CN109415708A - 食物芽孢杆菌脱氧核糖核酸酶变体及其用途 - Google Patents

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Abstract

包含多肽变体的洗涤剂组合物以及使用此类组合物和包含多肽变体的织物处理组合物来清洁和/或处理表面的方法。所述组合物可包含阴离子、非离子和/或阳离子表面活性剂。

Description

食物芽孢杆菌脱氧核糖核酸酶变体及其用途
参考序列表
本专利申请包含计算机可读格式的序列表，其以引用方式并入。
发明领域
本发明涉及包含新型脱氧核糖核酸酶(DNase)变体的洗涤剂组合物，其表现出相对于亲本脱氧核糖核酸酶在一种或多种特性上的改变，包括：洗涤性能，洗涤剂稳定性和/或贮存稳定性。本发明的变体适合用于清洁过程和洗涤剂组合物，诸如洗衣组合物和洗碗组合物，包括手洗和自动洗碗组合物。本发明还涉及编码该变体的分离的DNA序列、表达载体、宿主细胞以及用于制备和使用本发明的脱氧核糖核酸酶变体的方法。
背景技术
为了节约能源和保护环境，许多清洁过程的温度被降低了。此外，许多苛刻的洗涤剂组分(诸如强漂白剂)被替代了，并且短的清洁过程变得越来越受欢迎。当温度降低、漂白剂被替代时，以及当清洁和洗涤过程被缩短时，诸如细菌之类的微生物具有更好的生长条件。微生物通常生存为粘附至许多天然的、工业上的和医学环境中的表面，由包括生物聚合物和大分子在内的细胞外物质包封。所得的包封的微生物的粘液层称为生物膜，其通常围绕于胞外聚合物质(EPS)基质中。EPS是通常由细胞外DNA、蛋白质和多糖构成的聚合物聚集体。
诸如生物膜和EPS之类的有机物质的存在可能意味着衣物品变得粘稠，并且污垢可粘附到粘性区域。当脏的衣物品与较少污垢的衣物品一起清洗时，存在于洗涤液体中的污垢倾向于粘附到衣物上(例如通过再沉积的方式)，尤其是如上所述如果衣物很粘稠的情况。因此该衣物品在洗涤后较洗涤前更“脏”了。
国际专利申请WO 2011/098579(纽卡斯尔大学)和WO 2014/087011(诺维信A/S)涉及使用脱氧核糖核酸酶化合物。为了可用于诸如衣物洗涤的清洁过程中，诸如脱氧核糖核酸酶的酶需要在洗涤剂组合物中保持稳定并且与标准洗涤剂组分如表面活性剂、助洗剂、漂白剂等相容。
本发明提供洗涤剂组合物，诸如清洁和/或处理组合物。
发明内容
本发明涉及一种包含脱氧核糖核酸酶亲本变体的洗涤剂组合物，其中脱氧核糖核酸酶亲本属于GYS进化枝，并且其中亲本脱氧核糖核酸酶包含基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO：26)中的一者或两者；和洗涤剂组合物助剂。
本发明还涉及一种洗涤剂组合物，其包含(a)脱氧核糖核酸酶变体，其与SEQ IDNO：1中所示多肽相比、在对应SEQ ID NO：1的位点1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182的一个或多个位点处包含改变，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽全长(序列)至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性，但与SEQ ID NO：1中所示多肽的序列同一性少于100％，其中变体具有脱氧核糖核酸酶活性；和(b)助剂。
本发明还涉及洗涤剂组合物，其包含(a)脱氧核糖核酸酶亲本的变体，其中变体包含基序[[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO：26)中的一者或两者，其中所述变体与SEQ ID NO：1相比包含一处或多处替换，其中该替换选自：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性，但与SEQ ID NO：1中所示多肽的序列同一性少于100％，其中变体具有脱氧核糖核酸酶活性；和(b)助剂。优选地，该变体与SEQ ID NO：1中所示多肽相比具有至少一个改善的性质。与具有SEQ ID NO：1中所示多肽的脱氧核糖核酸酶相比，改善的性质优选地为增加的稳定性，测量值为半衰期改善系数(half-life improvement factor，HIF)。
本发明涉及一种洗涤剂，例如清洁和/或处理组合物，其包含根据本发明的变体；和清洁助剂；以及在清洁和/或处理过程(诸如洗衣或硬表面清洁如洗碗)中使用此类组合物。本发明还涉及一种处理表面(优选地，织物)的方法，其包括(i)形成含水的洗涤液体，洗涤液体包含水和洗涤剂组合物；(ii)在30℃或更低的温度下用该含水洗涤液体处理所述表面；以及(iii)冲洗所述表面。
本发明还涉及一种洗涤剂组合物(组合物为织物处理组合物，诸如织物软化剂组合物)和使用织物软化剂组合物处理织物的方法。
本文所述脱氧核糖核酸酶变体可通过一种方法制备，该方法包括：
a)在亲本脱氧核糖核酸酶中对应于SEQ ID NO：1的位点1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182的一个或多个位点导入一种改变，其中变体具有脱氧核糖核酸酶活性，
b)并且回收该变体。
适合用于本发明的组合物中的脱氧核糖核酸酶变体可以通过一种方法制备，该方法包括在亲本脱氧核糖核酸酶中的一个或多个位点导入一种改变，其中所述改变是替换，并且其中替换选自相对于SEQ ID NO：1中所示多肽的：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W。
该脱氧核糖核酸酶亲本优选地属于GYS进化枝，并且其中亲本脱氧核糖核酸酶包含基序[[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO：26)中的一者或两者。
本发明的一个方面涉及根据本发明的组合物用于深层清洁物品的用途，其中所述物品为纺织物或硬质表面。
序列
SEQ ID NO：1从食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：2从堀越氏芽孢杆菌(Bacillus horikoshii)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：3从芽孢杆菌62520获得的成熟多肽
SEQ ID NO：4从堀越氏芽孢杆菌(Bacillus horikoshii)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：5从堀越氏芽孢杆菌(bacillus horikoshii)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：6从芽孢杆菌16840获得的成熟多肽
SEQ ID NO：7从芽孢杆菌16840获得的成熟多肽
SEQ ID NO：8从芽孢杆菌62668获得的成熟多肽
SEQ ID NO：9从芽孢杆菌13395获得的成熟多肽
SEQ ID NO：10从horneckiae芽孢杆菌(Bacillus horneckiae)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：11从芽孢杆菌11238获得的成熟多肽
SEQ ID NO：12从芽孢杆菌62451获得的成熟多肽
SEQ ID NO：13从芽孢杆菌18318获得的成熟多肽
SEQ ID NO：14从病研所芽孢杆菌(Bacillus idriensis)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：15从栖藻芽孢杆菌(Bacillus algicola)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：16从环境样本J获得的成熟多肽
SEQ ID NO：17从越南芽孢杆菌(Bacillus vietnamensis)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：18从花津滩芽孢杆菌(bacillus hwajinpoensis)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：19从胶质类芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：20从印度芽孢杆菌(Bacillus indicus)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：21从黄海芽胞杆菌(Bacillus narisflavi)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：22从路西法芽孢杆菌(bacillus luciferensis)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：23从黄海芽胞杆菌(Bacillus marisflavi)获得的成熟多肽
SEQ ID NO：24从芽孢杆菌SA2-6获得的成熟多肽
SEQ ID NO：25基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N]
SEQ ID NO：26基序ASXNRSKG
定义
术语“助剂”是指针对所期望的洗涤剂组合物的特定类型和产品形式(例如液体、颗粒、粉末、条状物、糊剂、喷雾、片剂、凝胶或泡沫组合物)所选择的任何液体、固体或气体材料，该材料也优选地与组合物中所用的脱氧核糖核酸酶变体酶相容。在一些方面，颗粒状组合物为“致密”形式，而在其它方面，液体组合物为“浓缩”形式。
术语“等位变体”指占据相同染色体座位的基因的两个或更多个替代形式中的任何一个。等位变体天然来源于突变，并且可导致种群内的多态性。基因突变可为沉默突变(不改变编码的多肽)或者可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位变体是由基因的等位变体编码的多肽。
“生物膜”可由任何微生物组制备，其中细胞在表面(诸如纺织物，盘碟或硬质表面)上彼此粘附。在很多情况下这些粘附的细胞嵌入在细胞自身产生的胞外聚合物质(EPS)基质中。生物膜EPS通常是由胞外DNA、蛋白质和多糖构成的聚合物聚集体。生物膜可形成于生命体或非生命体表面。生物膜中生长的微生物细胞与同一生物体的浮游细胞存在生理上不同，其(浮游细胞)相比之下是在液体介质中可漂浮或游泳的单个细胞。生活在生物膜中的细菌通常与相同菌种的游离漂浮细菌具有显著不同的特性，因为膜的致密和受保护的环境使得它们能够以各种方式进行合作和相互作用。这种环境的一个有益效果是提高了对洗涤剂和抗生素的抗性，因为致密的细胞外基质和细胞外层保护了群落的内部。在下列菌种中能够找到产生衣物洗涤生物膜的细菌：不动杆菌属(Acinetobacter sp.)、气微菌属(Aeromicrobium sp.)、短波单胞菌属(Brevundimonas sp.)、微杆菌属(Microbacteriumsp.)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)和寡养食单胞菌属(Stenotrophomonas sp.)。
术语“cDNA”是指可从原核细胞或真核细胞获得的成熟的、剪接的mRNA分子通过反向转录来制备的DNA分子。cDNA不含在对应的基因组DNA中可能存在的内含子序列。最初的初始RNA转录物是mRNA的前体，其在作为成熟的经拼接的mRNA出现之前，通过一系列步骤，包括拼接，被加工。
术语“进化枝”是指基于可追溯到共同祖先的同源特征而聚类在一起的一组多肽。多肽进化枝能够可视化为系统发育树，而进化枝是由共同祖先和其所有直系后代组成的一组多肽。形成例如系统发育树中所示的一个进化枝的一组多肽通常可共享共同特性，并且与不在进化枝中的其它多肽相比更为密切相关。
术语“编码序列”指多核苷酸，其直接规定了其多肽产物的氨基酸序列。编码序列的边界一般由开放阅读框确定，它通常起始于ATG起始密码子或供选择的起始密码子如GTG和TTG并终止于终止密码子如TAA、TAG、和TGA。编码序列可为DNA、cDNA、合成的、或重组的多核苷酸。
术语“调控序列”是指对于编码本发明的变体的多核苷酸的表达所需的所有元件。每一调控序列可以是对编码所述变体的多核苷酸而言天然的或外源的，或对彼此而言天然的或外源的。此类调控序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、和转录终止子。调控序列至少包括启动子以及转录和翻译终止信号。可以为调控序列设置接头用于引入特异性限制性位点，以便于将该调控序列与编码变体的多核苷酸的编码区连接起来。
术语“深层清洁”是指减少或移除生物膜、EPS或它们的部分的组分，所述组分诸如蛋白质、DNA、多糖、污垢或存在于例如生物膜或EPS中的其它组分。
除非另外指明，术语“洗涤剂组合物”包括颗粒或粉末形式的多功能或“重垢型”洗涤剂，尤其是清洁洗涤剂；液体、凝胶或糊剂状的多功能洗涤剂，尤其是所谓的重垢型液体(HDL)类型；液体精细织物洗涤剂；手洗餐具洗涤剂或轻垢型餐具洗涤剂，尤其是高起泡类型的那些；机洗餐具洗涤剂，包括各种供家庭和机构使用的片剂、颗粒、液体和漂洗助剂类型；液体清洁和消毒剂，包括抗菌手洗型、洗涤棒、条皂、漱口水、假牙清洁剂、汽车或地毯清洁剂、浴室清洁剂；毛发洗发剂和毛发冲洗剂；沐浴凝胶，泡沫浴；金属清洁剂；以及清洁辅助剂如漂白添加剂和“去污棒”或预处理型。术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂制剂”用于提及旨在用于清洁脏污物体的洗涤介质中的混合物。在一些方面，该术语用于提及洗涤织物和/或服装(例如“衣物洗涤剂”)。在可供选择的方面，该术语是指其它洗涤剂，诸如用于清洁盘碟、餐具等的那些洗涤剂(例如“盘碟洗涤剂”)。本发明不旨在限于任何具体的洗涤剂制剂或组合物。术语“洗涤剂组合物”不旨在限于包含表面活性剂的组合物。除了根据本发明的变体之外、该术语旨在涵盖可包含例如表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白剂体系或漂白剂组分、聚合物、织物调理剂、泡沫促进剂、抑泡剂、染料、香料、变色抑制剂、荧光增白剂、杀细菌剂、杀真菌剂、垢悬浮剂、抗腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂和增溶剂的洗涤剂。洗涤剂组合物也可用于织物处理步骤，例如它们可提供织物清新，织物软化和/或着色焕新步骤。
术语“脱氧核糖核酸酶”，“脱氧核糖核酸酶变体”或“脱氧核糖核酸酶亲本”是指具有脱氧核糖核酸酶活性的多肽，其催化DNA中的磷酸二酯键的水解裂解，从而降解DNA。脱氧核糖核酸酶属于酯酶(EC编号3.1)，水解酶的子组。脱氧核糖核酸酶分类为EC 3.1.21.X。其中X＝i、2、3、4、5、6、7、8或9。术语“脱氧核糖核酸酶”和表述“具有脱氧核糖核酸酶活性的多肽”可在整个专利申请中互换使用。就本发明的目的而言，根据测定方法I或测定方法II中所述的步骤测定脱氧核糖核酸酶活性。在一些方面，与亲本脱氧核糖核酸酶相比，本发明的脱氧核糖核酸酶变体具有改善的脱氧核糖核酸酶活性。在一些方面，与SEQ ID NO：1所示的多肽相比，本发明的脱氧核糖核酸酶变体具有至少100％，例如至少110％、至少120％、至少130％、至少140％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％，或至少200％的脱氧核糖核酸酶活性。
术语“酶的有效量”是指实现特定应用(例如在定义的洗涤剂组合物中)所需的酶活性所必需的酶的量。此类有效量很容易由本领域的普通技术人员进行探知，并且依赖于许多因素，诸如所用的特定酶、清洁应用、洗涤剂组合物的具体组成，以及是否需要液体或干燥(例如颗粒状，条状)的组合物等。术语脱氧核糖核酸酶变体的“有效量”是指上文所述的，例如在定义的洗涤剂组合物中达到期望的酶活性水平的脱氧核糖核酸酶变体的量。
术语“表达”包括涉及制备变体的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、和分泌。
术语“表达载体”是指线性或环状的DNA分子，其包含编码变体的多核苷酸，并且所述多核苷酸可操作地连接至提供其表达的附加的核苷酸。
术语“织物”涵盖任何纺织物材料。因此，预期该术语涵盖服装，以及织物、纱线、纤维、非织造材料、天然材料、合成材料和任何其它纺织物材料。
术语“高洗涤剂浓度”体系包括在洗涤水中存在多于约2000ppm的洗涤剂组分的洗涤剂。欧洲的洗涤剂通常被认为是高洗涤剂浓度体系。
术语“宿主细胞”是指对用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行的转化、转染、转导等敏感的任何细胞类型。术语“宿主细胞”包括了由于在复制过程中发生的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。
术语“改善的性质”是指与亲本相比、和/或与具有SEQ ID NO：1的脱氧核糖核酸酶相比、或与具有所述变体的相同氨基酸序列但不在所述特定位置中的一个或多个处具有改变的脱氧核糖核酸酶相比，与变体相关联的被改善的特性。此类改善的性质包括但不限于稳定性(诸如洗涤剂稳定性)、洗涤性能(例如深层清洁效果)，深层清洁效果可以包括但不限于脱胶效果。
术语“改善的脱氧核糖核酸酶活性”在本文中被定义为改变的脱氧核糖核酸酶活性(例如增强了对DNA中磷酸二酯键水解裂解的催化裂解)，脱氧核糖核酸酶变体显示出相对于(或相比于)亲本脱氧核糖核酸酶(诸如相比于具有SEQ ID NO：1的脱氧核糖核酸酶)的活性而言的活性改变。
术语“低洗涤剂浓度”体系包括在洗涤水中存在少于约800ppm的洗涤剂组分的洗涤剂。亚洲的，例如日本的洗涤剂通常被认为是低洗涤剂浓度体系。
术语“改善的洗涤性能”包括但不限于术语“深层清洁效果”。根据本发明，改善的性能(例如脱氧核糖核酸酶变体的深层清洁性能)的测量是与脱氧核糖核酸酶亲本(例如SEQ ID No：1中所示的脱氧核糖核酸酶)相比较的。改善的性能(例如深层清洁性能)可表示为染污样本的衰减值。在洗涤及漂洗后将样本铺展平整并在常温下空气干燥过夜。所有洗涤样本在清洗的第二天进行评估。使用具有非常小的孔隙的Macbeth Color Eye 7000反射分光光度计进行样本的光反射率评定。在入射光中没有紫外光的情况下进行测定，并且提取460nm处的衰减。阳性响应表明污垢已被去除，包括由于例如生物膜粘性层粘附到织物上的污垢。
术语“分离的多核苷酸”是指经人工改性的多核苷酸。在一些方面，分离的多核苷酸是通过琼脂糖电泳所测定的至少1％纯的，例如，至少5％纯、至少10％纯、至少20％纯、至少40％纯、至少60％纯、至少80％纯、至少90％纯、和至少95％纯的。多核苷酸可为基因组、cDNA、RNA、半合成的、合成来源的、或它们的任何组合。
术语“衣物洗涤”涉及家用衣物洗涤和工业衣物洗涤两者，是指使用包含本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织物的过程。衣物洗涤过程可例如使用例如家用或工业洗衣机进行，或者可手工进行。
术语“成熟多肽”是指在翻译和任何翻译后修饰(诸如N-末端加工、C-末端截短、糖基化、磷酸化等)后最终形式的多肽。在一些方面，成熟多肽是SEQ ID NO：1的1至182位的氨基酸。根据EDMAN N末端测序数据和完整的MS数据，实验证实了根据本发明使用的成熟多肽的N末端。本领域已知宿主细胞可产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的C末端和/或N末端氨基酸)的混合物。
术语“成熟多肽编码序列”是指编码具有脱氧核糖核酸酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
术语“中等洗涤剂浓度”体系包括在洗涤水中存在的约800ppm至约2000ppm之间的洗涤剂组分的洗涤剂。北美的洗涤剂通常被认为是中等洗涤剂浓度体系。
术语“核酸构建体”是指单链或双链的核酸分子，它是从天然存在的基因分离的，或者是经过改性以包含不会天然地存在形式的核酸的片段，或者是合成的。当所述核酸构建体包含本发明的编码序列的表达所需的控制序列时，术语核酸构建体与术语“表达盒”是同义的。
术语“非织物洗涤剂组合物”包括非纺织品表面洗涤剂组合物，其包括但不限于用于硬质表面清洁的组合物，诸如盘碟洗涤剂组合物，其包括手动盘碟洗涤组合物、口腔洗涤剂组合物、义齿洗涤剂组合物和个人清洁组合物。
术语“可操作地连接”是指一种构型，控制序列在其中被置于相对于多核苷酸的编码序列的适当位点上，使得控制序列指导编码序列的表达。
术语“亲本”脱氧核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶亲本或前体脱氧核糖核酸酶可互换使用。在本发明的上下文中，“亲本脱氧核糖核酸酶”应被理解为脱氧核糖核酸酶，其氨基酸序列中进行至少一处改变以产生脱氧核糖核酸酶变体，其氨基酸序列与改变发生之前的脱氧核糖核酸酶序列(即亲本脱氧核糖核酸酶)少于100％相同。因此，亲本是与变体相比具有相同氨基酸序列但不具有在一个或多个特定位置处改变的脱氧核糖核酸酶。应当理解，本上下文中的表达“具有相同的氨基酸序列”涉及100％的序列同一性。在一个特定方面，脱氧核糖核酸酶亲本具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的序列同一性。
本文所用术语“相关洗涤条件”用于指示在洗涤剂市场细分中实际家庭使用的条件，具体地讲是洗涤温度、时间、洗涤力学、洗涤剂浓度、洗涤剂类型和水硬度。
术语“稳定性”包括贮存稳定性和在使用期间(例如在洗涤过程期间)的稳定性，并以时间函数反映根据本发明的脱氧核糖核酸酶变体的稳定性，例如当将脱氧核糖核酸酶变体保留在溶液(具体地讲洗涤剂溶液)中时保留了多少活性。稳定性受许多因素的影响，例如pH、温度、洗涤剂组合物，例如助洗剂、表面活性剂等的量等。可如实施例2中所述测量脱氧核糖核酸酶稳定性。术语“改善的稳定性”或“增加的稳定性”在本文中被定义为相对于亲本脱氧核糖核酸酶和/或相对于SEQ ID NO：1的稳定性，变体脱氧核糖核酸酶显示出增加的溶液稳定性。“改善的稳定性”和“增加的稳定性”包括洗涤剂稳定性。与脱氧核糖核酸酶亲本相比，术语“洗涤剂稳定性”或“改善的洗涤剂稳定性可改善脱氧核糖核酸酶活性的稳定性。如实施例2中所述测量脱氧核糖核酸酶稳定性。
术语“基本上纯的变体”是指按重量计包含至多10％、至多8％、至多6％、至多5％、至多4％、至多3％、至多2％、至多1％、和至多0.5％的其它多肽物质的制剂，所述多肽物质是与其天然地或重组地相关联的。优选地，所述变体按所述制剂中存在的总多肽物质的重量计是至少92％纯的，例如，至少94％纯、至少95％纯、至少96％纯、至少97％纯、至少98％纯、至少99％、至少99.5％纯、和100％纯的。本发明的变体优选地为基本上纯的形式。这能够通过例如为人们所熟知的重组方法或经典的纯化方法制备变体来实现。
术语“纺织品”指织造织物，以及适合转化为或用作纱、织造、针织、非织造织物的短纤维和原丝。该术语涵盖由天然的以及合成的(例如，制造的)纤维制成的纱。术语“纺织物材料”是纤维、纱中间体、纱、织物和由织物制成的产品(例如服装和其它制品)的通称。
术语“转录启动子”是指启动子，其为一段促进特定基因的转录的DNA。转录启动子通常位于它们所调控的基因附近，同一条链的上游(朝向有义链的5’区)。
术语“转录终止子”是指一段遗传序列，其标记了用于转录的基因组DNA上的基因或操纵子的末端。
术语“变体”是指具有脱氧核糖核酸酶活性的多肽，其包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的替换。替换是指将占据某个位点的氨基酸用不同的氨基酸进行替换，缺失是指移除占据某个位置的氨基酸，插入是指在占据某个位置的氨基酸的邻近添加氨基酸，例如1至10个氨基酸，优选1-3个氨基酸。本发明的变体具有SEQ ID NO：1中所示成熟多肽的脱氧核糖核酸酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少90％、至少95％、或至少100％。术语“脱氧核糖核酸酶变体”是指具有脱氧核糖核酸酶活性、并且与亲本脱氧核糖核酸酶相比(例如与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个(或一个或若干个)位点处的改变(即替换、插入和/或缺失)的脱氧核糖核酸酶。
如本文所用，术语“水硬度”或“硬度”或“dH”或“°dH”是指德氏硬度。每升水中含10毫克钙氧化物定义为1度。
术语“野生型脱氧核糖核酸酶”是指由天然存在的生物体(诸如存在于自然界中的真菌、细菌、古细菌、酵母、植物或动物)表达的脱氧核糖核酸酶。
变体设计的规则
就本发明的目的而言，将SEQ ID NO：1中公开的多肽用于测定另一种脱氧核糖核酸酶中对应的氨基酸残基。将另一种脱氧核糖核酸酶氨基酸序列与SEQ ID NO：1所公开的多肽进行比对，并且基于比对，确定对应于SEQ ID NO：1所公开的多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位点数字，其使用了Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.Biol.48：443-453)以在EMBOSS程序包的Needle程序中实现(EMBOSS：TheEuropean Molecular Biology Open Software Suite，Rice等人，2000，Trends Genet.16：276-277)，优选5.0.0或更新的版本。所用的参数是，为10的空位罚分，为0.5的空位延伸罚分，和EBLOSUM62(EMBOSS版的BLOSUM62)取代矩阵。
另一个脱氧核糖核酸酶中对应的氨基酸残基的鉴定可通过将多个多肽序列用若干个计算机程序进行比对来确定，程序包括但不限于MUSCLE(multiple sequencecomparison by log-expectation；版本3.5或更新的；Edgar，2004，Nucleic AcidsResearch 32：1792-1797)，MAFFT(版本6.857或更新版本；Katoh和Kuma，2002，NucleicAcids Research 30：3059-3066；Katoh等人，2005，Nucleic Acids Research 33：511-518；Katoh和Toh，2007，Bioinformatics 23：372-374；Katoh等人，2009，Methods in MolecularBiology 537：_39-64；Katoh和Toh，2010，bioinformatics 26：_1899-1900)，和采用了ClustalW的EMBOSS EMMA(1.83或更新版本；Thompson等人，1994，Nucleic Acids Research22：4673-4680)，使用它们各自的默认参数。
当另一种酶与SEQ ID NO：1的多肽存在分化由此使得传统的基于序列的比较未检测出它们的关系(Lindahl和Elofsson，2000，J.Mol.Biol.295：613-615)时，可使用其它成对序列比较算法。使用利用了多肽家族的概率表现(谱)来检索数据库的检索程序能够获得基于序列的检索中的更高灵敏度。例如，PSI-BLAST程序通过迭代的数据库搜索过程来生成谱，并且能够检测远缘同系物(Atschul等人，1997，Nucleic Acids Res.25：3389-3402)。如果多肽的家族或超家族在蛋白质结构数据库中具有一个或多个代表，能够实现甚至更高的敏感性。诸如GenTHREADER(Jones，1999，J.Mol.Biol.287：797-815；McGuffin和Jones，2003，Bioinformatics 19：874-881)的程序利用多种来源的信息(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱和溶剂化势能)作为至神经网络的输入，预测查询序列的结构性折叠。类似地，Gough等人，2000，J.Mol.Biol.313：903-919的方法能够被用于将未知结构的序列与SCOP数据库中存在的超家族模型比对。这些比对可以继而用于生成多肽的同源性模型，且可以使用多种为此目的开发的工具来评估这类模型的精确性。
对于已知结构的蛋白质，已经有数种用于检索和生成其结构性比对的工具和资源。例如，蛋白质的SCOP超家族已经过了结构性比对，并且可以获取和下载那些比对结果。可使用多种算法诸如距离比对矩阵(Holm和Sander，1998，Proteins 33：88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne，1998，Protein Engineering 11：739-747)来比对两个或多个蛋白结构，这些算法的实现可以另外用于使用感兴趣的结构来检索结构数据库以发现可能的结构同系物(例如，Holm和Park，2000，Bioinformatics 16：566-567)。
在对本发明的所述变体的描述中，使用以下命名法以便于参考。采用了公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。氨基酸位点用#1，#2等来表示。
替换：对于氨基酸替换，使用下列命名法：初始氨基酸、位点、替换后的氨基酸。因此，将位点#1的缬氨酸用丙氨酸替换被命名为“Val#1Ala”或“V#1A”。多个突变通过添加标记(“+”)或用逗号(，)隔开，例如“Val#1Ala+“Pro#2Gly”或V#1A，P#2G，表示在位点#1和#2的缬氨酸(V)和脯氨酸(P)分别由丙氨酸(A)和甘氨酸(G)替换。如果在给定位置中可替换的氨基酸多于一种，则这些氨基酸在括号中列出，诸如[x]或{x}。因此，如果色氨酸和赖氨酸均可替换占据位点#1的氨基酸，这表示为X#1{W，K}、X#1[W，K]或X#1[W/K]，其中X表示在亲本脱氧核糖核酸酶(例如SEQ ID NO：1中所示的脱氧核糖核酸酶或具有与前者至少60％的同一性的脱氧核糖核酸酶)的该位点上存在的氨基酸的残基。在一些情况下，变体可表示为#1{W，K}或X#2P，表明待替换的氨基酸的差别取决于亲本。为方便起见，因为将SEQ ID NO：1用于替换的编号，将SEQ ID NO：1中对应位点上的氨基酸表示为例如T1A。然而，技术人员显而易见的是，包含T1A的脱氧核糖核酸酶并不限于在对应于SEQ ID NO：1的位点1的位置上具有苏氨酸的亲本脱氧核糖核酸酶。在位点1上具有例如天冬酰胺的亲本脱氧核糖核酸酶中，技术人员将把该突变翻译详述为T1A至N1A。如果亲本脱氧核糖核酸酶在位点1中具有丙氨酸，技术人员将认识到亲本脱氧核糖核酸酶在该位点上没有改变。这同样适用于下文所述的缺失和插入。
缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：初始氨基酸，位点，*。因此，位点#1处的缬氨酸的缺失被命名为“Val#1*”或“V#1*”。多个缺失通过添加(“+”)或逗号隔开，例如，“Val#1*+Pro#2*”或“V#1*，P#2*”。
