本上纯的形式。这可以例如通过由熟知的重组方法或由经典纯化方法制备该变体来实现。

术语“纺织品”是指编织织物，以及适合用于转化为或用作纱线、编织、针织、以及非编织织物的短纤维和长丝。该术语涵盖从天然、以及合成(例如制造的)纤维制成的纱线。术语“纺织材料”是纤维、纱线中间体、纱线、织物、以及从织物制成的产品(例如，衣服以及其他物品)的通用术语。

术语“转录启动子”用于指为促进特定基因的转录的DNA区域的启动子。转录启动子典型地位于它们所调节的基因附近，在相同链上并且在上游(朝向有义链的5’区域)。

术语“转录终止子”用于指标记基因结束的基因序列区段或者在基因组DNA上用于转录的操纵子。

术语“变体”意指具有DNA酶活性并且在一个或多个(例如若干个)位置处包括取代的多肽。取代意指占据一个位置的氨基酸被一个不同的氨基酸置换，缺失意指除去占据一个位置的氨基酸，并且插入意指在与占据一个位置的氨基酸相邻处添加氨基酸，例如1至10个氨基酸，优选1至3个氨基酸。本发明的变体具有SEQ ID NO:1中所示的成熟多肽的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％的DNA酶活性。术语“DNA酶变体”意指具有DNA酶活性，并且与亲本DNA酶相比(例如与SEQ ID NO:1相比)在一个或多个(或一个或若干个)位置处包括改变(即，取代、插入、和/或缺失)的DNA酶。

如本文使用的术语“水硬度”或“硬度”或“dH”或“°dH”是指德国硬度。一度被定义为10毫克氧化钙/升水。

术语“野生型DNA酶”意指由天然存在的有机体(如在自然界中发现的真菌、细菌、古生菌、酵母、植物或动物)表达的DNA酶。

变体命名规则

出于本发明的目的，将SEQ ID NO:1中披露的多肽用于确定另一种DNA酶中的对应氨基酸残基。将另一种DNA酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1中所披露的多肽进行比对，并且基于该比对，使用例如如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(TheEuropean Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch)，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定与SEQ ID NO:1中所披露多肽中的任何氨基酸残基对应的氨基酸位置编号。使用的参数是空位开放罚分10、空位扩展罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。

可以通过使用若干计算机程序，使用其对应默认参数比对多个多肽序列来确定在另一种DNA酶中的对应氨基酸残基的鉴定，这些计算机程序包括但不限于MUSCLE(通过对数预期的多序列比较；版本3.5或更新版本；Edgar,2004,Nucleic Acids Research[核酸研究]32:1792-1797),MAFFT(版本6.857或更新版本；Katoh和Kuma,2002,Nucleic AcidsResearch[核酸研究]30:3059-3066；Katoh等人,2005,Nucleic Acids Research[核酸研究]33:511-518；Katoh和Toh,2007,Bioinformatics[生物信息学]23:372-374；Katoh等人,2009,Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]537:39-64；Katoh和Toh,2010,Bioinformatics[生物信息学]26:1899-1900)，以及采用ClustalW(1.83或更新版本；Thompson等人,1994,Nucleic Acids Research[核酸研究]22:4673-4680)的EMBOSS EMMA。

当另一种酶与SEQ ID NO:1的多肽相背离使得传统的基于序列的比较方法不能检测其相互关系时(Lindahl和Elofsson,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]295：613-615)，可以使用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中较高的敏感度可以使用搜索程序来获得，这些搜索程序利用多肽家族的概率表现(谱)来搜索数据库。例如，PSI-BLAST程序通过迭代数据库搜索过程来产生多个谱，并且能够检测远距离同源物(Atschul等人，1997,Nucleic Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402)。如果多肽的家族或超家族具有在蛋白结构数据库中的一个或多个代表，甚至可以实现更高的敏感度。程序，如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]287:797-815；McGuffin和Jones,2003,Bioinformatics[生物信息学]19:874-881)利用来自不同来源(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱、以及溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，Gough等人，2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]313:903-919的方法可以用于比对未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型，并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评估此类模型的准确度。

对于已知结构的蛋白质，若干工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如，蛋白的SCOP超家族已在结构上进行比对，并且那些比对是可访问的并且可下载的。可以使用多种算法(如距离比对矩阵(Holm和Sander,1998,Proteins[蛋白质]33:88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne,1998,Protein Engineering[蛋白质工程]11:739-747))比对两种或更多种蛋白质结构，并且这些算法的实施可以另外用于查询具有感兴趣的结构的结构数据库，以便发现可能的结构同源物(例如，Holm和Park,2000,Bioinformatics[生物信息学]16:566-567)。

在描述本发明的变体中，为了便于参考，对以下所述的命名法进行了改编。采用已接受的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。氨基酸位置表示为#₁、#₂等。

取代：对于氨基酸取代，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、被取代的氨基酸。因此，在位置#₁处的缬氨酸被丙氨酸取代被表示为“Val#₁Ala”或“V#₁A”。多个突变由加号(“+”)或逗号(，)分开，例如，“Val#₁Ala+“Pro#₂Gly”或V#₁A,P#₂G分别代表在位置#₁和#₂处的缬氨酸(V)和脯氨酸(P)被丙氨酸(A)和甘氨酸(G)取代。如果在给定位置中可以取代多于一种氨基酸，那么这些氨基酸被列于括号内，如[X]或{X}。因此，如果Trp和Lys两者都可以被取代，代替占据位置#₁的氨基酸，这被表示为X#₁{W,K}、X#₁[W,K]或X#₁[W/K]，其中X表示存在于亲本DNA酶(例如像SEQ ID NO:1中所示的DNA酶或与其具有至少60％同一性的DNA酶)的位置处的氨基酸残基。在一些情况下，这些变体可以表示为#₁{W,K}或X#₂P，表示待取代的氨基酸取决于亲本而变化。为了方便，当SEQ ID NO:1被用于对取代进行编号时，用SEQ IDNO:1中对应位置中的氨基酸(例如T1A)表示。然而，本领域技术人员将清楚，包含T1A的DNA酶变体不限于在对应于SEQ ID NO:1的位置1的位置处具有苏氨酸的亲本DNA酶。在位置1中具有例如天冬酰胺的亲本DNA酶中，本领域技术人员将翻译突变指定为T1A至N1A。在位置1中亲本DNA酶具有丙氨酸的情况下，本领域技术人员将认识到，亲本DNA酶在该位置处没有发生变化。这同样适用于以下描述的缺失和插入。

缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、*。因此，在位置#₁处的缬氨酸的缺失被表示为“Val#₁*”或“V#₁*”。多个缺失由加号(“+”)或逗号分开，例如“Val#₁*+Pro#₂*”或“V#₁*,P#₂*”。

插入：另外的氨基酸残基的插入，例如像在Val#₁后插入赖氨酸可以被表示为：Val#₁ValLys或V#₁VK。可替代地，另外的氨基酸残基的插入，如在V#₁后插入赖氨酸可以被表示为：*#₁aK。当插入多于一个的氨基酸残基，例如像在#₁后插入Lys和Ala时，这种插入可以被表示为：Val#₁ValLysGly或V#₁VKG。在此类情况下，还可以通过将小写字母添加到在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基位置编号处来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号，在该实例中：*#₁aK*#₁bG。

多种改变：包含多种改变的变体由加号(“+”)或由逗号(，)分开，例如“Val#₁Trp+Pro#₂Gly”或“V#₁W,P#₂G”代表在位置#₁和#₂处的缬氨酸和脯氨酸分别如上描述的被色氨酸和甘氨酸取代。

不同改变：当可以在一个位置处引入不同的改变时，这些不同的改变由逗号分开，例如“Val#₁Trp,Lys”或V#₁W,K代表在位置#₁处的缬氨酸被色氨酸或赖氨酸取代。因此，“Val#₁Trp,Lys+Pro#₂Asp”表示以下变体：“Val#₁Trp+Pro#₂Asp”、“Val#₁Lys+Pro#₂Asp”或V#₁W,K+P#₂D。

具体用于进化枝的命名法

出于本发明的目的，命名[IV]或[I/V]意指在该位置处的氨基酸可以是异亮氨酸(Ile，I)或缬氨酸(Val，V)。同样，对于如本文所述的其他组合，命名[LVI]和[L/V/I]意指在该位置处的氨基酸可以是亮氨酸(Leu，L)、缬氨酸(Val，V)或异亮氨酸(Ile，I)，并依次类推。除非进一步另有限制，否则氨基酸X被这样定义，使得它可以是20种天然氨基酸中的任一种。

具体实施方式

本发明提供了优选地从芽孢杆菌(特别是食物芽孢杆菌)获得的新颖DNA酶。本发明的DNA酶与具有SEQ ID NO:1的多肽包括至少60％序列同一性，并且与具有SEQ ID NO:1的DNA酶相比，包括在至少一个氨基酸位置处的改变。在一些方面，本发明的DNA酶变体包含氨基酸序列，该氨基酸序列在等同于SEQ ID NO:1中的位置的位置处包括做出的至少一个氨基酸取代。在一些方面，该DNA酶变体包含氨基酸序列，该氨基酸序列在等同于SEQ IDNO:1中的位置的位置处包括做出的至少一个氨基酸缺失。在一些方面，该DNA酶变体包含氨基酸序列，该氨基酸序列在等同于SEQ ID NO:1中的位置的位置处包括做出的至少一个氨基酸插入。本发明还涉及用于产生DNA酶变体的方法。本发明进一步涉及筛选方法。它并不旨在使本发明限于任何具体的产生变体的方法或筛选方法。与亲本DNA酶相比或与SEQ IDNO:1相比，本发明的DNA酶变体具有至少一个改进的特性。特性包括但不限于：稳定性如；在洗涤剂中的稳定性、储存稳定性、在洗涤中的稳定性和热稳定性、洗涤性能，特别是深层清洁性能、增加的表达水平和恶臭减少。

DNA酶变体

本发明的一些方面涉及SEQ ID NO:1的DNA酶变体或与其具有至少60％同一性的DNA酶的变体，并且涉及用于产生SEQ ID NO:1的DNA酶变体或与其具有至少60％同一性的DNA酶的方法。

本发明涉及在选自由以下组成的列表的一个或多个位置处包括改变的DNA酶：1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置，其中该变体具有DNA酶活性，并且其中该变体与具有SEQ ID NO 1中所示氨基酸序列的DNA酶相比具有至少一个改进的特性。

在一些方面，该变体与成熟亲本DNA酶的氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。

在一些方面，该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。

本发明进一步涉及包含SEQ ID NO:1的DNA酶亲本的变体，其中所述变体与SEQ IDNO:1相比在选自以下位置的至少一个位置中包括改变：对应于SEQ ID NO:1的位置的1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中该变体具有与SEQ ID NO:1至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列，其中该变体具有DNA酶活性，并且其中该变体与SEQ ID NO 1的DNA酶相比具有至少一个改进的特性。

在一个方面，本发明涉及根据前述权利要求中任一项所述的变体，该变体与SEQID NO:1中所示多肽相比，在对应于以下位置的一个或多个位置处包括改变：SEQ ID NO:1的1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽的整个长度具有至少80％的序列同一性，并且其中该变体具有DNA酶活性。

在一些方面，DNA酶变体具有改进的性能，其中该改进的性能是增加的稳定性，例如改进的洗涤剂稳定性、改进的洗涤稳定性、改进的储存稳定性和/或改进的热稳定性。

在一些优选的方面，该改变是取代并且本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1E、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中该变体具有DNA酶活性，并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO1编号)。

在甚至更优选的方面，该改变是取代并且本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中该变体具有DNA酶活性，并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)。

在一些方面，本发明的变体中的取代数目是1-20个，例如1-10个和1-5个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代。

在一些优选的方面，本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中该变体具有DNA酶活性，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)。

在一些方面，本发明涉及与SEQ ID NO:1具有至少60％序列同一性的DNA酶变体，其中当在相关测定中测试时，该变体与包含SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列的DNA酶相比，具有至少一个改进的特性。本发明的一些方面涉及当该DNA酶变体在相关测定中测试感兴趣的特性时具有高于1的改进因子的DNA酶变体，其中该参考DNA酶的特性被给予1的值。在一些方面，该特性是稳定性，如在洗涤剂中的储存稳定性，在另一个方面，该特性是洗涤性能，如深层清洁性能。

在一些方面，根据本发明的变体相对于亲本DNA酶具有一个或多个改进的特性，测量这些改进的特性为大于1.0的半衰期改进因子(HIF)，其中该改进的特性是稳定性，如在洗涤剂中的稳定性。

变体的半衰期改进因子(HIF)可以计算为T_1/2变体/T_1/2参考。与参考序列相比，改进的变体被鉴定为具有大于1.0的半衰期改进因子HIF的变体。

在一些方面，根据本发明的变体具有的半衰期改进因子(HIF)至少为：1.1；1.2；1.3；1.4；1.5；1.6；1.7；1.8；1.9；2.0；2.1；2.2；2.3；2.4；2.5；2.6；2.7、2.8；2.9；3.0、3.1；3.2；3.3；3.4；3.5、3.6、3.7、3.8、3.9；4.0、4.1；4.2；4.3；4.4；4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1；5.2；5.3；5.4；5.5、5.6、5.7、5.8、5.9；3.0、6.1；6.2；6.3；6.4；6.5、6.6、6.7、6.8、6.9；7.0、7.1；7.2；7.3；7.4；7.5、7.6、7.7、7.8、7.9；8.0、8.1；8.2；8.3；8.4；8.5、8.6、8.7、8.8、8.9；9.0、9.1；9.2；9.3；9.4；9.5、9.6、9.7、9.8、9.9；10.0、10.1；10.2；10.3；10.4；10.5、10.6、10.7、10.8、10.9；12、15、16、20、25或30。

可用于制造变体的蛋白质内的氨基酸位置是如下那些位置，其中，如与未改变的蛋白质即亲本相比，至少一个改变导致表现出改进特征的变体，即HIF>1.0。可以使用测定I或II或如实例2中所述地确定改进的特征。

在一些方面，与参考DNA酶(例如包含SEQ ID NO:1中所示多肽的DNA酶)相比，本发明的DNA酶变体具有改进的DNA酶活性，其中在下文测定和实例中描述的测定I或测定II中测试了活性。

活性改进因子(AIF)计算为变体的活性(参考条件下的斜率)除以参考的活性。具有改进的AIF>1.0的变体被鉴定为与对应参考相比具有改进的活性。

在一些方面，与参考DNA酶(例如包含SEQ ID NO:1中所示多肽的DNA酶)相比，本发明的DNA酶变体在洗涤剂中具有改进的稳定性，其中如在实例2中所述地测试了稳定性。

在一些方面，与参考DNA酶(例如包含SEQ ID NO:1中所示多肽的DNA酶)相比，这些DNA酶变体具有改进的深层清洁性能。

在一些优选的方面，本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)，并且其中该变体与亲本DNA酶(例如包含具有SEQ ID NO 1中所示氨基酸序列的多肽的DNA酶)相比具有至少一个改进的特性，任选地该改进的特性是以下中的一个或多个：改进的DNA酶活性，其中该活性在测定I或测定II中测试，改进的稳定性，其中如实例2中所述地测试稳定性和/或改进的深度清洁性能。

