CN106691902A

CN106691902A - 包含显齿蛇葡萄和合欢提取物的组合物和使用方法

Info

Publication number: CN106691902A
Application number: CN201510500612.1A
Authority: CN
Inventors: 杜华; 马英鑫; 刘涛; 李岩
Original assignee: Johnson and Johnson Consumer Companies LLC
Current assignee: Johnson & Johnson Consumer Co ltd; Johnson and Johnson Consumer Inc
Priority date: 2015-08-14
Filing date: 2015-08-14
Publication date: 2017-05-24
Anticipated expiration: 2035-08-14
Also published as: MX2018001842A; AU2016307932B2; CN106691902B; KR20180040638A; JP2018525397A; MX370624B; EP3334501B1; US10004677B2; WO2017030898A1; US20170042789A1; US20170042790A1; EP3334501A1; ES2972379T3; HK1255220A1; US20170042958A1; RU2018108841A; MA42607A; US9925136B2; CA2995207A1; RU2731561C2

Abstract

一种组合物，其用于施用于需要处理皮肤屏障恢复、水合和保湿的皮肤，该组合物包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物。还提供了使用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的组合物处理需要进行皮肤屏障处理的皮肤的方法，处理皮肤以减少衰老迹象的方法，以及处理皮肤以减少炎症迹象的方法。

Description

包含显齿蛇葡萄和合欢提取物的组合物和使用方法

技术领域

本发明涉及处理皮肤屏障和改善皮肤水合的组合物，其包含用于皮肤的植物提取物。更具体地，本发明涉及包含用于改善皮肤的状况和外观的显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata)和合欢(Albizia julibrissin)提取物的组合物，所述改善是例如通过改善皮肤屏障保护、改善皮肤的水合和保湿和降低皮肤的炎症，并对皮肤提供抗衰老性质。

发明背景

旨在用于改善皮肤外观(包括改善皮肤水合和保湿)的多种组合物是本领域已知的。然而，大多数这类保湿剂通过在皮肤上形成防止透皮水分缺失的闭塞性膜(如矿物油、凡士林和其他油类)，或者通过在皮肤表面上吸引和保留水分的湿润剂(如甘油、丙二醇、丁二醇等)起作用。需要更全面地保护皮肤屏障的试剂。

显齿蛇葡萄或“藤茶(Moyeam)”是属于葡萄科蛇葡萄属的植物物种。具体名称显齿蛇来自于植物的生长结构和叶。其主要分布于中国中部和南部。还发现其存在于一些东南亚国家。藤茶通常生长于张家界，一座位于中国湖南省的名山。叶和茎被用于制备在中国称作“茅岩莓”的草药茶。由于其高水平的类黄酮(特别是二氢杨梅素)，该茶在注重健康的消费者中非常受欢迎。传统应用包括治疗呼吸疾病、消除炎症、作为抗氧化剂、调节血糖和脂肪以及作为抗癌剂。显齿蛇葡萄被广泛用作药用植物。其干燥的叶和茎(也称为藤茶(Vine Tea)或茅岩莓)已在数百年间被用作保健茶和草药。该植物的化学成分包含类黄酮，如二氢杨梅素和杨梅酮(Du,Q.；Chen,P.；Jerz,G.；Winterhalter,P.Preparative separation of flavonoid glycosides inleaves extract of Ampelopsis grossedentata using high-speed counter-currentchromatography(使用高速逆流色谱在显齿蛇葡萄的叶提取物中制备分离黄酮苷).J.Chromatogr.A 2004,1040,147–149)。其被用作民间医药或日常饮品以治疗肝炎、流感、高血压、高血糖和喉咙痛(Gao,J.H.；Liu,B.G.；Ning,Z.X.；Zhao,R.X.；Zhang,A.Y.；Wu,Q.Characterization and antioxidant activity of flavonoid-rich extracts fromleaves of Ampelopsis grossedentata(来自显齿蛇葡萄叶的富类黄酮提取物的表征和抗氧化剂活性).J.Food Biochem.2009,33,808–820)。现代药理学研究证明其具有诸如抗癌、肝保护、抗氧化、抗炎等活性(Xiao J.Zheng,Hao Xiao,Zhi Zeng,ZiW.Sun,Can Lei,Jing Z.Dong,Ying Wang.Composition and serum antioxidation of themain flavonoids from fermented vine tea(Ampelopsis grossedentata)(发酵的藤茶(显齿蛇葡萄)的主要类黄酮的组成和血清抗氧化性).Journal of functional foods.2014,9,290–294.)。

合欢是一种蝶形花科树木，原产于东南亚和东亚。其还具有多个常用名称，如“波斯合欢树”或“绒花树”。其被广泛种植为公园和花园中的观赏植物。植物的种子被用作家畜和野生动物的食物。发现合欢的提取物具有抗抑郁性质(Kim,JH；Kim,SY；Lee,SY；Jang,CG(2007)."Antidepressant-like effects of Albizzia julibrissinin mice:Involvement of the 5-HT1A receptor system(小鼠中合欢的抗抑郁样效果：涉及5-HT1A受体系统)".Pharmacology,Biochemistry,and Behavior 87(1):41–7)。在传统中药中，合欢被用于养心和安神。参见http://www.acupuncture-and-chinese-medicine.com/albizza.html，访问2015年6月15日。其还用于治疗失眠、跌倒损伤和除痈。著名的中国古书《神农本草经》教导了其针对精神疾病的医学用途。合欢的主要组分包括三萜皂苷、木脂素、酚苷、类黄酮、精胺大环生物碱等。其中，三萜皂苷被证明是该天然药的主要生物活性原理(Kokila K,Priyadharshini SD,Sujatha V.Phytopharmacological properties of Albiziaspecies:a review(合欢的植物药理学性质：综述).Int J Pharm Pharm Sci 2013；5(增刊3):70–3)。现代药理学研究证明其具有镇静、抗抑郁、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、抗生育和抗血小板激活因子受体活性(Hongxiang Sun,Shuwang He,MinghuaShi.Adjuvant-active fraction from Albizia julibrissin saponins improves immuneresponses by inducing cytokine and chemokine at the site of injection(来自合欢皂苷的佐剂活性组分通过在注射位点处诱导细胞因子和趋化因子改进免疫应答).International Immunopharmacology 22(2014)346–355)。

皮肤提供了关键的屏障结构，保护人对抗环境损伤。具有大部分皮肤屏障功能的表皮是高度分层的且具有角质化的最外层。表皮屏障完整性破坏或功能丧失在病理学上涉及多种危害性皮肤病症，包括干性皮肤、皮肤敏化、特应性皮炎、牛皮癣和衰老。为建立强和改善的皮肤屏障，需要提高针对外界刺激防御的阈值。即使对于危害性皮肤病症，皮肤屏障的保留对于恢复和降低干燥、衰老、炎症和其他病理学性质仍是重要的。

干性皮肤是常见的皮肤病症，其在生命的某些时间影响几乎所有人。干性皮肤可导致许多皮肤问题，包括特异性皮炎、湿疹、牛皮癣和瘙痒症。对于弹性和透明的皮肤状态而言，保湿也是一个关键步骤，其使得皮肤看上去健康、年轻和美丽。

炎性皮肤病症(如特异性皮炎、湿疹和敏感型皮肤)也与皮肤的屏障性质紧密相关。表皮完整性是皮肤对抗外部刺激所必需的。

聚丝蛋白是通过其对皮肤屏障结构和功能的贡献参与皮肤保湿和免疫应答的重要蛋白。聚丝蛋白可被降解为形成天然保湿因子(NMF)的主要组分的游离氨基酸，其用作角质层(SC)的主要润湿剂。2-吡咯烷酮-5-羧酸(PCA)和尿刊酸(UCA)是两种重要的NMF组分，其结合水并使正常皮肤的表面柔软和柔性。聚丝蛋白以及NMF有助于角质层(SC)水合和pH。聚丝蛋白不同于功能为提高水吸收的传统保湿成分。聚丝蛋白和NMF的功能是改善表皮的水结合能力和皮肤屏障功能。减少的聚丝蛋白和NMF是导致干性皮肤的主要关键因素。聚丝蛋白和NMF的恢复或改善对于健康和有活力的皮肤而言是重要的。此外，UCA可在SC中具有若干其他功能，包括UV光保护和作为UV生成的羟基自由基的清除剂(Jacob P.Thyssenand Sanja Kezic(2014)“Causes of epidermal filaggrin reduction and their role in thepathogenesis of atopic dermatitis(表皮聚丝蛋白减少的原因及其在特异性皮炎的发病机理中的作用)”.J Allergy Clin Immunol 2014；134:792-9)。

此外，聚丝蛋白对于角质细胞的形成也是重要的。聚丝蛋白作为中间纤维相关蛋白(IFAP)起作用以将角蛋白纤维聚集成大纤维(角质细胞中存在的最大纤维束)。与若干其他表皮分化相关蛋白一起，随后将聚丝蛋白交联成角质化的包膜。聚丝蛋白有助于形成作为皮肤防御线的强结构。研究强烈表明，聚丝蛋白表达降低或完全丧失所致皮肤屏障功能扰动导致过敏原的经皮转移增强、进一步刺激朗格汉斯细胞(其导致Th2免疫应答)。这最终导致皮肤炎症的发生。聚丝蛋白的改善可预防或限制皮肤炎症的衰减(attenuation)。因此，聚丝蛋白处于防线前沿，并保护身体对抗可能触发异常免疫应答的外来环境物质的进入(Osawa R,Akiyama M,Shimizu H(2011)”The filaggrin gene defects and the risk of developing allergicdisorders(聚丝蛋白基因缺陷和发生过敏性疾病的风险).”Allergol Int.2011年3月；60(1):1-9)。

皮肤的功能和外观会随年龄下降。该下降可以是由皮肤屏障功能障碍导致的。兜甲蛋白(LOR)是另一种促进表皮的末端分化和皮肤屏障形成的重要蛋白。人LOR是不溶性蛋白，最初在角质化期间在表皮的颗粒层中表达并包含角质化包膜(CE)的总蛋白质量的80％。LOR的含量随年龄下降(Mark Rinnerthaler,Jutta Duschl,Peter Steinbacher,Manuel Salzmann,Johannes Bischof(2013)”Age-related changes inthe composition of the cornified envelope in human skin(人皮肤中角质化包膜的组成的年龄相关的变化)”.Experimental Dermatology,2013,22,329–335)。因此，促进LOR表达以降低衰老对于皮肤的影响是有利的。

LOR、内披蛋白和聚丝蛋白通过表皮分化期间e-(g-谷氨酰)赖氨酸异二肽键的形成而交联。该功能由转谷氨酰胺酶1(TGM 1)催化。大多数TGM1经由脂肪酰连接锚定于角质形成细胞质膜并且也具有将脂质交联至包膜的作用(Richard LEckert,Michael T Sturniolo,Ann-Marie Broome,Monica Ruse and Ellen A Rorke(2005)”Transglutaminase Function in Epidermis(表皮中的转谷氨酰胺酶功能)”Journal of Investigative Dermatology(2005)124,481–492)。TGM1的突变或含量下降与层状鱼鳞癣和皮肤屏障功能障碍的其他皮肤问题相关。因此，增加TGM 1对于改善皮肤强度和防止SC脱离是有益的。

干性皮肤、衰老、发痒和其他皮肤问题与皮肤的代谢和分化能力下降相关。细胞活力是皮肤生理性质的基本来源。皮肤细胞活力的恢复或改善可提供潜在的皮肤代谢和分化能力，这对于皮肤再生和防御内部和外界刺激而言是重要的。因此，需要发现活性成分以促进聚丝蛋白和LOR以改善皮肤屏障。