插入：插入另外的氨基酸残基，诸如例如在Val#1后插入赖氨酸可表示为：Val#1ValLys或V#1VK。另选地，插入另外的氨基酸残基诸如在V#1后插入赖氨酸可表示为：*#1aK。当插入的氨基酸多于一个时，诸如在#1后插入Lys(赖氨酸)和Gly(甘氨酸)，这可表示为：Val#1ValLysGly或V#1VKG。在这类情况下，可通过在插入氨基酸残基之前的氨基酸残基的位点编号上添加小写字母，来对插入氨基酸残基编号，如示例：*#1aK*#1bG。
多重改变：包含多重改变的变体通过添加标记(“+”)或逗号(，)隔开，例如，“Val#1Trp+Pro#2Gly”或“V#1W，P#2G”表示用色氨酸和甘氨酸替换在位点#1和#2的缬氨酸和脯氨酸，分别如上所述。
不同的改变：在一个位点处可导入不同的改变，不同改变可用逗号分隔，例如，“Val#1Trp，Lys”或V#1W，K，其表示用色氨酸或赖氨酸替换在位点#1的缬氨酸。因此，“Val#1Trp，Lys+Pro#2Asp”命名以下变体：“Val#1Trp+Pro#2Asp”，“Val#1Lys+Pro#2Asp”或V#1W，K+P#2D。
进化枝的命名细则
就本发明的目的而言，命名[IV]或[I/V]是指这个位点处的氨基酸可以是异亮氨酸(Ile，I)或缬氨酸(Val，V)。同样，命名[LVI]和[L/V/I]是指这个位点处的氨基酸可以是亮氨酸(Leu，L)、缬氨酸(Val，V)或异亮氨酸(Ile，I)以及如本文所述的其它组合等。除非另有限制，限定了氨基酸X使得其可为20种天然氨基酸的任一种。
具体实施方式
本发明提供包含新型脱氧核糖核酸酶的洗涤剂组合物，该新型脱氧核糖核酸酶优选地得自芽孢杆菌属(Bacillus)，具体来讲是食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)，即亲本脱氧核糖核酸酶来源于芽孢杆菌属。适用于本发明的脱氧核糖核酸酶包含与具有SEQ ID NO：1的多肽至少60％的序列同一性，并且与具有SEQ ID NO：1的脱氧核糖核酸酶相比包含至少一个氨基酸位点的改变。适用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体可包含氨基酸序列，该氨基酸序列包含在等同于SEQ ID NO：1中的位点的位点处产生的氨基酸的至少一种替换。脱氧核糖核酸酶变体可优选地包含氨基酸序列，该氨基酸序列包含在等同于SEQ ID NO：1中的位点的位点处产生的氨基酸的至少一种缺失。脱氧核糖核酸酶变体可优选地包含氨基酸序列，该氨基酸序列包含在等同于SEQ ID NO：1中的位点的位点处产生的氨基酸的至少一种插入。与亲本脱氧核糖核酸酶相比或与SEQ ID NO：1相比，适用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体具有至少一种改善的性质。特性包括但不限于稳定性，诸如：洗涤剂中的稳定性、贮存稳定性、洗涤稳定性和热稳定性、洗涤性能尤其是深层清洁性能、增加的表达水平和减少恶臭。
脱氧核糖核酸酶变体
适用于本发明的组合物中的脱氧核糖核酸酶变体优选地为SEQ ID NO：1的变体，或具有与前者至少60％的同一性的脱氧核糖核酸酶，和用于制备SEQ ID NO：1的脱氧核糖核酸酶变体或具有与前者至少60％的同一性的脱氧核糖核酸酶的方法。
合适的脱氧核糖核酸酶变体可包括在选自1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182的一个或多个位点处的改变，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1的多肽的位点，其中变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中变体与具有SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列的脱氧核糖核酸酶相比具有至少一个改善的性质。
该变体可具有与成熟亲本脱氧核糖核酸酶的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在一些方面，该变体具有与SEQ ID NO：1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
本发明还涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的组合物，该脱氧核糖核酸酶亲本的变体包含SEQ ID NO：1，其中所述变体与SEQ ID NO：1相比包含至少一个位点处的改变，该位点选自对应于SEQ ID NO：1的位点的位点：1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中变体的氨基酸序列具有与SEQ ID NO：1至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或至少95％的同一性，其中变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中变体与SEQ ID NO：1的脱氧核糖核酸酶相比具有至少一个改善的性质。
与SEQ ID NO：1中所示多肽相比，该变体可包括在对应于SEQ ID NO：1的位点1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182的一个或多个位点处的改变，其中该变体具有与SEQ ID No：1中所示多肽的全长至少80％的序列同一性，并且其中该变体具有脱氧核糖核酸酶活性。
优选地，脱氧核糖核酸酶变体具有改善的性能，其中改善的性能是增加的稳定性(例如改善的洗涤剂稳定性)、改善的洗涤稳定性、改善的储存稳定性和/或改善的热稳定性。
在一些优选的方面，所述改变是替换，脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个替换，其中替换选自：T1E、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
在一个更优选的方面，所述改变是替换，脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个替换，其中替换选自：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
在合适的变体中优选的替换数为1-20个，例如1-10个和1-5个，诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个替换。
在一些优选方面，适用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)可包含一个或多个替换，其中替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、138V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中变体具有脱氧核糖核酸酶活性，其中该变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，并且其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
合适的脱氧核糖核酸酶变体可与SEQ ID NO：1具有至少60％的序列同一性，其中在相关测定法中测试时所述变体与包含SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列的脱氧核糖核酸酶相比时具有至少一种改善的性质。在相关测定法中针对感兴趣的性质测试脱氧核糖核酸酶变体时，脱氧核糖核酸酶变体优选地具有高于1的改善系数，其中将参照脱氧核糖核酸酶的性质设定为数值1。优选地，该性质是稳定性，诸如在洗涤剂中的贮存稳定性和/或洗涤性能，诸如深层清洁性能。
在一些方面，根据本发明的变体相对于亲本脱氧核糖核酸酶具有一个或多个改善的性质，所述性质被测量为大于1.0的半衰期改善系数(HIF)，其中改善的性质是稳定性，诸如在洗涤剂中的稳定性。
对于变体的半衰期改善系数(HIF)可计算为T1/2变体/T1/2参照。与参照序列相比，改进的变体被鉴定为具有大于1.0的半衰期改善系数HIF的变体。
一些合适的变体具有半衰期改善系数(HIF)，其至少为1.05，1.1；1.15，1.2；1.3；1.4；1.5；1.6；1.7；1.8；1.9；2.0；2.1；2.2；2.3；2.4；2.5；2.6；2.7，2.8；2.9；3.0，3.1；3.2；3.3；3.4；3.5、3.6、3.7、3.8、3.9；4.0，4.1；4.2；4.3；4.4；4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1；5.2；5.3；5.4；5.5、5.6、5.7、5.8、5.9；3.0，6.1；6.2；6.3；6.4；6.5、6.6、6.7、6.8、6.9；7.0，7.1；7.2；7.3；7.4；7.5、7.6、7.7、7.8、7.9；8.0，8.1；8.2；8.3；8.4；8.5、8.6、8.7、8.8、8.9；9.0，9.1；9.2；9.3；9.4；9.5、9.6、9.7、9.8、9.9；10.0，10.1；10.2；10.3；10.4；10.5、10.6、10.7、10.8、10.9；12、15、16、20、25或30。
在蛋白内用于制备变体的氨基酸位点是其中至少一个改变产生与未改变的蛋白(即亲本即HIF＞1.0)相比表现出改善的特性的变体的那些位点。可使用测定法I或II或如实施例2中所述测定改善的特性。
优选地，与参照脱氧核糖核酸酶(例如包含SEQ ID NO：1中所示多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，脱氧核糖核酸酶变体具有改善的脱氧核糖核酸酶活性，其中在下文测定法和实施例中所述测定法I或测定法II中测试活性。
活性改善系数(AIF)被计算为变体的活性(在参照条件下的斜率)除以参照的活性。将具有改善的AIF＞1.0的变体鉴定为与对应的参照相比具有改善的活性。
优选地，与参照脱氧核糖核酸酶(例如包含SEQ ID NO：1中所示多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，脱氧核糖核酸酶变体具有改善的洗涤剂中的稳定性，其中稳定性如实施例2中所述进行测试。
优选地，与参照脱氧核糖核酸酶(例如包含SEQ ID NO：1中所示多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，脱氧核糖核酸酶变体具有改善的深层清洁性能。
在一些优选的方面，适合的脱氧核糖核酸酶变体包括一个或多个替换(相比于SEQID NO：1)，其中所述替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)，并且其中所述变体与亲本脱氧核糖核酸酶(例如包含具有SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比具有至少一个改善的性质，任选地，改善的性质是下列中的一个或多个：改善的脱氧核糖核酸酶活性(其中活性是在测定法I或测定法II中测试的)、改善的稳定性(其中稳定性是如实施例2中所述进行测试的)和/或改善的深层清洁性能。
在一些方面，与亲本相比或与具有SEQ ID NO：1所示多肽的脱氧核糖核酸酶相比，脱氧核糖核酸酶变体具有改善的稳定性，测量值为半衰期改善系数(HIF)。
一些优选的脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个替换，其中替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如包含具有SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供了具有改善的稳定性的脱氧核糖核酸酶变体，测量值为至少1.05的半衰期改善系数(HIF)，诸如1.08，诸如1.1，诸如1.15，诸如1.2，诸如1.25，诸如1.3，诸如1.4，诸如1.5，诸如1.6，诸如1.7，诸如1.8，诸如1.9，诸如2，诸如3，诸如4，诸如5或诸如至少10，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示的多肽的位点(根据SEQID NO：1进行编号)。
一些优选的脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个替换，其中所述替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、P6V、S7D、K8V、S9K、S9Q、S9V、A10D、A10M、A10I、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、Q14M、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、V49R、L51I、K52I、K52Q、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、P63A、T65L、T65I、T65V、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、D83C、D83F、L92T、A93G、G99S、S101D、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、T104S、T104P、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、G145V、G145E、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、T157S、Y159H、K160R、W161L、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、S164R、S164H、S164N、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D和Y182Q，其中每个替换提供了具有增加的稳定性(测量值为至少1.1的半衰期改善系数HIF)的脱氧核糖核酸酶变体，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示的多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
一些优选的脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个替换，其中所述替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、P6V、S7D、K8V、S9K、A10D、Q12S、Q12V、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、Q14M、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19N、T19L、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S30K、S30D、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、V49R、K52I、K52Q、A55S、D56I、D56L、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、P63A、T65L、S68V、S68I、S68W、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、D83C、A93G、S101D、S102M、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S116Q、A125K、S126I、S126E、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、G145V、G145E、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、S156C、T157S、Y159H、W161L、G162Q、G162N、G162D、G162M、S164R、S164H、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S168V、S168E、S168D、K170S、K170L、T171D、T171E、T171N、A172G、L173T、L173A、Q174L、G175D、G175E、G175N、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G和Y182A，其中每个替换提供了具有增加的稳定性(测量值为至少1.15的半衰期改善系数HIF)的脱氧核糖核酸酶变体，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示的多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
一些优选的脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个替换，其中所述替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、P6V、K8V、A10D、Q12S、Q12V、S13D、S13Y、S13T、S13Q、A17C、A17V、T19K、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S30K、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、Q40V、S42G、S42C、K52I、K52Q、A55S、D56I、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、Y58A、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、P63A、T65L、S68V、S68I、S68W、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、T77N、T77Y、F78L、F78I、T79G、T79R、N80K、A93G、S101D、S102M、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S126I、S126E、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、G145V、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、K152H、S156C、G162Q、G162N、G162D、S164R、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S168V、S168E、S168D、K170S、K170L、T171D、T171E、A172G、L173T、L173A、Q174L、G175D、G175E、G175N、L177I、N178D、N178E、N178T、S181R、S181E、Y182M、Y182C和Y182K，其中每个替换提供了具有增加的稳定性(测量值为至少1.2的半衰期改善系数HIF)的脱氧核糖核酸酶变体，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示的多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
一些优选的脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个替换，其中所述替换选自：T1I、T1L、T1V、Q12S、Q12V、A17C、T22P、T22A、T22V、T22D、Q40V、K52I、K52Q、A55S、D56I、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S68V、V76G、V76L、V76C、T77N、F78L、A93G、T105V、K107L、Q109K、A112S、S126I、G132R、G145V、A147H、A147R、A147K、A147Q、S156C、G162Q、Q166D、S167M、S168V、K170S、T171D、L173T、L173A、G175D、G175E和L177I，其中每个替换提供了具有增加的稳定性(测量值为至少1.5的半衰期改善系数HIF)的脱氧核糖核酸酶变体，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示的多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
一些优选的脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个替换，其中所述替换选自：T1I、T1L、Q12S、Q12V、A17C、T22P、Q40V、K52I、S57W、S57Y、S57F、V76G、Q109K、A112S、A147H、A147R、A147K、K170S、T171D和G175D，其中每个替换提供了具有增加的稳定性(测量值为至少2.0的半衰期改善系数HIF)的脱氧核糖核酸酶变体，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示的多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
一些特别优选的脱氧核糖核酸酶变体(与SEQ ID NO：1相比)包含一个或多个替换，其中所述替换选自：T1I、T1L、T1V、T22P、S25P、S57Y、S57W、S57F、S59V、S68V、V76L、T77Y、F78L、A93G、Q109R、S116D、T127V、S144P、A147H、A147R、G162Q、Q166D、S167L、S167F、G175D、G175N和N178D，其中每个替换提供了与SEQ ID NO：1中所示的多肽相比具有至少一个改善的性质的脱氧核糖核酸酶变体，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示的多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
优选地，变体与亲本酶相比具有改善的(增加的)比活性。
优选地，变体与亲本酶相比具有改善的(增加的)存储条件下的稳定性。
优选地，变体与亲本酶相比具有改善的(增加的)热稳定性。
与亲本脱氧核糖核酸酶(诸如具有SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列的脱氧核糖核酸酶)相比，本发明的脱氧核糖核酸酶变体具有至少一种改善的性质。当在SEQ ID No：1中或与前者具有至少60％的序列同一性的多肽中引入时，这些突变中的每一个提供至少一种改善的性质，诸如改善的稳定性。技术人员将显而易见的是，这些突变中的每一个提供一种改善的效果，因此2个、3个、4个等上述替换可增加此效应。因此本发明的一些方面涉及脱氧核糖核酸酶变体，其包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个替换，该替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
优选的替换包括下列突变的一个或多个：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E或Y182T。
特别优选的替换还包括下列中的一个或多个：T1I、T1V、Q12S、Q12V、A17C、T22P、T22A、T22V、T22D、Q40V、K52I、A55S、D56I、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S68V、V76G、V76L、V76C、T77N、A93G、T105V、K107L、A112S、S126I、G132R、G145V、A147Q、S156C、G162Q、Q166D、S167M、S168V、K170S、T171D、L173T、L173A、G175D、G175E或L177I。
特别优选的替换还包括下列中的一个或多个：T1I、T1V、T22P、S25P、S57W、S57F、S59V、S68V、V76L、T77Y、A93G、Q109R、S116D、T127V、S144P、G162Q、Q166D、S167L、S167F、G175D、G175N或N178D。
包含任何上述突变的一些脱氧核糖核酸酶变体在深层清洁中是有效的。
合适的变体可包括上文列出的那些以外另外的突变。这些另外的改性优选地不应显著改变变体脱氧核糖核酸酶的改善的性质。
保守取代的例子在碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)，疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)，和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、丝氨酸和甲硫氨酸)的组内。通常不改变比活性的氨基酸替换是本领域已知的，并且由例如H.Neurath和R.L.Hill，1979，In，The Proteins，Academic Press，New York进行了描述。常见的替换有Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、和Asp/Gly。
多肽中的必需氨基酸可根据本领域已知的方法进行鉴定，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells，1989，Science 244：1081-1085)。在后一种技术中，在分子中的每个残基处导入单个丙氨酸突变，并且针对脱氧核糖核酸酶活性测试所得的突变型分子，以鉴定对该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还可参见，Hilton等人，1996，J.Biol.Chem.271：4699-4708。所述酶的活性位点或其它生物学相互作用还可通过结构的物理分析进行测定，如通过诸如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记，与推定接触位点氨基酸突变的技术一起所测定的。参见，例如，de Vos等人，1992，Science 255：306-312；Smith等人，1992，J.Mol.Biol.224：899-904；Wlodaver等人，(1992)FEBS Lett.309：59-64。
优选的变体包含保守基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO：26)，这些保守基序是如下文描述的GYS进化枝的脱氧核糖核酸酶间所共有的。如“定义”中所解释的，进化枝包括一组多肽，其基于追踪到共同祖先的同源特征而聚类在一起。形成一个组(例如系统发育树中所示的一个进化枝)的多肽通常共有共同特性，并且比不在该进化枝的其它多肽更密切相关。
因此，一个优选的脱氧核糖核酸酶亲本的变体包含基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO：26)的一者或两者，其中变体与SEQ ID NO：1相比包含一个或多个替换，其中替换选自：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少80％的序列同一性并且该变体具有脱氧核糖核酸酶活性。
优选的变体包含基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQID NO：26)的一者或两者，其中变体与SEQ ID NO：1相比包含一个或多个替换，其中替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181T、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W(根据SEQ ID NO：1进行编号)，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽的至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％但小于100％的序列同一性，并且该变体具有脱氧核糖核酸酶活性。
亲本脱氧核糖核酸酶
优选地，脱氧核糖核酸酶亲本选自酶类E.C.3.1.11，E.C.3.1.12，E.C.3.1.15，E.C.3.1.16，E.C.3.1.21，E.C 3.1.22，E.C 3.1.23，E.C 3.1.24和E.C.3.1.25的任一个。
优选地，脱氧核糖核酸酶亲本得自微生物，并脱氧核糖核酸酶是微生物酶。脱氧核糖核酸酶优选地为真菌或细菌来源。
脱氧核糖核酸酶亲本可优选得自芽孢杆菌例如芽孢杆菌属(Bacillus)，诸如食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)、芽孢杆菌属62451，堀越氏芽孢杆菌(Bacillus horikoshii)、芽孢杆菌属16840，芽孢杆菌属62668、芽孢杆菌属13395、Bacillus horneckiae、芽孢杆菌属11238、病研所芽孢杆菌(Bacillus idriensis)、芽孢杆菌属62520、栖藻芽孢杆菌(Bacillus algicola)、越南芽孢杆菌(Bacillus vietnamensis)、花津滩芽孢杆菌(Bacillus hwajmpoensis)、印度芽孢杆菌(Bacillus indicus)、黄海芽胞杆菌(Bacillusmarisflayi)、路西法芽孢杆菌(Bacillus luciferensis)、芽孢杆菌属SA2-6。
脱氧核糖核酸酶亲本优选地属于包含在GYS进化枝中的脱氧核糖核酸酶的组，所述在GYS进化枝中的脱氧核糖核酸酶是包含保守基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO：26)的脱氧核糖核酸酶，并且其共有相似的结构和功能性质，参见例如在WO 2017/060475的实施例11中的图1的比对和系统发育树的生成。GYS进化枝的脱氧核糖核酸酶优选得自芽孢杆菌属。
优选的变体是具有脱氧核糖核酸酶活性的GYS进化枝的脱氧核糖核酸酶亲本的变体，任选地其中亲本包含基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)、ASXNRSKG(SEQ IDNO：26)中的一者或两者，并且其中所述多肽选自多肽组：
a)具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
b)具有与SEQ ID NO：2中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
c)具有与SEQ ID NO：3中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