在一些方面，与亲本相比或与具有SEQ ID NO:1中所示多肽的DNA酶相比，本发明的DNA酶变体具有改进的稳定性，测量为半衰期改进因子HIF。

在一些优选的方面，本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中与亲本DNA酶(例如包含具有SEQ ID NO 1中所示氨基酸序列的多肽的DNA酶)相比，每个取代提供一种具有增加稳定性的DNA酶变体，该稳定性测量为至少1.05，如1.08、如1.1、如1.15、如1.2、如1.25、如1.3、如1.4、如1.5、如1.6、如1.7、如1.8、如1.9、如2、如3、如4、如5或如至少10的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)。

在一些优选的方面，本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、P6V、S7D、K8V、S9K、S9Q、S9V、A10D、A10M、A10I、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、Q14M、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、V49R、L51I、K52I、K52Q、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、P63A、T65L、T65I、T65V、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、D83C、D83F、L92T、A93G、G99S、S101D、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、T104S、T104P、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、G145V、G145E、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、T157S、Y159H、K160R、W161L、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、S164R、S164H、S164N、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D和Y182Q，其中每个取代提供一种具有增加稳定性的DNA酶变体，该稳定性测量为至少1.1的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)。

在一些优选的方面，本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、P6V、S7D、K8V、S9K、A10D、Q12S、Q12V、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、Q14M、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19N、T19L、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S30K、S30D、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、V49R、K52I、K52Q、A55S、D56I、D56L、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、P63A、T65L、S68V、S68I、S68W、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、D83C、A93G、S101D、S102M、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S116Q、A125K、S126I、S126E、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、G145V、G145E、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、S156C、T157S、Y159H、W161L、G162Q、G162N、G162D、G162M、S164R、S164H、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S168V、S168E、S168D、K170S、K170L、T171D、T171E、T171N、A172G、L173T、L173A、Q174L、G175D、G175E、G175N、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G和Y182A，其中每个取代提供一种具有增加稳定性的DNA酶变体，该稳定性测量为至少1.15的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQID NO 1编号)。

在一些优选的方面，本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、P6V、K8V、A10D、Q12S、Q12V、S13D、S13Y、S13T、S13Q、A17C、A17V、T19K、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S30K、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、Q40V、S42G、S42C、K52I、K52Q、A55S、D56I、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、Y58A、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、P63A、T65L、S68V、S68I、S68W、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、T77N、T77Y、F78L、F78I、T79G、T79R、N80K、A93G、S101D、S102M、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S126I、S126E、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、G145V、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、K152H、S156C、G162Q、G162N、G162D、S164R、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S168V、S168E、S168D、K170S、K170L、T171D、T171E、A172G、L173T、L173A、Q174L、G175D、G175E、G175N、L177I、N178D、N178E、N178T、S181R、S181E、Y182M、Y182C和Y182K，其中每个取代提供一种具有增加稳定性的DNA酶变体，该稳定性测量为至少1.2的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ IDNO 1编号)。

在一些优选的方面，本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、Q12S、Q12V、A17C、T22P、T22A、T22V、T22D、Q40V、K52I、K52Q、A55S、D56I、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S68V、V76G、V76L、V76C、T77N、F78L、A93G、T105V、K107L、Q109K、A112S、S126I、G132R、G145V、A147H、A147R、A147K、A147Q、S156C、G162Q、Q166D、S167M、S168V、K170S、T171D、L173T、L173A、G175D、G175E和L177I，其中每个取代提供一种具有增加稳定性的DNA酶变体，该稳定性测量为至少1.5的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)。

在一些优选的方面，本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO 1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、Q12S、Q12V、A17C、T22P、Q40V、K52I、S57W、S57Y、S57F、V76G、Q109K、A112S、A147H、A147R、A147K、K170S、T171D和G175D，其中每个取代提供一种具有增加稳定性的DNA酶变体，该稳定性测量为至少2.0的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)。

在一些特别优选的方面，本发明的DNA酶变体包括一个或多个取代(与SEQ ID NO1相比)，其中该一个或多个取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T22P、S25P、S57Y、S57W、S57F、S59V、S68V、V76L、T77Y、F78L、A93G、Q109R、S116D、T127V、S144P、A147H、A147R、G162Q、Q166D、S167L、S167F、G175D、G175N和N178D，其中每个取代提供一种与SEQ IDNO 1中所示多肽相比具有至少一个改进特性的DNA酶变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO1编号)。

在一个实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改进(增加)的比活性。

在一个实施例中，与亲本酶相比，该变体在储存条件下具有改进(增加)的稳定性。

在一个实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改进(增加)的热稳定性。

与亲本DNA酶(如具有SEQ ID NO 1中所示氨基酸序列的DNA酶)相比，本发明的DNA酶变体具有至少一个改进的特性。当引入SEQ ID NO1或与其具有至少60％序列同一性的多肽中时，这些突变中的每个提供至少一个改进的特性，如改进的稳定性。本领域技术人员将清楚，这些突变中的每个均提供了改进的效果，因此2、3、4等个以上取代可以增加该效果。因此，本发明的一些方面涉及包含选自下组的取代中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个的DNA酶变体，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W(根据SEQ ID NO 1编号)。

优选的取代包括以下突变中的一个或多个：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E或Y182T。

特别优选的取代还包括以下中的一个或多个：T1I、T1V、Q12S、Q12V、A17C、T22P、T22A、T22V、T22D、Q40V、K52I、A55S、D56I、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S68V、V76G、V76L、V76C、T77N、A93G、T105V、K107L、A112S、S126I、G132R、G145V、A147Q、S156C、G162Q、Q166D、S167M、S168V、K170S、T171D、L173T、L173A、G175D、G175E或L177I。

特别优选的取代还包括以下中的一个或多个：T1I、T1V、T22P、S25P、S57W、S57F、S59V、S68V、V76L、T77Y、A93G、Q109R、S116D、T127V、S144P、G162Q、Q166D、S167L、S167F、G175D、G175N或N178D。

在一些方面，包含任何以上突变的本发明DNA酶变体在深度清洁中是有效的。

根据本发明的变体可以包含对以上列出的突变的另外突变。这些另外的修饰应优选地不显著改变变体DNA酶的改进特性。

保守取代的实例在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)、以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸以及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。

可以根据本领域已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的DNA酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人，1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性位点还可以通过对结构的物理分析来确定，如通过这样的技术确定：如核磁共振、晶体学、电子衍射、或光亲和标记，连同对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见例如，de Vos等人，1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人，1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人，1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。

本发明的变体优选地包含保守基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)，这些保守基序在如下所述的GYS-进化枝的DNA酶中共享。如“定义”中所解释的，进化枝包含基于追溯至共同祖先的同源性特征聚集在一起的一组多肽。形成一组例如系统发生树中所示的进化枝的多肽经常享有共同的特性，并且与不在进化枝中的其他多肽相比更密切相关。

因此，本发明的一个优选方面涉及DNA酶亲本的变体，其中该变体包含一个或两个基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)，其中该变体与SEQ ID NO 1相比包括一个或多个取代，其中该取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少80％的序列同一性并且该变体具有DNA酶活性。

本发明涉及DNA酶亲本的变体，其中该变体包含一个或两个基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)，其中该变体与SEQ ID NO 1相比包括一个或多个取代，其中该取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W(根据SEQ ID NO 1编号)，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少80％、至少85、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％但小于100％的序列同一性并且该变体具有DNA酶活性。

亲本DNA酶

优选地，DNA酶亲本选自任何以下酶类别：E.C.3.1.11、E.C.3.1.12、E.C.3.1.15、E.C.3.1.16、E.C.3.1.21、E.C 3.1.22、E.C 3.1.23、E.C 3.1.24和E.C.3.1.25。

优选地，DNA酶亲本从微生物获得并且该DNA酶是微生物酶。DNA酶优选地是真菌或细菌来源的。

DNA酶亲本优选地可从芽孢杆菌获得例如，芽孢杆菌，如食物芽孢杆菌、芽孢杆菌属物种-62451、堀越氏芽孢杆菌、芽孢杆菌属物种-16840、芽孢杆菌属物种-62668、芽孢杆菌属物种-13395、霍耐克芽孢杆菌、芽孢杆菌属物种-11238、病研所芽孢杆菌、芽孢杆菌属物种-62520、藻居芽孢杆菌、越南芽孢杆菌、花津滩芽孢杆菌、印度芽孢杆菌、黄海芽孢杆菌、路西法芽孢杆菌、芽孢杆菌属物种SA2-6。

DNA酶亲本优选地属于包含在GYS-进化枝中的DNA酶组，该DNA酶是包含保守基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)并且共享相似结构和功能特性的DNA酶，参见例如图1中的比对和WO 2017/060475的实例11中的系统发生树的产生。GYS-进化枝的DNA酶优选地从芽孢杆菌属获得。

本发明的一个实施例涉及具有DNA酶活性的GYS-进化枝的DNA酶亲本的变体，任选地其中该亲本包含基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)、ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)中的一个或两个，并且其中该多肽选自下组的多肽：

a)与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

b)与SEQ ID NO:2中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

c)与SEQ ID NO:3中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

d)与SEQ ID NO:4中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

e)与SEQ ID NO:5中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

f)与SEQ ID NO:6中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

g)与SEQ ID NO:7中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

h)与SEQ ID NO:8中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

i)与SEQ ID NO:9中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

j)与SEQ ID NO:10中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

k)与SEQ ID NO:11中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

l)与SEQ ID NO:12中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

m)与SEQ ID NO:13中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

n)与SEQ ID NO:14中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

o)与SEQ ID NO:15中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

p)与SEQ ID NO:16中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

q)与SEQ ID NO:17中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

r)与SEQ ID NO:18中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

s)与SEQ ID NO:19中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

t)与SEQ ID NO:20中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

u)与SEQ ID NO:21中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

v)与SEQ ID NO:22中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，

w)与SEQ ID NO:23中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，以及

x)与SEQ ID NO:24中所示多肽具有至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。

具有DNA酶活性并且包含GYS-进化枝基序的多肽已显示出特别好的深度清洁特性，例如该DNA酶特别有效地从物品(如纺织品或硬质表面)去除或减少有机物的组分，如生物膜组分。

在一些优选的方面，本发明涉及DNA酶亲本的变体，其中DNA酶亲本属于GYS-进化枝，并且其中亲本DNA酶包含一个或两个基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)。

亲本DNA酶可以是(a)与SEQ ID NO:1的成熟多肽具有至少60％序列同一性的多肽，(b)由在高严格条件下与成熟多肽编码序列或其全长互补体杂交的多核苷酸编码的多肽；或(c)由与成熟多肽编码序列具有至少60％序列同一性的多核苷酸编码的多肽。

在一些方面，该亲本与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，该多肽具有DNA酶活性。在一个方面，该亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:1中所示多肽相差多达10个氨基酸，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。

在一些方面，该亲本包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成。

在一些方面，该亲本是芽孢杆菌DNA酶，例如食物芽孢杆菌DNA酶，例如本文披露为SEQ ID NO:1的DNA酶。

使用DNA酶变体

本发明的DNA酶变体适合用于在清洁如衣物中使用。因此，本发明的一些方面涉及一种用于洗涤物品的方法，其中该方法包括以下步骤：

a.将物品暴露于包含本发明的DNA酶变体的洗涤液；

b.完成至少一个洗涤循环；并且

c.任选地冲洗该物品，

其中该物品是纺织品。

该液体溶液的pH在1至11的范围内，如在5.5至11的范围内，如在7至9的范围内，在7至8的范围内或在7至8.5的范围内。

该洗涤液可以具有在5℃至95℃范围内，或在10℃至80℃范围内，在10℃至70℃范围内，在10℃至60℃范围内，在10℃至50℃范围内，在15℃至40℃范围内或在20℃至30℃范围内的温度。在一些方面，该洗涤液的温度是30℃。

本发明进一步涉及根据该方法洗涤的物品。

可以将本发明的DNA酶变体添加至洗涤液中。

洗涤液中DNA酶变体酶的浓度典型地在以下范围内：0.00004-100ppm酶蛋白，如在0.00008-100范围内、在0.0001-100范围内、在0.0002-100范围内、在0.0004-100范围内、在0.0008-100范围内、在0.001-100ppm酶蛋白的范围内、0.01-100ppm酶蛋白，优选地0.05-50ppm酶蛋白，更优选地0.1-50ppm酶蛋白，更优选地0.1-30ppm酶蛋白，更优选地0.5-20ppm酶蛋白，并且最优选地0.5-10ppm酶蛋白。

在一些方面，本发明的DNA酶变体有效预防和/或减少恶臭。生物膜或EPS的存在意味着，衣物洗涤物品变得粘稠并且因此污垢粘附到粘稠区域。当脏的衣物洗涤物品与不太脏的衣物洗涤物品一起洗涤时，洗涤液中存在的污垢倾向于粘附到衣物洗涤物品(例如通过再沉积)，特别是在衣物洗涤物品如上描述是粘稠的情况下。其结果是，该衣物洗涤物品在洗涤后比洗涤前更“脏”。在一些方面，与亲本DNA酶相比，本发明的DNA酶变体具有改进的深度清洁特性，并且在一些方面，本发明的DNA酶变体降低了粘性和/或再沉积。

在一些方面，本发明涉及根据本发明的DNA酶变体用于深度清洁物品的用途，其中该物品是织物或硬质表面。

此外，本发明涉及根据本发明的DNA酶变体用于防止和/或减少污垢在物品上的粘附的用途。在一些方面，该物品是纺织品。当该污垢没有粘附到该物品时，该物品显得更干净。因此，本发明进一步涉及根据本发明的DNA酶变体用于维持或改进该物品白度的用途。

本发明进一步涉及包含根据本发明的DNA酶变体的洗涤剂组合物，优选地具有洗涤剂佐剂成分。包含根据本发明的DNA酶变体的洗涤剂组合物可以用于深度清洁物品、用于防止和/或减少物品的粘性、用于预处理物品上的污渍、用于在洗涤循环过程中防止和/或减少污垢的再沉积、用于防止和/或减少污垢在物品上的粘附、用于维持或改进物品的白度和/或用于防止和/或减少物品的恶臭。

变体的制备

本发明还涉及用于获得与亲本DNA酶相比(例如与SEQ ID NO:1中所示多肽相比)具有至少一个改进特性的DNA酶变体的方法。

本发明的一个方面涉及用于获得DNA酶变体的方法，该方法包括：

b)并且回收该变体。

与SEQ ID NO:1中所示多肽相比，该方法优选地包括引入1-20个，例如1-10个和1-5个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。

本发明的一些方面涉及用于获得与亲本DNA酶相比(例如与SEQ ID NO:1中所示多肽相比)具有至少一个改进特性的DNA酶变体的方法，该方法包括：

a)在选自下组的一个或多个位置处向与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％同一性的亲本DNA酶中引入取代，该组由以下组成：1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、13、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中该变体与SEQ IDNO:1中所示多肽具有至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的序列同一性；并且

b)回收该变体。

本发明进一步涉及用于获得与SEQ ID NO:1相比包括引入至少一个改变的DNA酶变体的方法，其中该改变是取代并且其中该取代选自下组，该组由以下组成：与SEQ ID NO:1中所示多肽相比的T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W。