申请人惊讶地发现，显齿蛇葡萄的某些提取物在与合欢的某些提取物合并时在提供优异的皮肤屏障保护、降低皮肤中的衰老迹象和减少皮肤炎症方面显示出乎意料的协同作用。

发明内容

因此，在一个方面中，本发明涉及包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物和美容学上可接受的局部运载体的局部组合物，其中，显齿蛇葡萄和合欢的提取物的重量比为1:10至10:1。

在另一个方面中，本发明涉及处理需要改善皮肤屏障功能的皮肤的方法，该方法使用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的局部组合物。

在另一个方面中，本发明涉及处理皮肤炎症的方法，该方法通过将包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的局部组合物施用于需要减少皮肤炎症的皮肤。

在另一个方面中，本发明涉及处理皮肤衰老的方法，该方法通过将包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的局部组合物施用于需要改善衰老迹象的皮肤。

从下述发明详述很容易了解本发明的这些和其他特征和优点。

发明详述

除非另有说明，本文所列举的所有百分比都是基于组合物总重量的重量百分比。

本文中使用的“需要改善皮肤屏障功能的皮肤”表示但不限于以下皮肤：缺少水分、缺少皮脂、开裂、干燥、发痒、鳞状、干皮病、脱水、看上去粗糙、剥落、受刺激或发炎的皮肤；疼痛、发痒、缺少柔韧度、缺少光泽、迟钝或缺少脂质的皮肤，具有改变的游离脂肪酸:神经酰胺:胆固醇比例、具有改变的透皮水分损失、具有改变的水屏障功能、具有改变的皮肤电导、表皮分化、增加的炎症/刺激、角化过度、异常脱皮和细菌增殖、敏感型皮肤、危害性皮肤病症(如湿疹皮肤)的皮肤、具有皮肤病(如特应性皮炎)的皮肤、牛皮癣，或以上两种或多种的组合。

本文中使用的“需要减少皮肤炎症的皮肤”表示表现出发红或红斑、水肿，或对外部因素具有反应性或敏感的皮肤。外部因素包括但不限于：太阳射线(UV、可见光、IR)、微生物、环境污染物、如臭氧、排放污染物、氯和生成氯的化合物、香烟烟雾、低温、热、肥皂和去污剂、化妆品、珠宝。可通过使用本发明的组合物处理或预防的炎性疾病和相关病症包括但不限于：关节炎、支气管炎、接触性皮炎、特应性皮炎、牛皮癣、脂溢性皮炎、漆树和毒葛皮炎、湿疹、过敏性皮炎、多态性日光疹、炎性皮肤病、毛囊炎、斑秃、毒漆皮炎(poison ivy)、昆虫叮咬、暗疮炎症、外界因素(包括但不限于化学品、外伤、污染物(如香烟烟雾)和日光暴露)诱导的刺激、炎症导致的二次病症(包括但不限于干燥病、角化过度、瘙痒症、发炎后色素沉淀、瘢痕等)。优选地，可通过使用本发明的组合物处理或预防的炎性疾病和相关病症是：关节炎、炎性皮肤病、接触性皮炎、过敏性皮炎、特应性皮炎、多态性日光疹、刺激(包括外界因素诱导的水肿)、暗疮炎症、牛皮癣、脂溢性皮炎、湿疹、毒葛皮炎、毒漆皮炎、漆树皮炎、昆虫叮咬、毛囊炎、斑秃和二次病症等。

本文中使用的“需要改善或减少衰老迹象的皮肤”表示但不限于以下皮肤：下垂、松弛、松懈、粗糙、有皱纹、变薄和不平整。改善衰老迹象表示改善皮肤的紧实度、改善皮肤的肌理、改善皮肤中皱纹的外观、改善皮肤色调或处理皮肤中的外来侵害。

本文中使用的“改善皮肤的紧实度”表示增强皮肤的紧实度或弹性、防止皮肤的紧实度或弹性损失，或预防或处理下垂、松弛和松懈的皮肤。可通过使用皮肤弹性测量仪(cutometer)测量皮肤的紧实度或弹性。参见Handbook of Non-InvasiveMethods and the Skin(《皮肤和非侵入性方法的手册》)Serup,G.Jemec和G.Grove编，第66.1章(2006)。皮肤弹性或紧实度的损失可以是多种因素的结果，包括但不限于衰老、环境损伤或将化妆品施用于皮肤的结果。

本文中使用的“改善皮肤的肌理”表示使皮肤的表面平滑以除去皮肤表面上的凸块或破口。

本文中使用的“改善皮肤中皱纹的外观”表示防止、延缓、阻止或反转皮肤中皱纹和细线形成的过程。

本文中使用的“处理皮肤中的外来侵害”表示减少或防止皮肤中外来侵害的损伤。外来侵害的示例包括但不限于：使用清洁剂(如含有表面活性剂的局部清洁剂)、化妆、剃须对皮肤的损伤以及环境损害(如来自UV光(例如来自日光的日光损伤或来自非天然来源(如UV灯和太阳模拟器)的损伤)、臭氧、废气、污染物、氯和含氯化合物和香烟烟雾)外来侵害对于皮肤的作用包括但不限于：对于脂质、碳水化合物、肽、蛋白质、核酸和维生素的修饰以及氧化和/或硝化损伤。外来侵害对于皮肤的作用还包括但不限于：皮肤活力丧失、细胞功能丧失或改变和基因和/或蛋白表达的变化。

本文中使用的“改善皮肤色调”表示使皮肤外观变亮(例如使有色的斑点或伤口变亮、减少皮肤的灰黄色和/或使皮肤的色彩变平)。

本文中使用的“美容/皮肤学上可接受的”表示适合与组织(如皮肤或毛发)接触而没有异常毒性、不相容性、不稳定、刺激性、过敏反应等。

本文中使用的“安全和有效量“指足以诱导所需效应但又足够低以避免严重副作用的量。化合物、提取物或组合物的安全有效量将根据以下因素而变化：最终使用者的年龄、健康和环境接触，治疗的持续时间和性质，采用的具体提取物、成分或组合物，所采用的具体药学上可接受的载体等。

为提供更简明的描述，本文中的一些定量表达前不使用术语“约”。应理解无论是否明确地使用术语“约”，本文中的每个含量均表示实际给定的数值，且其还表示基于本领域普通技术所能合理推断的给定数值的近似值，包括由于实验和/或测量条件产生的这类给定数值的近似值。

为提供更简明的描述，本文中的一些定量表达表述为约含量X至约含量Y的范围。应理解，当表述某一范围时，该范围不限于所述上限和下限，而是还包括约含量X至约含量Y的全部范围，或者其中的任何含量或范围。

如本文所述，申请人发现，包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的组合物提供了意料之外的良好的皮肤屏障功能，并降低、抑制、处理和延缓了皮肤屏障功能损伤的任何迹象。具体而言，申请人发现，显齿蛇葡萄和合欢的提取物诱导皮肤本身生成的天然保湿因子，且这类天然保湿因子的诱导生成对于改善皮肤屏障功能和皮肤水合和保湿具有有益作用。

根据本发明的一个方面，在以1:10至10:1的重量比混合时，包含合欢的花的提取物和的提取物的组合物使人类皮肤的天然保湿因子显著增加。

显齿蛇葡萄提取物：可以使用制备用于本发明所述应用的显齿蛇葡萄提取物的任何合适方式。可使用常规方法获得合适的提取物，包括但不限于通过以下方法从生物质中直接萃取：研磨、浸渍、压制、挤压、打浆、离心，和/或诸如冷渗滤、搅拌/蒸馏、微波辅助的萃取、超声、使用或不适用极性改性剂的超/亚临界CO2压缩气体萃取、加压溶剂萃取、加速溶剂萃取、表面活性剂辅助的加压热水萃取、油萃取、膜萃取、Soxhlet萃取、金手指蒸馏/萃取的工艺，和/或例如综合植物技术有限责任公司(Integrated Botanical Technologies,LLC)的美国专利号7,442,391、7,473,435和7,537,791中公开的工艺(其通过引用纳入本文)等，或使用其他方法(如溶剂萃取等)。具体而言，本发明所述的提取物优选是通过在溶剂(通常是有机溶剂、如醇、丙酮、含有或不含有极性改性剂的液体二氧化碳、己烷或氯仿)中研磨或浸渍植物材料进行的基于溶剂的萃取。所得提取物主要包含非极性化合物。植物生物质优选完全从萃取分离，并在萃取后不使用。

在包括溶剂萃取的方法中可使用多种溶剂中的任一种，包括极性溶剂、非极性溶剂或其中两种或多种的组合。优选地，使用极性溶剂。合适的极性溶剂包括极性无机溶剂(如水等)、极性有机溶剂(如醇和相应的有机酸，例如C₁-C₈醇(包括甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等)和有机酸(包括乙酸、甲酸、丙酸等)，多元醇和二元醇(包括C₁-C₈多元醇/二元醇等))，以及其中两种或多种的组合。合适的非极性溶剂包括非极性有机溶剂，如烷烃(包括C₁-C₈烷烃)、环烷烃(包括C₁-C₈烷烃)、烷基醚(包括C₁-C₈烷基醚)、石油醚、酮(包括C₁-C₈酮)、二氯甲烷、乙酸乙酯、二甲苯、甲苯、氯仿、植物油、矿物油等。在另一个实施方式中，可通过上文所述非极性溶剂进行萃取，或使用或不使用极性改性剂(如C₁-C₈醇、水、C₁-C₈多元醇/二元醇或C₁-C₈有机酸)进行极性超临界流体萃取。

在某些优选的实施方式中，该提取物是极性提取物。极性提取物表示通过对植物或植物部分使用极性溶剂来生产提取物。在某些实施方式中，通过粉碎显齿蛇葡萄的叶并使用极性溶剂萃取来制备提取物，该极性溶剂的20℃下的介电常数值是1至100，优选地20℃下的介电常数是4至60，更优选地20℃下的介电常数是4至50，且甚至更优选地20℃下的介电常数是4至40。优选的极性溶剂的示例包括20℃下的介电常数值为1至100(优选4至60，且更优选5至40)的C₁-C₈醇、C₁-C₈多元醇/二元醇、C₁-C₈有机酸、水以及其中两种或更多种的组合，包括但不限于具有“Dielectric Constants of Some Organic Solvent-Water Mixtures at VariousTemperatures(多种温度下一些有机溶剂-水混合物的介电常数)”，Akerlof,Gosta；JACS,第54卷，第11号(1932年11月))第4125-4139页中公开的所需介电常数值的那些溶剂和溶剂组合，该文献通过引用纳入本文。在某些优选的实施方式中，使用一种或多种C₁-C₈醇、C₁-C₈多元醇、C₁-C₈二元醇以及其中两种或更多种的组合来萃取极性提取物。在某些更优选的实施方式中，使用一种或多种C₁-C₄醇、C₁-C₄多元醇和/或C₁-C₄二元醇来萃取提取物。在某些更优选的实施方式中，在水存在或不存在的情况下使用包含甲醇、乙醇或其组合物的溶剂制备提取物。在某些优选的实施方式中，通过生物炭(也称作活性炭)处理进一步精制提取物。

在某些优选的实施方式中，本发明的提取物是通过粉碎显齿蛇葡萄的叶并使用溶剂萃取来制备的提取物，该溶剂的20℃下的介电常数是约1至约80，优选地20℃下的介电常数是约2至约60，更优选地20℃下的介电常数是约2至约40，且甚至更优选地20℃下的介电常数是约2至35。