d)具有与SEQ ID NO：4中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
e)具有与SEQ ID NO：5中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
f)具有与SEQ ID NO：6中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
g)具有与SEQ ID NO：7中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
h)具有与SEQ ID NO：8中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
i)具有与SEQ ID NO：9中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
j)具有与SEQ ID NO：10中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
k)具有与SEQ ID NO：11中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
1)具有与SEQ ID NO：12中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
m)具有与SEQ ID NO：13中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
n)具有与SEQ ID NO：14中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
o)具有与SEQ ID NO：15中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
p)具有与SEQ ID NO：16中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
q)具有与SEQ ID NO：17中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
r)具有与SEQ ID NO：18中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
s)具有与SEQ ID NO：19中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
t)具有与SEQ ID NO：20中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
u)具有与SEQ ID NO：21中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
v)具有与SEQ ID NO：22中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
w)具有与SEQ ID NO：23中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，和
x)具有与SEQ ID NO：24中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
具有脱氧核糖核酸酶活性并且包含GYS进化枝基序的多肽表现出特别好的深层清洁特性，例如该脱氧核糖核酸酶在从物品(诸如纺织物或硬质表面)去除或减少有机物质组分(诸如微生物来源的污垢)中特别有效。
优选地，该变体是属于GYS进化枝的脱氧核糖核酸酶亲本的变体，并且其中亲本脱氧核糖核酸酶包含基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO：26)中的一者或两者。
亲本脱氧核糖核酸酶可以是(a)具有与SEQ ID NO：1的成熟多肽至少60％的序列同一性的多肽，(b)由在高严谨条件下与成熟多肽编码序列或前者的全长互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽；或(c)由具有与成熟多肽编码序列至少60％的序列同一性的多核苷酸编码的多肽。
优选地，亲本具有与SEQ ID No：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％的序列同一性，诸如与SEQ ID No：1中所示多肽(其具有脱氧核糖核酸酶活性)至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个方面，亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO：1中所示多肽最多有10个氨基酸不同，例如有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个。
优选地，亲本包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成。
优选地，亲本为芽孢杆菌属(Bacillus)脱氧核糖核酸酶，例如食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)脱氧核糖核酸酶，例如本文所公开的如SEQ ID NO：1的脱氧核糖核酸酶。
使用脱氧核糖核酸酶变体
本发明的脱氧核糖核酸酶变体适用于清洁诸如衣物洗涤。因此，本发明的一些方面涉及一种用于清洗物品的方法，其中该方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于包含本文所述的洗涤剂组合物的洗涤液体中；
b.完成至少一个洗涤循环；以及
c.任选地漂洗该物品，
其中该物品是纺织物。
该液体溶液的pH在1至11的范围内，诸如在5.5至11的范围内、诸如在7至9的范围内、在7至8的范围内、或在7至8.5的范围内。
洗涤液体的温度可在5℃至95℃的范围内，或在10℃至80℃的范围内、在10℃至70℃的范围内、在10℃至60℃的范围内、在10℃至50℃的范围内、在15℃至40℃的范围内或在20℃至30℃的范围内。在一些方面中洗涤液体的温度是30℃。
本发明还涉及按照该方法清洗的物品。
可将本发明的洗涤剂组合物加水以形成洗涤液体。
在洗涤液中的脱氧核糖核酸酶变体酶的浓度通常是在0.00004-100ppm酶蛋白的范围内，诸如在0.00008-100的范围内、在0.0001-100的范围内、在0.0002-100的范围内、在0.0004-100的范围内、在0.0008-100的范围内、在0.001-100ppm酶蛋白的范围内、在0.01-100ppm酶蛋白的范围内、优选地在0.05-50ppm酶蛋白的范围内、更优选地在0.1-50ppm酶蛋白的范围内、更优选地在0.1-30ppm酶蛋白的范围内、更优选地在0.5-20ppm酶蛋白的范围内、和最优选地在0.5-10ppm酶蛋白的范围内。
本发明的洗涤剂组合物(包含脱氧核糖核酸酶变体和助剂)可用于物品的深层清洁、用于防止和/或降低物品粘黏、用于物品污渍的预处理、用于防止和/或减少污垢在洗涤循环中的再沉积、用于防止和/或减少污垢在物品上的附着、用于保持或提高物品的美白度、和/或用于防止和/或降低物品的恶臭。优选的洗涤剂组合物用于衣物洗涤过程中的织物的处理和/或清洁。
变体的制备
适用于本发明的变体可通过诸如下面提及的那些规程进行制备。
定点诱变是其中在编码亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点导入一个或多个(例如，若干个)突变的技术。
定点诱变能在体外通过PCR完成，所述PCR涉及包含期望突变的寡核苷酸引物的使用。定点诱变也能在体外通过盒诱变进行，所述盒诱变涉及限制性酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的一个位点上裂解以及随后将包含突变的寡核苷酸连入多核苷酸中。通常消化质粒和寡核苷酸的限制性酶是相同的，使得质粒的粘性末端和插入序列彼此连接。参见，例如，Scherer和Davis，1979，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76：4949-4955；和Barton等人，1990，Nucleic Acids Res.18：7349-4966。
定点诱变也可通过本领域已知的方法在体内完成。参见，例如，美国专利申请公布No.2004/0171154；Storici等人，2001，Nature Biotechnol.19：773-776；Kren等人，1998，Nat.Med.4：285-290；以及Calissano和Macino，1996，Fungal Genet.Newslett.43：15-16。
合成基因构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码受关注的多肽。基因合成能够利用多个技术进行，诸如Tian等人(2004，Nature 432：1050-1054)描述的基于多元微芯片的技术，以及在光-可编程的微流体芯片上合成和装配寡核苷酸的类似技术。
能使用已知的诱变、重组、和/或重排方法生成并测试单个或多个氨基酸替换、缺失、和/或插入，随后进行有关的筛选程序，诸如那些由以下文献公开的程序：Reidhaar-Olson和Sauer，1988，Science 241：53-57；Bowie和Sauer，1989，Proc.Nat/.Acad.Sci.USA86：2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625。能够使用的其它方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如，Lowman等人，1991，Biochemistry 30：10832-10837US 5,223,409；WO 92/06204)和区域定点诱变(Derbyshire等人，1986，Gene 46：145；Ner等人，1988，DNA 7：127)。
诱变/重排方法可以和高通量的、自动的筛选方法相结合，以检测宿主细胞表达的克隆的、诱变处理的多肽的活性(Ness等人，1999，Nature Biotechnology 17：893-896)。编码活性多肽的诱变DNA分子可从宿主细胞中回收并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许多肽中单个氨基酸残基重要性的快速确定。
半合成基因构建通过组合使用合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组来完成。半合成构建体的典型是通过利用合成的多核苷酸片段与PCR技术相结合的方法。因此可从头合成限定的基因区域，而其它区域可使用位点特异性诱变引物进行扩增，而其它区域可经过易错PCR或非易错PCR进行扩增。然后多核苷酸亚序列可以被重排。
核酸构建体
核酸构建体包含编码适用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列，该控制序列指导所述编码序列在合适的宿主细胞中、在与控制序列相容的条件下表达。
可以多种方式操作该多核苷酸以提供多肽的表达。根据表达载体在其插入载体之前对所述多核苷酸的操作可为可取的和必需的。利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术为本领域所熟知。
控制序列可为启动子，被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。启动子包含转录控制序列，其介导多肽的表达。所述启动子可为在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，其包括突变型、截短的和杂交体启动子，可得自对宿主细胞同源的或异源的、编码细胞外或细胞内多肽的基因。
用于指导本发明的核酸构建体在细菌宿主细胞中转录的合适启动子的示例是得自解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)α-淀粉酶基因(amyQ)的启动子、得自地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)α-淀粉酶基因(amyL)的启动子、得自地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)青霉素酶基因(penP)的启动子、得自嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)麦芽糖淀粉酶基因(amyM)的启动子、得自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)果聚糖蔗糖酶基因(sacB)的启动子、得自枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)xylA和xylB基因的启动子、得自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cryIIIA基因的启动子(Agaisse和Lereclus，1994，Molecular Microbiology 13：97-107)、得自大肠杆菌(E.coli)乳糖操纵子的启动子、得自大肠杆菌(E.coli)trc启动子(Egon等人，1988，Gene 69：301-315)、得自天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)琼脂糖酶基因(dagA)的启动子、以及得自原核β-内酰胺酶基因的启动子(Villa-Kamaroff等人，1978，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75：3727-3731)、以及tac启动子(DeBoer等人，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80，21-25)。另外的启动子在Gilbert等人，1980，ScientificAmerican 242：74-94的“来自重组细菌的有用的蛋白质(Useful proteins fromrecombinant bacteria)”和先前的Sambrook等人，1989，中有所描述。WO 99/43835中公开了串联启动子的例子。
用于在丝状真菌宿主细胞中指导本发明的核酸构建体的转录的合适启动子的示例是得自Bacillus nidulans乙酰胺酶、Bacillus niger中性α-淀粉酶、Bacillus niger酸性稳定α-淀粉酶、Bacillus niger或Bacillus awamori葡糖淀粉酶(glaA)、食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)TAKA淀粉酶、食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)碱性蛋白酶、食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)磷酸丙糖异构酶、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、毒性镰孢菌(Fusarium venenatum)淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、毒性镰孢菌(Fusarium venenatum)Daria(WO 00/56900)、毒性镰孢菌(Fusarium venenatum)Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶III、里氏木霉(Trichodermareesei)内切葡聚糖酶V、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶III、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-木糖苷酶，和里氏木霉(Trichoderma reesei)翻译延伸因子的基因的启动子，以及NA2-tpi启动子(来自芽胞杆菌属(Bacillus)中性α-淀粉酶基因的改性的启动子，其中未翻译前导序列被来自芽胞杆菌属(Bacillus)磷酸丙糖异构酶基因的未翻译前导序列所取代；非限制性示例包括来自Bacillus niger中性α-淀粉酶基因的改性的启动子，其中未翻译前导序列被来自Bacillus nidulans或食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)磷酸丙糖异构酶基因的未翻译前导序列所取代)；以及它们的突变的、截短的和杂交体启动子。其它启动子在美国专利6,011,147中有所描述。
在酵母宿主中，有用的启动子得自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)烯醇酶(ENO 1)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1，ADH2/GAP)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)磷酸丙糖异构酶(TPI)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)金属硫蛋白(CUP1)，和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)3-磷酸甘油酸激酶的基因。其它对于酵母宿主细胞有用的启动子在Romanos等人，1992，Yeast 8：423-488中有所描述。
所述对照序列还可为转录终止子，其被宿主细胞识别以终止转录。终止子可操作地连接至编码多肽的多核苷酸的3’末端。本发明中可使用在宿主细胞中有功能的任何终止子。
对于细菌宿主细胞优选的终止子是得自克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌(Escherichia coli)核糖体RNA(rrnB)的基因。
用于丝状真菌宿主细胞的优选的终止子来源于Bacillus nidulans乙酰胺酶、Bacillus nidulans邻氨基苯甲酸合成酶、Bacillus niger葡糖淀粉酶、Bacillus nigerα-葡萄糖苷酶、食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)TAKA淀粉酶、尖孢镰孢菌(Fusariumoxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶III、里氏木霉(Trichodermareesei)内切葡聚糖酶V、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶III、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-木糖苷酶、和里氏木霉(Trichoderma reesei)翻译延伸因子的基因。
对于酵母宿主细胞优选的终止子是得自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)烯醇酶、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞色素C(CYC1)、和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甘油醛-3-磷酸脱氢酶的基因。Romanos等人，1992，同上描述了对于酵母宿主细胞有用的其它终止子。
所述对照序列还可为启动子的下游mRNA稳定子区和增加所述基因表达的基因编码序列的上游(序列)。
合适的mRNA稳定子区的示例得自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SP82基因(Hue等人，1995，Journal of Bacteriology 177：3465-3471)。
所述对照序列还可为前导序列，对通过宿主细胞翻译重要的mRNA的非翻译区。前导序列可操作地连接至编码多肽的多核苷酸的5’-末端。可使用在宿主细胞中有功能性的任何前导序列。
对于丝状真菌宿主细胞优选的前导序列是得自食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)TAKA淀粉酶和Bacillus nidulans磷酸丙糖异构酶的基因。
对于酵母宿主细胞合适的前导序列是得自酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)烯醇酶(ENO 1)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)α-因子、和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)的基因。
控制序列还可为聚腺苷酸化序列，该序列可操作地连接至多核苷酸的3’-末端，并且当被转录时被宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加至被转录的mRNA的信号。可使用在宿主细胞中有功能性的任何聚腺苷酸化序列。
对于丝状真菌宿主细胞优选的聚腺苷酸化序列是得自Bacillus nidulans邻氨基苯甲酸合酶、Bacillus niger葡糖淀粉酶、Bacillus nigerα-葡糖苷酶、食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)TAKA淀粉酶、和尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶的基因。
对于酵母宿主细胞有用的聚腺苷酸化序列在Guo和Sherman，1995，Mol.CellularBiol.15：5983-5990中有所描述。
控制序列还可为信号肽编码区，其编码连接至多肽的N-末端的信号肽并指导该多肽进入细胞的分泌途径。多核苷酸的编码序列的5’-末端可固有地包含信号肽编码序列，其与编码多肽的编码序列的片段天然地连接在翻译阅读框中。另选地，编码序列的5’-末端可包含信号肽编码序列，其对该编码序列是外源的。在所述编码序列天然不包含信号肽编码序列的情况下，需要外源信号肽编码序列。另选地，外源信号肽编码序列可简单地替换天然信号肽编码序列以增强多肽的分泌。然而，可使用指导被表达的多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
对于细菌宿主细胞，有效的信号肽编码序列是得自芽孢杆菌属NCIB 11837麦芽淀粉酶、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)α-淀粉酶、嗜热脂肪芽胞杆菌中性蛋白酶(nprT，nprS，nprM)、和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)prsA的基因的信号肽编码序列。另外的信号肽在Simonen和Palva，1993，Microbiological Reviews 57：109-137中有所描述。
对于丝状真菌宿主细胞有效的信号肽编码序列是得自Bacillus niger中性淀粉酶、Bacillus niger葡糖淀粉酶、食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)TAKA淀粉酶、特异腐质霉(Humicola insolens)纤维素酶、特异腐质霉(Humicola insolens)内切葡聚糖酶V、柔毛腐质霉(Humicola lanuginosa)脂肪酶、和米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶的基因的信号肽编码序列。
对于酵母宿主细胞有用的信号肽是得自啤酒糖酵母α-因子和啤酒糖酵母反转酶的基因。Romanos等人，1992，同上描述了其它有用的信号肽编码序列。
控制序列还可为前肽编码序列，其编码定位在多肽的N-末端的前肽。所得的多肽被称为酶原或多肽原(或有时候为酶原)。多肽原是大体失活的，并且能够通过来自多肽原的多肽的催化或自催化裂解转变为活性多肽。前肽编码序列可得自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和啤酒糖酵母α-因子的基因。
在信号肽和前肽序列同时存在的情况下，前肽序列定位在紧挨多肽的N-末端，信号肽序列定位在紧挨前肽序列的N-末端。
添加调控序列也是可取的，其调控与宿主细胞的生长相关的多肽的表达。调控序列的示例是导致基因响应于化学或物理刺激(包括调控化合物的存在)而开启或关闭表达的那些(序列)。原核系统中的调控序列包括lac、tac和trp操纵子系统。在酵母中，也可使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可使用Bacillus niger葡糖淀粉酶启动子、食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)TAKAα-淀粉酶启动子和食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶I启动子和里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶II启动子。调控序列的其它例子是允许基因扩增的那些。在真核系统中，这些调控序列包括在甲氨蝶呤的存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因，以及与重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下，编码多肽的多核苷酸将可操作地连接至调控序列。
表达载体
本文感兴趣的重组表达载体包含编码适用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体的多核苷酸、启动子以及转录和翻译终止信号。可将各种核苷酸和控制序列连接在一起以制备重组表达载体，其可包括一个或多个方便的限制性位点以允许在此类位点插入或替换编码多肽的多核苷酸。作为另外一种选择，可通过将所述多核苷酸或包含所述多核苷酸的核酸构建体插入合适的用于表达的载体来表达所述多核苷酸。在创建表达载体中，所述编码序列位于载体中使得所述编码序列与合适的用于表达的对照序列可操作地连接。在另外的方面，通过核苷酸置换修饰多核苷酸序列密码子，以对应于旨在用于制备本发明的多肽的宿主生物体的密码子使用。所述重组表达载体可为任何载体(例如，质粒或病毒)，其可方便的经过重组DNA步骤并可形成所述多核苷酸的表达。载体的选择通常取决于载体与被导入所述载体的宿主细胞的相容性。载体可为线性或封闭的环形质粒。
所述载体可为自主复制载体，即，作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如，质粒、染色体外元件、微型染色体、或人工染色体。所述载体可包含任何形式以确保自我复制。作为另外一种选择，所述载体可为一种载体，当其被导入宿主细胞时被整合进基因组并连同被整合进的染色体一起复制。此外，可使用单个载体或质粒、或同时包含被导入宿主细胞的基因组的总DNA的两个或更多个载体或质粒、或转座子。
所述载体优选地包含一个或多个选择性标记，其允许简单选择转化的，转染的，转导等的细胞。选择性标记是一个基因，其产物提供了生物灭杀剂或病毒抗性、重金属抗性、原养型到营养缺陷型等等。
细菌选择性标记的示例是地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)dal基因，或赋予抗生素抗性(诸如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、奇放线菌素或四环素抗性)的标记。对于酵母宿主细胞合适的标记包括但不限于ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于丝状真菌宿主细胞的选择性标记包括但不限于adeA(磷酸核糖酰氨咪唑琥珀酸甲酰胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰转移酶)、bar(草胺膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5’磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷酰基转移酶)、和trpC(邻氨基苯甲酸合酶)，以及其等同物。优选的用于芽孢杆菌属(Bacillus)细胞中的是Bacillus nidulans或食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选用于木霉属(Trichoderma)细胞的是adeA、adeB、amdS、hph和pyrG基因。
选择性标记可以是双选择性标记系统，如在WO 2010/039889中所述的。在一些方面中，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
所述载体优选地包含元件，其允许载体整合至宿主细胞基因组或在细胞中独立于基因组自主复制载体。
对于整合进入宿主细胞基因组，所述载体可依赖于编码多肽的多核苷酸的序列或载体的任何其它元件，用于通过同源或非同源重组整合进基因组。作为另外一种选择，所述载体可包含另外的多核苷酸，用于指导通过同源重组在染色体的精确位置整合进入宿主细胞的基因组。为了增加在精确位置整合的可能性，整合元件应包含足够数量的核酸，诸如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对，其与对应的靶序列具有高度的序列同一性以提高同源重组的概率。所述整合元件可为与宿主细胞基因组中靶序列同源的任何序列。此外，所述整合元件可为非编码或可编码多核苷酸。另一方面，所述载体可通过非同源重组整合进宿主细胞的基因组。
对于自主复制，所述载体还包含复制起点，使得所述载体在所考虑的宿主细胞中自主复制。所述复制起点可为在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制因子。术语“复制起点”或“质粒复制因子”是指使得质粒或载体在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的例子是质粒pBR322、pUC19、pACYC177和pACYC184的复制起点，其允许在大肠杆菌属(E.coli)中复制，以及pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点，其允许在芽孢杆菌属中复制。
可用于酵母宿主细胞的复制起点的例子是2微米复制起点、ARSl、ARS4、ARS1和CEN3的组合、以及ARS4和CEN6的组合。
可用于丝状真菌细胞的复制起点的示例是AMA1和ANS1(Gems等人，1991，Gene 98：61-67；Cullen等人，1987，Nucleic Acids Res.15：9163-9175；WO 00/24883)。可按照在WO00/24883中公开的方法完成AMA1基因的分离和包含所述基因的质粒或载体的构建。