本发明的一些方面涉及一种用于获得DNA酶变体的方法，该方法包括向亲本DNA酶中引入在一个或多个位置处的改变，其中DNA酶亲本属于GYS-进化枝，并且其中亲本DNA酶包含基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)中的一个或两个。

本发明的一些方面涉及一种用于获得DNA酶变体的方法，该方法包括向亲本DNA酶中引入在一个或多个位置处的改变，其中该亲本DNA酶选自下组的多肽：

一些方面涉及获得DNA酶变体的方法，其中亲本DNA酶从芽孢杆菌属获得。

一些方面涉及获得DNA酶变体的方法，其中DNA酶亲本与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少80％，如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99但小于100％的序列同一性。

本发明的变体可以通过程序，(如以下提到的那些)来制备。

定点诱变是在编码该亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点处引入一个或多个(例如，若干个)突变的技术。

通过涉及使用含有所希望的突变的寡核苷酸引物的PCR可以体外实现定点诱变。还可以通过盒式诱变进行体外定点诱变，该盒式诱变涉及由限制酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处断裂并且随后将含有突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常，消化质粒和寡核苷酸的限制性酶是相同的，从而允许质粒和插入物的粘性末端彼此连接。参见例如，Scherer和Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]76:4949-4955；和Barton等人，1990,Nucleic Acids Res.[核酸研究]18:7349-4966。

还可以通过本领域已知的方法在体内实现定点诱变。参见例如，美国专利公布申请号2004/0171154；Storici等人，2001,Nature Biotechnol.[自然生物技术杂志]19:773-776；Kren等人，1998,Nat.Med.[自然医学]4:285-290；以及Calissano和Macino,1996,Fungal Genet.Newslett.[真菌遗传学时事通讯]43:15-16)。

合成基因构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码感兴趣的多肽。基因合成可以利用多种技术来进行，如由Tian等人(2004，Nature[自然]432:1050-1054)所述的基于多路微芯片的技术以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。

使用已知的诱变、重组、和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序可以做出单个或多个氨基酸取代、缺失、和/或插入并对其进行测试，这些相关的筛选程序是如由以下文献披露的那些：Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO95/22625。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如，Lowman等人，1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；US 5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人，1986,Gene[基因]46:145；Ner等人，1988,DNA 7:127)。

诱变/改组方法可以与高通量自动化筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的诱变多肽的活性(Ness等人，1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可以从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并且使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中个体氨基酸残基的重要性。

通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多方面来实现半合成基因的构建。半合成构建典型地是利用合成的多核苷酸片段的过程结合PCR技术。因此，基因的限定区域可以从头合成，而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增，然而还有其他区域可以进行易错PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。

核酸构建体

本发明还涉及包含编码本发明的DNA酶变体的多核苷酸的核酸构建体，该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列，该一个或多个控制序列在适合的宿主细胞中在与该控制序列相容的条件下指导编码序列的表达。

可以用多种方式操作该多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可以是希望的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。

该控制序列可以是启动子，即，被宿主细胞识别用于表达编码本发明多肽的多核苷酸的多核苷酸。该启动子含有转录控制序列，其介导所述多肽的表达。启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型和杂合型启动子，并且可以从编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。

用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的适合启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人，1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人，1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人，1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。进一步的启动子描述于Gilbert等人，1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94中的“Useful proteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”；和Sambrook等人，1989，见上文中。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。

用于指导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中的转录的适合启动子的实例是从以下的基因获得的启动子：构巢芽孢杆菌乙酰胺酶、黑芽孢杆菌中性α-淀粉酶、黑芽孢杆菌酸稳定性α-淀粉酶、黑芽孢杆菌或泡盛芽孢杆菌葡糖淀粉酶(glaA)、食物芽孢杆菌TAKA淀粉酶、食物芽孢杆菌碱性蛋白酶、食物芽孢杆菌丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶、以及里氏木霉翻译延长因子，以及NA2tpi启动子(一种修饰的启动子，其来自芽孢杆菌中性α-淀粉酶基因，其中未翻译的前导子已由芽孢杆菌丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导子替代；非限制性实例包括修饰的启动子，其来自黑芽孢杆菌中性α-淀粉酶的基因，其中未翻译的前导子已由构巢芽孢杆菌或食物芽孢杆菌丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导子替代)；及其突变型、截短型、和杂合型启动子。其他启动子描述于美国专利号6,011,147中。

在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、以及酿酒酵母3磷酸甘油酸激酶。Romanos等人，1992,Yeast[酵母]8:423-488描述了酵母宿主细胞的其他有用的启动子。

控制序列还可以是由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的3’末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可以用于本发明中。

细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。

用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：构巢芽孢杆菌乙酰胺酶、构巢芽孢杆菌邻氨基苯甲酸合酶、黑芽孢杆菌葡糖淀粉酶、黑芽孢杆菌α-葡糖苷酶、食物芽孢杆菌TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶、以及里氏木霉翻译延长因子。

用于酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)、以及酿酒酵母甘油醛-3磷酸脱氢酶。对于酵母宿主细胞其他有用的终止子由Romanos等人，1992，见上文描述。

控制序列还可以是在启动子下游并且在基因编码序列上游的mRNA稳定子区域，它增加该基因的表达。

适合的mRNA稳定子区域的实例从以下获得：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人，1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。

控制序列还可以是前导子，即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5’末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导子。

用于丝状真菌宿主细胞的优选前导子从食物芽孢杆菌TAKA淀粉酶和构巢芽孢杆菌丙糖磷酸异构酶的基因获得。

对于酵母宿主细胞适合的前导子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶(ENO 1)、酿酒酵母3磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子、和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。

控制序列还可以是聚腺苷酸化序列，一种可操作地连接至该多核苷酸的3’末端并且当转录时由宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加至所转录的mRNA的信号的序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何聚腺苷酸化序列。

用于丝状真菌宿主细胞的优选聚腺苷酸化序列从以下的基因获得：构巢芽孢杆菌邻氨基苯甲酸合酶、黑芽孢杆菌葡糖淀粉酶、黑芽孢杆菌α-葡糖苷酶、食物芽孢杆菌TAKA淀粉酶、和尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。

酵母宿主细胞的有用的聚腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。

控制序列还可以是编码与多肽的N末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5’端本身可以含有在翻译阅读框中天然与编码多肽的编码序列区段相连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5’端可以含有对于该编码序列是外源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不含有信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以单纯地替代天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。

用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837生麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)、和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。进一步的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述。

用于丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下的基因获得的信号肽编码序列：黑芽孢杆菌中性淀粉酶、黑芽孢杆菌葡糖淀粉酶、食物芽孢杆菌TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶、和米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶。

从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得用于酵母宿主细胞的有用信号肽。其他有用的信号肽编码序列由Romanos等人，1992，见上文描述。

控制序列还可以是编码位于多肽的N末端的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原一般是无活性的并且可以通过催化断裂或自身催化断裂来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(Myceliophthora thermophila laccase)(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶(Rhizomucor miehei aspartic proteinase)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)α-因子。

在信号肽序列和前肽序列二者均存在的情况下，该前肽序列位于紧邻多肽的N末端且该信号肽序列位于紧邻该前肽序列的N末端。

还可以为希望的是添加调节序列，这些调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些序列。原核系统中的调节序列包括lac、tac、以及trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑芽孢杆菌葡糖淀粉酶启动子、食物芽孢杆菌TAKAα-淀粉酶启动子、和食物芽孢杆菌葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子、以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是那些允许基因扩增的那些序列。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因、以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码多肽的多核苷酸将可操作地连接至调节序列。

表达载体

本发明还涉及包含编码本发明的DAN酶变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。多个核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包括一个或多个便利的限制位点以允许编码该多肽的多核苷酸在此类位点处的插入或取代。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中来表达该多核苷酸。在产生该表达载体时，该编码序列位于该载体中，这样使得该编码序列与该用于表达的适当控制序列可操作地连接。在另一个方面，已通过核苷酸取代对多核苷酸序列密码子进行修饰，以对应于旨在用于产生本发明多肽的宿主有机体的密码子使用。重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与有待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是线状或闭合的环状质粒。

载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体、或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何装置。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合到基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有有待引入宿主细胞基因组的总DNA，或者可以使用转座子。

载体优选地含有允许简单地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标志。选择性标志是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。

细菌选择性标志的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标志。酵母宿主细胞的适合的标志包括但不限于：ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标志包括但不限于，adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5’磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)、和trpC(邻氨基苯甲酸合酶)、以及其等效物。优选在芽孢杆菌细胞中使用的是构巢芽孢杆菌或食物芽孢杆菌amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选在木霉属细胞中使用的是adeA、adeB、amdS、hph、以及pyrG基因。

选择性标志可以是如描述于WO 2010/039889中的双选择性标志系统。在一些方面，双选择性标志是hph-tk双选择性标志系统。

载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。对于整合到该宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，该载体可以含有用于指导通过同源重组整合到宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性，整合的元件应含有足够数目的核酸，如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对，其与对应的靶序列具有高度的序列同一性以增强同源重组的可能性。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码多核苷酸或编码多核苷酸。另一方面，载体可以通过非同源重组整合到宿主细胞的基因组中。

对于自主复制，载体可以进一步包含使载体能够在所讨论的宿主细胞中自主地进行复制的复制起点。复制起点可以是在细胞中有功能的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。

细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。

用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。

在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人，1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人，1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175；WO00/24883)。可以根据WO 00/24883中披露的方法实现AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。

可以将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞中以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标志基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择含有选择性标志基因的经扩增的拷贝的细胞、以及由此该多核苷酸的另外的拷贝。

用于连接以上描述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如，Sambrook等人，1989，见上文)。

宿主细胞

本发明还涉及重组宿主细胞，这些宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持，如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。

该宿主细胞可以是在本发明多肽的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。

原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于芽孢杆菌属(Bacillus)、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、以及链霉菌属(Streptomyces)。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌(E.coli)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属Salmonella)、以及脲原体属(Ureaplasma)。

细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、以及苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)细胞。

细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)、以及马链球菌兽瘟亚种(Streptococcus equisubsp.Zooepidemicus)细胞。

细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌细胞，包括但不限于不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、以及浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)细胞。

可以通过如下方法实现将DNA引入芽孢杆菌属细胞中：原生质体转化(参见例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829，或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)、或接合(参见例如，Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan，1983，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人，1988，Nucleic AcidsRes.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人，2004，Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49：399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人，1989，J.Bacteriol.[细菌学杂志]171：3583-3585)或转导(参见例如，Burke等人，2001，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98：6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人，2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可以通过以下来实现：天然感受态(naturalcompetence)(参见例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如，Catt和Jollick，1991，Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如，Buckley等人，1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见例如，Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。

该宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物、或真菌细胞。

宿主细胞可以是真菌细胞。如本文使用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)、和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和全部有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人，在Ainsworth and Bisby’sDictionary of The Fung[安斯沃思和拜斯比真菌词典]，第8版，1995，CAB International[国际应用生物科学中心]，University Press[大学出版社]，Cambridge，UK[英国剑桥]中定义的)。

真菌宿主细胞可以是酵母细胞。如本文使用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)、和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可能在将来变化，出于本发明的目的，酵母应如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner、Passmore和Davenport编，Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9]，1980)中所描述的那样定义。

酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属、或耶氏酵母属细胞，如乳酸克鲁维酵母、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母、或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。

真菌宿主细胞可以是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门的亚门(如由Hawksworth等人，1995，见上文，所定义)的所有丝状形式。丝状真菌一般的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳多糖、甘露聚糖、以及其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延长，而碳分解代谢是专性需氧的。相比之下，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)，而碳分解代谢可以是发酵的。

丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属(Acremonium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、短梗霉属(Aureobasidium)、烟管菌属(Bjerkandera)、拟蜡菌属(Ceriporiopsis)、金孢子菌属(Chrysosporium)、鬼伞菌属(Coprinus)、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属(Cryptococcus)、线黑粉酵母属(Filibasidium)、镰孢属(Fusarium)、腐质霉属(Humicola)、梨孢菌属(Magnaporthe)、毛霉属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、新美鞭菌属(Neocallimastix)、脉孢菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉菌属(Penicillium)、平革菌属(Phanerochaete)、白腐菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属(Piromyces)、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属(Schizophyllum)、踝节菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、梭孢壳属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、栓菌属(Trametes)、或木霉属(Trichoderma)细胞。

例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛芽孢杆菌、臭芽孢杆菌、烟芽孢杆菌、日本芽孢杆菌、构巢芽孢杆菌、黑芽孢杆菌、食物芽孢杆菌、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsis aneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsis gilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsis rivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporiummerdarium)、毡金孢子菌、昆士兰金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolus hirsutus)、杆孢状镰孢、禾谷镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢(Fusarium graminum)、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢平革菌(Phanerochaetechrysosporium)、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。

可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、和细胞壁重建的方法以本身已知的方式转化。用于转化芽孢杆菌属和木霉属宿主细胞的适合程序描述于EP238023、Yelton等人，1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474，和Christensen等人，1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422中。用于转化镰孢属(Fusarium)物种的适合方法由Malardier等人，1989,Gene[基因]78:147-156、和WO96/00787描述。可以使用由如以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑，Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷，第182-187页，Academic Press,Inc.[学术出版社有限公司],纽约；Ito等人，1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人，1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。

产生方法

本发明还涉及产生本发明的DNA酶变体的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该DNA酶变体的条件下培养细胞；和任选地(b)回收该DNA酶变体。在一些方面，该细胞是芽孢杆菌属细胞。在另一方面，该细胞是食物芽孢杆菌细胞。

本发明还涉及产生本发明的DNA酶变体的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该DNA酶变体的条件下培养本发明的重组宿主细胞；和任选地(b)回收该DNA酶变体。

宿主细胞是在适合用于使用本领域已知的方法产生多肽的营养介质中培养的。例如，可以通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵器中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批、或固态发酵)培养细胞，该培养在适合的介质中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源以及无机盐的适合的营养介质中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果多肽被分泌到该营养介质中，那么可以直接从该介质回收多肽。如果多肽不进行分泌，那么其可以从细胞裂解液中进行回收。

可以使用本领域已知的对DNA酶变体多肽特异的方法来检测DAN酶变体。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成、或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定多肽的活性。

可以使用本领域已知的方法来回收该DNA酶变体多肽。例如，可以通过常规程序从该营养介质中回收该DNA酶变体多肽，这些常规程序包括但不局限于收集、离心、过滤、萃取、喷雾干燥、蒸发、或沉淀。在一些方面，回收包含该DNA酶变体的发酵液。

可以通过本领域已知的多种程序纯化多肽以获得基本上纯的多肽，这些程序包括但不限于色谱法(例如，离子交换、亲和、疏水、层析聚焦和大小排阻)、电泳程序(例如，制备型等电聚焦)、差示溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE、或提取(参见例如，ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约，1989)。

在替代方面，不回收多肽，而是将表达多肽的本发明宿主细胞用作变体的来源。

组合物

本发明进一步涉及包含至少一种根据本发明的DNA酶变体以及优选地洗涤剂佐剂成分的洗涤剂组合物。该洗涤剂组合物可以用于改进深度清洁效果，包括但不限于深度清洁物品、防止和/或减少物品的粘性、用于预处理物品上的污渍、用于在洗涤循环过程中防止和/或减少污垢的再沉积、用于防止和/或减少污垢在物品上的粘附、用于维持或改进物品的白度和用于防止和/或减少物品的恶臭。本发明的DNA酶变体在粉末和液体洗涤剂中是有用的。