在某些实施方式中，该组合物还可包含来自显齿蛇葡萄植物的其他部分的提取物，例如茎、树皮、根、果实、种子或花中的一种或多种。在其他实施方式中，该组合物基本不含显齿蛇葡萄植物的其他非叶部分的提取物。

在其他实施方式中，该组合物可包含来自显齿蛇葡萄的植物的细胞培养物的提取物。

可将任何合适量的显齿蛇葡萄提取物用于本发明局部组合物。在某些优选的实施方式中，该组合物包含大于零至约20％显齿蛇葡萄提取物。在某些其他优选的实施方式中，该组合物包含约0.0001至约20％、约0.001至约10％、约0.01至约5％、约0.1至约5％，或约0.2至约2％显齿蛇葡萄提取物。在某些其他优选的实施方式中，该组合物包含大于零至约1％、约0.0001至约1％、约0.001至约1％，或约0.01至约1％显齿蛇葡萄提取物。在某些其他优选的实施方式中，该组合物包含约1至约5％、优选约2至约5％显齿蛇葡萄提取物。在某些优选的实施方式中，显齿蛇葡萄提取物的含量来自于显齿蛇葡萄的叶。

合欢提取物：可以使用制备用于本发明所述应用的合欢提取物的任何合适方式。可使用常规方法获得合适的提取物，包括但不限于通过以下方法从生物质中直接萃取：研磨、浸渍、压制、挤压、打浆、离心，和/或诸如冷渗滤、搅拌/蒸馏、微波辅助的萃取、超声、使用或不适用极性改性剂的超/亚临界CO2压缩气体萃取、加压溶剂萃取、加速溶剂萃取、表面活性剂辅助的加压热水萃取、油萃取、膜萃取、Soxhlet萃取、金手指蒸馏/萃取的工艺，和/或例如综合植物技术有限责任公司(Integrated Botanical Technologies,LLC)的美国专利号7,442,391、7,473,435和7,537,791中公开的工艺(其通过引用纳入本文)等，或使用其他方法(如溶剂萃取等)。具体而言，本发明所述的提取物优选是通过在溶剂(通常是有机溶剂、如醇、丙酮、含有或不含有极性改性剂的液体二氧化碳、己烷或氯仿)中研磨或浸渍植物材料进行的基于溶剂的萃取。所得提取物主要包含非极性化合物。植物生物质优选完全从萃取分离，并在萃取后不使用。

在包括溶剂萃取的方法中可使用多种溶剂中的任一种，包括极性溶剂、非极性溶剂或其两种或多种的组合。优选地，使用极性溶剂。合适的极性溶剂包括极性无机溶剂(如水等)、极性有机溶剂(如醇和相应的有机酸，例如C₁-C₈醇(包括甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等)和有机酸(包括乙酸、甲酸、丙酸等)，多元醇和二元醇(包括C₁-C₈多元醇/二元醇等))，以及其中两种或多种的组合。合适的非极性溶剂包括非极性有机溶剂，如烷烃(包括C₁-C₈烷烃)、环烷烃(包括C₁-C₈烷烃)、烷基醚(包括C₁-C₈烷基醚)、石油醚、酮(包括C₁-C₈酮)、二氯甲烷、乙酸乙酯、二甲苯、甲苯、氯仿、植物油、矿物油等。在另一个实施方式中，可通过上文所述非极性溶剂进行萃取，或使用或不使用极性改性剂(如C₁-C₈醇、水、C₁-C₈多元醇/二元醇或C₁-C₈有机酸)进行极性超临界流体萃取。

在某些优选的实施方式中，该提取物是极性提取物。极性提取物表示对植物或植物部分使用极性溶剂进行萃取。在某些实施方式中，通过粉碎合欢的花并使用极性溶剂萃取来制备提取物，该极性溶剂的20℃下的介电常数值是1至100，优选地20℃下的介电常数是4至60，更优选地20℃下的介电常数是4至50，且甚至更优选地20℃下的介电常数是4至40。优选的极性溶剂的示例包括20℃下的介电常数值为1至100(优选4至60，且更优选5至40)的C₁-C₈醇、C₁-C₈多元醇/二元醇、C₁-C₈有机酸、水以及其中两种或更多种的组合，包括但不限于具有“Dielectric Constants of Some Organic Solvent-Water Mixtures at VariousTemperatures(多种温度下一些有机溶剂-水混合物的介电常数)”，Akerlof,Gosta；JACS,第54卷，第11号(1932年11月))第4125-4139页中公开的所需介电常数值的那些溶剂和溶剂组合，该文献通过引用纳入本文。在某些优选的实施方式中，使用一种或多种C₁-C₈醇、C₁-C₈多元醇、C₁-C₈二元醇以及其中两种或更多种的组合来萃取极性提取物。在某些更优选的实施方式中，使用一种或多种C₁-C₄醇、C₁-C₄多元醇和/或C₁-C₄二元醇来萃取提取物。在某些更优选的实施方式中，在水存在或不存在的情况下使用包含甲醇、乙醇或其组合物的溶剂制备提取物。在某些优选的实施方式中，通过生物炭(也称作活性炭)处理进一步精制提取物。

在某些优选的实施方式中，本发明的提取物是通过粉碎合欢的花并使用溶剂萃取来制备的提取物，该溶剂的20℃下的介电常数是约1至约80，优选地20℃下的介电常数是约2至约60，更优选地20℃下的介电常数是约2至约40，且甚至更优选地20℃下的介电常数是约2至35。

在某些实施方式中，该组合物还可包含来自合欢树的其他部分的提取物，例如茎、树皮、木质部、根、果实或种子中的一种或多种。在其他实施方式中，该组合物基本不含合欢树的其他非花部分的提取物。

在其他实施方式中，该组合物可包含来自合欢树的细胞培养物的提取物。

可将任何合适量的合欢提取物用于本发明局部组合物。在某些优选的实施方式中，该组合物包含大于零至约20％合欢提取物。在某些其他优选的实施方式中，该组合物包含约0.0001至约20％、约0.001至约10％、约0.01至约5％、约0.1至约5％，或约0.2至约2％合欢提取物。在某些其他优选的实施方式中，该组合物包含大于零至约1％、约0.0001至约1％、约0.001至约1％，或约0.01至约1％合欢提取物。在某些其他优选的实施方式中，该组合物包含约1至约5％、优选约2至约5％合欢提取物。在某些优选的实施方式中，合欢提取物的含量来自于合欢的花。

在将含有本发明所述提取物的局部组合物施用于皮肤时，认为仅一定百分比的本发明所述提取物透过表皮。透过百分比由许多因素确定，例如分子量、溶解性等，其具有非常广泛的变化。本发明还包括一种改善皮肤的屏障功能和改善皮肤的水合和保湿的方法，具体方法为对需要改善皮肤屏障功能和改善皮肤保湿的皮肤施用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的组合物，具体而言是重量比为1:10至10:1的显齿蛇葡萄叶和合欢花的提取物的组合。该方法包括例如对需要改善皮肤屏障功能的皮肤局部施用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的本发明组合物，具体而言是重量比为1:10至10:1的显齿蛇葡萄叶和合欢花的提取物的组合。这类局部施用可以针对身体上需要处理的任何皮肤，例如脸、唇、颈、胸、背、手臂、臀、腋下和/或腿的皮肤。优选地，该提取物是显齿蛇葡萄和合欢的极性提取物。

本发明还包括一种降低皮肤干燥程度的方法，具体方法为对有此需要的皮肤施用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的本发明组合物，具体而言是重量比为1:10至10:1的显齿蛇葡萄叶和合欢花的提取物的组合。该方法包括例如对需要减少皮肤炎症的皮肤局部施用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的本发明组合物，具体而言是重量比为1:10至10:1的显齿蛇葡萄叶和合欢花的提取物的组合。这类局部施用可以针对身体上需要处理的任何皮肤，例如脸、唇、颈、胸、背、臀、手臂、腋下和/或腿的皮肤。优选地，该提取物是显齿蛇葡萄和合欢的极性提取物。

本发明还包括一种减少皮肤炎症的方法，具体方法为对需要减少皮肤炎症的皮肤施用包含炎症减少治疗有效量的显齿蛇葡萄和合欢的提取物的组合物。具体而言，该方法使用重量比为1:10至10:1的显齿蛇葡萄叶和合欢花的提取物的组合。该方法包括例如对需要减少皮肤炎症的皮肤局部施用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的本发明组合物，具体而言是重量比为1:10至10:1的显齿蛇葡萄叶和合欢花的提取物的组合。这类局部施用可以针对身体上需要处理的任何皮肤，例如脸、唇、颈、胸、背、臀、手臂、腋下和/或腿的皮肤。优选地，该提取物是显齿蛇葡萄和合欢的极性提取物。

本发明还包括一种改善皮肤衰老的方法，具体方法为对需要改善皮肤衰老的皮肤施用包含对于减少衰老迹象而言治疗有效量的显齿蛇葡萄和合欢的提取物的组合物。具体而言，该方法使用重量比为1:10至10:1的显齿蛇葡萄叶和合欢花的提取物的组合。该方法包括例如对需要改善皮肤衰老的皮肤局部施用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的本发明组合物，具体而言是重量比为1:10至10:1的显齿蛇葡萄叶和合欢花的提取物的组合。这类局部施用可以针对身体上需要处理的任何皮肤，例如脸、唇、颈、胸、背、臀、手臂、腋下和/或腿的皮肤。优选地，该提取物是显齿蛇葡萄和合欢的极性提取物。

可将任何合适量的显齿蛇葡萄和合欢的提取物用于本发明的组合物。优选地，该组合物包含安全和有效量的显齿蛇葡萄和合欢的提取物。具体而言，优选对待使用的显齿蛇葡萄和合欢的提取物的含量进行选择以实现对给定皮肤状态的所需处理。提取物组合物中存在的显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的含量的重量比(提取物组合物的重量)为约1:10至约10:1，优选约1:7至约7:1，更优选约1:5至约5:1，甚至更优选约1:3至约3:1且甚至更优选约1:1的比例。

任何合适的运载体都可用于该组合物。优选地，该运载体是美容学上可接受的运载体。本领域技术人员应理解，美容学上可接受的运载体包括适用于与身体(特别是皮肤)接触同时不存在过多毒性、不相容性、不稳定性、刺激、过敏性应答等的运载体。运载体的安全和有效的含量是组合物重量的约50％至约99.999％，优选约80％至约99.9％，更优选约99.9％至约95％，最优选约98％至约99.8％。

该运载体可以是多种形式。例如，乳液形式的运载体在本发明中是有用的，包括但不限于水包油、油包水、水包油包水和硅酮包水包油乳液。这些乳液可覆盖大范围的粘度，例如使用Brookfield RVT粘度计测得约100cps至约200,000cps。

合适的美容学上可接受的运载体的示例包括用于以下产品类型的美容学上可接受的材料和溶剂：美容溶液、悬浮液、液剂(lotion)、霜剂、精华液(serum，亦称浓液、浓浆等)、精油产品、凝胶、调色剂、膏条(sticks)、喷雾、油膏、液体洗涤剂和皂条、洗发露、护发素、糊剂、泡沫、摩丝、粉末、剃须膏、拭子、贴片、条带、粉末化贴片、微针贴片、绷带、水凝胶、成膜产品、面膜和皮肤膜、化妆品、液滴等。这些产品类型可含有若干种美容学上可接受的运载体类型，包括但不限于溶液剂、混悬剂、乳液(如微米乳液和纳米乳液)、凝胶剂、固体剂、脂质体、其他包封技术等。