可将多于一个拷贝的本发明的多核苷酸插入宿主细胞以增加多肽的制备。可通过将至少一个附加的拷贝的所述序列整合进宿主细胞基因组、或在细胞包含扩增拷贝的选择性标记基因的情况下通过包含具有所述多核苷酸的可扩增的选择性标记基因来获得所述多核苷酸拷贝数的增加，从而能通过在合适的选择性试剂的存在下培养所述细胞而选择所述多核苷酸的附加的拷贝。
用于连接上述元件以构建本发明的所述重组表达载体的步骤是本领域技术人员所熟知的(参见，例如，Sambrook等人，1989，同上)。
宿主细胞
本文感兴趣的重组宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个控制序列的多核苷酸，该控制序列指导可用于本发明的多肽的制备。如前面所述，将包含多核苷酸的构建体或载体导入宿主细胞使得构建体或载体保持为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体。术语“宿主细胞”涵盖了由于在复制过程中发生的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码多肽的基因和它的来源。
宿主细胞可为在本发明的多肽的重组制备中有用的任何细胞，例如，原核细胞或真核细胞。
所述原核宿主细胞可为任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于芽孢杆菌属、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、地芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、海洋芽胞杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、和链霉菌属(Streptomyces)。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌属(E.coli)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏球菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)和脲原体属。
所述细菌宿主细胞可为任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽胞杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)细胞。
细菌宿主细胞还可为任何链球菌属(Streptococcus)细胞，包括但不限于似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)和马链球菌兽瘟亚种(Streptococcus equisubsp.Zooepidemicus)细胞。
细菌宿主细胞还可为任何链霉菌属(Streptomyces)细胞，包括但不限于不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、和浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)细胞。
将DNA导入芽孢杆菌属细胞可通过原生质体转化(参见，例如，Chang和Cohen，1979，Mol.Gen.Genet.168：111-115)、感受态细胞转化(参见，例如Young和Spizizen，1961，J.Bacteriol.81：823-829、或Dubnau和Davidoff-Abelson，1971，J.Mol.Biol.56：209-221)，电穿孔(参见，例如Shigekawa和Dower，1988，Biotechniques 6：742-751)，或结合(参见，例如Koehler和Thorne，1987，J.Bacteriol.169：5271-5278)实现。将DNA导入大肠杆菌属(E.coli)细胞可通过原生质体转化(参见，例如Hanahan，1983，J.Mol.Biol.166：557-580)或电穿孔(参见，例如Dower等人，1988，Nucleic Acids Res.16：6127-6145)实现。将DNA导入链霉菌属(Streptomyces)细胞可通过原生质体转化、电穿孔(参见，例如Gong等人，2004，Folia Microbiol.(Praha)49：399-405)、结合(参见，例如Mazodier等人，1989，J.Bacteriol.171：3583-3585)、或转导(参见，例如Burke等人，2001，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98：6289-6294)实现。将DNA导入假单胞菌属(Pseudomonas)细胞可通过电穿孔(参见，例如Choi等人，2006，J.Microbiol.Methods 64：391-397)、或结合(参见，例如Pinedo和Smets，2005，Appl.Environ.Microbiol.71：51-57)实现。将DNA导入链球菌属(Streptococcus)细胞可通过自然感受态(参见，例如Perry和Kuramitsu，1981，Infect.Immun.32：1295-1297)、原生质体转化(参见，例如Catt和Jollick，1991，Microbios68：189-207)、电穿孔(参见，例如Buckley等人，1999，Appl.Environ.Microbiol.65：3800-3804)或结合(参见，例如Clewell，1981，Microbiol.Rev.45：409-436)实现。然而，可使用本领域已知的将DNA导入宿主细胞的任何方法。
所述宿主细胞还可为真核细胞，诸如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
所述宿主细胞还可为真菌细胞。如本文所用，“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和缀合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有分生孢子真菌(如Hawksworth等人，在Ainsworth and Bisby’sDictionary of The Fungi，第8版，1995，CAB International，University Press，Cambridge，UK中定义的)。
所述真菌宿主细胞可为酵母细胞。如本文所用，“Yeast”包括产子囊孢子酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于不完全菌纲(Fungi Imperfecti)(芽生菌目(Blastomycetes))的酵母。由于未来酵母的分类可发生变化，就本发明的目的而言，应如Biology and Activities of Yeast(Skinner，Passmore和Davenport，editors，Soc.申请Bacteriol.Symposium Series No.9，1980)中所述定义酵母。
酵母宿主细胞可为假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、或耶氏酵母属(Yarrowia)细胞，诸如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔斯伯酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、啤酒糖酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁费酵母(Saccharomyceskluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母(Saccharomycesoviformis)、或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
所述真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括所有丝状形式的真菌门亚门和卵菌门(如Hawksworth等人，1995，同上所定义的)。所述丝状真菌是特征大致在于由甲壳质、纤维素、葡聚糖、脱乙酰壳多糖、甘露聚糖和其它复合多糖构成的菌丝壁。营养生长是通过菌丝延长，并且碳分解代谢是专性需氧的。相比之下，酵母诸如啤酒糖酵母的营养生长是通过通过单细胞菌体的出芽，并且碳分解代谢可为发酵的。
所述丝状真菌宿主细胞可为支顶孢属(Acremonium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、短梗霉属(Aureobasidium)、烟管菌属(Bjerkandera)、拟蜡菌属(Ceriporiopsis)、金黄孢子菌属(Chrysosporium)、鬼伞属(Coprinus)、革盖菌(Coriolus)、隐球菌属(Cryptococcus)、丝梗霉属(Filibasidium)、镰孢菌属(Fusarium)、腐质霉属(Humicola)、稻温病菌(Magnaporthe)、毛霉属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、新考玛脂霉属(Neocallimastix)、脉孢菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、显革菌属(Phanerochaete)、射脉菌属(Phlebia)、梨囊鞭菌属(Piromyces)、侧耳菌属(Pleurotus)、裂褶菌属(Schizophyllum)、篮状菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌(Thermoascus)、草根霉属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、栓菌属(Trametes)、或木霉属(Trichoderma)细胞。
例如，所述丝状真菌宿主细胞可为Bacillus awamori、臭芽孢杆菌(Bacillusfoetidus)、Bacillus fumigatus、Bacillus japonicus、Bacillus nidulans、Bacillusniger、食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)、烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsis aneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsis gilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsis rivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜毛金孢菌(Chrysosporium keratinophilum)、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢菌(Chrysosporium pannicola)、昆士兰金孢菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢菌(Chrysosporium tropicum)、环纹金孢菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛云芝菌(Coriolushirsutus)、镰孢属(Fusarium bactridioides)、谷类镰孢菌(Fusarium cerealis)、库威镰孢菌(Fusarium crookwellense)、黄色镰孢菌(Fusarium culmorum)、禾谷镰孢菌Fusariumgraminearum)、禾镰孢菌(Fusarium graminum)、异孢镰孢菌(Fusarium heterosporum)、合欢木镰孢菌(Fusarium negundi)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、网状镰孢菌(Fusarium reticulatum)、粉红镰孢菌(Fusarium roseum)、接骨木镰孢菌(Fusariumsambucinum)、肤色镰孢菌(Fusarium sarcochroum)、拟枝镰孢菌(Fusariumsporotrichioides)、硫色镰孢菌(Fusarium sulphureum)、圆镰孢菌(Fusariumtorulosum)、拟丝镰孢菌(Fusarium trichothecioides)、镶片镰孢菌(Fusariumvenenatum)、孤独腐质霉(Humicola insolens)、柔毛腐质霉(Humicola lanuginosa)、米赫毛霉(Mucor miehei)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、射纹革菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotuseryngii)、太瑞斯梭孢壳霉(Thielavia terrestris)、长绒毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康氏木霉(Trichoderma koningii)、长梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉、或绿色木霉(Trichoderma viride)细胞。
可以通过涉及原生质体形成、原生质体转化和细胞壁再生的方法，以本身已知的方式转化真菌细胞。用于转化芽孢杆菌属(Bacillus)和木霉属(Trichoderma)宿主细胞的合适的步骤在EP 238023，Yelton等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：1470-1474以及Christensen等人，1988，Bio/Technology 6：1419-1422中有所描述。用于转化镰孢属(Fusarium)菌种的合适的方法在Malardier等人，1989，Gene 78：147-156和WO 96/00787中有所描述。可使用Becker和Guarente，In Abelson，J.N.和Simon，M.I.，editors，Guide toYeast Genetics and Molecular Biology，Methods in Enzymology，第194卷，第182-187页，Academic Press，Inc.，New York；Ito等人，1983，J.Bacteriol.153：153-163；和Hinnen等人，1978，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75：1920的规程转化酵母。
制备方法
制备可用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体的方法，包括(a)在有利于制备该脱氧核糖核酸酶变体的条件下培养细胞；以及任选地，(b)回收脱氧核糖核酸酶变体。在一些方面中，细胞是芽孢杆菌属(Bacillus)细胞。在另一方面，细胞是食物芽孢杆菌(Bacilluscibi)细胞。
制备本发明的脱氧核糖核酸酶变体的方法，包括(a)在有利于制备该脱氧核糖核酸酶变体的条件下培养本发明的重组宿主细胞；以及任选地，(b)回收脱氧核糖核酸酶变体。
使用本领域已知的方法在适于制备该多肽的营养培养基中培养所述宿主细胞。例如，细胞可以在实验室或工业发酵罐中，在合适的培养基中和在允许所述多肽被表达和/或分离的条件下，通过摇瓶培养、或小规模或大规模发酵(包括连续，分批，补料分批或固态发酵)进行培养。在包含碳源和氮源和无机盐的合适的营养培养基中，使用本领域已知的步骤进行培养。合适的培养基可购自商业供应商或可根据公布的组合物(例如，在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果多肽被分泌在营养培养基中，可直接从培养基中回收该多肽。如果多肽不是分泌的，可从细胞裂解液中回收它。
可使用本领域已知的对脱氧核糖核酸酶变体多肽特异性的方法检测该脱氧核糖核酸酶变体。这些检测方法包括但不限于使用特异性抗体、形成酶产物或酶底物的消失。例如，可使用酶反应分析法以测定多肽的活性。
可使用本领域中已知的方法回收脱氧核糖核酸酶变体多肽。例如，可通过常规步骤，包括但不限于采集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从营养培养基回收脱氧核糖核酸酶变体多肽。在一些方面，回收包含脱氧核糖核酸酶变体的发酵液。
可通过本领域中已知的多种方法，包括但不限于色谱法(例如，离子交换、亲和、疏水、色谱聚焦和体积排阻)、电泳方法(例如，制备性等电聚焦)、溶解度差异(例如，硫酸铵沉淀)，SDS-PAGE、或提取(参见，例如，Protein Purification，Janson和Ryden，editors，VCHPublishers，New York，1989)纯化多肽以获得基本上纯的多肽。
在一个可供选择的方面，不回收多肽，而是使用表达该多肽的宿主细胞作为变体的来源。
洗涤剂组合物
优选的洗涤剂组合物用于清洁和/或处理织物和/或硬质表面。
洗涤剂助剂选自表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预制的过酸、聚合物分散剂、粘土污垢去除/抗再沉积剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构增弹剂、织物软化剂、载体、水溶助长剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、抗发泡剂、分散剂、加工助剂、颜料以及它们的混合物。
洗涤剂助剂成分优选包括表面活性剂，具体地对于清洁组合物来说表面活性剂包括阴离子和/或非离子型，优选为两者，比率为从20：1至1：2。在包含脱氧核糖核酸酶变体的清洁洗涤剂组合物中包括表面活性剂的一个优点是改善了洗涤性能。在一些方面，洗涤剂助剂成分是助洗剂或粘土污垢去除/抗再沉积剂。
优选的助剂成分优选地包含酶。洗涤剂组合物可包含一种或多种酶，如下所述。所述一种或多种酶可选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代加过氧酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶。适用于本发明洗涤剂组合物的具体的酶描述如下。
洗涤剂组合物可被配制成条状、均一化片剂、具有两层或更多层的片剂、具有一个或多个隔室的小袋、常规或致密型粉末、颗粒、糊剂、凝胶或常规的、致密或浓缩的液体。洗涤剂组合物可为液体洗涤剂、粉末洗涤剂或颗粒洗涤剂。
本发明的一些方面涉及包含脱氧核糖核酸酶的衣物洗涤或清洁组合物，按组合物的重量计(wt％)优选地其含量为从约0.000001wt％至约1wt％、从约0.0001wt％至约1wt％、从约0.0002wt％至约1wt％、从约0.0005wt％至约1wt％、从约0.001wt％至约1wt％、从约0.002wt％至约1wt％、从约0.005wt％至约1wt％、优选地为从约0.01wt％至约0.5wt％、优选地为从0.0002wt％至约1wt％。数量为wt％/单位活性酶，例如按所述组合物的重量计从约0.00001wt％至约1wt％的脱氧核糖核酸酶。
具有脱氧核糖核酸酶活性的活性酶的浓度优选为总洗涤剂浓度的至少0.00001％，优选为至少0.00002％，优选为至少0.0001wt％，优选为至少0.0002wt％，优选为至少0.001wt％，优选为至少0.002wt％，优选为至少0.005wt％，优选为至少0.01wt％，优选为至少0.02wt％，优选为至少0.05wt％，优选为至少0.1wt％。
酶量也可为ppm(mg/L)活性酶蛋白质。因此，在一个方面，组合物中脱氧核糖核酸酶的量为至少0.00001ppm、0.00002ppm、0.00005ppm、0.0001ppm、0.0002ppm、0.0005ppm、0.001ppm、0.002ppm、0.005ppm、0.01ppm、0.02ppm、0.05ppm、0.1ppm、0.2ppm、0.5ppm、1ppm、2ppm、5ppm、10ppm或至少20ppm的脱氧核糖核酸酶。在一个方面，组合物中脱氧核糖核酸酶的量在约0.00001ppm至约10ppm脱氧核糖核酸酶的范围内，或在约0.0001ppm至约2ppm脱氧核糖核酸酶的范围内，或在约0.001ppm至约2ppm脱氧核糖核酸酶的范围内。
在一些方面，该洗涤剂组合物是适用于例如在高的温度和/或pH条件下洗涤的液体或粉末衣物洗涤剂，诸如在或高于40℃和/在或高于pH8。在一些方面，该洗涤剂组合物是适用于例如在低的温度和/或pH条件下洗涤的液体或粉末衣物洗涤剂，诸如在或低于20℃和/或pH6。洗涤剂还可被配制为单位剂量洗涤剂和/或压缩洗涤剂，可选的为具有最低水量或无水。洗涤剂组合物还可为盘碟洗涤洗涤剂。衣物洗涤剂和盘碟洗涤剂可不含磷酸盐。
本发明还涉及一种洗涤剂组合物，其为织物处理组合物诸如织物软化剂组合物。优选的织物软化剂组合物包括织物软化剂化合物，其具有季铵酯软化活性(织物软化活性物质，Fabric Softening Active“FSA”)，优选的量为按所述组合物的重量计从2至50。在优选的织物软化剂组合物中，季铵酯软化活性物质按所述组合物的重量计以从3.0％至30％，更优选的从3.0％至18％或20％，甚至更优选的从7.0％至15％的含量存在。季铵酯软化活性物质的含量可取决于组合物(稀释的或浓缩的组合物)中全部软化活性物质的期望浓度以及其它软化活性物质的存在与否。更高含量会增加在从洗衣机中递送时产生分配器残余或随时间推移粘度不稳定的风险。
合适的季铵软化化合物(quats)包括但不限于选自以下的材料：单酯季铵软化化合物、二酯季铵软化化合物、三酯季铵软化化合物以及它们的混合物。优选地，单酯季铵软化化合物的含量为从2.0％至40.0％，二酯季铵软化化合物的含量为从40.0％至98.0％，三酯季铵软化化合物的含量为从0.0％至25.0％，按全部季铵酯软化活性物质的重量计。
季铵酯软化活性物质可包含下式的化合物：
{R2 (4-m)-N+-[X-Y-R1]m}A-
其中：
m是1、2或3，条件是每个m的值是相同的；
每个R1独立地是烃基、或支链烃基基团，优选地R1是直链的，更优选地R1为部分不饱和的直链烷基链；
每个R2独立地是C1-C3烷基或羟烷基基团，优选地R2选自甲基、乙基、丙基、羟乙基、2-羟丙基、1-甲基-2-羟乙基、聚(C2-3烷氧基)、聚乙氧基、苄基；
每个X为独立地(CH2)n、CH2-CH(CH3)-或CH-(CH3)-CH2-和
每个n为独立地1、2、3或4，优选地每个n是2；
每个Y为独立地-O-(O)C-或-C(O)-O-；
A-独立地是选自氯化物、硫酸甲酯、和硫酸乙酯，优选地A-选自氯化物和硫酸甲酯；
前提条件是当Y为-O-(O)C-时，每个R1中的碳的总和为从13至21，优选地为从13至19。
在优选的液体织物软化剂组合物中，从其形成季铵织物软化活性物质的母体脂肪酸的碘值是从0至100，更优选地从10至60，甚至更优选从15至45。
合适的季铵酯柔软剂活性物的示例是可从KAO Chemicals以商品名Tetranyl AT-1和Tetranyl AT-7590，从Evonik以商品名Rewoquat WE16 DPG、Rewoquat WE18、RewoquatWE20、Rewoquat WE28、和Rewoquat 38 DPG，从Stepan以商品名Stepantex GA90、StepantexVR90、Stepantex VK90、Stepantex VA90、Stepantex DC90、Stepantex VL90A商购获得。
液体洗涤剂组合物
本发明的脱氧核糖核酸酶变体还可被配制在液体衣物洗涤组合物诸如包含下列组分的液体衣物洗涤组合物中：
至少0.00001例如0.005mg活性脱氧核糖核酸酶变体蛋白质/升洗涤剂，
以及任选地
b)0wt％至60wt％的至少一种表面活性剂，和任选地
c)0wt％至50wt％的至少一种助洗剂。
表面活性剂可选自如上所述的非离子的、阴离子和/或两性表面活性剂，优选地阴离子或非离子表面活性剂，但也可使用两性表面活性剂。一般来讲，优选漂白稳定的表面活性剂。优选的阴离子表面活性剂为硫酸盐表面活性剂并且具体地为烷基醚硫酸盐，尤其是C-9-15醇醚硫酸盐、C12-15伯醇乙氧基化物、C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐，诸如单十二烷基酯硫酸盐。阴离子表面活性剂的非限制性示例包括硫酸盐和磺酸盐，具体来说，直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、烯基磺酸盐、链烷烃-2，3-二基双(硫酸盐)、羟基烷基磺酸盐和二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)诸如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲烷基磺酸盐(SAS)、链烷磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺酸化脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)，其包括甲酯磺酸盐(MES)、烷基或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯或单酯、或脂肪酸的盐(皂)，以及它们的组合。
阴离子表面活性剂可优选地以盐形式加入到洗涤剂中。这些盐中的合适阳离子为碱金属离子，诸如钠，钾，锂和铵盐，例如(2-羟乙基)铵，双(2-羟乙基)铵和三(2-羟乙基)铵盐。非离子表面活性剂的非限制性示例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯，诸如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯，烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多苷(APG)、烷氧基化胺，脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)，多羟基烷基脂肪酸酰胺，或葡糖胺的N-酰基或N-烷基衍生物(葡糖酰胺，GA或脂肪酸葡糖酰胺，FAGA)、以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品，以及它们的组合。可商购获得的非离子表面活性剂包括得自BASF的PlurafacTM、lutensolTM和pluronicTM，得自Cognis的DehyponTM系列，和得自Clariant的Cognis和genapolTM系列。
助洗剂优选选自磷酸盐、柠檬酸钠助洗剂、碳酸钠、硅酸钠，硅铝酸钠(沸石)。合适的助洗剂为碱金属磷酸盐或磷酸铵、多磷酸盐、膦酸盐、多膦酸盐、碳酸盐，碳酸氢盐，硼酸盐，柠檬酸盐和聚羧酸盐。柠檬酸盐助洗剂，例如柠檬酸及其可溶性盐(尤其是钠盐)是聚羧酸盐助洗剂。柠檬酸盐能够与沸石，硅酸盐如BRITESIL类型和/或层状硅酸盐助洗剂组合使用。助洗剂的添加量优选为按重量计约0-65％，诸如按重量计约5％至约50％。在衣物洗涤剂中，助洗剂的含量通常为按重量计约40-65％，具体地讲按重量计约50-65％，具体地讲按重量计20％至50％。具体地讲，助洗剂和/或共助洗剂可为与Ca和Mg形成水溶性络合物的螯合剂。可使用本领域已知用于清洁洗涤剂中的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性示例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐诸如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐诸如碳酸钠、可溶性硅酸盐诸如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如，得自Hoechst的SKS-6)和(羧甲基)菊粉(CMI)，以及它们的组合。助洗剂的另外的非限制性示例包括柠檬酸盐、螯合剂诸如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐和膦酸盐，以及烷基或烯基琥珀酸。另外的具体示例包括2，2’，2”-次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N，N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)、1-羟乙烷-1，1-二膦酸、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N，N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(磺甲基谷氨酸)(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、丝氨酸-N，N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N，N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N，N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N，N-二乙酸(ANDA)、对氨基苯磺酸-N，N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N，N-二乙酸(TUDA)和N′-(2-羟乙基)乙二胺-N，N，N’-三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)，以及它们的组合和盐。适用于本文的膦酸盐包括1-羟乙烷-1，1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA或DTPMP)、次氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP或NTMP)、2-膦酰基丁烷-1，2，4-三羧酸(PBTC)、六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(HDTMP)。
该组合物还可以包含按重量计0-50％(诸如约5％至约30％)的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可包括单独的共助洗剂，或与一种助洗剂结合，例如沸石助洗剂。共助洗剂的非限制性示例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，诸如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)或聚天冬氨酸。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂在，例如，WO 09/102854，US 5977053中有所描述。