本发明的一些方面涉及包含DNA酶变体和洗涤剂佐剂的洗涤剂组合物，该DNA酶变体与SEQ ID NO:1中所示多肽相比在一个或多个选自下组的位置处包括改变，该组由以下组成：1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、13、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182。

在本发明的一些方面，该洗涤剂组合物包含DNA酶变体和洗涤剂佐剂，该DNA酶变体与SEQ ID NO:1中所示多肽相比包括一个或多个选自下组的取代，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W。

在本发明的一些方面，该洗涤剂佐剂成分选自下组，该组由以下组成：表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或色素。

洗涤剂佐剂成分可以是表面活性剂。在包含DNA酶变体的洗涤剂组合物中包括表面活性剂的一个优点是洗涤性能得以改进。在一些方面，洗涤剂佐剂成分是助洗剂或粘土去污剂/抗再沉积剂。

在一些方面，洗涤剂佐剂成分是酶。该洗涤剂组合物可以包含一种或多种酶，如以下指定的。该一种或多种酶可以选自下组，该组由以下组成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶。以下描述了适合用于本发明洗涤剂组合物的特定酶。

该洗涤剂组合物可以被配制为棒、均匀的片剂、以及具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。该洗涤剂组合物可以是液体洗涤剂、粉末洗涤剂或颗粒洗涤剂。

本发明的一些方面涉及包含DNA酶的衣物洗涤或清洁组合物，按组合物的重量(wt％)计优选地处于从约0.000001wt％至约1wt％的水平、从约0.0001wt％至约1wt％的水平、从约0.0002wt％至约1wt％的水平、从约0.0005wt％至约1wt％的水平、从约0.001wt％至约1wt％的水平、从约0.002wt％至约1wt％的水平、从约0.005wt％至约1wt％的水平、优选地从约0.01wt％至约0.5wt％的水平、优选地从0.0002wt％至约1wt％的水平。这些量是每单位活性酶的wt％，例如按组合物的重量计从约0.00001wt％至约1wt％的DNA酶。

具有DNA酶活性的活性酶的浓度为优选地至少0.00001％、优选地至少0.00002％、优选地至少0.0001wt％、优选地至少0.0002wt％、优选地至少0.001wt％、优选地至少0.002wt％、优选地至少0.005wt％、优选地至少0.01wt％、优选地至少0.02wt％、优选地至少0.05wt％、优选地至少0.1wt％的总洗涤剂浓度。

酶量还可以是以ppm(mg/L)活性酶蛋白计。因此，在一个方面，组合物中DNA酶的量是至少0.00001ppm、0.00002ppm、0.00005ppm、0.0001ppm、0.0002ppm、0.0005ppm、0.001ppm、0.002ppm、0.005ppm、0.01ppm、0.02ppm、0.05ppm、0.1ppm、0.2ppm、0.5ppm、1ppm、2ppm、5ppm、10ppm或至少20ppm DNA酶。在一个方面，组合物中DNA酶的量在从约0.00001ppm至约10ppm的范围内、或在从约0.0001ppm至约2ppm的范围内、或在从约0.001ppm至约2ppmDNA酶的范围内。

在一些方面，该洗涤剂组合物是液体或粉末衣物洗涤剂，适合用于例如在高温和/或高pH下(如在或高于40℃和/或在或高于pH 8下)的洗涤。在一些方面，该洗涤剂组合物是液体或粉末衣物洗涤剂，适合用于例如在低温和/或低pH下(如在或低于20℃和/或pH 6下)的洗涤。该洗涤剂还可以被配制成单位剂量洗涤剂和/或任选具有最少的水或无水的致密洗涤剂。该洗涤剂还可以是餐具洗涤洗涤剂。衣物和餐具洗涤洗涤剂可以是无磷的。

液体洗涤剂组合物

本发明的DNA酶变体还可以配制在液体衣物洗涤组合物(如液体衣物洗涤组合物)中，该组合物包含：

a)每升洗涤剂中至少0.00001例如0.005mg的活性DNA酶变体蛋白，

和任选地

b)0wt％至60wt％的至少一种表面活性剂，以及任选地

c)0wt％至50wt％的至少一种助洗剂

该表面活性剂可以是在如上描述的非离子、阴离子和/或两性离子型表面活性剂中选择的，优选地阴离子或非离子型表面活性剂也可以使用两性离子型表面活性剂。一般而言，优选是漂白剂稳定的表面活性剂。优选的阴离子型表面活性剂是硫酸盐表面活性剂以及特别地烷基醚硫酸盐，尤其是C-9-15醇醚硫酸盐、C12-15伯醇乙氧基化物、C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐，如单十二烷基酯硫酸盐。阴离子型表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，具体地是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸的盐(皂)、及其组合。

阴离子型表面活性剂优选地以盐的形式添加至洗涤剂中。在这些盐中的适合阳离子是碱金属离子，如钠、钾和锂以及铵盐，例如(2-羟基乙基)铵、二(2-羟基乙基)铵和三(2-羟基乙基)铵盐。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化的胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品、及其组合。可商购的非离子型表面活性剂包括来自BASF公司的Plurafac^TM、Lutensol^TM和Pluronic^TM，来自科宁公司(Cognis)的Dehypon^TM系列和来自科莱恩特公司(Clariant)的Genapol^TM系列。

优选地，助洗剂选自磷酸盐、柠檬酸钠助洗剂、碳酸钠、硅酸钠、铝硅酸钠(沸石)。适合的助洗剂是碱金属或磷酸铵、聚磷酸盐、膦酸盐、聚磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硼酸盐、柠檬酸盐和聚羧酸盐。柠檬酸盐助洗剂，例如柠檬酸及其可溶性盐(特别是钠盐)是聚羧酸盐助洗剂。柠檬酸盐可以与沸石、硅酸盐像BRITESIL类型、和/或层状硅酸盐助洗剂组合使用。助洗剂优选以按重量计约0％-65％(如按重量计约5％至约50％)的量添加。在衣物洗涤洗涤剂中，助洗剂的水平典型地为按重量计约40％-65％、特别是按重量计约50％-65％、特别是按重量计从20％至50％。助洗剂和/或共助洗剂可以特别地是与Ca和Mg形成水溶性络合物的螯合试剂。可以利用本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、和(羧甲基)菊粉(CMI)、及其组合。助洗剂的进一步的非限制性实例包括柠檬酸盐；螯合剂，如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐和膦酸盐；以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(磺甲基谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及N’-(2-羟基乙基)-亚乙基二胺-N,N,N’-三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、及其组合和盐。适合用于本文使用的膦酸酯包括1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA或DTPMP)、次氮基三(亚甲基膦酸)(ATMP或NTMP)、2-膦酰基丁烷-1,2,4-三羧酸(PBTC)、六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(HDTMP)。

该组合物还可以含有按重量计0％-50％，如约5％至约30％的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂，或与助洗剂，例如沸石助洗剂组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)或聚天冬氨酸。进一步的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US5977053中。

在一些方面，该助洗剂是基于非磷的助洗剂，如柠檬酸和/或甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)和/或其盐。

在优选的助洗剂包括柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)和/或其盐的情况下，该液体组合物还可以是无磷酸盐的。

本发明的一些方面涉及一种液体衣物洗涤组合物，该组合物包含：

a)每升组合物中至少0.00001例如0.005mg的DNA酶变体，和任选地

b)按重量计0％至30％的至少一种表面活性剂，其中该至少一种表面活性剂选自LAS、AEOS和/或SLES，以及任选地

c)按重量计0％至50％的至少一种助洗剂，该助洗剂选自柠檬酸和/或甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)和/或其盐。

a)每升组合物中至少0.00001例如0.005mg的DNA酶变体，和任选地

b)按重量计0％至30％的至少一种表面活性剂，其中该至少一种表面活性剂是LAS、AEOS和/或SLES，以及任选地

c)按重量计0％至50％的至少一种助洗剂，该助洗剂选自HEDP、DTMPA或DTPMPA。

该液体洗涤剂组合物可以典型地含有按重量计至少20％并且高达95％的水，如高达70％的水、高达50％的水、高达40％的水、高达30％的水、高达20％的水、高达10％的水、高达5％的水或高达2％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包含在水性液体洗涤剂中。水性液体洗涤剂可以含有从0％-30％的有机溶剂。液体洗涤剂甚至可以是非水性的，其中水含量低于10％，优选低于5％。

粉末组合物

洗涤剂组合物还可以配制成用于衣物洗涤或餐具洗涤的颗粒洗涤剂。本发明的一些方面涉及一种颗粒洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含

a)每克组合物中至少0.00001例如0.005mg的DNA酶变体，任选地

b)0wt％至40wt％的阴离子型表面活性剂，任选地

c)0wt％至20wt％的非离子型表面活性剂，和/或任选地

d)0wt％至40wt％的助洗剂，如碳酸盐、沸石、磷酸盐助洗剂、钙螯合助洗剂或络合剂。

该表面活性剂可以是在如上描述的非离子、阴离子和/或两性离子型表面活性剂中选择的，优选地阴离子或非离子型表面活性剂也可以使用两性离子型表面活性剂。一般而言，优选是漂白剂稳定的表面活性剂。优选的阴离子型表面活性剂是硫酸盐表面活性剂以及特别地烷基醚硫酸盐，尤其是C-9-15醇醚硫酸盐、C12-15伯醇乙氧基化物、C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐，例如单十二烷基酯硫酸盐。阴离子型表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，具体地是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸的盐(皂)、及其组合。阴离子型表面活性剂优选地以盐的形式添加至洗涤剂中。在这些盐中的适合阳离子是碱金属离子，如钠、钾和锂以及铵盐，例如(2-羟基乙基)铵、二(2-羟基乙基)铵和三(2-羟基乙基)铵盐。

非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化的胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品、及其组合。

可商购的非离子型表面活性剂包括来自BASF公司的Plurafac^TM、Lutensol^TM和Pluronic^TM类、来自科宁公司的Dehypon^TM系列和来自科莱恩特公司的Genapol^TM系列。

该助洗剂可以是非磷酸盐的，如柠檬酸盐，优选为钠盐和/或沸石。膦酸酯助洗剂可以是以上描述的那些中的任一者。

该助洗剂优选地选自如上描述的磷酸盐和柠檬酸钠助洗剂、碳酸钠、硅酸钠、铝硅酸钠(沸石)。适合的助洗剂是以上描述的并且包括碱金属或磷酸铵、聚磷酸盐、膦酸酯、聚膦酸酯、碳酸盐、碳酸氢盐、硼酸盐、聚羟基磺酸盐、聚乙酸盐、羧酸盐、柠檬酸盐、和聚羧酸盐。柠檬酸盐助洗剂，例如柠檬酸及其可溶性盐(特别是钠盐)是聚羧酸盐助洗剂。优选地该助洗剂以按重量计约0％-65％、如按重量计约5％至约50％、如按重量计5％至40％、如按重量计10％至40％、如按重量计10％至30％、如按重量计15％至20％或如按重量计20％至40％的量添加。该助洗剂可以是膦酸酯助洗剂，包括1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)、2-膦酰基丁烷-1,2,4-三羧酸(PBTC)、和六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(HDTMP)。优选的膦酸酯包括1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)和/或二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)。优选地膦酸酯以约在如下水平的量添加：组合物的按重量计从约0.01％至约10％、优选按重量计从0.1％至约5％、更优选地按重量计从0.5％至3％。

在优选的助洗剂包括柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)和/或其盐的情况下，该颗粒组合物还可以是无磷酸盐的。

本发明的一些方面涉及一种颗粒组合物，该颗粒组合物包含：

a)每克组合物中至少0.00001例如0.005mg的DNA酶变体，和任选地

b)按重量计0％至30％的至少一种表面活性剂，其中该表面活性剂是LAS、AEOS和/或SLES，以及任选地

a)每克组合物中至少0.00001例如0.005mg的DNA酶变体，和任选地

洗涤剂可以含有按重量计0％-30％，如约1％至约20％的漂白系统。可以利用包含本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的组分的任何漂白系统。适合的漂白系统组分包括过氧化氢源；过酸源；和漂白催化剂或增效剂。

过氧化氢源：适合的过氧化氢源是无机过酸盐，包括碱金属盐(如过碳酸钠和过硼酸钠(通常是一水合物或四水合物))，以及过氧化氢―尿素(1/1)。

过酸源：过酸可以是(a)直接作为预形成过酸掺入，或(b)从过氧化氢和漂白活化剂(过水解)在洗涤液中原位形成，或(c)从过氧化氢和过氧化氢酶和后者适合的底物(例如酯)在洗涤液中原位形成。

a)适合的预形成过酸包括但不限于过氧羧酸(如过氧苯甲酸)及其环取代的衍生物、过氧-α-萘甲酸、过氧邻苯二甲酸、过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸[邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸(PAP)]、和邻-羧基苯甲酰氨基过氧己酸；脂族和芳族二过氧二羧酸如二过氧十二烷二酸、二过氧壬二酸、二过氧癸二酸、二过氧巴西基酸、2-癸基二过氧丁二酸、以及二过氧邻苯二甲酸、-间苯二甲酸和-对苯二甲酸；过亚氨酸；过氧单硫酸；过氧二硫酸；过氧磷酸；过氧硅酸；以及所述化合物的混合物。应理解的是，在一些情况下，所提到的过酸可能最好是作为适合的盐的添加，如碱金属盐(例如)或碱土金属盐。

b)适合的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺、腈类或酸酐类别的那些，以及适用时，其盐。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸钠(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸(DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(NOBS)、和/或披露于WO98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP624154中并且在该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋精)具有它们是环境友好的优点。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋精在存储时在产品中具有良好的水解稳定性，并且是有效的漂白活化剂。最后，ATC是多功能的，因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。

漂白催化剂和增效剂：该漂白系统还可以包括漂白催化剂或增效剂。可以用于本发明组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰胶原、钴-胺催化剂和锰三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂；特别优选锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的络合物，具体地是Me3-TACN，如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2、和[2,2’,2”-次氮基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κN-甲基亚基)三酚并-κ3O]锰(III)。这些漂白催化剂还可以是其他金属化合物，如铁或钴络合物。

在其中过酸的来源包括在内的一些方面，可以使用具有下式之一的有机漂白催化剂或漂白增效剂：

(i)

(ii)

(iii)及其混合物；其中每个R1独立地是含有从9至24个碳的支链烷基或含有从11至24个碳的直链烷基，优选地每个R1独立地是含有从9至18个碳的支链烷基或含有从11至18个碳的直链烷基，更优选地每个R1独立地选自下组，该组由以下组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。

其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259、EP 1867708(维生素K)和WO 2007/087242中。适合的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。