以下是运载体的非限制性示例。其他运载体可由本领域普通技术人员配制。在一个实施方式中，该运载体含有水。在另一个实施方式中，该运载体还可含有一种或多种水性或有机溶剂。有机溶剂的示例包括但不限于：异山梨醇二甲醚；肉豆蔻酸异丙酯；阳离子、阴离子和非离子性质的表面活性剂；植物油；矿物油；蜡；胶；合成和天然的胶凝剂；烷醇；二元醇；和多元醇。二元醇的示例包括但不限于：甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、二甘醇、三甘醇、辛二醇、甘油、丁二醇和己二醇，以及其共聚物或混合物。烷醇的示例包括但不限于：具有约2个碳原子至约12个碳原子(例如约2个碳原子至约4个碳原子)的那些，如异丙醇和乙醇。多元醇的示例包括但不限于：具有约2个碳原子至约15个碳原子(例如约2个碳原子至约10个碳原子)的那些，如丙二醇。有机溶剂可以基于运载体的总质量约1％至约99.99％(例如约20％至约50％)的含量存在于运载体中。水可以基于运载体的总质量约5％至约95％(例如约50％至约90％)的含量存在于运载体中(在使用前)。溶液可含有任何合适量的溶剂，包括约40至约99.99％。某些优选的溶液含有约50至约99.9％，约60至约99％，约70至约99％，约80至约99％，或约90至约99％的溶剂。

液剂可以由这类溶液制备。除溶剂外，液剂通常还含有至少一种润肤剂。液剂可包含约1％至约20％(例如约5％至约10％)的润肤剂和约50％至约90％(例如约60％至约80％)的水。

可由溶液配制的另一种产品类型是霜剂。霜剂通常含有约5％至约50％(例如约10％至约20％)的润肤剂和约45％至约85％(例如约50％至约75％)的水。

可由溶液配制的另一种产品类型是油膏。油膏可含有动物、植物或合成的油或半固体10烃的简单基底。油膏可含有约2％至约10％的润肤剂加约0.1％至约2％的增稠剂。

本发明中有用的组合物还可配置为乳液。如果运载体是乳液，该运载体的约1％至约10％(例如约2％至约5％)含有乳化剂。乳化剂可以是非离子型、阴离子型或阳离子型。

液剂和霜剂可配制为乳液。通常这类液剂含有0.5％至约5％的乳化剂，而这类霜剂通常含有约1％至约20％(例如约5％至约10％)的润肤剂；约20％至约80％(例如约30％至约70％)的水；以及约1％至约10％(例如约2％至约5％)的乳化剂。

水包油类型和油包水类型单一乳液皮肤护理制剂(如霜剂和油膏)是本领域熟知的并可用于本发明。多相乳液组合物(如水包油包水类型或油包水包油类型)也可用于本发明。通常，这类单一或多相乳液含有水、润肤剂和乳化剂作为主要成分。

本发明的组合物还可配制为凝胶(例如使用合适胶凝剂的水性、醇、醇/水或油性凝胶)。用于水性和/或醇性凝胶的合适胶凝剂包括但不限于天然胶、丙烯酸和丙烯酸酯聚合物和共聚物，以及纤维素衍生物(例如羟甲基纤维素和羟丙基纤维素)。用于油(如矿物油)的合适胶凝剂包括但不限于氢化丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。这类凝胶通常含有约0.1％至5％(以重量计)的这类胶凝剂。

本发明的组合物还可配制为固体制剂(例如基于蜡的膏条、皂条组合物、粉末或拭子)。本发明的组合物还可与固体、半固体或可溶性基材(如拭子、膜、垫、手套或条带)组合。

本发明的组合物还可包含多种其他美容活性剂中的任一种。合适的其他活性剂的示例包括：亮肤剂、暗化剂、其他抗衰老剂、弹性蛋白原促进剂、胶原促进剂、抗粉刺剂、泛油控制剂、抗微生物剂(如抗酵母剂、抗真菌剂和抗细菌剂)、抗炎剂、抗寄生物剂、外用镇痛药、防晒剂、光保护剂、抗氧化剂、角质软化剂、去污剂/表面活性剂、保湿剂、营养剂、维生素、能力增强剂、抗汗剂、收敛剂、除臭剂、脱毛剂、毛发生长增强剂、毛发生长延缓剂、紧致剂、水合加强剂、效力加强剂、抗茧剂、皮肤调理剂、抗橘皮组织剂、气味控制剂(如气味掩蔽或pH改变剂)等。

多种合适的其他美容学上可接受的活性剂的示例包括：羟基酸；过氧化苯甲酰；D-泛醇；UV过滤物，例如但不限于阿伏苯宗(Parsol 1789)、双二苏里唑二钠(bisdisulizole disodium)(Neo Heliopan AP)、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯(Uvinul A Plus)、依莰舒(Mexoryl SX)、邻氨基苯甲酸甲酯、4-氨基苯甲酸(PABA)、西诺沙酯、乙基己基三嗪酮(Uvinul T 150)、胡莫柳酯、4-甲基亚苄基樟脑(Parsol5000)、甲氧基肉桂酸辛酯(Octinoxate)、水杨酸辛酯(Octisalate)、二甲氨苯酸辛酯(Escalol 507)、苯基苯并咪唑磺酸(Ensulizole)、多晶硅-15(Parsol SLX)、水杨酸三乙醇胺、双乙基己氧基苯酚甲氧基苯三嗪(Bemotrizinol)(Tinosorb S)、二苯甲酮1–12、二羟苯宗、甲酚曲唑三硅氧烷(Mexoryl XL)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(Iscotrizinol)(Uvasorb HEB)、氰双苯丙烯酸辛酯、羟苯甲酮(Eusolex 4360)、磺异苯酮、比斯科三唑(bisoctrizole)(Tinosorb M)、二氧化钛、氧化锌；类胡萝卜素；游离基清除剂；自旋捕捉剂；类视黄醇和类视黄醇前体，如30视黄醇、视黄酸和棕榈酸视黄酯；神经酰胺；多不饱和脂肪酸；必需脂肪酸；酶；酶抑制剂；矿物质；激素，如雌激素；类固醇，如氢化可的松；2-二甲基氨基乙醇；铜盐，如氯化铜；含有铜的肽，如Cu:Gly-His-Lys、辅酶Q10；氨基酸，如脯氨酸；维生素；乳糖酸；乙酰辅酶A；烟酸；核黄素；硫胺素；核糖；电子输送体，如NADH和FADH2；和其他植物提取物，如燕麦、芦荟、小白菊、大豆、香菇提取物，以及其衍生物和混合物。

在某些优选的实施方式中，该皮肤护理组合物包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物，和至少一种其他皮肤保湿活性剂。其他皮肤保湿剂的示例包括：甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、二甘醇、三甘醇、辛二醇、甘油、丁二醇和己二醇，或其混合物。

在某些优选的实施方式中，本发明的组合物是包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物和至少一种用于改善衰老迹象的其他试剂的皮肤护理组合物。合适的改善衰老迹象的其他试剂的示例包括但不限于：弹性蛋白原促进剂、胶原促进剂、类视黄醇、透明质酸、二甲基氨基乙醇、N,N,N',N'-四(2-羟基丙基)乙二胺、α羟基酸、聚羟基酸，以及其中两种或多种的组合。

本文中使用的“弹性蛋白原促进剂”指具有增强弹性蛋白原生产的生物活性的一类化合物。根据本发明，弹性蛋白原促进剂包括能够增强人体中弹性蛋白原生产的所有天然或合成的化合物。

合适的弹性蛋白原促进剂的示例包括但不限于：黑莓提取物、黄栌提取物、小白菊提取物、珠子草(Phyllanthus niruri)的提取物和具有铜和/或锌组分的双金属复合物。该具有铜和/或锌组分的双金属复合物可以是，例如，柠檬酸铜-锌、草酸铜-锌、酒石酸铜-锌、苹果酸铜-锌、琥珀酸铜-锌、丙二酸铜-锌、马来酸铜-锌、天冬氨酸铜-锌、谷氨酸铜-锌、戊二酸铜-锌、富马酸铜-锌、葡萄糖酸铜-锌、聚丙烯酸铜-锌、己二酸铜-锌、庚二酸铜-锌、辛二酸铜-锌、阿兹酸铜-锌(copper-zincazealate)、癸二酸铜-锌、十二烷酸铜-锌，或其组合。在优选的实施方式中，该弹性蛋白原促进剂选自黑莓提取物、黄栌提取物、小白菊提取物，及其组合。在特别优选的实施方式中，该弹性蛋白原促进剂选自黑莓提取物、小白菊提取物，及其组合。

“黄栌提取物”指“黄栌(Cotinus coggygria)”的叶的提取物，如其水提取物，可获自保加利亚索菲亚的比尔可库伯公司(Bilkokoop)。

“黑莓提取物”指从悬钩子属植物(优选欧洲黑莓(Rubus fruticosus))分离的化合物的掺混物。在一个实施方式中，这些化合物分离自该植物的花。在另一个实施方式中，这些化合物分离自该植物的干燥的花。这类化合物可分离自一种或多种植物部分(例如整个植物、植物的花、种子、根、根茎、茎、果实和/或叶)。在优选的实施方式中，该黑莓提取物是黑莓叶提取物。一种特别合适的黑莓提取物是通过以下方式生产的：使用复合至约5％至约10％的活性的水和乙醇混合物、使用麦芽糊精基质(可购自新泽西州泰特波卢的西来斯公司(Symrise Inc.)并以“SymMatrix”的名称销售)提取欧洲黑莓的叶。

可收获“珠子草”的提取物并用作整个植物，或者可以使用一种或多种植物部分(例如植物的花、种子、根、根茎、茎、果实和/或叶)。可将珠子草植物或其部分磨碎成粉末，例如通过研磨或碾磨。珠子草的合适的研磨形式可购自内华达州卡森城的雨树营养公司(Raintree Nutrition,Inc.)。优选地，使用珠子草的低分子量部分，例如基本不含分子量大于约100,000道尔顿的分子物质的珠子草部分。优选地，这类低分子量部分是可以从珠子草植物中使用水提取的。

本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种弹性蛋白原促进剂，如上文所述的那些。该组合物优选包含(基于活性物)约0.1％至约10％的弹性蛋白原促进剂，更优选约0.5％至约5％的弹性蛋白原促进剂，且最优选约0.5％至约2％的弹性蛋白原促进剂。

本文中使用的“胶原促进剂”指具有增强胶原生产的生物活性的化合物。根据本发明，“非类视黄醇胶原促进剂”包括不是类视黄醇或不来源于类视黄醇、且能够增强人体中胶原生产的所有天然或合成的化合物。

合适的胶原促进剂的示例包括但不限于下列：类视黄醇(包括视黄醇、视黄醛和视黄酸)、小白菊(Tanacetum parthenium)的提取物、积雪草(Centella asiatica)的提取物，和豨莶草(Siegesbeckia orientalis)的提取物；大豆的提取物；胶原促进肽；乌索酸和积雪草皂苷。