在一些方面，助洗剂是基于非磷的助洗剂，诸如柠檬酸和/或甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)和/或它们的盐。
该液体组合物还可不含磷酸盐，因为优选的助洗剂包括柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)和/或它们的盐。
本发明的一些方面涉及一种液体衣物洗涤组合物，其包含：
a)每升组合物至少0.00001mg例如0.005mg的脱氧核糖核酸酶变体，和任选地
b)按重量计0％至30％的至少一种表面活性剂，其中所述至少一种表面活性剂选自LAS、AEOS和/或SLES，和任选地
c)按重量计0％至50％的至少一种助洗剂，其选自柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)和/或它们的盐。
本发明的一些方面涉及一种液体衣物洗涤组合物，其包含：
a)每升组合物至少0.00001mg例如0.005mg的脱氧核糖核酸酶变体，和任选地
b)按重量计0％至30％的至少一种表面活性剂，其中所述至少一种表面活性剂为LAS、AEOS和/或SLES，和任选地
c)按重量计0％至50％的至少一种助洗剂，其选自HEDP、DTMPA或DTPMPA。
液体洗涤剂组合物通常可包含按重量计至少20％和至多95％的水，诸如至多70％的水、至多50％的水、至多40％的水、至多30％的水、至多20％的水、至多10％的水、至多5％的水或至多2％的水。含水液体洗涤剂中可包括其它类型的液体(非限制性地包括烷醇、胺、二醇、醚和多元醇)。含水液体洗涤剂可包含0-30％的有机溶剂。液体洗涤剂甚至能够是非水性的，其中水含量低于10％，优选地低于5％。
粉末组合物
洗涤剂组合物还可配制成用于衣物洗涤或盘碟洗涤的颗粒状洗涤剂。本发明的一些方面涉及一种颗粒洗涤剂组合物，其包含：
a)每克组合物至少0.00001mg例如0.005mg的脱氧核糖核酸酶变体，任选地
b)0wt％至40wt％的阴离子表面活性剂，任选地
c)0wt％至20wt％的非离子表面活性剂，和/或任选地
d)0wt％至40wt％的助洗剂，诸如碳酸盐、沸石、磷酸盐助洗剂、钙多价螯合助洗剂或络合剂。
表面活性剂可选自如上所述的非离子的、阴离子和/或两性表面活性剂，优选地阴离子或非离子表面活性剂，但也可使用两性表面活性剂。一般来讲，优选漂白稳定的表面活性剂。优选的阴离子表面活性剂为硫酸盐表面活性剂并且具体地为烷基醚硫酸盐，尤其是C-9-15醇醚硫酸盐、C12-15伯醇乙氧基化物、C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐，诸如单十二烷基酯硫酸盐。阴离子表面活性剂的非限制性示例包括硫酸盐和磺酸盐，具体来说，直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、烯基磺酸盐、链烷烃-2，3-二基双(硫酸盐)、羟基烷基磺酸盐和二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)诸如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲烷基磺酸盐(SAS)、链烷磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺酸化脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)，其包括甲酯磺酸盐(MES)、烷基或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯或单酯、或脂肪酸的盐(皂)，以及它们的组合。阴离子表面活性剂可优选地以盐形式加入到洗涤剂中。这些盐中的合适阳离子为碱金属离子，诸如钠，钾，锂和铵盐，例如(2-羟乙基)铵，双(2-羟乙基)铵和三(2-羟乙基)铵盐。
非离子表面活性剂的非限制性示例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯，诸如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯，烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多苷(APG)、烷氧基化胺，脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)，多羟基烷基脂肪酸酰胺，或葡糖胺的N-酰基或N-烷基衍生物(葡糖酰胺，GA或脂肪酸葡糖酰胺，FAGA)、以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品，以及它们的组合。
可商购获得的非离子表面活性剂包括得自BASF的PlurafacTM、lutensolTM和pluronicTM，得自Cognis的DehyponTM系列和得自Clariant的genapolTM系列。
助洗剂可为非磷酸盐，诸如柠檬酸盐，优选为钠盐和/或沸石。膦酸盐助洗剂可以是任意上述的那些。
如上所述助洗剂优选地选自磷酸盐和柠檬酸钠助剂、碳酸钠、硅酸钠，钠铝硅酸盐(沸石)。合适的助洗剂如上所述并且包括碱金属磷酸盐或磷酸铵、多磷酸盐、膦酸盐、多膦酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硼酸盐、聚羟基磺酸盐、聚乙酸盐、羧酸盐、柠檬酸盐和聚羧酸盐。柠檬酸盐助洗剂，例如柠檬酸及其可溶性盐(尤其是钠盐)是聚羧酸盐助洗剂。助洗剂优选以按重量计约0-65％的量加入，诸如按重量计约5％至约50％，诸如按重量计5％至40％，诸如按重量计10％至40％，诸如按重量计10％至30％，诸如按重量计15％至20％或诸如按重量计20％至40％。助洗剂可为膦酸盐助洗剂，其包括1-羟乙烷-1，1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)，二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)、2-膦酰基丁烷-1，2，4-三羧酸(PBTC)和六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(HDTMP)。优选的膦酸盐包括1-羟乙烷-1，1-二膦酸(HEDP)和/或二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)。膦酸盐的添加量优选地约为按重量计从约0.01％至约10％，优选为按重量计从0.1％至约5％，更优选为按所述组合物的重量计从0.5％至3％。
该颗粒组合物还可不含磷酸盐，因为优选的助洗剂包括柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)和/或它们的盐。
本发明的一些方面涉及一种颗粒组合物，其包含：
a)每克组合物至少0.00001mg例如0.005mg的脱氧核糖核酸酶变体，和任选地
b)按重量计0％至30％的至少一种表面活性剂，其中该表面活性剂为LAS、AEOS和/或SLES，和任选地
c)按重量计0％至50％的至少一种助洗剂，其选自柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)和/或它们的盐。
本发明的一些方面涉及一种颗粒组合物，其包含：
a)每克组合物至少0.00001mg例如0.005mg的脱氧核糖核酸酶变体，和任选地
b)按重量计0％至30％的至少一种表面活性剂，其中所述至少一种表面活性剂为LAS、AEOS和/或SLES，和任选地
c)按重量计0％至50％的至少一种助洗剂，其选自HEDP、DTMPA或DTPMPA。
洗涤剂可包含按重量计0-30％(诸如约1％至约20％)的漂白体系。可使用包含本领域已知用于清洁洗涤剂中的组分的任何漂白体系。合适的漂白体系组分包括过氧化氢源；过酸源；以及漂白催化剂或增效剂。
过氧化氢源：合适的过氧化氢源是无机过酸盐，其包括碱金属盐诸如过碳酸钠和过硼酸钠(通常是一水或四水合物)，和过氧化脲(1/1)。
过酸源：过酸可(a)以预制的过酸直接掺入或(b)由过氧化氢和漂白活化剂(过水解)在洗涤液体中原位形成，或(c)由过氧化氢和过水解酶和后者的合适底物(例如酯)在洗涤液体中原位形成。
a)合适的预制过酸包括但不限于，过氧羧酸(诸如过氧苯甲酸及其环取代的衍生物)、过氧-α-萘甲酸、过氧邻苯二甲酸、过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸[邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸(PAP)]、以及o-羧基苯甲酰氨基过氧己酸；脂族和芳族二过氧二羧酸诸如二过氧十二烷二酸、二过氧壬二酸、二过氧癸二酸、二过氧十三烷二酸、2-癸基二过氧丁二酸以及二过氧邻苯二甲酸、-间苯二甲酸和-对苯二甲酸；过亚氨酸；过氧单硫酸；过氧二硫酸；过氧磷酸；过氧硅酸；以及上述化合物的混合物。应当理解，所提及的过酸在一些情况下最好以合适的盐(的形式)添加，诸如碱金属盐(例如，)或碱土金属盐。
b)合适的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺、腈或酸酐类的那些，以及在适用的情况下它们的盐。合适的示例为四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3，5，5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二烷酰基氧基)苯-1-磺酸钠(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸钠(DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(NOBS)，和/或WO98/17767中所公开的那些。EP624154中公开了感兴趣的漂白活化剂的一个具体家族，在这个家族中特别优选的是柠檬酸乙酰基三乙酯(ATC)。ATC或类似甘油三乙酸酯的短链甘油三酯具有对环境友好的优点。此外，柠檬酸乙酰基三乙酯和甘油三乙酸酯在储存期间，在产品中具有良好的水解稳定性，并且是有效的漂白活化剂。最后，ATC是多功能的，如在过水解反应中释放的柠檬酸盐可用为助洗剂。
漂白催化剂和增效剂：漂白体系还可包括漂白催化剂或增效剂。可用于本发明的组合物中的漂白催化剂的一些非限制性示例包括草酸锰、乙酸锰，锰-胶原、钴胺催化剂和三氮杂环壬烷(MnTACN)锰催化剂；特别优选的是1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1，2，4，7-四甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)锰络合物，具体的讲是Me3-TACN，诸如二核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2和[2，2′，2″-次氨基三(乙烷-1，2-二基亚氮烷基-κN-甲基亚乙基)三苯酚-κ3O]锰(III)。漂白催化剂也可为其它金属化合物，例如铁或钴络合物。
在一些方面，其中包括过酸源，可使用具有以下化学式之一的有机漂白催化剂或漂白增效剂：
(iii)以及它们的混合物；其中每个R1为独立地包含9至24个碳的支链烷基基团或包含11至24个碳的直链烷基基团，优选地每个R1独立地是包含9至18个碳的支链烷基基团或包含11至18个碳的直链烷基基团，更优选地每个R1独立地选自2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基和异十五烷基。
其它示例性漂白体系在，例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259、EP 1867708(维生素K)和WO 2007/087242中有所描述。合适的光漂白剂可为例如磺化锌或酞菁铝。
根据一些方面和以上任何方面，本发明还涉及一种清洁组合物，其包含；
a)每克组合物至少0.00001mg例如0.005mg的脱氧核糖核酸酶变体，任选地
b)10-50wt％的助洗剂以及任选地
c)至少一种漂白剂组分，其中该漂白剂优选为过氧化物并且该漂白催化剂是一种锰化合物。
氧漂剂优选为过碳酸盐和锰催化剂，优选为1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷或四水合乙酸锰(III)。
根据一些方面和以上任何方面，本发明还涉及一种清洁组合物，其包含；
a)每克组合物至少0.00001mg例如0.005mg的脱氧核糖核酸酶变体，任选地
b)10-50wt％的助洗剂，其选自柠檬酸、甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)以及它们的混合物，以及任选的
c)至少一种漂白剂组分，其中该漂白剂是氧漂剂并且该漂白催化剂是一种锰化合物。
氧漂剂优选地为过碳酸盐和锰催化剂，优选地为1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环-壬烷或四水合乙酸锰(II)。
根据一些方面和以上任何方面，本发明还涉及一种洗涤剂组合物，其包含；
a)每克组合物至少0.00001mg例如0.005mg的脱氧核糖核酸酶变体，任选地
b)10-50wt％的助洗剂，其选自柠檬酸、甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)以及它们的混合物，以及任选的
c)0.1-40wt％(优选为0.5-30wt％)的漂白组分，其中该漂白组分为过氧化物(优选地为过碳酸盐)以及含金属的漂白催化剂(优选为1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷或四水合乙酸锰(II)(MnTACN))。
洗涤剂组分的选择可以包括，针对织物护理、考虑待清洁的织物的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洗时的温度、和洗涤剂产品的配方。虽然下文提到的组分根据特定的功能性由通用标题进行分类，这不应被解释为限制，因为一种组分，包括下文中所示的示例性非限制性组分可包括技术人员将理解的附加功能。
水溶助长剂
洗涤剂组合物可包含按重量计0-10％(例如按重量计0-5％，诸如约0.5至约5％或约3％至约5％)的水溶助长剂。可使用本领域已知用于衣物洗涤剂中的任何水溶助长剂。水溶助长剂的非限制性示例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、异丙基苯磺酸钠(SCS)、甲基异丙基苯磺酸钠、氧化胺、醇类和聚甘醇醚、羟萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基硫酸钠，以及它们的组合。
聚合物
洗涤剂组合物可包含按重量计0-10％(诸如0.5-5％、2-5％、0.5-2％或0.2-1％)的聚合物。可使用本领域已知用于衣物洗涤剂中的任何聚合物。聚合物可以用作如上文提到的共助洗剂，或可提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油脂清洁和/或抗发泡的性质。一些聚合物可以具有多于一种的上述性质和/或多于一种以下提及的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙烯乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(乙烯亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、以及聚羧酸酯诸如PAA、PAA/PMA、聚天冬氨酸，和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸月桂酯共聚物、疏水改性的CMC(HM--CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚二醇类的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二醇酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及二季铵乙氧基硫酸盐。其它示例性聚合物公开于例如WO 2006/130575中。还可以想到上述聚合物的盐。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物也包括织物调色剂，诸如染料或颜料，它们被配制用于洗涤剂组合物中，当所述织物与包含所述洗涤组合物的洗涤液体接触时它们能沉积在织物上，从而通过吸收/反射可见光改变所述织物的色调。荧光增白剂发出至少一些可见光。与之相反，织物调色剂改变表面色调是因为它们吸收至少一部分可见光谱。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土缀合物，并且也可包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。适宜的小分子染料包括的小分子染料选自属于以下颜色索引(C.I.)分类的染料：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红，或它们的混合物，例如如WO2005/03274、WO2005/03275、WO 2005/03276和EP 1876226(以引用方式并入本文)中描述的。洗涤剂组合物优选地包含约0.00003wt％至约0.2wt％，约0.00008wt％至约0.05wt％，或甚至约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。组合物可包含0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物是单位剂量小袋形式时这可为尤其优选的。合适的调色剂也公开于，例如WO 2007/087257和WO 2007/087243中。
酶
洗涤剂组合物可包含一种或多种另外的酶，诸如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶，例如漆酶和/或过氧化物酶。
一般来讲，所选择酶的特性通常将与所选择的洗涤剂相容(即最适pH、与其它酶或非酶成分相容等)，并且该酶应当以有效量存在。
纤维素酶
适用的纤维素酶包括细菌源或真菌源的那些。包括经化学修饰的或蛋白工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、腐质霉属(Humicola)、镰孢霉属(Fusarium)、草根霉属(Thielavia)、支顶孢属(Acremonium)的纤维素酶，例如，在US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757和WO 89/09259中所公开的由孤独腐质霉(Humicola insolens)、嗜热毁丝菌(Myceliophthorathermophila)和尖芽孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)制得的真菌纤维素酶。
特别合适的纤维素酶是具有颜色护理有益效果的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的示例为在EP 0 495 257，EP 0 531 372，WO 96/11262，WO 96/29397，WO 98/08940中描述的纤维素酶。其它示例是纤维素酶变体，诸如在WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307和WO 99/001544中描述的那些。
其它的纤维素酶是内切-β-1，4-葡聚糖酶(其序列与WO 2002/099091的SEQ IDNO：2的位点1至位点773的氨基酸序列具有至少97％的同一性)，或家族44木葡聚糖酶(其为一种木葡聚糖酶，其序列与WO 2001/062903的SEQ ID NO：2的位点40-559具有至少60％的同一性)。
可商购获得的纤维素酶包括CelluzymeTM和CarezymeTM(Novozymes A/S)、Carezyme PremiumTM(Novozymes A/S)、CellucleanTM(Novozymes A/S)、CellucleanClassicTM(Novozymes A/S)、CellusoftTM(Novozymes A/S)、WhitezymeTM(Novozymes A/S)、ClazinaseTM和Puradax HATM(Genencor International Inc.)以及KAC-500(B)TM(KaoCorporation)。
蛋白酶
合适的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源的。优选微生物来源的。包括了化学改性的或蛋白质工程化的突变型。其可为碱性蛋白酶，例如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可例如为S1家族(诸如胰蛋白酶)或S8家族(诸如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶蛋白酶可例如为来自例如家族M4的嗜热菌蛋白酶或其它金属蛋白酶，诸如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌蛋白酶”是指丝氨酸蛋白酶的子组，其根据Siezen等人，ProteinEngng.4(1991)：719-737，和Siezen等人Protein Science 6(1997)501-523。丝氨酸蛋白酶是蛋白酶的子组，其特征在于在活性位点具有丝氨酸，其与底物形成共价加合物。枯草杆菌蛋白酶可分成6个子分区，即枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)家族、嗜热蛋白酶(Thermitase)家族、蛋白酶K家族、羊毛硫细菌素肽酶(Lantibiotic peptidase)家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌蛋白酶的示例为来源于芽孢杆菌属(Bacillus)的那些，诸如在US7262042和WO09/021867中描述的诸如迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和吉氏芽孢杆菌(Bacillusgibsonii)，和在WO89/06279中描述的枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草杆菌蛋白酶BPN′、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168，以及在(WO93/18140)中描述的蛋白酶PD138。其它可用的蛋白酶可以是在WO92/175177、WO01/016285、WO02/026024和WO02/016547中描述的那些。胰蛋白酶-样蛋白酶的示例为胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属(Fusarium)蛋白酶(在WO89/06270、WO94/25583和WO05/040372中描述的)以及在WO05/052161和WO05/052146中所述的来源于纤维单胞菌属(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶。
另外的优选蛋白酶是(如例如WO95/23221中所述)得自迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)DSM 5483的碱性蛋白酶，以及在WO92/21760、WO95/23221、EP1921147和EP1921148中所述的它们的变体。
金属蛋白酶的示例是在WO07/044993(Genencor Int.)中描述的中性金属蛋白酶，诸如来源于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的那些。
有用的蛋白酶的示例是在WO92/19729、WO96/034946、WO98/20115、WO98/20116、WO99/011768、WO01/44452、WO03/006602、WO04/03186、WO04/041979、WO07/006305、WO11/036263、WO11/036264中描述的变体，特别是在下列位点中的一者或多者具有替换的变体：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中所述位点对应于WO2016/001449的SEQ ID NO：1中所示的迟缓芽孢杆菌(Bacillus Lentus)蛋白酶的位点。更优选的蛋白酶变体可包含下列突变中的一者或多者：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、N85S、N85R、G96S、G96A、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、N120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256DT268A或R269H。蛋白酶变体优选地为WO 2016/001449的SEQ ID NO：1中所示的迟缓芽孢杆菌(Bacillus Lentus)蛋白酶的变体，或为WO2016/001449的SEQ ID NO：2中所示的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamylolichenifaciens)蛋白酶(BPN′)的变体。蛋白酶变体优选地与WO 2016/001449的SEQID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的多肽具有至少80％的序列同一性。
一种蛋白酶变体，其包含在对应于WO2004/067737的SEQ ID NO：1的位点171、173、175、179或180的一个或多个位点的替换，其中所述蛋白酶变体与WO2004/067737的SEQ IDNO：1具有至少75％但少于100％的序列同一性。
合适的可商购获得的蛋白酶包括以商品名DuralaseTm，DurazymTm、Ultra、Ultra、Ultra、Ultra、100T、Blaze125T、Blaze150T、和(Novozymes A/S)出售的那些，以商品名 PurafectPurafect ExcellenzP1000TM、Excellenz P1250TM、Preferenz P100TM、PurafectPreferenzP110TM、Effectenz P1000TM、Effectenz P1050TM、PurafectEffectenz P2000TM、和(Danisco/DuPont)、AxapemTM(Gist-Brocases N.V.)、BLAP(US5352604的图29中显示的序列)以及他们的变体(Henkel AG)出售的那些和来自KAO的KAP(嗜碱芽孢杆菌(Bacil′lusalkalophilus)枯草杆菌蛋白酶)。
脂肪酶和角质酶
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括了化学改性的或蛋白质工程化的突变酶。示例包括来自嗜热丝孢菌属(Thermomyces)例如来自EP 258068和EP305216中所描述的疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(先前命名为柔毛腐质霉(Humicolalanugmosa))的脂肪酶，来自腐质霉属(Humicola)例如特异腐质霉(H.insolens)(WO 96/13580)的角质酶，来自假单胞菌属(Pseudomonas)菌株(这些中的一部分现在重命名为伯克霍尔德菌属(Burkholderia))例如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218272)、洋葱假单胞菌(P.Cepacia)(EP 331376)、假单胞菌属菌株(P.sp.strain)SD705(WO 95/06720&WO 96/27002)、威斯康辛假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)的脂肪酶、GDSL型链霉菌属(Streptomyces)脂肪酶(WO10/065455)、来自稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)(WO 10/107560)的角质酶、来自门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)(US 5,389,536)的角质酶、来自嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)(WO 11/084412)的脂肪酶、嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)脂肪酶(WO 11/084417)、来自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(WO 11/084599)的脂肪酶，以及来自灰色链霉菌(Streptomyces griseus)(WO 11/150157)和始旋链霉菌(S.pristmaespiralis)(WO 12/137147)的脂肪酶。
其它示例是脂肪酶变体，诸如在EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508和WO 09/109500中描述的那些(脂肪酶变体)。
优选的商业脂肪酶产品包括LipolaseTM，LipexTM；LipolexTM和LipocleanTM(Novozymes A/S)，Lumafast(最初来自Genencor)和Lipomax(最初来自Gist-Brocades)。
其它示例是有时被称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母菌(Candida antarctica)脂肪酶A(WO 10/111143)同源的酰基转移酶、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)(WO 05/56782)的酰基转移酶、来自CE 7家族(WO 09/67279)过水解酶，以及耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)过水解酶的变体尤其是在来自Huntsman Textile Effects Pte Ltd的商业产品Gentle Power Bleach中使用的S54V变体(WO 10/100028)。
淀粉酶