根据一些方面和前述方面中的任一项，本发明还涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：

a)每克组合物中至少0.00001例如0.005mg的DNA酶变体，任选地

b)10wt％-50wt％的助洗剂和任选地

c)至少一种漂白组分，其中该漂白剂优选地是过氧化物并且该漂白催化剂是锰化合物。

氧漂白剂优选地是过碳酸盐和锰催化剂，优选地是1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷或乙酸锰(III)四水合物。

a)每克组合物中至少0.00001例如0.005mg的DNA酶变体，任选地

b)10wt％-50wt％的助洗剂，该助洗剂选自柠檬酸、甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)及其混合物，以及任选地

c)至少一种漂白组分，其中该漂白剂是氧漂白剂并且该漂白催化剂是锰化合物。

氧漂白剂优选地是过碳酸盐和锰催化剂，优选地是1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷或乙酸锰(II)四水合物。

根据一些方面和前述方面中的任一项，本发明还涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含：

a)每克组合物中至少0.00001例如0.005mg的DNA酶变体，任选地

c)0.1wt％-40wt％、优选从0.5wt％-30wt％的漂白组分，其中该漂白组分是过氧化物，优选地是过碳酸盐和含金属的漂白催化剂，优选地是1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷或乙酸锰(II)四水合物(MnTACN)。

洗涤剂组分的选择可以包括(用于纺织品护理)有待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据功能性对以下提到的组分由通用标题进行分类，但这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，一种组分可以包括另外的功能性，包括以下示出的示例性、非限制性组分。

水溶助剂

该洗涤剂组合物可以含有按重量计0％-10％，例如按重量计0％-5％，如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠、及其组合。

聚合物

该洗涤剂组合物可以含有按重量计0％-10％，如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％的聚合物。可以利用本领域已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如以上提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提到的特性和/或多于一种的以下提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物，如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。进一步的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基磺酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。还考虑了以上提到的聚合物的盐。

织物调色剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，如染料或色素，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，该洗涤液包含所述洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括色素。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如如描述于WO 2005/03274、WO2005/03275、WO 2005/03276以及EP 1876226(通过引用并入本文)中。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。适合的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO 2007/087243中。

酶

洗涤剂组合物可以包含一种或多种另外的酶，如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶(例如漆酶)、和/或过氧化酶。

一般而言，所选的一种或多种酶的特性应与所选的洗涤剂相容(即，最佳pH、与其他酶和非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。

纤维素酶

适合的纤维素酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳属、支顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。

尤其适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO 99/001544中的那些纤维素酶变体。

其他纤维素酶是具有与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％同一性的序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶或一种家族44木葡聚糖酶，该木葡聚糖酶是一种具有与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％同一性的序列的木葡聚糖酶。

可商购的纤维素酶包括Celluzyme^TM、和Carezyme^TM(诺维信公司)、CarezymePremium^TM(诺维信公司)、Celluclean^TM(诺维信公司)、Celluclean Classic^TM(诺维信公司)、Cellusoft^TM(诺维信公司)、Whitezyme^TM(诺维信公司)、Clazinase^TM、和Puradax HA^TM(杰能科国际公司(Genencor International Inc.))、以及KAC-500(B)^TM(花王株式会社(Kao Corporation))。

蛋白酶

适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选的是微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如M4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自M5、M7或M8家族的那些。

术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人，Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人，Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是通过在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸来表征的蛋白酶亚组。枯草杆菌酶可以划分为6个亚部，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。

枯草杆菌酶的实例是源自芽孢杆菌属的那些，如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌；和描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO92/175177、WO01/016285、WO02/026024和WO02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于WO89/06270、WO94/25583和WO 05/040372中)，以及源自纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO05/052161和WO05/052146中)。

进一步优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如描述于例如WO 95/23221中)、及其变体(描述于WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP1921148中)。

金属蛋白酶的实例是如描述于WO07/044993(杰能科国际公司(Genencor Int.))中的中性金属蛋白酶，如源自解淀粉芽孢杆菌的那些。

有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体：WO 92/19729、WO 96/034946、WO98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264，尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中所述位置对应于WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶的位置。更优选的蛋白酶变体可以包括以下突变中的一个或多个：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、N85S、N85R、G96S、G96A、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、N120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D、T268A或R269H。这些蛋白酶变体优选地是在WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶的变体或在WO 2016/001449的SEQ ID NO 2中示出的解淀粉芽孢杆菌蛋白酶(BPN’)的变体。这些蛋白酶变体优选地与WO 2016/001449的SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2中所示多肽具有至少80％的序列同一性。

在以下一个或多个位置处包括取代的蛋白酶变体，该位置对应于WO2004/067737的SEQ ID NO:1的位置171、173、175、179、或180，其中所述蛋白酶变体与WO2004/067737的SEQ ID NO:1具有至少75％但小于100％的序列同一性。

适合的可商购蛋白酶包括以下列商标名出售的那些：Duralase^Tm、Durazym^Tm、Ultra、Ultra、

Ultra、Ultra、Blaze100T、Blaze125T、Blaze150T、和(诺维信公司(Novozymes A/S))，在以下商标名下出售的那些： PurafectPurafect Excellenz P1000^TM、Excellenz P1250^TM、Preferenz P100^TM、PurafectPreferenz P110^TM、Effectenz P1000^TM、Effectenz P1050^TM、PurafectEffectenz P2000^TM、和(丹斯尼克公司(Danisco)/杜邦公司(DuPont))、Axapem^TM(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocases N.V.))、BLAP(在US5352604的图29中示出的序列)及其变体(汉高公司(HenkelAG))和来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(Bacillusalkalophilus))。

脂肪酶和角质酶：

适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括如描述于EP258068和EP305216中的来自嗜热丝孢菌属(Thermomyces)(例如来自疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(之前命名为疏棉状腐质霉(Humicola lanuginosa))的脂肪酶、来自腐质霉属(Humicola)(例如特异腐质霉(H.insolens)(WO96/13580))的角质酶、来自假单胞菌属(Pseudomonas)菌株(这些假单胞菌属菌株中的一些现在重命名为伯克氏菌属(Burkholderia))(例如，产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP218272))、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP331376)、假单胞菌属物种菌株SD705(WO95/06720&WO96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO96/12012)、GDSL型链霉菌属脂肪酶(Streptomyces)(WO10/065455)的脂肪酶、来自稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)(WO10/107560)的角质酶、来自门多萨假多胞菌(Pseudomonas mendocina)(US5,389,536)的角质酶、来自嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)(WO11/084412)的脂肪酶、嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)脂肪酶(WO11/084417)、来自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(WO11/084599)的脂肪酶、以及来自灰色链霉菌(Streptomyces griseus)(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)(WO12/137147)的脂肪酶。

其他实例是脂肪酶变体，如描述于EP407225、WO92/05249、WO94/01541、WO94/25578、WO95/14783、WO95/30744、WO95/35381、WO95/22615、WO96/00292、WO97/04079、WO97/07202、WO00/34450、WO00/60063、WO01/92502、WO07/87508以及WO09/109500中的那些。

优选的商业化脂肪酶产品包括Lipolase^TM、Lipex^TM；Lipolex^TM和Lipoclean^TM(诺维信公司)，Lumafast(来自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocades))。

再其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)、以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。

脂肪酶和角质酶

适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如，如描述于EP 258068和EP305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如特异腐质霉(WO 96/13580)；来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔氏菌属)，例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP331376)、假单胞菌属物种菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。

其他实例是如EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中所描述的那些脂肪酶变体。

优选的商业化脂肪酶产品包括Lipolase^TM、Lipex^TM；Lipolex^TM和Lipoclean^TM(诺维信公司)，Lumafast(来自杰能科公司)以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司)。

再其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)、以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。

淀粉酶

可以与本发明的DNA酶一起使用的适合的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属，例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。

适合的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:1具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，如在以下位置中的一个或多个中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。

不同的适合的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。

其他适合的淀粉酶是包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的从解淀粉芽孢杆菌获得的α-淀粉酶的残基1-33和WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中所示的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％的序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的从解淀粉芽孢杆菌获得的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：

M197T；

H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或

G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。

进一步的适合的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216以及K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。

可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476，使用WO 96/023873的SEQ ID NO.2进行编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置(如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有取代的那些。

可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211以及264。

进一步的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:2具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444以及G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183中具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：

N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；

N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；

S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或

S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。

其他适合的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别地优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K以及R458K的变体，以及在选自下组的一个或多个位置中另外地具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345以及A339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。

其他实例是如描述于WO 2011/098531、WO 2013/001078以及WO 2013/001087中的那些淀粉酶变体。

可商购的淀粉酶是Duramyl^TM、Termamyl^TM、Fungamyl^TM、Stainzyme ^TM、StainzymePlus^TM、Natalase^TM、Liquozyme X和BAN^TM(来自诺维信公司)，以及Rapidase^TM、Purastar^TM/Effectenz^TM、Powerase以及Preferenz S100(来自杰能科国际公司/杜邦公司)。

过氧化物酶/氧化酶

根据本发明的过氧化物酶是由如由国际生物化学与分子生物学联合会命名委员会(IUBMB)陈述的酶分类EC 1.11.1.7包含的过氧化物酶，或从其获得的表现出过氧化物酶活性的任何片段。

适合的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486)，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中描述的那些。

过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及表现出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯根离子形成次氯酸盐。

在一个方面，该卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，该卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在优选方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯根离子来源组合。

已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。

还已从细菌，如假单胞菌属(例如，吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。

在优选的方面，该卤代过氧化物酶可源自弯孢属物种(Curvularia sp.)，特别是疣枝弯孢(Curvularia verruculosa)或不等弯孢(Curvularia inaequali)，如描述于WO95/27046中的不等弯孢CBS 102.42；或描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或衍生自如描述于WO 01/79459中的Drechslera hartlebii、如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie、或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium属物种。

氧化酶可以包括由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶、或从其获得的表现出漆酶活性的任何片段、或表现出类似活性的化合物，如儿茶酚氧化酶(EC 1.10.3.1)、邻-氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)、或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。

优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以从植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)获得。

来自真菌的适合实例包括可源自以下的菌株的漆酶：芽孢杆菌属、脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)、柄孢壳菌属、葡萄孢属、金钱菌属(Collybia)、层孔菌属(Fomes)、香菇属、侧耳属、栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)、丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))、拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)、和C.plicatilis)、小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))、斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))、毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)、Schytalidium(例如，S.thermophilum)、多孔菌属(例如，P.pinsitus)、射脉菌属(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)、或革盖菌属(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。

来自细菌的适合实例包括可源自芽孢杆菌属的菌株的漆酶。

优选的是从拟鬼伞属或毁丝霉属获得的漆酶；从灰盖拟鬼伞获得的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或来自嗜热毁丝霉，如披露于WO 95/33836中。

可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加包含所有这些酶的组合添加剂来将一种或多种洗涤剂酶包括在洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即单独的或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品是颗粒，特别是无粉尘颗粒；液体，特别是稳定化液体；或浆液。

无粉尘颗粒例如可以如在US 4,106,991和4,661,452中所披露地产生并且可以任选地通过本领域已知的方法包衣。蜡状包衣材料的实例是具有平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有从16至50个环氧乙烷单位的乙氧基化的壬基酚；其中的醇含有从12至20个碳原子并且其中存在15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化的脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。

其他材料

还可以利用本领域已知的用于在本发明清洁组合物中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇(如丙二醇))、织物调理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂、以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域已知的用于在洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在技术人员的技术范围内。

分散剂

本发明的清洁组合物还可以含有分散剂。具体地，粉末洗涤剂可以包含分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。适合的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉末洗涤剂]，Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]，第71卷，马塞尔德克尔公司(Marcel Dekker,Inc)中。

染料转移抑制剂

本发明的清洁组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不局限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。

荧光增白剂

优选地，洗涤剂组合物还可以含有另外的组分，这些组分可以给正在清洁的物品着色，如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，该增亮剂优选地以约0.01％至约0.5％的水平存在。在本发明的组合物中可以使用适合用于在衣物洗涤洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐：4,4’-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2’-二磺酸盐、4,4’-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2’-二磺酸盐、4,4’-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2’-二磺酸盐、4,4’-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2’-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从瑞士巴塞尔汽巴–嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG,Basel,Switzerland)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4’-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2’-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2’-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选荧光增白剂，是可商购的Parawhite KX，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals andChemicals,Mumbai,India)供应。天来宝CBS-X是4.4’-双-(磺基苯乙烯基)-联苯基二钠盐，也称为二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠盐。适合用于在本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷氨基香豆素。

适合的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。

污垢释放聚合物

该洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如棉和聚酯基的织物)去除污垢，特别是从聚酯基的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是非离子型或阴离子型对苯二甲酸基的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents[粉末洗涤剂]，Surfactant science series[表面活性剂科学系列]第71卷第7章，马塞尔德克尔公司。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如WO 2009/087523中详细描述的(通过引用并入本文)。此外，随机接枝共聚物是适合的污垢释放聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856和WO2006/113314中(通过引用并入本文)。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如修饰的纤维素衍生物，如描述于EP 1867808或WO 2003/040279中的那些(二者通过引用并入本文)。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。适合的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素、及其混合物。适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素、及其混合物。

抗再沉积剂

本发明的清洁组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下描述的基于纤维素的聚合物还可以用作抗再沉积剂。

流变改性剂

本发明的清洁组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自下组，该组由以下组成：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如如在EP 2169040中所示。

其他适合的辅助材料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填充剂、泡沫调节剂、助水溶剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂、以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。

洗涤剂产品的配制品

该洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如棒、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。

洗涤剂配制品形式：层(相同或不同的相)、袋、对比用于机器给药单位的形式。

袋可以被配置为单一隔室或多隔室。它可以具有适合用于容持该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。所述内部体积可以分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选的是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，包含可水解降解的和水溶性的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在商品参考号M8630下，如由美国印第安纳州盖里的克里斯克拉夫特工业产品公司(Chris Craft In.Prod.Of Gary,Ind.,US)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包含固体衣物洗涤清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在构成上可以与含有固体的室不同。参考：(US 2009/0011970 A1)

可以由水可溶袋中的或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分彼此物理分离。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。

这些形式的定义/特征：

非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且最高达95％的水，如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包含在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0％-30％的有机溶剂。

液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。

颗粒洗涤剂配制品

可以如WO 09/092699、EP 1705241、EP 1382668、WO 07/001262、US 6472364、WO04/074419或WO 09/102854中所描述地制备颗粒洗涤剂。其他有用的洗涤剂配制品描述于以下中：WO 09/124162、WO 09/124163、WO 09/117340、WO 09/117341、WO 09/117342、WO09/072069、WO 09/063355、WO 09/132870、WO 09/121757、WO 09/112296、WO 09/112298、WO09/103822、WO 09/087033、WO 09/050026、WO 09/047125、WO 09/047126、WO 09/047127、WO09/047128、WO 09/021784、WO 09/010375、WO 09/000605、WO 09/122125、WO 09/095645、WO09/040544、WO 09/040545、WO 09/024780、WO 09/004295、WO 09/004294、WO 09/121725、WO09/115391、WO 09/115392、WO 09/074398、WO 09/074403、WO 09/068501、WO 09/065770、WO09/021813、WO 09/030632、和WO 09/015951。