积雪草在留尼旺岛还称作Violette marronne，在印度还称作Gotu Kola或印度石莲花(Indian pennywort)，在北美还称作Centella repanda，在马达加斯加还称作Talapetraka，是一种多形态草本植物且属于伞形科(Umbelliferae或Apiaceae)，具体是天胡荽(Hydrocotyle)亚科。其在整个热带野生且适宜海平面以上约600-1200米海拔的潮湿和阴暗的区域。积雪草有三个种类：迪比卡(Typica)、埃塞俄比亚(Abyssinica)和佛罗里达(Floridana)。该草本植物是已知的且使用其愈合、镇静、镇痛、抗抑郁、抗病毒和抗微生物性质。该草本植物的生物活性似乎是由于其中存在三萜烯分子。合适的积雪草提取物可以TECA的形式获自瑞士巴塞尔的拜尔健康护理公司(Bayer Consumer HealthCare)。

“豨莶草的提取物”指植物豨莶草的多种提取物中的任一种，包括获自司达玛公司(Sederma)(新泽西州爱迪生市的克罗达国际公司集团(Croda InternationalGroup))的达路托塞(Darutoside)。

合适的胶原促进肽包括以下马曲金肽(即来源于胞外基质蛋白(胶原、弹性蛋白或蛋白聚糖)降解的肽)，包括以MATRIXYL获自司达玛公司(新泽西州爱迪生市的克罗达国际公司集团)的棕榈酰五肽(特别是Pal-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH)；以PROCYTE获自宾夕法尼亚州蒙特戈梅尔维的光美达公司(Photomedex)的GHK铜肽；以Biopoeptide CL获自司达玛公司(新泽西州爱迪生市的克罗达国际公司集团)的棕榈酰GHK肽；仿生物四肽，例如以Chronoline三肽获自加拿大魁北克省的优尼派克斯公司(Unipex)的那些；以及棕榈酰三肽，其以Syn-Coll获自瑞士巴塞尔的DSM公司。

乌索酸也称作五环三萜酸、Prunol、Malol、Urson、熊果酸和3-β-羟基-乌尔斯-12-烯-28-酸(3-Beta-Hydroxy-Urs-12-En-28-Oic Acid)。其可购自密苏里州圣路易斯的西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)。

积雪草皂苷在化学上也称作[6-[[3,4-二羟基-6-(羟基甲基)-5-(3,4,5-三羟基-6-甲基环氧-2-基)氧基环氧-2-基]氧甲基]-3,4,5-三羟基环氧-2-基]10,11-二羟基-9-(羟基甲基)-1,2,6a,6b,9,12a-六甲基-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-十四氢-1H-二萘并苯-4a-羧酸酯)([6-[[3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-5-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxymethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]10,11-dihydroxy-9-(hydroxymethyl)-1,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydro-1H-picene-4a-carboxylate)，可购自例如拜耳桑特公司(Bayer SantéFamiliale Division)(69，雨果大道(Boulevard Victor Hugo)93400圣旺法国)。

本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种胶原促进剂。该组合物优选包含(基于活性物)约0.1％至约10％的胶原促进剂，更优选约0.5％至约5％的胶原促进剂，且最优选约0.5％至约2％的胶原促进剂。

本发明的组合物还可以包含至少一种亮肤活性剂。合适的亮肤活性剂的示例包括但不限于：酪氨酸酶抑制剂、黑色素降解剂、黑素体转移抑制剂(包括PAR-2拮抗剂)、剥脱剂(exfoliant)、防晒剂、类视黄醇、抗氧化剂、凝血酸、凝血酸鲸蜡酯盐酸盐、皮肤漂白剂、亚油酸、腺苷一磷酸二钠盐、洋甘菊提取物、尿囊素、遮光剂、滑石和二氧化硅、锌盐等，以及Solano等Pigment Cell Res.19(550-571)和Ando等Int J Mol Sci 11(2566-2575)中描述的其他试剂。

合适的酪氨酸酶抑制剂的示例包括但不限于：维生素C及其衍生物、维生素E及其衍生物、曲酸、熊果苷、雷琐酚、对苯二酚、黄酮(如甘草类黄硐)、甘草根提取物、桑树叶提取物、菊叶薯蓣(Dioscorea Coposita)根提取物、虎耳草提取物等、鞣花酸、水杨酸盐及衍生物、葡糖胺及衍生物、富勒烯、扁柏醇、双酸、乙酰葡糖胺、5,5’-二丙基-二苯基-2,2’-二醇(厚朴木脂素(Magnolignan))、4-(4-羟基苯基)-2-丁醇(4-HPB)，其中两种或多种的组合，等。维生素C衍生物的示例包括但不限于：抗坏血酸及盐、抗坏血基-2-葡糖苷、抗坏血酸磷酸钠、抗坏血酸磷酸酶和富维生素C天然提取物。维生素E衍生物的示例包括但不限于：α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚及其混合物、醋酸生育酚、磷酸生育酚和富维生素E衍生物的天然提取物。间苯二酚衍生物的示例包括但不限于：间苯二酚、4-取代的间苯二酚，如4-烷基间苯二酚，如4-丁基间苯二酚(噜忻喏(rucinol))、4-己基间苯二酚(辛诺维亚HR(Synovea HR)，辛德昂公司(Sytheon))、苯基乙基间苯二酚(辛姆白(Symwhite)，德之馨公司(Symrise))、1-(2,4-二羟基苯基)-3-(2,4-二甲氧基-3-甲基苯基)-丙烷(内维托(nivitol)，优尼锦公司(Unigen))等以及富间苯二酚的天然提取物。水杨酸盐的示例包括但不限于：4-甲氧基水杨酸钾、水杨酸、乙酰水杨酸、4-甲氧基水杨酸及其盐。在某些优选的实施方式中，该酪氨酸酶抑制剂包括4-取代的间苯二酚、维生素C衍生物或维生素E衍生物。在更优选的实施方式中，该酪氨酸酶抑制剂包括苯基乙基间苯二酚、4-己基间苯二酚或抗坏血基-2-葡糖苷。

合适的黑色素降解剂的示例包括但不限于：过氧化物和酶，如过氧化物酶和木质酶。在某些优选的实施方式中，该黑色素抑制剂包括过氧化物或木质酶。

合适的黑素体转移抑制剂的示例包括PAR-2拮抗剂(如胰蛋白酶抑制剂或包曼-伯克(Bowman-Birk)抑制剂)、维生素B3和衍生物如烟酰胺、大豆精华、全大豆、大豆提取物。在某些优选的实施方式中，该黑素体转移抑制剂包括大豆提取物或烟酰胺。

剥脱剂的示例包括但不限于：α-羟基酸(如乳酸、乙醇酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸或前述任何物质的任何组合)、β-羟基酸(如水杨酸)、聚羟基酸(如乳糖酸和葡糖酸)以及机械剥脱(如微晶换肤术)。在某些优选的实施方式中，该剥脱剂包括乙醇酸或水杨酸。

防晒剂的示例包括但不限于：阿伏苯宗(Parsol 1789)、双二苏里唑二钠(bisdisulizole disodium)(Neo Heliopan AP)、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯(Uvinul A Plus)、依莰舒(Mexoryl SX)、邻氨基苯甲酸甲酯、4-氨基苯甲酸(PABA)、西诺沙酯、乙基己基三嗪酮(Uvinul T 150)、胡莫柳酯、4-甲基亚苄基樟脑(Parsol5000)、甲氧基肉桂酸辛酯(Octinoxate)、水杨酸辛酯(Octisalate)、二甲氨苯酸辛酯(Escalol 507)、苯基苯并咪唑磺酸(Ensulizole)、多晶硅-15(Parsol SLX)、水杨酸三乙醇胺、双乙基己氧基苯酚甲氧基苯三嗪(Bemotrizinol)(Tinosorb S)、二苯甲酮1–12、二羟苯宗、甲酚曲唑三硅氧烷(Mexoryl XL)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(Iscotrizinol)(Uvasorb HEB)、氰双苯丙烯酸辛酯、磺异苯酮、比斯科三唑(bisoctrizole)(Tinosorb M)、二氧化钛、氧化锌等。

类视黄醇的示例包括但不限于：视黄醇(维生素A醇)、视黄醛(维生素A醛)、乙酸视黄酯、丙酸视黄酯、亚油酸视黄酯、视黄酸、棕榈酸视黄酯、异维甲酸、他扎罗汀、贝沙罗汀、阿达帕林，其中两种或多种的组合，等。在某些优选的实施方式中，该类视黄醇选自视黄醇、视黄醛、乙酸视黄酯、丙酸视黄酯、亚油酸视黄酯，以及其中两种或多种的组合。在某些更优选的实施方式中，该类视黄醇是视黄醇。

抗氧化剂的示例包括但不限于：水溶性抗氧化剂如巯基化合物及其衍生物(如焦亚硫酸钠和N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽)、硫辛酸和二氢硫辛酸、茋类如白藜芦醇和衍生物、乳铁蛋白、铁和铜螯合物以及抗坏血酸和抗坏血酸衍生物(例如抗坏血基-2-葡糖苷、抗坏血酸棕榈酸酯和抗坏血基多肽)。适用于本发明组合物的油溶性抗氧化剂包括但不限于：丁羟甲苯、类视黄醇(如视黄醇和棕榈酸视黄酯)、生育酚(如醋酸生育酚)、生育三烯酚和泛醌。适用于本发明组合物的含有抗氧化剂的天然提取物包括但不限于：含有类黄酮和异类黄酮及其衍生物(如染料木黄酮和黄豆苷原)的提取物、含有白藜芦醇的提取物等。这类天然提取物的示例包括葡萄籽、绿茶、红茶、白茶、松树皮、小白菊、不含小白菊内酯的小白菊、燕麦提取物、黑莓提取物、黄栌提取物、大豆提取物、柚子提取物、麦芽提取物、橘皮苷、葡萄提取物、马齿苋提取物、甘草查耳酮、查耳酮、2,2’-二羟基查耳酮、报春花提取物、蜂胶等。

其他美容活性剂可以任何合适的量存在于组合物中，例如组合物的约0.0001％至约20％(以重量计)，例如约0.001％至约10％，如约0.01％至约5％。在某些优选的实施方式中是0.1％至5％且在其他优选的实施方式中是1％至2％。

本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种抗炎化合物。合适的抗炎剂的示例包括：经取代的间苯二酚、(E)-3-(4-甲苯磺酰基)-2-丙烯腈(如可购自密苏里州圣路易斯的西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)的“Bay 11-7082”)、四氢姜黄素(如可购自新泽西州皮斯卡特维的萨宾萨公司(Sabinsa)的四氢姜黄素CG)、来源于下列的材料和提取物：黄柏(Phellodendron amurense)树皮提取物(PCE)、非变性大豆(Glycine max)、小白菊(Tanacetum parthenium)、姜(Zingiberofficinale)、银杏(Ginkgo biloba)、羟基积雪草苷(积雪草提取物成分)、黄栌(Cotinuscoggygria)、款冬提取物(Petasites hybridus)、枸杞果(Lycium barbarum)、奶蓟草提取物(Silybum marianum)、金银花(Lonicera japonica)、秘鲁凤仙花(Myroxylonpereirae)、鼠尾草(Salvia officinalis)、蔓越莓提取物(Vaccinium oxycoccos)、籽粒苋油(Amaranthus cruentus)、石榴(Punica granatum)、巴拉圭茶(Ilex paraguariensisLeaf Extract)、白百合花提取物(Lilium candidum)、橄榄叶提取物(Olea europaea)、根皮素(苹果提取物)、燕麦粉(Aveena sativa)、麦诺美(Lifenol)(啤酒花：Humuluslupulus)提取物、刺芒柄花(Ononis spinosa)、甘草查耳酮(甘草：Glycyrrhiza inflate提取物成分)、馨敏舒(Symrelief)(没药醇和姜提取物)，其中两种或多种的组合，等。