可与本发明的脱氧核糖核酸酶一起使用的合适淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶，并且可以是细菌或真菌来源。包括了化学改性的或蛋白质工程化的突变型。淀粉酶包括例如得自芽孢杆菌属(Bacillus)，例如地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的特殊菌株的α-淀粉酶，更详细的描述于GB 1,296,839中。
合适的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO：2的淀粉酶或与其SEQ IDNO：1具有90％的序列同一性的变体。优选的变体在WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO：4中有所描述，诸如在下述位点中的一者或多者具有替换的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。
不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO：6的淀粉酶或其与SEQ ID No：6具有90％的序列同一性的变体。SEQ ID NO：6的优选变体是在位点181和182中具有缺失以及在位点193中具有的替换的那些。
合适的其它淀粉酶是杂交体α-淀粉酶(其包含在WO 2006/066594的SEQ ID NO：6中所示的得自解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶的残基1-33以及在WO2006/066594的SEQ ID NO：4中所示的地衣芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶的残基36-483)，或与其具有90％的序列同一性的变体。该杂交体α-淀粉酶的优选变体是在下列位点的一者或多者具有替换、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含在WO 2006/066594的SEQ ID NO：6中所示的得自解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶的残基1-33以及SEQ ID NO：4的残基36-483的杂交体α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下替换的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 99/019467中SEQ ID NO：6的淀粉酶或其与SEQ IDNO：6具有90％的序列同一性的变体。SEQ ID NO：6的优选变体是在以下位点中的一者或多者具有替换、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。尤其优选的淀粉酶是具有在位点R181和G182或位点H183和G184的缺失的那些。
可使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQID NO：2或SEQ ID NO：7的那些或其与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：2或SEQ IDNO：7具有90％的序列同一性的变体。SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：2或SEQ IDNO：7的优选变体是在下列位点中的一者或多者具有替换、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476，使用WO 96/023873的SEQ ID NO：2进行编号。更优选的变体是在选自181、182、183、和184的两个位点，诸如位点181和182、位点182和183或位点183和184具有缺失的那些。SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：7的最优选的淀粉酶变体是在位点183和184具有缺失并且在位点140、195、206、243、260、304和476的一个或多个处具有替换的那些。
可以使用的其它淀粉酶是具有WO 08/153815中的SEQ ID NO：2、WO 01/66712中的SEQ ID NO：10的淀粉酶，或其与WO 08/153815中的SEQ ID NO：2具有90％的序列同一性或与WO 01/66712中的SEQ ID NO：10具有90％的序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ IDNO：10的优选变体是在下列位点中的一者或多者具有替换、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。
另外合适的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO：2的淀粉酶，或与其SEQ IDNO：2具有90％的序列同一性的变体。SEQ ID NO：2的优选变体是具有C末端截短和/或在下列位点中的一者或多者具有替换，缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO：2的更优选的变体是在下列位点中的一者或多者具有替换：Q87E，R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E，R、N272E，R、S243Q，A，E，D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E和G475K和/或在位点R180和/或S181或T182和/或G183具有缺失的那些。
SEQ ID NO：2的最优选淀粉酶变体是具有以下替换的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或者
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中该变体为C末端截短的并且任选地还包含在位点243的替换和/或位点180和/或位点181的缺失。
其它合适的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO：12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO：12具有至少90％的序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO01/66712中的SEQ IDNO：12的下列位点中的一者或多者具有替换，缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有缺失D183和G184并且具有替换R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及另外在选自M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339的一个或多个位点具有替换的变体，最优选的变体在所有这些位点上另外具有替换。
其它示例为淀粉酶变体，诸如在WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中所述的那些。
可商购获得的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、StainzymeTM、Stainzyme PlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X和BANTM(来自Novozymes A/S)，以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase和Preferenz S100(来自GenencorInternational Inc./杜邦DuPont)。
过氧化物酶/氧化酶
根据本发明，过氧化物酶是由酶分类EC 1.11.1.7(由国际生物化学与分子生物学联合会命名委员会(IUBMB)提出)所包含的过氧化物酶，或由其获得的表现出过氧化物酶活性的任何片段。
合适的过氧化物酶包括细菌源或真菌源的那些。包括了化学改性的或蛋白质工程化的突变型。可用的过氧化物酶示例包括来自鬼伞属(Coprinopsis)的过氧化物酶，例如来自灰盖鬼伞(C.cinerea)(EP 179,486)的，以及在WO 93/24618、WO 95/10602和WO 98/15257中所述的那些它们的变体。
根据本发明，过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，诸如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶，以及表现出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。卤代过氧化物酶根据它们对卤离子的特异性进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化由氯离子形成次氯酸盐。
在一个方面，本发明的卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，该卤代过氧化物酶是钒卤过氧化物酶，即包含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的一个优选方法中，包含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯离子源结合。
已经从许多不同的真菌分离出卤代过氧化物酶，具体地得自真菌组暗色丝孢菌(hyphomycetes)，诸如卡尔里霉菌属(Caldariomyces)例如卡尔里黑霉(C.fumago)、链格孢属(Alternaria)、弯孢属(Curvularia)例如疣状弯孢霉(C.verruculosa)和不等弯孢霉(C.inaequalis)、内脐蠕孢属(Drechslera)、单格孢属(Ulocladium)和葡萄孢霉属(Botrytis)。
另外也从细菌诸如假单胞菌属(Pseudomonas)(例如吡咯菌素假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(Streptomyces)(例如金霉素链霉菌(Streptomycesaureofaciens))中分离出卤代过氧化物酶。
在一个优选的方面，卤代过氧化物酶来源于弯孢属(Curvularia)，具体地讲疣状弯孢霉(Curvularia verruculosa)或不等弯孢霉(Curvularia inaequalis)，诸如在WO95/27046中所述的不等弯孢霉(Curvularia inaequalis)CBS 102.42；或WO 97/04102中所述的疣状弯孢霉(C.verruculosa)CBS 147.63或疣状弯孢霉(C.verruculosa)CBS 444.70；或来自如WO 01/79459中所述的内脐蠕孢属(Drechslera hartlebii)，WO 01/79458中所述的盐水小树状霉(Dendryphiella salina)、WO 01/79461中所述的Phaeotrichoconiscrotalarie、或WO 01/79460中所述的Geniculosporium属。
根据本发明，氧化酶具体地包括为酶分类EC 1.10.3.2所包含的任何漆酶，或从其获得的表现出漆酶活性的任何片段，或表现出类似活性的化合物，诸如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)，邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)，或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。所述酶可得自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌的合适示例包括来源于芽孢杆菌属(Bacillus)、脉孢菌属(Neurospora)例如粗糙脉孢菌(N.crassa)、足孢子菌属(Podospora)、葡萄孢菌属(Botrytis)、金钱菌属(Collybia)、层孔菌属(Fomes)、香菇属(Lentinus)、侧耳属(Pleurotus)、栓菌属(Trametes)例如绒毛栓菌(T.villosa)和变色栓菌(T.versicolor)、丝核菌属(Rhizoctonia)例如立枯丝核菌(R.solani)、鬼伞属(Coprinopsis)例如灰盖鬼伞(C.cinerea)、毛头鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)以及褶纹鬼伞(C.plicatilis)、小脆柄菇属(Psathyrella)例如黄盖小脆柄菇(P.condelleana)、斑褶菇属(Panaeolus)例如大孢花褶伞(P.papilionaceus)、毁丝霉属(Myceliophthora)例如嗜热毁丝霉(M.thermophila)、Schytalidium属例如S.thermophilum、多孔菌属(Polyporus)例如筛孔多孔菌(P.pinsitus)、射脉菌属(Phlebia)例如射脉齿菌(P.radiata)(WO 92/01046)、或革盖菌属(Coriolus)例如毛革盖菌(C.hirsutus)(JP 2238885)的漆酶。
来自细菌的合适示例包括来源于一株芽孢杆菌(Bacillus)的漆酶。
优选的是得自鬼伞属(Coprinopsis)或毁丝霉属(Myceliophthora)的漆酶；具体的讲如WO 97/08325中所公开的得自灰盖鬼伞(Coprinopsis Cinerea)的漆酶；或如WO 95/33836中所公开的得自来自嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)的。
可通过加入包含一种或多种酶的单个添加剂或通过加入包含所有这些酶的混合添加剂将洗涤剂酶加入洗涤剂组合物中。可将本发明的洗涤剂添加剂，即，单个添加剂或混合添加剂，配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂制剂是颗粒(具体地讲无粉尘颗粒)，液体(具体地讲稳定液体)，或混悬液。
可如例如US 4,106,991和4,661,452所公开的那样制备无粉尘颗粒，并且可任选地通过本领域已知的方法进行涂覆。蜡质涂层材料的示例为聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)，其具有1000至20000平均摩尔量；乙氧基化的壬基酚具有16个至50个环氧乙烷单元；乙氧基化的脂肪醇，其中所述醇包含12个至20个碳原子并且其中有15个至80个环氧乙烷单元；脂肪醇、脂肪酸；和脂肪酸甘油一酯和甘油二酯和甘油三酯。在GB 1483591中给出了适用于应用流化床技术的成膜涂层材料的示例。例如液体酶制备可根据已建立的方法，通过加入多元醇如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸来稳定化。可根据EP 238,216中公开的方法制备保护的酶。
其它材料
也可利用本领域已知用于本发明的清洁组合物中的任何洗涤剂组分。其它任选的洗涤剂组分包括防腐剂、抗收缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂/崩解试剂、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC、和/或多元醇例如丙二醇)、织物调理剂包括粘土、填料/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、泡沫促进剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂、和芯吸剂、其单独或组合(使用)。可使用本领域已知用于洗涤剂中的任何成分。技术人员熟练地掌握了对此类成分的选择。
分散剂
本发明的洗涤剂组合物也可包含分散剂。具体地讲，粉末洗涤剂可包含分散剂。合适的水溶性有机材料包含均聚酸或共聚酸或它们的盐，其中聚羧酸包含至少两个彼此相隔不超过两个碳原子的羧基基团。合适的分散剂在例如Powdered Detergents，Surfactantscience系列第71卷(Marcel Dekker，Inc)中有所描述。
染料转移抑制剂
本发明的清洁组合物也可包含一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物的染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、聚胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮和N-乙烯咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯咪唑或它们的混合物。-当存在于受试组合物中时，染料转移抑制剂可以按组合物的重量计约0.0001％至约10％，约0.01％至约5％或甚至约0.1％至约3％的含量存在。
荧光增白剂
洗涤剂组合物可优选还包含可着色正被清洁的制品的附加组分，诸如荧光增白剂或光学增亮剂。其中存在增白剂的含量优选为约0.01％至约0.5％。适用于衣物洗涤剂组合物中的任何荧光增白剂可用于本发明的组合物中。最常用的荧光增白剂是属于以下类别中的那些：二氨基二苯乙烯-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物、和联苯基二苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基二苯乙烯-磺酸衍生物类型的示例包括下述的钠盐：4，4′-双-(2-二乙醇氨基-4-苯氨基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2，2′-二磺酸盐、4，4′-双-(2，4-二苯胺-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2，2′-二磺酸盐、4，4′-双-(2-苯胺-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2，2′-二磺酸盐、4，4′-双-(4-苯基-1，2，3-三唑并-2-基)二苯乙烯-2，2′-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1，2-d][1，2，3]三唑并-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是购自Ciba-Geigy AG(Basel，Switzerland)的Tinopal DMS和Tinopal CBS。Tinopal DMS为4，4′-双-(2-吗啉代-4-苯氨基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2，2′-二磺酸二钠盐。Tinopal CBS为2，2′-双-(苯基-苯乙烯基)二磺酸二钠盐。还优选的荧光增白剂是可商购获得的Parawhite KX，由Paramount Minerals andChemicals(Mumbai，India)提供。Tinopal CBS-X为4.4′-双-(磺基苯乙烯基)-联苯基二钠盐，也称为二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠。其它适用于本发明的荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷基氨基香豆素。
合适的荧光增白剂含量包括从约0.01、从0.05、从约0.1或甚至从约0.2wt％的较低含量至0.5或甚至0.75wt％的较高含量。
去垢性聚合物
洗涤剂组合物也可包含一种或多种去垢性聚合物，其有助于将污垢从织物(诸如棉花和基于聚酯的织物)中移除，具体地讲从基于聚酯的织物移除疏水性污垢。去垢性聚合物可例如为基于非离子或阴离子对苯二甲酸盐的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Marcel Dekker，Inc.的PowderedDetergents，Surfactant science series第71卷中的第7章。另一种类型的去垢性聚合物为两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物，其包含核心结构和附接到该核心结构的多个烷氧基化物基团。该核心结构可包含聚亚烷基亚胺结构或聚链烷醇胺结构，如在WO 2009/087523中所详细描述的(据此以引用方式并入本文)。此外，无规接枝共聚物为合适的去垢性聚合物。合适的接枝共聚物在WO 2007/138054、WO 2006/108856和WO 2006/113314中有更详细的描述(以引用方式并入本文)。其它的去垢性聚合物为取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，诸如改性的纤维素衍生物诸如在EP 1867808或WO 2003/040279中描述的那些(均据此以引用方式并入本文)。适宜的纤维质聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺、以及它们的混合物。适宜的纤维质聚合物包括阴离子改性的纤维素、非离子改性的纤维素、阳离子改性的纤维素、两性离子改性的纤维素、以及它们的混合物。适宜的纤维质聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯型羧甲基纤维素、以及它们的混合物。
抗再沉积剂
本发明的洗涤剂组合物也可包含一种或多种抗再沉积剂，诸如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙烯亚胺。上文所述在“去垢性聚合物”下的基于纤维素的聚合物也可用作抗再沉积剂。
流变改性剂
本发明的洗涤剂组合物也可包含一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，与降粘剂不同。流变改性剂选自：非聚合结晶的、羟基功能性材料、聚合流变改性剂，所述聚合流变改性剂向液体洗涤剂组合物的含水液体基质赋予剪切致稀特性。可通过本领域已知的方法修改和调节洗涤剂的流变特性和粘度，例如如EP 2169040中所示。
其它合适的助剂包括但不限于抗收缩剂、抗皱剂、杀菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填料、泡沫调节剂、水溶助长剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构增弹剂。
洗涤剂产品的配方
洗涤剂组合物可为任何便利的形式，例如，条状、均质片剂、具有两个或更多个层的片剂、常规或致密粉末、颗粒、糊剂、凝胶、或常规，致密或浓缩的液体。
洗涤剂制剂形式：层(相同或不同的相)，小袋，用于机器投配单元的相对形式。
小袋可以被设置为单个或多个隔室的。它可为适于容纳该组合物的任何形式，形状和材料，例如不允许与水接触之前从小袋中释放组合物。小袋由包封内部体积的水溶性膜制成。所述内部体积能够分成小袋的隔室。优选的膜为聚合材料，优选地聚合物形成膜或片材。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、钠糊精、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糖糊精、聚甲基丙烯酸酯、最优选聚乙烯醇共聚物和羟丙基甲基纤维素(HPMC)。膜中的聚合物例如PVA的含量优选为至少约60％。优选的平均分子量通常为约20,000至约150,000。膜也可为共混组合物，所述组合物包含可水解降解的和水溶性聚合物共混物，诸如聚交酯和聚乙烯醇(以贸易参考M8630而闻名，由Chris Craft In.Prod.Of Gary出售，印第安纳，美国)加上增塑剂如甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇，以及它们的混合物。小袋可以包含固体衣物洗涤组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分隔的部分组分。液体组分的隔室在组成上可不同于包含固体的隔室。参见(US 2009/0011970 A1)
洗涤剂成分可通过在水溶性小袋中或不同的片剂层中的隔室彼此物理地分离。因此可避免组分之间的负存储交互作用。每个隔室的不同溶解特征也可导致洗涤溶液中所选组分的延迟溶解。
形式的定义/特征：
液体或凝胶洗涤剂，它不是单位剂量，可以是含水的，通常含有按重量计至少20％和高达95％的水，诸如高达约70％的水，高达约65％的水，高达约55％的水，高达约45％的水，高达约35％的水。其它类型的液体，包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚和多元醇，可包括在含水液体或凝胶中。含水液体或凝胶洗涤剂可包含0-30％的有机溶剂。
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
颗粒状洗涤剂配方
颗粒状洗涤剂可如WO 09/092699、EP 1705241、EP 1382668、WO 07/001262、US6472364、WO 04/074419或WO 09/102854中所述配制。其它有用的洗涤剂配方在WO 09/124162、WO 09/124163、WO 09/117340、WO 09/117341、WO 09/117342、WO 09/072069、WO09/063355、WO 09/132870、WO 09/121757、WO 09/112296、WO 09/112298、WO 09/103822、WO09/087033、WO 09/050026、WO 09/047125、WO 09/047126、WO 09/047127、WO 09/047128、WO09/021784、WO 09/010375、WO 09/000605、WO 09/122125、WO 09/095645、WO 09/040544、WO09/040545、WO 09/024780、WO 09/004295、WO 09/004294、WO 09/121725、WO 09/115391、WO09/115392、WO 09/074398、WO 09/074403、WO 09/068501、WO 09/065770、WO 09/021813、WO09/030632、和WO 09/015951、
WO 2011025615、WO 2011016958、WO 2011005803、WO 2011005623、WO2011005730、WO 2011005844、WO 2011005904、WO 2011005630、WO 2011005830、WO2011005912、WO 2011005905、WO 2011005910、WO 2011005813、WO 2010135238、WO2010120863、WO 2010108002、WO 2010111365、WO 2010108000、WO 2010107635、WO2010090915、WO 2010033976、WO 2010033746、WO 2010033747、WO 2010033897、WO2010033979、WO 2010030540、WO 2010030541、WO 2010030539、WO 2010024467、WO2010024469、WO 2010024470、WO 2010025161、WO 2010014395、WO 2010044905、
WO 2010145887、WO 2010142503、WO 2010122051、WO 2010102861、WO2010099997、WO 2010084039、WO 2010076292、WO 2010069742、WO 2010069718、WO2010069957、WO 2010057784、WO 2010054986、WO 2010018043、WO 2010003783、WO2010003792、
WO2011023716、WO2010142539、WO2010118959、WO2010115813、WO2010105942、WO2010105961、WO2010105962、WO2010094356、WO2010084203、WO2010078979、WO2010072456、WO2010069905、WO2010076165、WO2010072603、WO2010066486、WO2010066631、WO2010066632、WO2010063689、WO2010060821、WO2010049187、WO2010031607、WO2010000636中有所描述。
酶共成粒剂的配方
脱氧核糖核酸酶可被配制成颗粒，例如作为组合了一种或多种酶的共成粒剂。随后每种酶将存在于更多颗粒中，确保洗涤剂中更均匀的酶分布。这还降低了由于不同的颗粒尺寸而导致的不同酶的物理离析。在IP.com的公开IPCOM000200739D中公开了用于洗涤剂行业的制备多酶共成粒剂的方法。
通过使用共成粒剂来配制酶的另一个示例公开于WO 2013/188331，其涉及一种洗涤剂组合物，其包含：(a)多酶共成粒剂；(B)少于10wt的沸石(无水基)；和(c)少于10wt的磷酸盐(无水基)，其中所述酶共成粒剂包含10至98wt％的吸湿分量，并且所述组合物还包含20至80wt％的洗涤剂吸湿分量。WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选织物表面)的方法，该方法包括以下步骤：(i)在含水洗涤液体中使所述表面与受权利要求书保护和本文描述的洗涤剂组合物接触，(ii)漂洗和/或干燥所述表面。
在以下非限制性段落中进一步描述本发明。
段落1：脱氧核糖核酸酶变体，其包含在对应于SEQ ID NO：1的多肽的位点1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182的一个或多个位点的替换，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性并且其中该变体与SEQ ID NO：1中所示多肽具有至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
段落2：根据第1段所述的变体，其中该变体与SEQ ID NO：1中所示的多肽相比具有增加的稳定性，测量值为半衰期改善系数(HIF)。
段落3：根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体具有至少1.05、至少1.10、至少1.15、至少1.20、至少1.50、至少2.00、至少2.50、至少3.00、至少4.00、至少5.00、至少6.00、至少7.00、至少8.00、至少9.00或至少10.00的改善系数。