WO 2011025615、WO 2011016958、WO 2011005803、WO 2011005623、WO2011005730、WO 2011005844、WO 2011005904、WO 2011005630、WO 2011005830、WO2011005912、WO 2011005905、WO 2011005910、WO 2011005813、WO 2010135238、WO2010120863、WO 2010108002、WO 2010111365、WO 2010108000、WO 2010107635、WO2010090915、WO 2010033976、WO 2010033746、WO 2010033747、WO 2010033897、WO2010033979、WO 2010030540、WO 2010030541、WO 2010030539、WO 2010024467、WO2010024469、WO 2010024470、WO 2010025161、WO 2010014395、WO 2010044905、

WO 2010145887、WO 2010142503、WO 2010122051、WO 2010102861、WO2010099997、WO 2010084039、WO 2010076292、WO 2010069742、WO 2010069718、WO2010069957、WO 2010057784、WO 2010054986、WO 2010018043、WO 2010003783、WO2010003792、

WO 2011023716、WO 2010142539、WO 2010118959、WO 2010115813、WO2010105942、WO 2010105961、WO 2010105962、WO 2010094356、WO 2010084203、WO2010078979、WO 2010072456、WO 2010069905、WO 2010076165、WO 2010072603、WO2010066486、WO 2010066631、WO 2010066632、WO 2010063689、WO 2010060821、WO2010049187、WO 2010031607、WO 2010000636。

共颗粒中酶的配制品

该DNA酶可以被配制为颗粒，例如，配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度，不同酶的物理隔离。用于产生针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com公开内容IPCOM000200739D中。

使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中，其涉及包含以下的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)少于10wt沸石(无水基底)；和(c)少于10wt磷酸盐(无水基底)，其中所述酶共颗粒包含从10wt％至98wt％的水分汇组分，并且该组合物另外包含从20wt％至80wt％的洗涤剂水分汇组分。WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选织物表面)的方法，该方法包括以下步骤：(i)将所述表面在水性洗涤液中与如本文要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触，(ii)冲洗和/或干燥该表面。

在以下非限制性段落中进一步描述本发明。

段落1.一种DNA酶变体，该DNA酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包括取代：SEQ ID NO:1的多肽的1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中该变体具有DNA酶活性，并且其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。

段落2.根据段落1所述的变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽相比具有增加的稳定性，该稳定性测量为半衰期改进因子HIF。

段落3.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体具有至少1.05、至少1.10、至少1.15、至少1.20、至少1.50、至少2.00、至少2.50、至少3.00、至少4.00、至少5.00、至少6.00、至少7.00、至少8.00、至少9.00或至少10.00的改进因子。

段落4.根据前述段落中任一项所述的变体，该变体包括一个或多个选自下组的取代，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中这些位置对应于SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列中的氨基酸位置(根据SEQ ID NO 1编号)；并且其中该变体具有DNA酶活性，并且其中该变体与SEQID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性。

段落5.根据前述段落中任一项所述的变体，该变体包括一个或多个选自下组的取代，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、P6V、S7D、K8V、S9K、S9Q、S9V、A10D、A10M、A10I、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、Q14M、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、V49R、L51I、K52I、K52Q、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、P63A、T65L、T65I、T65V、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、D83C、D83F、L92T、A93G、G99S、S101D、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、T104S、T104P、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、G145V、G145E、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、T157S、Y159H、K160R、W161L、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、S164R、S164H、S164N、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D和Y182Q，其中一个或多个位置处的每个取代提供一种具有增加稳定性的DNA酶变体，该稳定性测量为至少1.1的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)。

段落6.根据前述段落中任一项所述的变体，该变体包括一个或多个选自下组的取代，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、P6V、S7D、K8V、S9K、A10D、Q12S、Q12V、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、Q14M、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19N、T19L、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S30K、S30D、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、V49R、K52I、K52Q、A55S、D56I、D56L、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、P63A、T65L、S68V、S68I、S68W、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、D83C、A93G、S101D、S102M、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S116Q、A125K、S126I、S126E、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、G145V、G145E、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、S156C、T157S、Y159H、W161L、G162Q、G162N、G162D、G162M、S164R、S164H、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S168V、S168E、S168D、K170S、K170L、T171D、T171E、T171N、A172G、L173T、L173A、Q174L、G175D、G175E、G175N、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G和Y182A，其中一个或多个位置处的每个取代提供一种具有增加热稳定性的DNA酶变体，该热稳定性测量为至少1.15的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO1编号)。

段落7.根据前述段落中任一项所述的变体，该变体包括一个或多个选自下组的取代，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、P6V、K8V、A10D、Q12S、Q12V、S13D、S13Y、S13T、S13Q、A17C、A17V、T19K、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S30K、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、Q40V、S42G、S42C、K52I、K52Q、A55S、D56I、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、Y58A、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、P63A、T65L、S68V、S68I、S68W、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、T77N、T77Y、F78L、F78I、T79G、T79R、N80K、A93G、S101D、S102M、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S126I、S126E、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、G145V、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、K152H、S156C、G162Q、G162N、G162D、S164R、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S168V、S168E、S168D、K170S、K170L、T171D、T171E、A172G、L173T、L173A、Q174L、G175D、G175E、G175N、L177I、N178D、N178E、N178T、S181R、S181E、Y182M、Y182C和Y182K，其中一个或多个位置处的每个取代提供一种具有增加热稳定性的DNA酶变体，该热稳定性测量为至少1.2的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)。

段落8.根据前述段落中任一项所述的变体，该变体包括一个或多个选自下组的取代，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、Q12S、Q12V、A17C、T22P、T22A、T22V、T22D、Q40V、K52I、K52Q、A55S、D56I、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S68V、V76G、V76L、V76C、T77N、F78L、A93G、T105V、K107L、Q109K、A112S、S126I、G132R、G145V、A147H、A147R、A147K、A147Q、S156C、G162Q、Q166D、S167M、S168V、K170S、T171D、L173T、L173A、G175D、G175E和L177I，其中一个或多个位置处的每个取代提供一种具有增加热稳定性的DNA酶变体，该热稳定性测量为至少1.5的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQ ID NO 1编号)。

段落9.根据前述段落中任一项所述的变体，该变体包括一个或多个选自下组的取代，该组由以下组成：T1I、T1L、Q12S、Q12V、A17C、T22P、Q40V、K52I、S57W、S57Y、S57F、V76G、Q109K、A112S、A147H、A147R、A147K、K170S、T171D和G175D，其中一个或多个位置处的每个取代提供一种具有增加热稳定性的DNA酶变体，该热稳定性测量为至少2.0的半衰期改进因子HIF，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中每个位置对应于SEQ ID NO:1中所示多肽的位置(根据SEQID NO 1编号)。

段落10.根据段落1-9中任一项所述的变体，该变体与SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的同一性、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但小于100％的序列同一性。

段落11.根据段落1-10中任一项所述的变体，其中取代的数目是1-20，例如1-10和1-5，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10个取代。

段落12.一种多核苷酸，该多核苷酸编码根据段落1-11中任一项所述的变体。

段落13.一种核酸构建体，该核酸构建体包含根据段落12所述的多核苷酸。

段落14.一种表达载体，该表达载体包含根据段落12所述的多核苷酸。

段落15.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含根据段落12所述的多核苷酸。

段落16.一种产生DNA酶变体的方法，该方法包括：在适合用于表达该变体的条件下培养根据段落15所述的宿主细胞；以及任选地回收该变体。

段落17.一种组合物，该组合物包含根据段落1-11中任一项所述的变体。

段落18.根据段落17所述的组合物，该组合物进一步包含至少一种碳水化合物活性酶，像糖酶、果胶酶、甘露聚糖酶、淀粉酶、纤维素酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、蛋白酶如金属蛋白酶、脂肪酶、角质酶、氧化酶，例如漆酶、和/或过氧化物酶。

段落19根据段落18所述的组合物，该组合物包含蛋白酶，其中该蛋白酶在以下位置中的一个或多个中包括取代：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中这些位置对应于WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中所示迟缓芽孢杆菌蛋白酶的位置，并且其中这些蛋白酶变体与WO2016/001449的SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2中分别所示Savinase或BPN’蛋白酶具有至少80％的序列同一性。

段落20根据段落18或19中任一项所述的组合物，该组合物包含蛋白酶，其中该蛋白酶包括以下取代中的一个或多个：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、N85S、N85R、、G96S、G96A、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、N120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D、T268A或R269H，其中这些位置对应于WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中所示迟缓芽孢杆菌蛋白酶的位置，并且其中这些蛋白酶变体与WO2016/001449的SEQ IDNO 1和SEQ ID NO 2中分别所示Savinase或BPN’蛋白酶具有至少80％的序列同一性。

段落21根据段落18至20中任一项所述的组合物，该组合物包含蛋白酶，其中该蛋白酶选自在对应于WO2004/067737的SEQ ID NO:1的位置171、173、175、179、或180的一个或多个位置处包括取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与WO2004/067737的SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少75％但小于100％的序列同一性。

段落22根据段落18至21中任一项所述的组合物，该组合物包含淀粉酶，其中该淀粉酶是以下淀粉酶中的一种或多种：

a)具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ ID NO:1具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，如在以下位置中的一个或多个中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408、和444；

b)具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些；

c)包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的从解淀粉芽孢杆菌获得的α-淀粉酶的残基1-33和WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中所示的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％的序列同一性的变体，其中该杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264，包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的从解淀粉芽孢杆菌获得的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的优选的变体包括具有以下取代的那些：

M197T、H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S、或G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S；

d)具有WO 99/019467中所示SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列同一性的变体，SEQ ID NO:6的优选的变体包括在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269，特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些；

e)具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的淀粉酶或其分别与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7具有90％序列同一性的变体，其中SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和/或476，使用WO 96/023873的SEQ ID NO.2用于编号，更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置(如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些，SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的更优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和/或476中的一个或多个中具有取代的那些；

f)具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性或与WO 01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的变体，WO01/66712中的SEQ ID NO:10的优选的变体包括在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和/或264；

g)具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ ID NO:2具有90％序列同一性的变体，SEQ ID NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和/或G475，SEQID NO:2的优选的变体包括具有以下取代中的一个或多个的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183中具有缺失的那些，SEQ ID NO:2的优选的淀粉酶变体包括具有以下取代的那些：N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的并且任选地进一步在位置243处包括取代和/或在位置180和/或位置181处包括缺失；或

h)具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的淀粉酶或与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性的变体，优选的淀粉酶变体是在WO01/66712中的SEQ ID NO:12的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471或N484，优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和/或R458K的变体，以及在选自下组的一个或多个位置中另外地具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是具有所有这些取代的变体。

段落23.根据段落18至22中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含脂肪酶，其中该脂肪酶选自来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如，如描述于EP 258068和EP 305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌。

段落24.根据权利要求17至23中任一项所述的组合物，该组合物包含：

a)每升洗涤剂中至少0.005mg根据段落1至11中任一项所述的活性DNA酶变体，和任选地

b)0wt％至60wt％的至少一种表面活性剂，以及任选地

c)0wt％至50wt％的至少一种助洗剂。

段落25.根据段落24所述的组合物，该组合物包含5wt％至60wt％的至少一种选自非离子、阴离子和/或两性离子型表面活性剂的表面活性剂。

段落26.根据段落25所述的组合物，其中该组合物包含阴离子型表面活性剂，优选以下中的任一种：硫酸盐表面活性剂以及特别地烷基醚硫酸盐，尤其是C-9-15醇醚硫酸盐、C12-15伯醇乙氧基化物、C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐，如单十二烷基酯硫酸盐，包括硫酸盐和磺酸盐，具体地是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸的盐(皂)、及其组合。

段落27.根据段落24至26中任一项所述的组合物，其中该组合物包含至少一种非离子型表面活性剂，包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化的胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品、及其组合。可商购的非离子型表面活性剂包括来自BASF公司的Plurafac^TM、Lutensol^TM和Pluronic^TM，来自科宁公司的Dehypon^TM系列和来自科莱恩特公司的Genapol^TM系列。

段落28.根据段落24至27中任一项所述的组合物，其中该组合物包含从2wt％至50wt％的至少一种助洗剂。

段落29.根据段落28所述的组合物，其中至少一种助洗剂选自：磷酸盐、柠檬酸钠助洗剂、碳酸钠、硅酸钠、铝硅酸钠(沸石)。

段落30.根据段落29所述的组合物，其中至少一种助洗剂选自：沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐(如三磷酸钠(STP或STPP))、碳酸盐(如碳酸钠)、可溶性硅酸盐(如偏硅酸钠)、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司的SKS-6)、和(羧甲基)菊粉(CMI)、及其组合、柠檬酸盐、螯合剂(如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐和膦酸盐)、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(磺甲基谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及N’-(2-羟基乙基)-亚乙基二胺-N,N,N’-三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、及其组合和盐，膦酸酯包括1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA或DTPMP)、次氮基三(亚甲基膦酸)(ATMP或NTMP)、2-膦酰基丁烷-1,2,4-三羧酸(PBTC)或六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(HDTMP)。

段落31.一种液体衣物洗涤组合物，该组合物包含：

a)每升组合物中至少0.005mg根据段落1至11中任一项所述的DNA酶变体，和任选地

段落32.一种液体衣物洗涤组合物，该组合物包含：

段落33.根据段落27至32中任一项所述的组合物，该组合物包含：

a)每克组合物中至少0.005mg根据段落1至11中任一项所述的DNA酶变体，任选地

b)10wt％-50wt％的助洗剂和任选地

c)至少一种漂白组分

段落34.根据段落33所述的组合物，该组合物包含至少一种漂白组分，该漂白组分选自过氧化氢源；过酸源；和漂白催化剂或增效剂。

段落35.根据段落34所述的组合物，该组合物包含至少一种漂白组分，该漂白组分选自以下中的一种或多种：四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸钠(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸(DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(NOBS)、乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)、漂白催化剂包括草酸锰、乙酸锰、锰胶原、钴-胺催化剂和锰三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂；优选地锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的络合物，如Me3-TACN，如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2、和[2,2’,2”-次氮基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κN-甲基亚基)三酚并-κ3O]锰(III)。

段落36.根据段落17至35中任一项所述的组合物，其中该组合物是清洁组合物，如洗涤剂组合物，如衣物或餐具洗涤组合物。

段落37.根据段落17至36中任一项所述的组合物，其中该组合物是液体组合物，包含按重量计至少20％并且高达95％的水，如高达70％的水、高达50％的水、高达40％的水、高达30％的水、高达20％的水、高达10％的水、高达5％的水或高达2％的水。

段落38.根据段落17至37中任一项所述的组合物，其中该组合物是颗粒，例如粉末衣物洗涤组合物或餐具洗涤组合物。

段落39.根据段落1至11中任一项所述的DNA酶变体或根据段落17至38中任一项所述的组合物用于深度清洁物品的用途。

段落40.根据段落1至11中任一项所述的DNA酶变体或根据段落17至38中任一项所述的组合物用于减少和/或防止再沉积的用途。

段落41.根据段落1至11中任一项所述的DNA酶变体或根据段落17至38中任一项所述的组合物用于减少和/或防止恶臭的用途。

段落42.一种用于洗涤物品的方法，其中该方法包括以下步骤：

a.将物品暴露于洗涤液，该洗涤液包含根据段落1至11中任一项所述的DNA酶变体；

b.完成至少一个洗涤循环；以及

c.任选地冲洗该物品，

其中该物品是纺织品。

段落43.根据段落42所述的方法，其中液体溶液的pH是在1至11的范围内，如在5.5至11、如在7至9的范围内、在7至8的范围内或在7至8.5的范围内。

段落44.根据段落42或43所述的方法，其中该洗涤液可以具有在5℃至95℃范围内，或在10℃至80℃范围内，在10℃至70℃范围内，在10℃至60℃范围内，在10℃至50℃范围内，在15℃至40℃范围内或在20℃至30℃范围内的温度。在一些方面，该洗涤液的温度是30℃。