在一个实施方式中，该抗炎剂是间苯二酚。特别合适的经取代的间苯二酚包括4-己基间苯二酚和4-辛基间苯二酚，特别是4-己基间苯二酚。4-己基间苯二酚可以“SYNOVEA HR”购自新泽西州林肯公园的辛德昂公司(Sytheon)。4-辛基间苯二酚可购自康涅狄格州西汉文的城市化学有限公司(City Chemical LLC)。

“小白菊提取物”指植物“小白菊(Tanacetum parthenium)”的提取物，例如可根据标题为“PARTHENOLIDE FREE BIOACTIVE INGREDIENTS FROMFEVERFEW(TANACETUM PARTHENIUM)AND PROCESSES FOR THEIRPRODUCTION(来自小白菊(TANACETUM PARTHENIUM)的不含小白菊内酯的生物活性成分及其生产方法)”的美国专利申请公开号2007/0196523的详细描述生产。一种特别适用的小白菊提取物可以约20％活性小白菊的形式购自纽约州奥西宁的综合植物技术公司(Integrated Botanical Technologies)。

本发明的组合物中还可存在多种其他材料。在某些优选的实施方式中，该组合物包含一种或多种选自下组的局部成分：表面活性剂、螯合剂、润肤剂、湿润剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂等。

润肤剂指有助于维持皮肤的柔软、光滑和柔韧外观的化合物(例如通过保留在皮肤表面上或角质层中以作为润滑剂)。合适的润肤剂的示例包括Handbook ofCosmetic Science and Technology(《美容科学和技术手册》)(A.Barel、M.Paye和H.Maibach编，由纽约州纽约的马塞尔德克公司(Marcel Dekker,Inc)于2001年出版)的第35章、第399-415页(皮肤感觉剂，G Zocchi著)中发现的那些，且包括但不限于：凡士林、己基癸醇硬脂酸酯和植物、坚果和植物油(如澳洲坚果油、米糠油、葡萄籽油、棕榈油、月见草油、氢化花生油和鳄梨油)。

湿润剂指旨在提高皮肤顶层水含量的化合物(如吸湿化合物)。合适的湿润剂的示例包括Handbook of Cosmetic Science and Technology(《美容科学和技术手册》)(A.Barel、M.Paye和H.Maibach编，由纽约州纽约的马塞尔德克公司(MarcelDekker,Inc)于2001年出版)的第35章、第399-415页(皮肤感觉剂，G Zocchi著)中发现的那些，且包括但不限于：甘油、山梨糖醇或海藻糖(如α,α-海藻糖、β,β-海藻糖、α,β-海藻糖)或其盐或酯(如海藻糖6-磷酸盐/酯)。

表面活性剂指旨在清洁或乳化的表面活性试剂。合适的表面活性剂的示例包括Handbook of Cosmetic Science and Technology(《美容科学和技术手册》)(A.Barel、M.Paye和H.Maibach编，由纽约州纽约的马塞尔德克公司(Marcel Dekker,Inc)于2001年出版)的第37章、第431-450页(表面活性剂的分类，L.Oldenhovede Guertechin著)中发现的那些，且包括但不限于：阴离子表面活性剂(如硫酸盐)、阳离子表面活性剂(如甜菜碱)、两性离子表面活性剂(如椰油酰甘氨酸钠(sodiumcoco glycinate))、非离子表面活性剂(如烷基多聚葡糖苷)。

合适的螯合剂的例子包括能保护和保存本发明组合物的那些螯合剂。优选地，螯合剂是乙二胺四乙酸(“EDTA”)，并且更优选是EDTA四钠，其可以“Versen100XL”为商品名市售购自密歇根州米德兰的陶式化学品公司(Dow ChemicalCorporation)。

合适的防腐剂包括，例如对羟基苯甲酸酯类、季铵类、苯氧乙醇、苯甲酸盐、DMDM乙内酰脲、有机酸，且以组合物的总重量计防腐剂在组合物中的用量为约0％至约1％，或约0.05％至约0.5％。

赋予其他特性(如赋予毛发光泽)的多种调理剂中的任一种适用于本发明。示例包括但不限于大气压沸点低于约220℃的挥发性硅酮调理剂。合适的挥发性硅酮的非排他性例子包括：聚二甲基硅氧烷、聚二甲基环硅氧烷、六甲基二硅氧烷、环二甲基硅酮液，例如以“DC-345”为商品名市售购自密歇根州米德兰的陶式康宁公司(Dow Corning Corporation)的聚二甲基环硅氧烷，和它们的混合物，优选包括环二甲基硅酮液。其他合适的调理剂包括阳离子聚合物，包括多聚季铵、阳离子瓜耳胶等。

多种市售可得的珠光剂或遮光剂中的任一种都适用于该组合物。合适的珠光剂或遮光剂的例子包括但不限于(a)具有约16至约22个碳原子的脂肪酸和(b)乙二醇或丙二醇的单酯或二酯；(a)具有约16至约22个碳原子的脂肪酸和(b)式HO-(JO)a-H的聚亚烷基二醇的单酯或二酯，其中J是具有约2至约3个碳原子的亚烷基基团，a是2或3；含有约16至约22个碳原子的脂肪醇；式KCOOCH₂L的脂肪酯，其中K和L独立地含有约15至约21个碳原子；不溶于香波组合物的无机固体，以及其混合物。

适用于在皮肤上使用的任何芳香组合物可用于本发明的组合物中。

在某些优选的实施方式中，本发明的形式为包含本发明的组合物的基材。可以使用任意合适的基材。已公开了合适的基材和基材材料的示例，例如在US7452547和US2009/0241242中，其通过引用全文纳入本文。

在某些优选的实施方式中，该基材是拭子、手套或面膜。优选地，这类实施方式包括上文引用的参考文献中定义的不溶于水的基材。对于某些实施方式，该不溶于水的基材可具有特定尺寸和性质使得其覆盖人类用户的脸以有助于将不溶于水的基材以护肤膜基材的形式置于用户脸上。例如，该不溶于水的护肤膜基材可具有用于用户的嘴、鼻和/或眼的开口。或者，该不溶于水的基材可不具有这类开口。这类不具有开口的配置可用于下述本发明的实施方式，其中旨在将该不溶于水的基材披在非面部皮肤区域上或旨在将该不溶于水的基材用作拭子。该不溶于水的基材可具有多种形状，如有角的形状(如矩形)或弧形形状(如圆形或椭圆形)。对于某些实施方式，该基材是手套，如美国公开申请号2006/0141014中所述，该文献全文纳入本文。在本发明的一个实施方式中，该产品包括不同形状的多个不溶于水的基材。

可以使用任何合适的将组合物施用于皮肤的方法。例如，可将组合物从包装中直接施用于需要的皮肤，通过手施用于需要的皮肤，或从基材(如拭子或护肤膜)转移，或其中两种或多种的组合。在其他实施方式中，可经由滴管、试管、滚筒、喷雾和贴片施用组合物或者将组合物添加至浴或水以施用于皮肤，等。可以多种方式或形式施用组合物，包括但不限于不需冲洗的霜剂、护肤膜和/或精华液。

在其他实施方式中，本发明的方法包括向皮肤施用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的至少两种不同的组合物或产品。例如，该方法可包括向需要改善皮肤屏障功能和改善皮肤水合和保湿的皮肤施用包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的第一组合物，随后向需要处理的皮肤施用不同于第一组合物的包含显齿蛇葡萄和合欢的提取物的第二组合物。在某些优选的实施方式中，该第一和第二组合物可独立地选自液剂、清洁剂、护肤膜、拭子、霜剂、精华液、凝胶等。在某些优选的实施方式中，该第一和第二组合物中至少一种是清洁剂、液剂、霜剂、精油产品或精华液，而另一种是面膜或拭子。在某些其他优选的实施方式中，该第一和第二组合物中至少一种是清洁剂，而另一种是液剂或霜剂。

虽然前述说明书代表了本发明的示例性实施方式，应理解其中可进行各种添加、修改和替换而不背离本发明的精神和范围。具体而言，本领域技术人员应理解，本发明可体现为其他特定形式、结构、设置、部分，并具有其他要素、材料和组分，而不背离其精神或主要特性。本领域技术人员应理解，本发明可与结构、设置、部分、材料和组分的许多修改联用，且其用于本发明的实践，特别适用于特定环境和操作需要，同时不背离本发明的原理。因此，目前公开的实施方式应在所有方面都被理解为说明性而非限制性的，本发明的范围示于所附权利要求，而不是被前述说明书所限制。应理解，在权利要求书中，术语“包括/包含”不排除操作其他要素或步骤。此外，单数不排除多数。术语“一个”、“一种”、“第一”、“第二”等不排除多个。

实施例

实施例中使用以下测试方法。

试验1：体外聚丝蛋白试验

来自EpiKutis系统的皮肤表皮等效物(陕西生物细胞生物技术有限责任公司(Shaanxi BioCell Biotechnology Co.Ltd.)，中国)用于以下测试。3-D皮肤等效物Epikutis系统由正常、人来源的表皮角质形成细胞组成，该角质形成细胞经培养以形成高度特化的人表皮模型。生物细胞公司的Epikutis皮肤等效物模型(各直径为8mm)用于以下测试。

如下所述制备测试材料(活性物)：

该实施例显示制备具有0.001％提取物的培养基。首先使用DMSO(二甲亚砜)将粗提取物稀释为10％溶液。随后将稀释的提取物添加至细胞培养基。添加额外的DMSO使得细胞培养基中提取物的浓度为0.001％(以重量计)且细胞培养基中DMSO的含量为0.1％。

测试中的空白对照介质是含有0.1％DMSO的培养基。

在接受以后，在维持介质中将表皮等效物在37℃下孵育24小时。孵育后，使用含有植物提取物的培养基或空白对照介质对等效物在37℃下再处理24小时。

各测试组中重复3个表皮等效物。

使用低温恒温器(莱卡公司(Leica)CM3050s)切割皮肤表皮等效物的切片(厚度为5μm)并在-20℃下使用丙酮固定10分钟。通过将组织切片与针对聚丝蛋白的小鼠单克隆抗体(1/100，阿柏堪穆公司(Abcam)，英国剑桥)孵育2小时来检测聚丝蛋白。根据生产商说明书使用LSAB+系统-HRP和DAKO自动染色机(大科公司(Dako))通过链霉亲和素/过氧化物酶方法进行染色和观察。作为非特异性标记的对照，省略一抗。对各试样的多个切片进行加工以确保代表性样品。为评估蛋白定位，使用共聚焦激光扫描显微镜(OLYMPUS-BX53)。使用IPP软件(来自美国MC公司(Media Cybernetics)的Image-Pro Plus)定量分析IOD(积分光密度)的结果作为聚丝蛋白的量。通过以下公式计算超过空白对照的聚丝蛋白增长：

超过空白对照的聚丝蛋白增长＝(特定样品的IOD值–空白对照的IOD值)/空白对照的IOD值×100％

通过使用双尾和等方差假设的斯氏T检验确定空白对照与实验组之间的统计学差异，p值小于0.05被认为具有显著性差异。

试验2：体外L-吡咯烷羧酸钠(PCA)试验

使用试验1中给出的方法制备测试样品。对于进一步的PCA试验，使用如试验1所述含有植物提取物的培养基或空白对照介质处理皮肤表皮等效物。各测试组中重复3个表皮等效物。