段落4：根据前面段落的任一个所述的变体，其包含一个或多个替换，所述替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中所述位点对应于SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列中的氨基酸位点(根据SEQID NO：1进行编号)；并且其中该变体具有脱氧核糖核酸酶活性并且其中该变体具有与SEQID NO：1中所示多肽至少至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
段落5：根据前面段落的任一个所述的变体，其包含一个或多个替换，该替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、P6V、S7D、K8V、S9K、S9Q、S9V、A10D、A10M、A10I、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、Q14M、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、V49R、L51T、K52I、K52Q、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、P63A、T65L、T65I、T65V、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、D83C、D83F、L92T、A93G、G99S、S101D、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、T104S、T104P、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、G145V、G145E、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、T157S、Y159H、K160R、W161L、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、S164R、S164H、S164N、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D和Y182Q，其中在一个或多个位点上每个替换提供了一种脱氧核糖核酸酶变体，该变体具有增加的稳定性，测量值为至少1.1的半衰期改善系数(HIF)，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
段落6：根据前面段落的任一个所述的变体，其包含一个或多个替换，该替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、P6V、S7D、K8V、S9K、A10D、Q12S、Q12V、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、Q14M、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19N、T19L、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S30K、S30D、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、V49R、K52I、K52Q、A55S、D56I、D56L、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、P63A、T65L、S68V、S68I、S68W、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、D83C、A93G、S101D、S102M、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S116Q、A125K、S126I、S126E、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、G145V、G145E、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、S156C、T157S、Y159H、W161L、G162Q、G162N、G162D、G162M、S164R、S164H、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S168V、S168E、S168D、K170S、K170L、T171D、T171E、T171N、A172G、L173T、L173A、Q174L、G175D、G175E、G175N、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G和Y182A，其中在一个或多个位点上每个替换提供了一种脱氧核糖核酸酶变体，该变体具有增加的热稳定性，测量值为至少1.15的半衰期改善系数(HIF)，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
段落7：根据前面段落的任一个所述的变体，其包含一个或多个替换，该替换选自：T1I、T1L、T1V、T1F、P6V、K8V、A10D、Q12S、Q12V、S13D、S13Y、S13T、S13Q、A17C、A17V、T19K、K21Q、K21E、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S30K、D32Q、I38V、S39A、S39P、S39Y、Q40V、S42G、S42C、K52I、K52Q、A55S、D56I、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、Y58A、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、P63A、T65L、S68V、S68I、S68W、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、T77N、T77Y、F78L、F78I、T79G、T79R、N80K、A93G、S101D、S102M、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、Q109K、Q109R、A112S、S116D、S116R、S126I、S126E、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、G145V、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、K152H、S156C、G162Q、G162N、G162D、S164R、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S168V、S168E、S168D、K170S、K170L、T171D、T171E、A172G、L173T、L173A、Q174L、G175D、G175E、G175N、L177I、N178D、N178E、N178T、S181R、S181E、Y182M、Y182C和Y182K，其中在一个或多个位点上每个替换提供了一种脱氧核糖核酸酶变体，该变体具有增加的热稳定性，测量值为至少1.2的半衰期改善系数(HIF)，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
段落8：根据前面段落的任一个所述的变体，其包含一个或多个替换，该替换选自：T1I、T1L、T1V、Q12S、Q12V、A17C、T22P、T22A、T22V、T22D、Q40V、K52I、K52Q、A55S、D56I、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S68V、V76G、V76L、V76C、T77N、F78L、A93G、T105V、K107L、Q109K、A112S、S126I、G132R、G145V、A147H、A147R、A147K、A147Q、S156C、G162Q、Q166D、S167M、S168V、K170S、T171D、L173T、L173A、G175D、G175E和L177I，其中在一个或多个位点上每个替换提供了一种脱氧核糖核酸酶变体，该变体具有增加的热稳定性，测量值为至少1.5的半衰期改善系数(HIF)，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示多肽的位点(根据SEQ ID NO：1进行编号)。
段落9：根据前面段落的任一个所述的变体，其包含一个或多个替换，该替换选自：T1I、T1L、Q12S、Q12V、A17C、T22P、Q40V、K52I、S57W、S57Y、S57F、V76G、Q109K、A112S、A147H、A147R、A147K、K170S、T171D和G175D，其中在一个或多个位点上每个替换提供了一种脱氧核糖核酸酶变体，该变体具有增加的热稳定性，测量值为至少2.0的半衰期改善系数(HIF)，其中变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于SEQ ID NO：1中所示多肽的位点(根据SEQID NO：1进行编号)。
段落10：段落1-9的任一个所述的变体，其具有与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但少于100％的序列同一性。
段落11：段落1-10的任一个所述的变体，其中替换的数量是1-20，例如1-10和1-5，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个替换。
段落12：一种多核苷酸，其编码段落1-11的任一个所述的变体。
段落13：一种核酸构建体，其包含段落12的多核苷酸。
段落14：一种表达载体，其包含段落12的多核苷酸。
段落15：一种重组宿主细胞，其包含段落12的多核苷酸。
段落16：一种制备脱氧核糖核酸酶变体的方法，包括：在适于表达所述变体的条件下培养第15段的宿主细胞；和任选的回收所述变体。
段落17：一种组合物，其包含段落1-11中任一个所述的变体。
段落18：段落17的组合物，其还包含至少一种碳水化合物活性酶，如糖酶、果胶酶、甘露聚糖酶、淀粉酶、纤维素酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、蛋白酶诸如金属蛋白酶、脂肪酶、角质酶、氧化酶例如漆酶和/或过氧化物酶。
段落19根据段落18所述的组合物，其包含蛋白酶，其中该蛋白酶包含在下列位点中的一者或多者处的替换：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中所述位点对应于WO 2016/001449的SEQ ID NO：1中所示的迟缓芽孢杆菌(Bacillus Lentus)蛋白酶的位点，并且其中该蛋白酶变体具有与WO2016/001449中的SEQID NO：1和SEQ ID NO：2分别所示的Savinase或BPN’蛋白酶至少80％的序列同一性。
段落20根据段落18或19的任一个所述的组合物，其包含一种蛋白酶，其中该蛋白酶包含下列替换中的一者或多者：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、N85S、N85R、、G96S、G96A、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、N120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D T268A或R269H，其中所述位点对应于WO 2016/001449的SEQ ID NO：1中所示的迟缓芽孢杆菌(Bacillus Lentus)蛋白酶的位点，并且其中该蛋白酶变体具有与WO2016/001449中的SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别所示的Savinase或BPN’蛋白酶至少80％的序列同一性。
段落21根据段落18至20的任一个所述的组合物，其包含一种蛋白酶，其中该蛋白酶选自蛋白酶变体，该蛋白酶变体在对应于WO2004/067737的SEQ ID NO：1的位点171、173、175、179或180的一个或多个位点处包含替换，其中所述蛋白酶变体具有与WO2004/067737的SEQ ID NO：1中所示的多肽至少75％但少于100％的序列同一性。
段落22根据段落18至21的任一个所述的组合物，其包含一种淀粉酶，其中该淀粉酶为下列淀粉酶中的一种或多种：
a)具有WO 95/10603中的SEQ ID NO：2的淀粉酶或其具有与SEQ ID NO：190％的序列同一性的变体。优选的变体在WO94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424和WO 99/019467的SEQ ID NO：4中有所描述，诸如在下列位点中的一者或多者具有替换的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444；
b)具有WO 02/010355中的SEQ ID NO：6的淀粉酶或具有与SEQ ID NO：690％的序列同一性的它们的变体。优选的SEQ ID NO：6的变体是在位点181和182具有缺失以及在位点193具有替换的那些；
c)杂合体α-淀粉酶，其包含WO 2006/066594的SEQ ID NO：6中所示得自解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶的残基1-33，以及WO 2006/066594的SEQ IDNO：4中所示的地衣芽孢杆菌(B.Licheniformis)α-淀粉酶的残基36-483，或其具有90％的序列同一性的变体，其中该杂合体α-淀粉酶的优选变体是在下列位点中的一者或多者处具有替换、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264，包含WO 2006/066594的SEQ ID NO：6中所示得自解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO：4的残基36-483的杂合体α-淀粉酶的优选变体包括具有以下替换的那些：M197T、H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S、或G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S；
d)具有WO 99/019467中所示SEQ ID NO：6的淀粉酶，或具有与SEQ ID NO：690％的序列同一性的它们的变体，SEQ ID NO：6的优选变体包括在下列位点的一者或多者处具有替换、缺失或删除的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269，特别优选的淀粉酶是在位点R181和G182处、或位点H183和G184处具有删除的那些；
e)具有WO 96/023873的SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：7的淀粉酶，或分别与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：7具有90％的序列同一性的它们的变体，其中SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：7的优选变体是在下列位点的一者或多者具有替换、删除或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和/或476，使用WO 96/023873的SEQ ID NO：2进行编号，更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位点处(诸如181和182、182和183、或位点183和184)具有缺失的那些，SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：7的更优选淀粉酶变体是在位点183和184处具有缺失并且在位点140、195、206、243、260、304和/或476的一者或多者处具有替换的那些；
f)具有WO 08/153815的SEQ ID NO：2、WO 01/66712中的SEQ ID NO：10的淀粉酶，或与WO 08/153815的SEQ ID NO：2具有90％的序列同一性或与WO 01/66712中的SEQ IDNO：10具有90％的序列同一性的它们的变体，WO 01/66712中的SEQ ID NO：10的优选变体包括在下列位点的一者或多者处具有替换、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和/或264；
g)具有WO 09/061380的SEQ ID NO：2的淀粉酶，或具有与SEQ ID NO：290％的序列同一性的变体，SEQ ID NO：2的优选变体是具有C末端截短和/或在下列位点的一者或多者处具有替换、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和/或G475；SEQID NO：2的优选变体包括具有下列替换的一者或多者：Q87E，R、Q98R、S125A、N128C、T131T、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E，R、N272E，R、S243Q，A，E，D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E和G475K，和/或在位点R180和/或S181、或T182和/或G183处具有缺失的那些；SEQ ID NO：2的优选淀粉酶变体包括具有替换N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K的那些，其中该变体是C端截短的并且任选还在位点243处包含替换和/或在位点180和/或位点181处包含缺失；或者
h)具有WO 01/66712中SEQ ID NO：12的淀粉酶，或与SEQ ID NO：12具有至少90％的序列同一性的变体，优选的淀粉酶变体是在WO01/66712中SEQ ID NO：12的下列位点的一者或多者处具有替换、缺失或插入的那些：R28、R118、N174、R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314、R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471或N484，优选的淀粉酶包括具有缺失D183和G184并且具有替换R118K、N195F、R320K和/或R458K的变体和在选自：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339的一个或多个位点另外具有替换的变体，最优选的是具有所有这些替换的变体。
段落23：根据段落18至22的任一个所述的组合物，其还包含脂肪酶，其中该脂肪酶选自嗜热真菌属(Thermomyces)的脂肪酶，例如来自在EP 258068和EP 305216中所述的疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)。
段落24：根据权利要求17至23中任一项所述的组合物，其包含：
a)每升洗涤剂至少0.005mg根据段落1至11中任一段落所述的活性脱氧核糖核酸酶变体；和任选地
b)0wt％至60wt％的至少一种表面活性剂，和任选地
c)0wt％至50wt％的至少一种助洗剂。
段落25：根据段落24所述的组合物，其包含5wt％至60wt％的至少一种表面活性剂，所述表面活性剂选自非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂和/或两性表面活性剂。
段落26：根据段落25所述的组合物，其中所述组合物包含阴离子表面活性剂优选是以下任何一个：硫酸盐表面活性剂并具体的是烷基醚硫酸盐，尤其是C-9-15醇醚硫酸盐、C12-15伯醇乙氧基化物、C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐，诸如单十二烷基酯硫酸盐，包括硫酸盐和磺酸盐，具体地讲，直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸钠(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、烯基磺酸盐、链烷烃-2，3-二基双(硫酸盐)、羟基烷基磺酸盐和二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)诸如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲烷基磺酸盐(SAS)、链烷磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺酸化脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)，其包括甲酯磺酸盐(MES)、烷基或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯或单酯、或脂肪酸的盐(皂)，以及它们的组合。
段落27：根据段落24至26的任一段所述的组合物，其中该组合物包括至少一种非离子表面活性剂，其包括醇乙氧基化物(AE或为AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯，诸如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯，烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多苷(APG)、烷氧基化胺，脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)，多羟基烷基脂肪酸酰胺，或葡糖胺的N-酰基或N-烷基衍生物(葡糖酰胺，GA或脂肪酸葡糖酰胺，FAGA)、以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品，以及它们的组合。可商购获得的非离子表面活性剂包括得自BASF的PlurafacTM、lutensolTM和pluronicTM，得自Cognis的DehyponTM系列，和得自Clariant的Cognis和genapolTM系列。
段落28：根据段落24至27的任一段所述的组合物，其中该组合物包含2wt％至50wt％的至少一种助洗剂。
段落29：根据段落28所述的组合物，其中至少一种助洗剂选自：磷酸盐、柠檬酸钠助洗剂、碳酸钠，硅酸钠，硅铝酸钠(沸石)。
段落30：根据段落29所述的组合物，其中至少一种助洗剂选自：沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐诸如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐诸如碳酸钠、可溶性硅酸盐诸如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如得自Hoechst的SKS-6)、以及(羧甲基)菊粉(CMI)以及它们的组合、柠檬酸盐、螯合剂诸如氨基羧酸盐，氨基聚羧酸盐和膦酸盐，以及烷基或烯基琥珀酸。另外的具体示例包括2，2’，2”-次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N，N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)、1-羟乙烷-1，1-二膦酸、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N，N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(磺甲基谷氨酸)(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、丝氨酸-N，N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N，N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N，N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N，N-二乙酸(ANDA)、对氨基苯磺酸-N，N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N，N-二乙酸(TUDA)和N’-(2-羟乙基)乙二胺-N，N，N’-二乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)，以及它们的组合和盐，膦酸盐包括1-羟基乙烷-1，1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA或DTPMP)、次氮基三(亚甲基膦酸)(ATMP或NTMP)、2-磷酸丁烷-1，2，4-三羧酸(PBTC)或己二胺四(亚甲基膦酸)(HDTMP)。
段落31：一种液体衣物洗涤组合物，其包含：
a)每升组合物至少0.005mg的根据段落1至11中任一段落所述的脱氧核糖核酸酶变体，和任选地
b)按重量计0％至30％的至少一种表面活性剂，其中所述至少一种表面活性剂选自LAS、AEOS和/或SLES，和任选地
c)按重量计0％至50％的至少一种助洗剂，所述助洗剂选自柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-N，N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)和/或它们的盐。
段落32：一种液体衣物洗涤组合物，其包含：
a)每升组合物至少0.005mg的根据段落1至11中任一段落所述的脱氧核糖核酸酶变体，和任选地
b)按重量计0％至30％的至少一种表面活性剂，其中所述至少一种表面活性剂为LAS、AEOS和/或SLES，和任选地
c)按重量计0％至50％的至少一种助洗剂，其选自HEDP、DTMPA或DTPMPA。
段落33：根据段落27至32中任一段落所述的组合物，其包含：
a)每克组合物至少0.005mg的根据段落1至11中任一段落所述的脱氧核糖核酸酶变体，任选地
b)10-50wt％的助洗剂以及任选地
c)至少一种漂白剂组分。
段落34：根据段落33所述的组合物，其包含至少一种漂白剂组分，该漂白剂组分选自过氧化氢源；过酸源；以及漂白催化剂或增效剂。
段落35：根据段落34所述的组合物，其包含至少一种漂白剂组分，该漂白剂组分选自下列中的一者或多者：四乙酰乙二胺(TAED)、4-[(3，5，5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二烷酰基氧基)苯-1-磺酸钠(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸(DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(NOBS)、乙酰基柠檬酸三乙酯(ATC)、漂白催化剂，其包括草酸锰、醋酸锰、锰胶原、钴胺催化剂和三氮杂环壬烷锰(MnTACN)催化剂；优选1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1，2，4，7-四甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)，诸如Me3-TACN的锰络合物，诸如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2和[2，2′，2″-次氨基三(乙烷-1，2-二基亚氮烷基-κN-甲基亚乙基)三苯酚-κ3O]锰(III)。
段落36：根据段落17至35中任一段落所述的组合物，其所述组合物是清洁组合物诸如清洁剂组合物、诸如衣物洗涤或盘碟洗涤组合物。
段落37：根据段落17至36中任一段落所述的组合物，其中所述组合物为液体组合物，所述组合物包含按重量计至少20％和至多95％的水，诸如至多70％的水，至多50％的水，至多40％的水，至多30％的水，至多20％的水，至多10％的水，至多5％的水或至多2％的水。
段落38：根据段落17至37中任一段落所述的组合物，其中该组合物是颗粒状的，例如粉末衣物洗涤组合物或盘碟洗涤组合物。
段落39：根据段落1至11中任一段落所述的脱氧核糖核酸酶变体或根据段落17至38中任一段落所述的组合物用于物品的深层清洁的用途。
段落40：用根据段落1至11中任一段落所述的脱氧核糖核酸酶变体或根据段落17至38中任一段落所述的组合物用于以减少和/防止再沉积的用途。
段落41：根据段落1至11中任一段落所述的脱氧核糖核酸酶变体或根据段落17至38中任一段落所述的组合物用于减少和/防止恶臭的用途。
段落42：衣物洗涤物品的方法，其中所述方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于包含根据段落1至11中任一段落所述的脱氧核糖核酸酶变体的洗涤液体中；
b.完成至少一个洗涤循环；以及
c.任选地漂洗该物品，
其中该物品是纺织物。
段落43：根据段落42所述的方法，其中液体溶液的pH在1至11的范围内，诸如在5.5至11的范围内，诸如在7至9的范围内，在7至8的范围内，或在7至8.5的范围内。
段落44：根据段落42或43所述的方法，其中所述洗涤液体的温度在5℃至95℃的范围内，或在10℃至80℃的范围内，在10℃至70℃的范围内，在10℃至60℃的范围内，在10℃至50℃的范围内，在15℃至40℃的范围内，或在20℃至30℃的范围内。在一些方面，洗涤液体温度是30℃。
下列段落进一步描述了本发明。
段落1一种脱氧核糖核酸酶变体，与SEQ ID NO：1中所示多肽相比，其在对应于下列SEQ ID NO：1的位点的一个或多个位点处包含改变：1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、13、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中所述变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％的序列同一性并且所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性。
段落2段落1所述的变体，与SEQ ID NO：1相比，其包含一个或多个改变，其中所述一个或多个改变选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中所述变体具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少60％的序列同一性并且所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性。