在以下段落中进一步描述本发明

段落1一种DNA酶变体，该DNA酶变体与SEQ ID NO:1中所示多肽相比，在对应于以下位置的一个或多个位置处包括改变：SEQ ID NO:1的1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、13、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％的序列同一性，并且该变体具有DNA酶活性。

段落2根据段落1所述的变体，该变体与SEQ ID NO:1相比包括一个或多个改变，其中该一个或多个改变选自下组，该组由以下组成：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％的序列同一性并且该变体具有DNA酶活性。

段落3根据段落1-2中任一项所述的变体，该变体与亲本相比或与具有SEQ ID NO:1中所示多肽的DNA酶相比具有改进的稳定性。

段落4根据段落1-3中任一项所述的变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的序列同一性。

段落5根据段落1-4中任一项所述的变体，其中与SEQ ID NO:1相比的改变的总数是1-20个，例如1-10个和1-5个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。

段落6一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含根据权利要求1至5中任一项所述的变体。

段落7根据段落6所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含一种或多种洗涤剂组分。

段落8根据段落6-7中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含选自下组的一种或多种另外的酶，该组由以下组成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶、或其任何混合物。

段落9根据段落6-8中任一项所述的洗涤剂组合物，其处于条、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体的形式。

段落10根据段落6-9中任一项所述的洗涤剂组合物在清洁过程如衣物洗涤或硬质表面清洁如餐具洗涤中的用途。

段落11一种用于获得DNA酶变体的方法，该方法包括向亲本DNA酶中引入在一个或多个位置处的改变，这些位置对应于以下位置：SEQ ID NO1的1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、13、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中该变体具有与SEQ ID NO 1所示多肽至少60％相同的氨基酸序列；以及回收该变体。

段落12根据段落11所述的方法，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽相比包括两个、三个、四个或五个改变。

段落13根据段落11或12中任一项所述的方法，其中该变体包括选自下组的一个或多个改变，该组由以下组成：与SEQ ID NO:1中所示多肽相比的T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W。

段落14根据段落11-13中任一项所述的方法，其中该DNA酶变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性。

测定和洗涤剂组合物

标准洗涤剂A组合物(液体)

成分：12％LAS、11％AEO Biosoft N25-7(NI)、7％AEOS(SLES)、6％MPG(丙二醇)、3％乙醇、3％TEA、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％DTMPA和0.2％PCA(所有的百分数都是w/w)

标准洗涤剂T组合物(粉末)

成分：11％LAS、2％AS/AEOS、2％皂、3％AEO、15.15％碳酸钠、3％硅酸钠、18.75％沸石、0.15％螯合剂、2％柠檬酸钠、1.65％AA/MA共聚物、2.5％CMC和0.5％SRP(所有的百分数都是w/w)。

标准洗涤剂X组合物(粉末)

成分：16.5％LAS、15％沸石、12％二硅酸钠、20％碳酸钠、1％sokalan、35.5％硫酸钠(所有的百分数都是w/w)。

测定I：DNA酶活性的测试

可以在具有甲基绿(美国新泽西州富兰克林湖的BD公司(BD,Franklin Lakes,NJ,USA))的DNA酶测试琼脂上确定DNA酶活性，其根据供应商的手册制备。简言之，将21g琼脂溶于500ml水中，并且然后在121℃下高压灭菌15min。将高压蒸汽处理的琼脂在水浴中温和至48℃，并且将20ml的琼脂倒入培养皿并且允许在室温下通过孵育来固化。在固化的琼脂平板上，添加5μl的酶溶液，并且DNA酶活性被观察为斑点酶溶液周围的无色区域。

方法

PCR、克隆、连接核苷酸等的一般方法是本领域技术人员熟知的，并且可以例如在以下文献中发现：“Molecular cloning:A laboratory manual[分子克隆：实验室手册]”,Sambrook等人，(1989),Cold Spring Harbor lab.[冷泉港实验室]，冷泉港，纽约；Ausubel,F.M.等人(编辑)；“Current protocols in Molecular Biology[分子生物学现代方法]”,John Wiley and Sons[约翰威利父子出版公司],(1995)；Harwood,C.R.,和Cutting,S.M.(编辑)；“DNA Cloning:A Practical Approach[DNA克隆：一种实用的方法],第I和II卷”,D.N.Glover编辑(1985)；“Oligonucleotide Synthesis[寡核苷酸合成]”,M.J.Gait编辑(1984)；“Nucleic Acid Hybridization[核酸杂交]”,B.D.Hames和S.J.Higgins编辑(1985)；“A Practical Guide To Molecular Cloning[分子克隆实用指南]”,B.Perbal,(1984)。

实例

实例1：通过定点诱变构建变体

定点变体是构建自包含根据本发明的具体取代的食物芽孢杆菌DAN酶(SEQ IDNO:1)。使用PCR连同正确地设计的诱变寡核苷酸(其在所得序列中引入所希望的突变)，通过传统的DNA片段克隆制得这些变体(Sambrook等人，Molecular Cloning:A LaboratoryManual[分子克隆：实验室手册]，第2版，冷泉港，1989)。

对应于希望的一个或多个突变位点侧翼的DNA序列设计诱变的寡核苷酸，其由限定插入/缺失/取代的DNA碱基对分离，并购自寡核苷酸的供应商，如美国生命科技公司(Life Technologies)。为了测试本发明的DNA酶变体，通过同源重组将包含本发明变体的突变DNA整合到感受态枯草芽胞杆菌菌株中，使用标准方案发酵(基于酵母提取物的培养基，3-4天，30℃)，并且通过活性测定筛选。

表达和纯化

将构建的变体铺在补充有6ug/ml氯霉素的LB琼脂上，并在37℃下生长一天。在生长后，将菌落挑选到标准96孔微量滴定板的各个孔中，这些微量滴定板含有200ul TBgly肉汤，补充有6ug/ml氯霉素和痕量金属(50mM FeCl3、20mM CaCl2、10mM MnCl2、10mM ZnSO4、2mM CuCl2、和2mM NiCl2，(F.William Studier,“Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures[在高密度振荡培养中通过自动诱导产生蛋白质]”,Protein Expression and Purification[蛋白质表达和纯化],41(2005)207-234)。

还将野生型食物芽孢杆菌DNA酶作为参考接种在每个微量滴定板上的四个孔中。使微量滴定板在30℃下以220rpm振荡生长3天。在生长后，在96％(v/v)标准A存在下，在48.5℃下对上清液施加应力20分钟后，筛选上清液的残留活性。

标准洗涤剂A(液体)

12％LAS、11％AEO Biosoft N25-7(NI)、5％AEOS(SLES)、6％MPG(丙二醇)、3％乙醇、3％TEA、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％DTMPA和0.2％PCA(所有的百分数都是w/w)，添加水至100％。

实例2：测试DNA酶变体的稳定性

通过将10ul上清液转移至两个96孔标准微量滴定板(各自含有240ul标准A)，将每个上清液样品分成两个相同的样品。在微量滴定板振荡器中以7500rpm振荡5分钟后，将一个微量滴定板在室温(21℃＝参考条件)下孵育20min，并且将另一个微量滴定板在96孔PCR块中在应力温度(48.5℃＝应力条件)下也孵育20min。将两组样品(参考条件和应力条件)在稀释缓冲液(50mM Tris，HCl，pH 7.5)中稀释100倍，然后通过使用DNAseAlertsubstrate^TM溶液测定活性。

(综合DNA技术公司(Integrated DNA Technologies)/比利时，部分#11-04-02-04，https://www.idtdna.com/pages/products/reagents/nuclease-detection-products)。

DNA酶活性测定II

对于DNA酶活性测量，将10ul 100倍稀释的参考DNA酶样品和应力DNA酶样品转移至新的384孔微量滴定板中，并添加40ul DNAseAlert测定溶液(50mM TrisHCl，pH.7.5，5mMMnCl2，6nM DNAseAlert substrate^TM)。每90秒读取荧光(激发536nm和发射556nm)，总共30分钟。根据动力学曲线，通过线性回归确定参考样品(在参考条件下的活性)和对应的应力样品(在应力条件下的活性)的斜率。每个DNA酶变体和参考DNA酶(SEQ ID NO 1)的残留活性(RA)计算如下：

斜率(应力样品)/斜率(参考样品)。

半衰期改进因子

DNA酶变体和DNA酶参考(SEQ ID NO 1)的半衰期改进因子(HIF，T_1/2，以分钟计)计算如下：20分钟x LN(0.5)/LN(RA)。变体的半衰期改进因子(HIF)计算为T_1/2变体/T_1/2主链。改进的变体被鉴定为具有大于1.0的半衰期改进因子HIF的变体(HIF参考(SEQ ID NO 1)＝1.0)。

活性改进因子(AIF)计算为变体的活性(参考条件下的斜率)除以参考的活性(SEQID NO 1；参考条件下的斜率)。具有改进的AIF>1.0的变体被鉴定为与对应参考(SEQ ID NO1)相比具有改进的活性。结果示于下表1中。

表1食物芽孢杆菌(SEQ ID NO 1)DNA酶变体的半衰期改进因子

序列表

<110> 诺维信公司

<120> 食物芽孢杆菌DNA酶变体

<130> 14170-WO-PCT

<160> 26

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 182

<212> PRT

<213> 食物芽孢杆菌

<400> 1

Thr Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Ala Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ala Leu Thr Val Lys Thr Glu Gly Ser Met Ser Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Leu Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Ser Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Val Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Ser Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Ser Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Val Thr Phe Thr Asn

65 70 75 80

Pro Ser Asp Leu Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Ser Lys Arg Gln Asp Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Ser Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Ser Thr Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ser

130 135 140

Gly Ala Ala Cys Gly Tyr Ser Lys Trp Trp Ile Ser Thr Lys Tyr Lys

145 150 155 160

Trp Gly Leu Ser Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Ala Leu Gln Gly Met

165 170 175

Leu Asn Ser Cys Ser Tyr

180

<210> 2

<211> 182

<212> PRT

<213> 堀越氏芽孢杆菌

<400> 2

Leu Pro Pro Gly Thr Pro Thr Lys Ser Glu Ala Gln Asn Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Lys Ser Glu Gly Ser Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Leu Phe Pro His Trp Ser Gly Gln Gly Asn Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Ile Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Cys Pro Thr

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Phe Asp Gly Val Ile Val Tyr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Glu Gln Arg Arg Ala Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Val Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys His Arg

145 150 155 160

Trp Asn Leu His Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ser Leu Gln Thr Met

165 170 175

Leu Asn Gly Cys Ala Tyr

180

<210> 3

<211> 182

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种-62520

<400> 3

Leu Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Glu Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ala Leu Thr Val Lys Pro Glu Asp Pro Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

His Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Asn Gly Cys Asn Thr Arg Gln

35 40 45

Ile Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Ala Cys Pro Val

50 55 60

Thr Thr Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Phe Asp Gly Val Ile Val Tyr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Glu Lys Arg Arg Ser Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Val Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys His Arg

145 150 155 160

Trp Gly Leu His Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ser Leu Gln Ser Met

165 170 175

Leu Asn Gly Cys Ala Tyr

180

<210> 4

<211> 182

<212> PRT

<213> 堀越氏芽孢杆菌

<400> 4

Leu Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Glu Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Lys Ser Glu Asp Pro Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

His Phe Pro His Trp Ser Gly Gln Gly Asn Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Ile Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Phe Asp Gly Val Ile Val Tyr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Val Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Glu Gln Arg Arg Ser Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Val Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys His Arg

145 150 155 160

Trp Asn Leu His Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ala Leu Gln Thr Met

165 170 175

Leu Asn Gly Cys Val Tyr

180

<210> 5

<211> 182

<212> PRT

<213> 堀越氏芽孢杆菌

<400> 5

Leu Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Glu Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Lys Thr Glu Asp Pro Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Leu Phe Pro His Trp Ser Gly Gln Gly Ser Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Ile Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Cys Pro Thr

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Phe Asp Gly Val Ile Val Tyr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Val Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Glu Gln Arg Arg Ala Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Thr Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Val Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys His Arg

145 150 155 160

Trp Asn Leu His Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ser Leu Gln Thr Met

165 170 175

Leu Asn Gly Cys Ala Tyr

180

<210> 6

<211> 182

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种-16840

<400> 6

Leu Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Glu Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ala Leu Thr Val Lys Ala Glu Asp Pro Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asn

20 25 30

Leu Phe Pro His Trp Asn Ser Gln Gly Asn Gly Cys Asn Thr Arg Gln

35 40 45

Leu Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Arg Trp Tyr Ser Tyr Phe Asp Gly Val Val Val Thr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Glu Lys Arg Lys Glu Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Val Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Ala Ala Arg Cys Gly Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys Tyr Arg

145 150 155 160

Trp Asp Leu Ser Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ser Leu Gln Thr Met

165 170 175

Leu Asn Thr Cys Ser Tyr

180

<210> 7

<211> 182

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种-16840

<400> 7

Leu Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Gln Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ala Leu Thr Val Lys Ala Glu Asp Pro Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asn

20 25 30

Leu Phe Pro His Trp Ser Ser Gln Gly Asn Gly Cys Asn Thr Arg Gln

35 40 45

Leu Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Arg Trp Tyr Ser Tyr Phe Asp Gly Val Val Val Thr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Glu Lys Arg Arg Glu Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Val Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Val

130 135 140

Ala Ala Arg Cys Gly Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys Tyr Arg

145 150 155 160

Trp Asp Leu Ser Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ser Leu Gln Thr Met

165 170 175

Leu Asn Thr Cys Ser Tyr

180

<210> 8

<211> 182

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种-62668

<400> 8

Leu Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Glu Ala Gln Ser Gln Leu Thr

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Lys Pro Glu Asp Pro Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

His Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Asn Gly Cys Asn Thr Arg Gln

35 40 45

Ile Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val

50 55 60

Thr Thr Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Phe Asp Gly Val Ile Val Tyr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Ala Glu Gln Arg Arg Asn Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Val Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Thr

130 135 140

Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys Tyr Arg

145 150 155 160

Trp Gly Leu His Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ser Leu Gln Ser Met

165 170 175

Leu Asn Gly Cys Ala Tyr

180

<210> 9

<211> 185

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种-13395

<400> 9

Ala Ser Ala Phe Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Thr Ala Gln Ser

1 5 10 15

Gln Leu Asn Ser Leu Pro Val Lys Ser Glu Gly Ser Met Asn Gly Tyr

20 25 30

Ser Arg Asp Lys Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Asp Gly Cys Asp

35 40 45

Thr Arg Gln Leu Val Leu Lys Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Ser Gly Ser