通过超声波使用500μl去离子水提取皮肤表皮等效物，持续30分钟。各表皮等效物提取两次。将等效物在14000rpm下离心10分钟。将4μL乙腈和8μL 1M甲酸铵添加至388μL上清液。通过RP-HPLC分析PCA，其中使用RP-18硅胶柱、20mM甲酸铵和1％乙腈的流动相，pH 7.8，流速1mL/分钟。以每个等效物的PCA量的形式测试PCA。通过以下公式计算超过空白对照的PCA增长：

超过空白对照的PCA增长＝(特定样品的每个等效物的PCA量–空白对照的每个等效物的PCA量)/空白对照的每个等效物的PCA量×100％

试验3：体外转谷氨酰胺酶-1(TGM1)蛋白试验

使用试验1中给出的方法制备测试样品。对于进一步的TGM1蛋白试验，使用如试验1所述含有植物提取物的培养介质或空白对照介质处理皮肤表皮等效物。各测试组中重复3个表皮等效物。

使用低温恒温器(莱卡公司(Leica)CM3050s)切割皮肤表皮等效物的切片(厚度为5μm)并在-20℃下使用丙酮固定10分钟。通过将组织切片与针对转谷氨酰胺酶-1的小鼠单克隆抗体(1/800，阿柏堪穆公司，英国剑桥)孵育2小时来检测转谷氨酰胺酶-1。根据生产商说明书使用LSAB+系统-HRP和DAKO自动染色机(大科公司(Dako))通过链霉亲和素/过氧化物酶方法进行染色和观察。作为非特异性标记的对照，省略一抗。对各试样的多个切片进行加工以确保代表性样品。为评估蛋白定位，使用共聚焦激光扫描显微镜(OLYMPUS-BX53)。使用IPP软件定量分析IOD(积分光密度)的结果作为TGM1蛋白的量。通过以下公式计算超过空白对照的TGM1增长：

超过空白对照的TGM1增长＝(特定样品的IOD值–空白对照的IOD值)/空白对照的IOD值×100％

试验4：MTT皮肤等效物生长状态评估–皮肤代谢活性试验

皮肤等效物的生长状态与待建立的皮肤屏障和表皮的潜在质量相关。皮肤等效物的生长状态反映了皮肤代谢活性。使用下文所述MTT试验对其进行评估。

使用试验1中给出的方法制备测试样品。对于进一步的MTT试验，使用如试验1所述含有植物提取物的培养介质或空白对照介质处理皮肤表皮等效物。

各测试组中重复3个表皮等效物。

该MTT试验是比色试验系统，其测量活细胞的线粒体将黄色的溴化甲基噻唑基二苯基-四唑(MTT)还原为不溶性紫色产物。

使用MTT(溴化3-(4,5-二甲基噻唑基-2-基)-2,5,-二苯基四唑盐，西格玛公司(sigma))对皮肤表皮等效物处理3小时，随后使用达氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS)清洗三次。随后将等效物转移至新腔体中并在4℃下与异丙醇孵育过夜。溶解后，穿刺组织以进一步释放裂解物。使用异丙醇作为溶剂对照在570nm的波长下测量裂解物。

通过以下公式计算皮肤代谢活性：

皮肤代谢活性率(％)＝(特定样品浓度的OD值–不含DMSO的对照的OD值)/(空白对照组的OD值-不含DMSO的对照的OD值)×100。(OD：光密度)。

并通过以下公式计算超过空白对照的皮肤代谢活性的增长，

超过空白对照的皮肤代谢活性的增长＝特定样品的皮肤代谢活性率(％)-空白对照的皮肤代谢活性率(％)。

试验5：体外兜甲蛋白(LOR)试验

使用试验1中给出的方法制备测试样品。对于进一步的LOR蛋白试验，使用如试验1所述含有植物提取物的培养介质或空白对照介质处理皮肤表皮等效物。

各测试组中重复3个表皮等效物。

使用低温恒温器(莱卡公司(Leica)CM3050s)切割皮肤表皮等效物的切片(厚度为5μm)并在-20℃下使用丙酮固定10分钟。通过将组织切片与针对兜甲蛋白的小鼠单克隆抗体(1/250，阿柏堪穆公司，英国剑桥)孵育2小时来检测兜甲蛋白。根据生产商说明书使用LSAB+系统-HRP和DAKO自动染色机(大科公司(Dako))通过链霉亲和素/过氧化物酶方法进行染色和观察。作为非特异性标记的对照，省略一抗。对各试样的多个切片进行加工以确保代表性样品。为评估蛋白定位，使用共聚焦激光扫描显微镜(OLYMPUS-BX53)。使用IPP软件定量分析IOD(积分光密度)的结果作为LOR蛋白的量。通过以下公式计算超过空白对照的LOR增长：

超过空白对照的LOR增长＝(特定样品的IOD值–空白对照的IOD值)/空白对照的IOD值×100％

试验6：使用SLS的透过试验进行皮肤屏障质量评估

具有高质量皮肤屏障的皮肤可有效地阻挡外部有害材料透过进入皮肤并导致皮肤代谢活性的降低。较高的皮肤代谢活性表示较低的有害材料透过且进一步显示具有较高皮肤屏障功能的皮肤。

在该研究中，我们使用月桂醇硫酸钠(SLS)作为有害材料。

使用试验1中给出的方法制备测试样品。对于进一步的皮肤代谢活性试验，使用如试验1所述含有植物提取物的培养介质或空白对照介质处理皮肤表皮等效物。

各测试组中重复3个表皮等效物。

转移至6孔板后，使用1％曲通X-100(月桂醇硫酸钠，西格玛公司)局部处理等效物并在37±1℃、5±1％CO₂、95％Hm下培养3小时或6小时。随后使用DPBS对样品清洗15次。

使用MTT(溴化3-(4,5-二甲基噻唑基-2-基)-2,5,-二苯基四唑盐，西格玛公司)对表皮等效物处理3小时。随后使用达氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS)对等效物清洗三次，随后转移至新腔体中并在4℃下与异丙醇孵育过夜。溶解后，穿刺组织以进一步释放裂解物。使用异丙醇作为溶剂对照在570nm的波长下测量裂解物。

皮肤代谢活性率反映了SLS的透过和皮肤屏障功能。通过以下公式计算皮肤代谢活性：

试验7：基因表达研究

使用试验1中给出的方法制备试验样品。

在6孔培养板中接种人角质形成细胞，保持在37℃、5％CO₂下。达到40％融合时，将角质形成细胞与含有植物提取物的培养介质或空白对照介质(含有0.1％DMSO的培养介质)在37℃、5％CO₂下孵育24小时。孵育24小时后，使用试剂(生命科学公司(Life Science))提取总RNA并使用试剂盒Perfect Real Time(宝生物公司(TaKaRa))进行逆转录。该研究中的引物来自宝生物公司(中国大连)，包括LOR(Genbank编号：NM-00427)、TGM1(Genbank编号：NM_00359.2)、FLG(Genbank编号：NM_002016)和胱冬酶-14(Genbank编号：NM_012114.2)。使用SYBR Green实时PCR主混合物(SYBR Green Real time PCR Master Mix)(宝生物公司)进行定量RT-PCR。在CFX96检测系统(伯乐公司(BIO-RAD))中进行反应。通过使用实时定量PCR和2^-ΔΔCt的方法分析基因表达结果。

使用以下公式计算对比空白对照的基因表达的增长：

对比空白对照的基因表达的增长(％)＝(特定样品的基因表达–空白对照的基因表达)/空白对照的基因表达×100％。

试验8：胶原生成试验

胶原是真皮中最丰富的结缔材料，其是一种纤维状蛋白，主要功能为维持皮肤紧实度。随着年龄的增加，皮肤中的胶原含量下降(C.Castelo-Branco,M.Duran,J.González-Merlo(1992)”Skin collagen changes related to age and hormonereplacement therapy(年龄相关的皮肤胶原变化和激素替代治疗)”Maturitas(1992)Oct；15(2):113-9)。UV、烟雾、污染和生活方式诱导的外源衰老也导致胶原降解(LBaumann(2007)”Skin ageing and its treatment(皮肤衰老及其治疗)”Journal ofPathology(2007)；211:241–251)(Jerry L.Mccullough and Kristen M.Kelly(2006)“Prevention and Treatment of Skin Aging(皮肤衰老的预防和治疗)”Ann.N.Y.Acad.Sci.(2006)1067:323–331)。

将人成纤维细胞的T-75cm²烧瓶在PBS中清洗两次，置于冰上并添加2ml的冷RIPA裂解缓冲液(碧云天公司(Beyotime)，中国)。通过刮擦收集细胞并将上清液以12000转/分钟离心20分钟。在6孔培养板中接种人成纤维细胞，保持在37℃、5％CO₂下。达到约50％融合时，将人成纤维细胞与含有植物提取物或空白对照介质(含有0.1％DMSO的培养介质)在37℃、5％CO₂下孵育24小时。24小时孵育后，提取总胶原。根据生产商的实验方案使用二辛可宁酸蛋白试验(伯乐实验室公司(Bio-Rad Laboratories)，加利福尼亚州赫尔克里斯)测定蛋白浓度。

对于免疫印迹分析，使用10％Tris-HCl凝胶对40μg蛋白进行SDS-PAGE。将蛋白转移至硝酸纤维膜上并使用5％奶粉封闭，随后使用一抗探测4℃孵育过夜。用于该研究的一抗是单克隆抗胶原I(1:500，阿柏堪穆公司，英国剑桥)和单克隆抗弹性蛋白(1:200，阿柏堪穆公司，英国剑桥)。使用合适的一抗对膜进行探测，随后与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育2小时(1:1000，碧云天公司，中国)。根据DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(碧云天公司，中国)的说明书来检测蛋白水平。通过使用IPP软件进行蛋白条带的数字分析，以IOD(积分光密度)的形式对蛋白定量。数据表示为经β-肌动蛋白标准化的蛋白相对密度。并通过以下公式计算对比空白对照的胶原改善：

对比空白对照的胶原改善＝(特定样品的IOD值–空白对照的IOD值)/空白对照的IOD值×100％。

试验9：细胞因子的ELISA试验

将角质形成细胞以2×10⁴/cm²的浓度接种在6孔板中。当接种效率达到约45％/孔时，将角质形成细胞与含有植物提取物的培养介质或空白对照介质(含有0.1％DMSO的培养介质)在37℃、5％CO₂下孵育24小时。孵育24小时后，收集上清液用作T₀时间点。同时，将细胞暴露于300mJ/cm²的UVB辐射。刮取对照细胞但不暴露于UV。24小时后，收集上清液用作T₂₄时间点。使用ELISA试验(英杰公司，IL1α：目录号KAC1191，TNFα试剂盒：目录号KHC3011，IL8试剂盒：目录号KHC0081，IL6试剂盒：目录号KHC0061)来测定细胞因子水平。

使用以下公式计算对比UVB暴露所损伤的空白对照等效物的UVB诱导的细胞因子抑制，％。

对比UVB暴露所损伤的空白对照等效物的UVB诱导的细胞因子抑制，％＝(空白对照的T24–特定样品的T24)/(空白对照的T24–空白对照的T0)×100％。

以下实施例显示了显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的制备和功效。

实施例1：从叶中制备显齿蛇葡萄提取物(E1)