段落3段落1-2中任一段落所述的变体，其与亲本相比、或与具有SEQ ID NO：1中所示多肽的脱氧核糖核酸酶相比具有改善的稳定性。
段落4段落1-3中任一段落所述的变体，其中所述变体具有与SEQ ID No：1中所示多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，至少99％的序列同一性。
段落5段落1-4中任一段落所述的变体，其中与SEQ ID No：1相比的改变的总数是1-20个，例如1-10个和1-5个，诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。
段落6一种洗涤剂组合物，其包含根据权利要求1至5中任一项所述的变体。
段落7段落6所述的洗涤剂组合物，还包含一种或多种洗涤剂组分。
段落8根据段落6-7中任一段落所述的洗涤剂组合物，还包含一种或多种附加的酶，该酶选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原酸酶、过氧化物酶、卤代过氧化物酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶，或其任何混合物。
段落9根据段落6-8中任一段落所述的洗涤剂组合物，形式为条状、均质片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个隔室的小袋、常规或致密粉末、颗粒、糊剂、凝胶或常规、致密或浓缩的液体。
段落10根据段落6-9中任一段落所述的洗涤剂组合物在清洁过程，诸如衣物洗涤或硬质表面清洁，诸如盘碟洗涤中的用途。
段落11一种获得脱氧核糖核酸酶变体的方法，其包括在亲本脱氧核糖核酸酶中在对应于下列SEQ ID NO：1的位点的一个或多个位点处导入改变：1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、13、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中所述变体的氨基酸序列具有与SEQ ID No：1中所示多肽至少60％的同一性。
段落12段落11所述的方法，其中所述变体与SEQ ID NO：1中所示的多肽相比包含两个、三个、四个或五个改变。
段落13根据段落11或12中任一段落所述的方法，其中所述变体与SEQ ID NO：1中所示的多肽相比包含一个或多个改变，所述改变选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、TSC、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W。
段落14根据段落11-13中任一段落所述的方法，其中所述脱氧核糖核酸酶变体与SEQ ID No：1中所示的多肽具有至少60％，诸如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性。
测定法和洗涤剂组合物
模型洗涤剂A(液体)的组成
组成：12％LAS、11％AEO Biosoft N25-7(NI)、7％AEOS(SLES)、6％MPG(单丙烯乙二醇)、3％乙醇、3％TEA、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％DTMPA和0.2％PCA(所有百分比均为w/w)
模型洗涤剂T(粉末)的组成
组成：11％LAS、2％AS/AEOS、2％皂、3％AEO、15.15％碳酸钠、3％硅酸钠、18.75％沸石、0.15％螯合剂、2％柠檬酸钠、1.65％AA/MA共聚物、2.5％CMC和0.5％SRP(所有百分比均为w/w)。
模型洗涤剂X(粉末)的组成
组成：16.5％LAS、15％沸石、12％二硅酸钠、20％碳酸钠、1％sokalan、35.5％硫酸钠(所有百分比均为w/w)。
测定法I：脱氧核糖核酸酶活性测试
脱氧核糖核酸酶活性可在脱氧核糖核酸酶测试琼脂上用甲基绿(BD，FranklinLakes，NJ，USA)确定，其根据来自供应商的手册制备。简而言之，将21g琼脂溶于500ml水中，然后在121℃下高压消毒15分钟。高压消毒后的琼脂在水浴中保温至48℃，并将20ml的琼脂倾注到培养皿中使之在室温条件下固化。在固化琼脂板上，加入5ul酶溶液，并且将脱氧核糖核酸酶活性观察为围绕斑点酶溶液的无色区域。
方法
PCR、克隆、连接核苷酸等的一般方法是本领域技术人员所熟知的，并且可在例如“分子克隆：实验室手册(Molecular cloning：A laboratory manual)”，桑布鲁克等人，(1989)，Cold Spring Harbor lab.，Cold Spring Harbor，NY；Ausubel F.M.等人(eds.)；“Current protocols in Molecular Biology”，John Wiley and Sons，(1995)；Harwood，C.R.和Cutting，S.M.(eds.)；“DNA克隆：实用方法(DNA Cloning：A Practical Approach)，卷一和卷二”，D.N.Glover编辑(1985)；“寡核苷酸合成(Oligonucleotide Synthesis)”，M.J.Gait编辑(1984)；“核酸杂交(Nucleic Acid Hybridization)”，B.D.Hames&S.J.Higgins eds(1985)；“分子克隆实践指南(A Practical Guide To MolecularCloning)”，B.Perbal，(1984)中找到。
实施例
实施例1：通过定点诱变构建变体
位点定向变体由食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)脱氧核糖核酸酶(SEQ ID NO：1)构建，其包含根据本发明的特定替换。所述变体通过DNA片段的传统克隆制备(Sambrook等人，Molecular cloning：A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor，1989)，其使用PCR与适当设计的诱变寡核苷酸一起使用，所述诱变寡核苷酸在所得序列中引入所需的突变。
诱变寡核苷酸被设计为与侧接所需突变位点的DNA序列对应，该突变由限定插入/缺失/置换的DNA碱基对分离，并且购自寡核苷酸供应商诸如Life Technologies。为了测试本发明的脱氧核糖核酸酶变体，包含本发明变体的突变DNA通过同源重组整合到感受态枯草芽孢杆菌(B.subtilis)菌株中，使用标准规程发酵(基于酵母提取物的培养基，3-4天，30℃)，并通过活性测定进行筛选。
表达和纯化
将构建的变体接种至补充了6ug/ml氯霉素的LB琼脂上，在37℃生长一天。生长结束后，挑取菌落至96孔微量滴定板的单个孔中，其中包含200ul的TBgly肉汤并补充了6ug/ml氯霉素和微量金属(50mM FeCl3、20mM CaCl2、10mM MnC12、10mM ZnSO4、2mM CuCl2和2mMNiCl2，(F.William Studier，“Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures”，Protein Expression and Purification，41(2005)207-234)。
在每个微量滴定板的四个孔中接种野生型食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)脱氧核糖核酸酶作为参照。将微量滴定板在30℃以220rpm振荡生长三天。生长结束后，在有96％(v/v)模型A的存在下，在48.5℃下胁迫处理20分钟后对上清液筛选残基活性。
模型洗涤剂A(液体)
12％LAS、11％AEO Biosoft N25-7(NI)、5％AEOS(SLES)、6％MPG(单丙烯乙二醇)、3％乙醇、3％TEA、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％DTMPA及0.2％的PCA(所有百分比均为w/w)，加水至100％。
实施例2：测试脱氧核糖核酸酶变体的稳定性
通过将10ul上清液转移到两个96孔标准微量滴定板(每个包含240ul的模型A)中将每个上清液样品分成相同的两份样本。在微量板振荡仪中以7500rpm振荡五分钟后，将一个微量滴定板在室温(21℃＝基准条件)下温育20分钟，将另一个微量滴定板在96孔PCR块中在胁迫温度(48.5℃＝胁迫条件)下也温育20分钟。在使用DNAseAlert substrateTM溶液进行活性测定前，将这两组样品(基准条件和胁迫条件)用稀释缓冲液(50mM Tris，HCl，pH7.5)稀释100倍。
(Integrated DNA Technologies/Belgium，part#11-04-02-04，https：//www。idtdna。com/pages/products/reagents/nuclease-detection-products)。
脱氧核糖核酸酶活性测定II
对于脱氧核糖核酸酶活性测量，将10ul 100倍稀释的基准脱氧核糖核酸酶样品和胁迫脱氧核糖核酸酶样品转移到新的384孔微量滴定板并且加入40ul DNAseAlert测定溶液(50mM TrisHCl，pH.7.5，5mM MnCl2，6nM DNAseAlert substrateTM)。每90秒读取一次荧光(激发波长536nm和发射波长556nm)总共30分钟。根据动力学曲线，通过线性回归确定基准样品(在基准条件下的活性)和对应的胁迫样本(在胁迫条件下的活性)的斜率。计算每个脱氧核糖核酸酶变体和基准脱氧核糖核酸酶(SEQ ID NO：
1)的残余活性(RA)如下：
斜率(胁迫样本)/斜率(基准样品)。
半衰期改善系数
对于脱氧核糖核酸酶变体和脱氧核糖核酸酶基准(SEQ ID NO：1)的半衰期改善系数(HIF，T1/2在若干分钟内的)计算为：20分钟x LN(0.5)/LN(RA)。对于变体的半衰期改善系数(HIF)计算为T1/2变体/T1/2主链。具有改善的变体被鉴定为具有大于1.0的半衰期改善系数HIF(HIF基准(SEQ ID NO：1)＝1.0)的变体。
活性改善系数(AIF)被计算为将变体的活性(在基准条件的斜率)除以基准的活性(SEQ ID NO：1；在基准条件的斜率)。具有改善的AIF>1.0的变体被鉴定为与对应的基准(SEQ ID NO：1)相比具有改善的活性。结果示于下表1中。
表1食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)(SEQ ID NO：1)脱氧核糖核酸酶变体的半衰期 改善系数
洗涤剂实例
实施例1-6：设计用于手洗或顶部加载式洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
实施例7-12：设计用于前加载式自动洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
*脱氧核糖核酸酶显示为每100g洗涤剂的活性酶毫克数。
实施例13-18：重垢型液体衣物洗涤剂组合物
实施例19-23：单位剂量衣物洗涤剂组合物。此类单位剂量配方可包括一个或多个 隔室。
实施例24：多隔室单位剂量组合物
下文中提供了本发明的多隔室的单位剂量衣物洗涤剂配方。在这些实例中，单位剂量具有三个隔室，但类似的组合物能够以两个、四个或五个隔室被制得。用于包封所述隔室的膜是聚乙烯醇。
多隔室配方
实施例25：本发明的织物软化剂组合物
针对组合物实施例1-24的原材料和说明
具有C11-C18平均脂族碳链链长的直链烷基苯磺酸盐，
C12-18二甲基羟乙基氯化胺
AE3S是C12-15烷基乙氧基(3)硫酸盐
AE7是C12-15醇乙氧基化物，具有7的平均乙氧基化度
AE9是C12-16醇乙氧基化物，具有9的平均乙氧基化度
HSAS是如US 6,020,303和US 6,060,443所公开的具有约16-17的碳链长度的中间支化伯烷基硫酸盐
聚丙烯酸酯MW 4500是由BASF提供的
羧甲基纤维素是由CP Kelco(Arnhem，Netherlands)供应的V
CHEC是阳离子改性的羟乙基纤维素聚合物。
膦酸盐螯合剂是，例如，二亚乙基四胺五乙酸(DTPA)羟乙烷二磷酸盐(HEDP)
CellucleanTM、和均是Novozymes(Bagsvaerd，Denmark)的产品。
Purafect是Genencor International，Palo Alto，California，USA的产品
荧光增白剂1是AMS，荧光增白剂2是CBS-X，直接紫9是Violet BN-Z NOBS是壬酰氧苯磺酸钠
TAED是四乙酰基乙二胺
S-ACMC是与C.I.缀合的羧甲基纤维素。活性蓝19产品名称为AZO-CM-纤维素
去垢剂为PF。
丙烯酸/马来酸共聚物的分子量为70,000，丙烯酸根与马来酸根的比率为70∶30
EDDS是乙二胺-N，N′-二琥珀酸的钠盐，(S，S)异构体抑泡剂附聚物是由DowCorning，Midland，Michigan，USA提供的
HSAS是中间支化的烷基硫酸盐
紫CT聚合物调色染料由Milliken，Spartanburg，South Carolina，USA提供
1无规接枝共聚物为聚乙酸乙烯酯接枝的环氧乙烷共聚物，其具有聚环氧乙烷主链和多个聚乙酸乙烯酯侧链。聚环氧乙烷主链的分子量为约6000，并且聚环氧乙烷与聚乙酸乙烯酯的重量比为约40至60，并且每50个环氧乙烷单元具有不超过1个接枝点。
2聚乙烯亚胺(MW＝600)，每个-NH具有20个乙氧基化基团。
3两亲性烷氧基化聚合物是聚乙烯亚胺(分子量＝600)，制备自被衍生为每个-NH包含24个乙氧基化物基团每-NH和每个-NH包含16个丙氧基化物基团的聚合物。
4淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
5在所有这些实施例中脱氧核糖核酸酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
a Proxel GXL 20％1，2-苯并异噻唑-3-酮的水性双丙二醇溶液，由Lonza提供。
b N，N-双(羟乙基)-N，N-二甲基氯化铵脂肪酸酯。该材料的母体脂肪酸的碘值介于18和22之间。得自Evonik的材料包含有游离脂肪酸形式的杂质、N，N-双(羟乙基)-N，N-二甲基氯化铵脂肪酸酯的单酯形式的杂质、和N，N-双(羟乙基)-N-甲胺的脂肪酸酯形式的杂质。
c 由Dow Corning提供，8％的活性
d US 8,765,659中所述，表达为100％包封的香料油
e CDE，由BASF提供的阳离子聚合物增稠剂
f N，N-二甲基辛酰胺和N，N-二甲基癸酰胺，重量比为约55∶45，商品名M-8-10来自Stepan公司。

Claims (18)

1.一种洗涤剂组合物，其包含a)脱氧核糖核酸酶亲本的变体，其中所述变体包含基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO：26)的一者或两者，其中所述变体与SEQ ID NO 1相比包含一个或多个替换，其中所述替换选自：T1I、T1V、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、T19K、T19L、T19S、T19I、T19V、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22I、G24Y、S25P、S27N、S27I、S27M、S27D、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42C、S42L、S42M、S42F、S42W、V49R、L51I、K52I、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78I、F78H、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107D、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147Q、A147W、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159F、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171A、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W，其中所述变体具有与SEQ ID NO：1中所示的多肽至少80％的序列同一性并且所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性；以及
b)一种助剂，优选的量为0.01wt％至99.9wt％。
2.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶亲本的所述变体与所述亲本相比、或与具有SEQ ID NO：1中所示的多肽的脱氧核糖核酸酶相比具有改善的稳定性，测量值为半衰期改善系数，HIF。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的洗涤剂组合物，其中所述变体具有与SEQ ID NO：1中所示的多肽至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，但少于100％的序列同一性。
4.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中与SEQ ID NO：1相比改变的总数量是1-20个，例如1-10个和1-5个，诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。
5.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述助剂选自另外的酶，所述另外的酶选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶，以及它们的混合物。
6.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其包含5wt％至70wt％的表面活性剂，优选包含阴离子和/或非离子表面活性剂。
7.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其为衣物洗涤剂组合物。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的洗涤剂组合物，其为硬质表面清洁剂。
9.根据权利要求8所述的洗涤剂组合物，其为盘碟洗涤组合物。
10.根据权利要求1至5中任一项所述的洗涤剂组合物，其包含(i)2wt％至50wt％的季铵酯织物软化剂化合物，其优选地选自以下化学式的化合物：
{R2 (4-m)-N+-[X-Y-R1]m}A-
其中：
m为1、2或3，条件是每个m的值是相同的；
每个R1独立地是烃基、或支链烃基基团，优选地R1是直链的，更优选地R1为部分不饱和的直链烷基链；
每个R2独立地是C1-C3烷基或羟烷基基团，优选地R2选自甲基、乙基、丙基、羟乙基、2-羟丙基、1-甲基-2-羟乙基、聚(C2-3烷氧基)、聚乙氧基、苄基；
每个X为独立地(CH2)n、CH2-CH(CH3)-或CH-(CH3)-CH2-并且
每个n独立地是1、2、3或4，优选地每个n是2；
每个Y独立地为-O-(O)C-或-C(O)-O-；
A-独立地选自氯化物、硫酸甲酯、和硫酸乙酯，优选地A-选自氯化物和硫酸甲酯；
前提条件是当Y为-O-(O)C-时，每个R1中的碳的总和为13至21，优选为13至19。
11.根据权利要求10所述的洗涤剂组合物，其为洗涤后处理组合物，优选漂洗添加的。
12.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物在清洁过程诸如衣物洗涤或硬质表面清洁诸如盘碟洗涤中的用途。
13.一种包括获得脱氧核糖核酸酶变体的制备洗涤剂组合物的方法，其包括；
a)在对应于以下SEQ ID NO 1的位点的一个或多个位点处将改变导入亲本脱氧核糖核酸酶：1、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、19、21、22、24、25、27、28、29、30、32、38、39、40、42、49、51、52、55、56、57、58、59、61、63、65、68、76、77、78、79、80、82、83、92、93、94、99、101、102、104、105、107、109、112、116、125、126、127、130、132、135、138、139、143、144、145、147、149、152、156、157、159、160、161、162、164、166、167、168、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、181和182，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，
bI回收所述变体；以及将所述脱氧核糖核酸酶变体与洗涤剂组合物助剂混合。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述变体与SEQ ID NO：1中所示的多肽相比包含1-20个，例如1-10个和1-5个，诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。
15.根据权利要求13或14中任一项所述的方法，其中所述改变是替换，并且其中所述替换与SEQ ID NO：1中所示多肽相比选自：T1I、T1L、T1V、T1F、T1Y、T1M、T1E、G4N、T5F、T5C、P6V、P6G、S7D、S7T、K8V、S9K、S9Q、S9V、S9L、S9F、S9P、S9R、A10D、A10M、A10I、A10Q、A10T、A10V、A10L、A10K、Q12S、Q12V、Q12E、S13D、S13Y、S13T、S13Q、S13F、S13R、S13V、S13N、S13H、S13M、S13W、S13K、S13L、S13E、Q14M、Q14R、N16S、A17C、A17V、A17E、A17T、A17S、T19K、T19N、T19L、T19S、T19I、T19V、K21Q、K21E、K21M、T22P、T22A、T22V、T22D、T22R、T22K、T22M、T22E、T22H、T22L、T22W、T22F、T22C、T22S、T22I、G24Y、S25P、S25T、S27N、S27I、S27M、S27D、S27T、S27V、S27F、S27A、S27C、S27L、S27E、G28L、Y29W、S30K、S30D、S30H、S30T、D32Q、I38V、I38M、S39A、S39P、S39Y、S39H、S39E、S39N、S39M、S39D、Q40V、S42G、S42C、S42D、S42L、S42M、S42F、S42N、S42W、V49R、L51I、K52I、K52Q、K52H、A55S、D56I、D56L、D56T、S57W、S57Y、S57F、S57H、S57C、S57P、S57V、S57R、S57T、Y58A、Y58T、S59C、S59T、S59L、S59Q、S59V、S59K、S59R、S59M、S59I、S59H、N61D、P63A、T65L、T65I、T65V、T65R、T65K、S68V、S68I、S68W、S68K、S68Y、S68H、S68C、S68T、S68L、V76G、V76L、V76C、V76K、V76H、V76E、V76A、V76Y、V76N、V76M、V76R、V76I、V76F、T77N、T77Y、T77W、T77R、F78L、F78I、F78H、F78V、F78Y、F78C、T79G、T79R、N80K、N80S、S82L、S82E、S82K、S82R、S82H、D83C、D83F、D83L、L92T、A93G、E94N、G99S、S101D、S101A、S102M、S102L、S102V、S102A、S102K、S102T、S102R、T104S、T104P、T104A、T105V、T105I、K107L、K107C、K107R、K107H、K107S、K107M、K107E、K107A、K107Q、K107D、Q109K、Q109R、Q109S、A112S、S116D、S116R、S116Q、S116H、S116V、S116A、S116E、S116K、A125K、S126I、S126E、S126A、S126C、T127C、T127V、T127S、S130E、G132R、D135R、T138Q、W139R、R143E、R143K、S144Q、S144H、S144A、S144L、S144P、S144E、S144K、G145V、G145E、G145D、G145A、A147H、A147R、A147K、A147Q、A147W、A147N、A147S、G149S、K152H、K152R、S156C、S156G、S156K、S156R、S156T、S156A、T157S、Y159H、Y159F、K160R、K160V、W161L、W161Y、G162Q、G162N、G162D、G162M、G162R、G162A、G162S、G162E、G162L、G162K、G162V、G162H、S164R、S164H、S164N、S164T、Q166D、S167M、S167L、S167F、S167W、S167E、S167A、S167Y、S167H、S167C、S167I、S167Q、S167V、S167T、S168V、S168E、S168D、S168L、K170S、K170L、K170F、K170R、T171D、T171E、T171N、T171A、T171S、T171C、A172G、A172S、L173T、L173A、L173V、Q174L、G175D、G175E、G175N、G175R、G175S、M176H、L177I、N178D、N178E、N178T、N178S、N178A、S179E、S181R、S181E、S181D、S181I、S181F、S181H、S181W、S181L、S181M、S181Y、S181Q、S181V、S181G、S181A、Y182M、Y182C、Y182K、Y182G、Y182A、Y182S、Y182V、Y182D、Y182Q、Y182F、Y182L、Y182N、Y182I、Y182E、Y182T和Y182W。
16.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中所述脱氧核糖核酸酶亲本属于GYS进化枝，并且其中所述亲本脱氧核糖核酸酶包含基序[D/M/L][S/T]GYSR[D/N](SEQ ID NO：25)或ASXNRSKG(SEQ ID NO：26)的一者或两者。
17.根据权利要求13至16中任一项所述的方法，其中所述亲本脱氧核糖核酸酶选自以下多肽：
a)具有与SEQ ID NO：1中所示多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
b)具有与SEQ ID NO：2中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
c)具有与SEQ ID NO：3中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
d)具有与SEQ ID NO：4中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
e)具有与SEQ ID NO：5中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
f)具有与SEQ ID NO：6中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
g)具有与SEQ ID NO：7中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
h)具有与SEQ ID NO：8中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
i)具有与SEQ ID NO：9中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
j)具有与SEQ ID NO：10中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
k)具有与SEQ ID NO：11中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
l)具有与SEQ ID NO：12中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
m)具有与SEQ ID NO：13中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
n)具有与SEQ ID NO：14中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
o)具有与SEQ ID NO：15中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
p)具有与SEQ ID NO：16中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
q)具有与SEQ ID NO：17中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
r)具有与SEQ ID NO：18中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
s)具有与SEQ ID NO：19中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
t)具有与SEQ ID NO：20中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
u)具有与SEQ ID NO：21中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
v)具有与SEQ ID NO：22中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
w)具有与SEQ ID NO：23中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，和
x)具有与SEQ ID NO：24中所示多肽至少80％、至少83％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
18.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物或根据权利要求13至17中任一项所述制备的组合物用于深层清洁物品的用途，其中所述物品为纺织物或硬质表面。
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