50 55 60

Cys Pro Val Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Ile Thr

65 70 75 80

Val Tyr Ser Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala

85 90 95

Glu Ala Trp Arg Ser Gly Ala Ser Gly Trp Thr Thr Glu Lys Arg Gln

100 105 110

Ser Phe Ala Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala

115 120 125

Ser Val Asn Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro

130 135 140

Pro Arg Ser Gly Ser His Cys Ala Tyr Ala Lys Met Trp Val Asn Thr

145 150 155 160

Lys Tyr Arg Trp Gly Leu His Leu Gln Ser Ala Glu Lys Ser Ala Leu

165 170 175

Gln Ser Met Leu Asn Ala Cys Ser Tyr

180 185

<210> 10

<211> 185

<212> PRT

<213> 霍耐克芽孢杆菌

<400> 10

Ala Ser Ala Phe Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Thr Ala Gln Ser

1 5 10 15

Gln Leu Asn Ser Leu Thr Val Lys Ser Glu Gly Ser Met Thr Gly Tyr

20 25 30

Ser Arg Asp Lys Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Asp Gly Cys Asp

35 40 45

Thr Arg Gln Leu Val Leu Lys Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Ser Gly Asn

50 55 60

Cys Pro Val Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Ile Thr

65 70 75 80

Val Tyr Ser Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala

85 90 95

Glu Ala Trp Arg Ser Gly Ala Ser Gly Trp Thr Thr Glu Lys Arg Gln

100 105 110

Ser Phe Ala Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala

115 120 125

Ser Val Asn Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro

130 135 140

Pro Arg Ser Gly Ser His Cys Ala Tyr Ala Lys Met Trp Val Asn Thr

145 150 155 160

Lys Tyr Arg Trp Gly Leu His Val Gln Ser Ala Glu Lys Ser Ala Leu

165 170 175

Gln Ser Met Leu Asn Ala Cys Ser Tyr

180 185

<210> 11

<211> 182

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种-11238

<400> 11

Phe Pro Pro Glu Ile Pro Ser Lys Ser Thr Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Lys Ser Glu Asp Ala Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Asp Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Met Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Ser Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Ile Thr Val Tyr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Glu Lys Arg Arg Asn Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Val Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ser

130 135 140

Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Ala Lys Met Trp Val Asn Thr Lys Tyr Arg

145 150 155 160

Trp Gly Leu His Leu Gln Ser Ala Glu Lys Ser Gly Leu Glu Ser Met

165 170 175

Leu Asn Thr Cys Ser Tyr

180

<210> 12

<211> 182

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种-62451

<400> 12

Leu Pro Pro Asp Leu Pro Ser Lys Ser Thr Thr Gln Ala Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ser Leu Asn Val Lys Asn Glu Glu Ser Met Ser Gly Tyr Ser Arg Glu

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Asp Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Val Ile Leu Lys Arg Asp Ala Asp Asn Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Ile Thr Phe Asn Asp

65 70 75 80

Pro Ser Gln Leu Asp Ile Asp His Val Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Ser Thr Ala Lys Arg Glu Asp Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Ser Ser Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Gly Ala Asn Cys Ala Tyr Ala Lys Met Trp Ile Asn Thr Lys Tyr Asn

145 150 155 160

Trp Gly Leu His Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Ala Leu Gln Gly Met

165 170 175

Leu Asn Ser Cys Ser Tyr

180

<210> 13

<211> 182

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种-18318

<400> 13

Phe Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Thr Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Lys Ser Glu Gly Ser Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ile Gly Gln Gly Ser Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Leu Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Ser Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Val Thr Phe Tyr Asp

65 70 75 80

Pro Ser Asp Leu Asp Ile Asp His Val Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Ser Thr Gln Lys Arg Lys Asp Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Ser Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Ser Ser Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Thr Arg Ser

130 135 140

Gly Ala Ala Cys Gly Tyr Ser Lys Trp Trp Ile Ser Thr Lys His Lys

145 150 155 160

Trp Gly Leu Ser Leu Gln Ser Ser Glu Lys Asn Ala Leu Gln Gly Met

165 170 175

Leu Asn Ser Cys Val Tyr

180

<210> 14

<211> 182

<212> PRT

<213> 病研所芽孢杆菌

<400> 14

Leu Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Thr Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ala Leu Thr Val Gln Thr Glu Gly Ser Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Asn Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Val Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Thr Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Val Thr Leu Tyr Asn

65 70 75 80

Pro Ser Asp Leu Asp Ile Asp His Val Val Ala Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Asp Lys Arg Glu Asp Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Ser Gly Thr Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Ser Thr Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ser

130 135 140

Gly Ala Ala Cys Gly Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Ser Thr Lys Tyr Lys

145 150 155 160

Trp Asn Leu Asn Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Ala Leu Gln Ser Met

165 170 175

Leu Asn Ser Cys Ser Tyr

180

<210> 15

<211> 182

<212> PRT

<213> 藻居芽孢杆菌

<400> 15

Phe Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Glu Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Gln Ser Glu Gly Ser Met Ser Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ile Gly Gln Gly Asn Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Leu Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Asp Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Phe Asp Gly Val Thr Val Tyr Asp

65 70 75 80

Pro Ser Asp Leu Asp Ile Asp His Met Val Pro Met Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Ser Thr Gln Lys Arg Glu Asp Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Ser Gly Pro His Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Ser Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Lys Pro Thr Arg Tyr

130 135 140

Gly Ala His Cys Gly Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys Tyr Val

145 150 155 160

Tyr Asp Leu Thr Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Glu Leu Gln Ser Met

165 170 175

Leu Asn Thr Cys Ser Tyr

180

<210> 16

<211> 182

<212> PRT

<213> 环境样品J

<400> 16

Leu Pro Pro Asn Ile Pro Ser Lys Ala Asp Ala Leu Thr Lys Leu Asn

1 5 10 15

Ala Leu Thr Val Gln Thr Glu Gly Pro Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Leu Phe Pro His Trp Ser Ser Gln Gly Asn Gly Cys Asn Thr Arg His

35 40 45

Val Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Ser Val Val Asp Thr Cys Pro Val

50 55 60

Thr Thr Gly Arg Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Leu Val Phe Thr Ser

65 70 75 80

Ala Ser Asp Ile Asp Ile Asp His Val Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Ser Thr Lys Arg Gln Ser Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Thr Ser Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Ala Lys Met Trp Val Glu Thr Lys Ser Arg

145 150 155 160

Trp Gly Leu Thr Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ala Ala Leu Gln Thr Ala

165 170 175

Ile Asn Ala Cys Ser Tyr

180

<210> 17

<211> 182

<212> PRT

<213> 越南芽孢杆菌

<400> 17

Phe Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Thr Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ala Leu Thr Val Lys Ser Glu Ser Ser Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ile Gly Gln Arg Asn Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Leu Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Ser Tyr Ser Gly Ser Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Ser Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Val Thr Phe Thr Asp

65 70 75 80

Pro Ser Asp Leu Asp Ile Asp His Val Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Ala Lys Arg Glu Asp Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Ser Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Ser Ser Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ser

130 135 140

Gly Ala Ala Cys Gly Tyr Ser Lys Trp Trp Ile Ser Thr Lys Tyr Lys

145 150 155 160

Trp Gly Leu Ser Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Ala Leu Gln Gly Met

165 170 175

Leu Asn Ser Cys Ile Tyr

180

<210> 18

<211> 182

<212> PRT

<213> 花津滩芽孢杆菌

<400> 18

Ile Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Ala Ala Gln Ser Gln Leu Asp

1 5 10 15

Ser Leu Ala Val Gln Ser Glu Gly Ser Met Ser Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ile Gly Gln Gly Asn Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Leu Val Leu Gln Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Asp Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Phe Asp Gly Val Gln Val Tyr Asp

65 70 75 80

Pro Ser Tyr Leu Asp Ile Asp His Met Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Ser Thr Gln Lys Arg Glu Asp Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asp Gly Pro His Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Ser Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Lys Pro Thr Arg Tyr

130 135 140

Ser Ala His Cys Gly Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys Tyr Val

145 150 155 160

Tyr Asp Leu Asn Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ala Leu Gln Ser Met

165 170 175

Leu Asn Thr Cys Ser Tyr

180

<210> 19

<211> 182

<212> PRT

<213> 胶质类芽孢杆菌

<400> 19

Leu Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Thr Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Lys Ser Glu Ser Thr Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Thr Ser Gln Gly Gly Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Val Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Ser Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Ile Thr Val Tyr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Glu Lys Arg Gln Asn Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Gly Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Ser Asn

115 120 125

Arg Ala Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Lys Pro Thr Arg Ser

130 135 140

Gly Ala His Cys Ala Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Asn Thr Lys Tyr Arg

145 150 155 160

Trp Gly Leu His Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Ala Leu Gln Ser Met

165 170 175

Leu Asn Thr Cys Ser Tyr

180

<210> 20

<211> 182

<212> PRT

<213> 印度芽孢杆菌

<400> 20

Thr Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Thr Ala Gln Thr Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ala Leu Thr Val Lys Thr Glu Gly Ser Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Leu Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Ser Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Val Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Ser Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Val Thr Phe Tyr Asp

65 70 75 80

Pro Ser Asp Leu Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Ser Lys Arg Gln Asp Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Ser Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Ser Thr Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Gly Ala Ala Cys Gly Tyr Ser Lys Trp Trp Ile Ser Thr Lys Tyr Lys

145 150 155 160

Trp Gly Leu Ser Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Ala Leu Gln Gly Met

165 170 175

Leu Asn Ser Cys Ser Tyr

180

<210> 21

<211> 182

<212> PRT

<213> 黄海芽孢杆菌

<400> 21

Thr Pro Pro Val Thr Pro Ser Lys Ala Thr Ser Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Gly Leu Thr Val Lys Thr Glu Gly Ala Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ser Ser Gln Gly Gly Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Val Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Ser Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Ser Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Val Lys Phe Thr Asn

65 70 75 80

Pro Ser Asp Leu Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Ala Gln Arg Glu Ala Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Ser Gly Ser Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Ser Ser Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Gly Ala Lys Cys Gly Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Ser Thr Lys Ser Lys

145 150 155 160

Trp Asn Leu Ser Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Ala Leu Gln Gly Met

165 170 175

Leu Asn Ser Cys Val Tyr

180

<210> 22

<211> 184

<212> PRT

<213> 路西法芽孢杆菌

<400> 22

Ala Ser Leu Pro Pro Gly Ile Pro Ser Leu Ser Thr Ala Gln Ser Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Leu Thr Val Lys Ser Glu Gly Ser Leu Thr Gly Tyr Ser

20 25 30

Arg Asp Val Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Ser Gly Cys Asp Thr

35 40 45

Arg Gln Val Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Asn Cys

50 55 60

Pro Val Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Val Thr Val

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Val Val Pro Leu Ala Glu

85 90 95

Ala Trp Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Glu Lys Arg Gln Asn

100 105 110

Phe Ala Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser

115 120 125

Ser Asn Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Thr

130 135 140

Arg Thr Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Ala Lys Met Trp Ile Asn Thr Lys

145 150 155 160

Tyr Arg Trp Gly Leu His Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ala Leu Gln

165 170 175

Ser Met Leu Asn Thr Cys Ser Tyr

180

<210> 23

<211> 182

<212> PRT

<213> 黄海芽孢杆菌

<400> 23

Thr Pro Pro Val Thr Pro Ser Lys Glu Thr Ser Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Gly Leu Thr Val Lys Thr Glu Gly Ala Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ser Ser Gln Gly Gly Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Val Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Ser Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Ser Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Val Lys Phe Thr His

65 70 75 80

Pro Ser Asp Leu Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Ala Gln Arg Glu Ala Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Ser Gly Ser Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Ser Ser Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ala

130 135 140

Gly Ala Lys Cys Gly Tyr Ala Lys Trp Trp Ile Ser Thr Lys Ser Lys

145 150 155 160

Trp Asn Leu Ser Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Ala Leu Gln Gly Met

165 170 175

Leu Asn Ser Cys Val Tyr

180

<210> 24

<211> 182

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种 SA2-6

<400> 24

Leu Pro Ser Gly Ile Pro Ser Lys Ser Thr Ala Gln Ser Gln Leu Asn

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Lys Ser Glu Gly Ser Met Thr Gly Tyr Ser Arg Asp

20 25 30

Lys Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Gly Gly Cys Asp Thr Arg Gln

35 40 45

Val Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val

50 55 60

Thr Ser Gly Lys Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Ile Ser Val Tyr Ser

65 70 75 80

Pro Ser Glu Ile Asp Ile Asp His Val Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp

85 90 95

Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Thr Lys Arg Gln Asn Phe Ala

100 105 110

Asn Asp Leu Asn Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Thr Ala Ser Val Asn

115 120 125

Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Tyr

130 135 140

Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Ala Lys Met Trp Ile Asn Thr Lys Tyr Arg

145 150 155 160

Trp Asp Leu Asn Leu Gln Ser Ser Glu Lys Ser Ser Leu Gln Ser Met

165 170 175

Leu Asp Thr Cys Ser Tyr

180

<210> 25

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 基序

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1)

<223> Xaa = Asp (D)或Met (M)或Leu (L)

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (2)..(2)

<223> Xaa = Ser (S)或Thr (T)

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (7)..(7)

<223> Xaa = Asp (D)或Asn (N)

<400> 25

Xaa Xaa Gly Tyr Ser Arg Xaa

1 5

<210> 26

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 基序

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (3)..(3)

<223> Xaa = 任何氨基酸

<400> 26

Ala Ser Xaa Asn Arg Ser Lys Gly

1 5

Claims

1.一种DNA酶亲本的变体，其中该变体包含一个或两个基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)，其中该变体与SEQ ID NO 1相比包括一个或多个取代，其中该取代选自下组，该组由以下组成：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中该变体与SEQID NO:1中所示多肽具有至少80％的序列同一性并且该变体具有DNA酶活性。

2.根据权利要求1所述的变体，该变体与该亲本相比或与具有SEQ ID NO:1中所示多肽的DNA酶相比具有改进的稳定性，测量为半衰期改进因子HIF。

3.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％但小于100％的序列同一性。

4.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中与SEQ ID NO:1相比的改变的总数是1-20个，例如1-10个和1-5个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。

5.一种清洁组合物，例如洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含根据权利要求1至4中任一项所述的变体。

6.根据权利要求5所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含一种或多种洗涤剂组分。

7.根据权利要求5-6中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含一种或多种选自下组的另外的酶，该组由以下组成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶、或其任何混合物。

8.根据权利要求6-7中任一项所述的洗涤剂组合物，其处于条、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体的形式。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的洗涤剂组合物在清洁过程，如衣物洗涤或硬质表面清洁，如餐具洗涤中的用途。

10.一种用于获得DNA酶变体的方法，该方法包括：

a)向亲本DNA酶中引入在一个或多个位置处的改变，这些位置对应于以下位置：SEQ IDNO 1的1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中该变体具有DNA酶活性，

b)并且回收该变体。

11.根据权利要求10所述的方法，其中该变体与SEQ ID NO:1中所示多肽相比包括1-20个，例如1-10个和1-5个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。

12.根据权利要求10或11中任一项所述的方法，其中该改变是取代并且其中该取代选自下组，该组由以下组成：与SEQ ID NO:1中所示多肽相比的T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中该DNA酶亲本属于GYS-进化枝，并且其中该亲本DNA酶包含一个或两个基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO:25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO:26)。

14.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中该亲本DNA酶选自下组的多肽：

15.根据权利要求13或14中任一项所述的方法，其中该亲本DNA酶从芽孢杆菌属获得。

16.根据权利要求10-15中任一项所述的方法，其中该DNA酶变体与SEQ ID NO:1中所示多肽具有至少80％，如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列同一性。

17.根据权利要求1至4中任一项所述的DNA酶变体用于深度清洁物品的用途，其中该物品是纺织品或硬质表面。