在中国收集显齿蛇葡萄植物。物种鉴定基于总形态特性(Flora of ChinaEditorial Committee(中国植物编辑委员会)，Flora Reipublicae Popularis Sinicae(《中国植物志》)，北京:Science Press,1998,48:53)。除去植物的土和碎片并将其分为地上部分和根。使用5000mL的95％乙醇/水在搅拌机中匀化约1000g的叶；将悬浮液以匀速运动保持24小时。随后过滤所得悬浮液并使用不超过40℃的旋转蒸发仪在低压下干燥。过滤后，如上文所述对剩余的原材料再次进行提取。将来自两次提取的合并的干物质命名为粗提取物，约270g，产率为27.0％(E1)。

可使用90:10至0:100的A(水+0.1％甲酸):B(乙腈)的梯度洗脱在292nm处获得显齿蛇葡萄提取物的特征性HPLC指纹图谱。脱氢杨梅黄酮通过HPLC-MS鉴定并通过HPLC-DAD定量。提取物中脱氢杨梅黄酮的含量为约85.0％。

实施例2：从花中制备合欢提取物(E2)

在中国收集合欢植物。物种鉴定基于总形态特性(Flora of China EditorialCommittee(中国植物编辑委员会)，Flora Reipublicae Popularis Sinicae(《中国植物志》)，北京:Science Press,1998,39:65)。除去植物的土和碎片并将其分为地上部分和根。使用12000mL的95％乙醇/水在搅拌机中匀化约2,000g的花；将悬浮液以匀速运动保持24小时。随后过滤所得悬浮液并使用不超过40℃的旋转蒸发仪在低压下干燥。过滤后，如上文所述对剩余的原材料再次进行提取。将来自两次提取的合并的干物质命名为粗提取物，约144g，产率为7.2％(E2)。

可使用90:10至0:100的A(水+0.1％甲酸):B(乙腈)的梯度洗脱在348nm处获得合欢提取物的特征性HPLC指纹图谱。栎素通过HPLC-MS鉴定并通过HPLC-DAD定量。合欢中栎素的含量为约7.74％。

实施例3：聚丝蛋白增长的测定

使用上述试验1的方法测试提取物E1、E2和这两种物质1:1的组合(0.001％E1+0.001％E2)的聚丝蛋白水平。使用DMSO(二甲亚砜)将粗提取物稀释为10％溶液。随后将稀释的提取物添加至细胞培养基。添加额外的DMSO使得细胞培养基中提取物的浓度为0.001％(以重量计)且细胞培养介质中DMSO的含量为0.1％。空白对照是含有0.1％DMSO溶剂(以重量计)的细胞培养介质。

结果列于下表1。

表1：表皮等效物模型中聚丝蛋白增长的结果

*＝p<0.05对比空白对照(斯氏T检验，双尾和等方差假设)。

基于这些结果，可得出结论：施用显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合对于促进皮肤的聚丝蛋白具有协同作用。因此，显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合预期具有以下效果：改善皮肤水合并强化皮肤屏障结构并因此改善皮肤对于导致皮肤炎症(其涉及危害性皮肤问题)的外部抗原透过的防御并保护皮肤免受内部水分损失。

实施例4：L-吡咯烷羧酸钠(PCA)增长的测定

使用上述试验2的方法测试提取物E1、E2和这两种物质以1:1、3:1、7:1、1:7重量比的组合的L-吡咯烷羧酸钠(PCA)水平。各样品测试三次。

结果列于下表2。

表2：L-吡咯烷羧酸钠(PCA)和表皮等效物模型中超过空白对照的PCA增长(％)的结果

*＝p<0.05对比空白对照(斯氏T检验，双尾和等方差假设)。

基于实施例3和4所示的结果，可得出结论：局部施用显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合对于促进皮肤的聚丝蛋白和皮肤的天然保湿因子(NMF)的生成具有协同作用，从而改善皮肤屏障完整性并改善皮肤的水结合能力，因此减少聚丝蛋白减少所诱导的炎症并改善皮肤水合并缓解皮肤干燥。

基于这些结果，可得出结论：施用显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合可提高PCA。且施用显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合对于促进皮肤的PCA生成具有协同作用，组合比例为12.5％至87.5％(1:7至7:1)考虑经表皮透过时，显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合的总浓度在低至0.0005％(W/W)至最高30％(W/W)的范围中可以非常有效。

实施例5：皮肤等效物生长状态评估–皮肤代谢活性试验

通过上述试验4中的MTT测试测定E1、E2以及E1和E2的组合的皮肤代谢活性潜力。

结果列于下表3。

表3：表皮等效物模型中皮肤代谢活性的增长

*＝p<0.05对比空白对照(斯氏T检验，双尾和等方差假设)。

基于这些结果，可得出结论：向合欢提取物添加显齿蛇葡萄提取物显著改善了皮肤代谢活性，其具有产生明显较高的皮肤屏障质量的潜力。

实施例6：转谷氨酰胺酶-1(TGM1)增长的测定

使用上述试验3中的方法测定提取物E1、E2以及两种提取物的组合的转谷氨酰胺酶-1(TGM1)水平。

结果列于下表4。

表4：表皮等效物模型中超过空白对照的转谷氨酰胺酶-1(TGM1)增长的结果

*＝p<0.05对比空白对照(斯氏T检验，双尾和等方差假设)。

基于这些结果，可得出结论：施用显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合对于促进皮肤的转谷氨酰胺酶-1蛋白具有协同作用。因此，显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合预期具有以下协同效果：改善皮肤水合并强化皮肤屏障结构并因此改善皮肤对于导致皮肤炎症(其涉及危害性皮肤问题)的外部抗原透过的防御并保护皮肤免受内部水分损失。

实施例7：兜甲蛋白(LOR)增长的测定

使用上述试验5中的方法测定提取物E1、E2以及两种提取物的组合的兜甲蛋白(LOR)水平。结果列于下表5。

表5：表皮等效物模型中超过空白对照的兜甲蛋白(LOR)增长的结果

*＝p<0.05对比空白对照(斯氏T检验，双尾和等方差假设)。

基于这些结果，可得出结论：施用显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合对于促进皮肤的兜甲蛋白具有协同作用。因此，显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合预期对于改善衰老皮肤的LOR蛋白具有协同作用。其还预期改善皮肤水合并强化皮肤屏障结构并因此改善皮肤对于导致皮肤炎症(其涉及危害性皮肤问题)的外部抗原透过的防御并保护皮肤免受内部水分损失。

实施例8：对于基因表达的影响

使用上述试验7中所述试验测试提取物E1、E2和两种提取物的组合对于基因表达的影响。测试的基因是兜甲蛋白(LOR)、转谷氨酰胺酶-1(TGM1)、聚丝蛋白(FLG)和胱冬酶14(CASP14)。

结果列于下表6。

表6：对于基因表达的影响

*＝p<0.05对比空白对照(斯氏T检验，双尾和等方差假设)。

基于这些结果，可得出结论：施用显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合可显著提高FLG、Caspase-14和TGM1的基因表达。因此，显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合预期具有以下协同效果：改善皮肤水合并强化皮肤屏障结构并因此改善皮肤对于导致皮肤炎症(其涉及危害性皮肤问题)的外部抗原透过的防御并保护皮肤免受内部水分损失。

基于这些结果，可得出结论：施用显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合可提高LOR的基因表达。因此，显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合预期改善衰老皮肤的LOR蛋白。其还预期改善皮肤完整性并强化皮肤屏障结构并因此改善皮肤对于导致皮肤炎症(其涉及危害性皮肤问题)的外部抗原透过的防御并保护皮肤免受内部水分损失。

实施例9：在表皮等效物模型中通过SLS的透过试验测定皮肤屏障功能

通过上述试验6中所示SLS的透过试验来进行E1、E2以及E1和E2的组合的皮肤屏障功能评估。测试了皮肤代谢活性。结果列于下表7。

表7：在表皮等效物模型中使用SLS透过试验进行皮肤屏障功能评估的结果

*＝p<0.05对比空白对照等效物(同时被1％SLS损伤)(斯氏T检验，双尾和等方差假设)。

基于这些结果，可得出结论：使用显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合可建立稳健的皮肤屏障，其可有效地阻断有害材料透过进入皮肤以降低皮肤代谢活性。因此，显齿蛇葡萄提取物和合欢提取物的组合预期具有以下效果：提高皮肤完整性并强化皮肤屏障结构并改善皮肤水合并强化皮肤屏障结构并因此改善皮肤对于导致皮肤炎症(其涉及危害性皮肤问题)的外部抗原透过的防御并保护皮肤免受内部水分损失。

从上述实施例6、7、8和9中可以看到，显齿蛇葡萄和合欢的提取物的组合预期提高皮肤的水合水平、改善角质层的结构、强化皮肤屏障结构并减少外部抗原透过进入皮肤从而防止皮肤细胞损伤，并还保护皮肤免受内部水分损失。因此，显齿蛇葡萄和合欢的提取物的组合能够改善对于内在和外在刺激的防御，并从而预防皮肤过敏和炎症以及其他氧化相关的危害性皮肤问题。

实施例10：胶原生成的测定

使用上述试验8中的方法测定提取物E1、E2以及两种提取物的组合对于胶原生成的影响。

结果列于下表8。

表8：人成纤维细胞模型中胶原生成的测定

*＝p<0.05对比空白对照(斯氏T检验，双尾和等方差假设)。

从上述实施例10中可以看到，显齿蛇葡萄和合欢提取物的组合可显著改善胶原的生成，因此对保护皮肤免于衰老具有协同作用。

实施例11：UVB诱导的细胞因子的抑制的抗炎试验

使用上述试验9中的方法测定提取物E1、E2以及两种提取物的组合对于UVB诱导的细胞因子的抑制的抗炎作用的影响。结果列于下表9。

表9：角质形成细胞模型中UVB诱导的细胞因子的抑制的抗炎试验

*＝p<0.05对比空白对照(UVB暴露)(斯氏T检验，双尾和等方差假设)。

从上述实施例11中可以看到，显齿蛇葡萄和合欢提取物的组合可显著改善UVB暴露诱导的细胞因子的抑制，因此对抗炎具有协同作用。

实施例12：

使用表10所示梯度制备本发明的皮肤护理组合物。

表10

如下文所述制备表10中显示的组合物：向加工容器中添加水。开始混合并添加羟乙基纤维素并混合直至溶解。施用热量并持续混合直至温度达到85℃。随后添加甘油并在85℃下持续混合。添加GENAMIN BTLF和Tego AmidS 18，也添加Brij 721和Lanette C18 98-100MY、Savonol 82和道康宁AP 8087。将组合物在85℃下再混合10-15分钟。随后将组合物从热源处移开并持续混合并冷却。在40℃时，向混合物中添加显齿蛇葡萄叶的提取物和合欢花的提取物以及苯甲醇、道康宁345流体和道康宁CB 9111和适量的水并持续混合并冷却至30-35℃。随后将组合物填充至包装。

实施例13：

使用表11所示梯度制备本发明所述皮肤护理组合物。

表11

如下文所述制备表10中显示的组合物。向加工容器中添加水并将温度设置在85℃。开始混合并添加甘油并混合直至溶解。添加Uceomul GMS-165和凡士林以及Miglyol 812、道康宁9041硅酮和棕榈酸异丙酯。将组合物在85℃下再混合10-15分钟。随后将组合物从热源处移开并冷却。在40℃时，添加苯甲醇和显齿蛇葡萄叶的提取物以及合欢花的提取物，加入适量的水并持续混合并冷却至30-35℃。随后将组合物填充至包装。

实施例14

使用表12所示梯度制备本发明所述皮肤护理组合物。

表12

如下文所述制备表12中显示的组合物。称量显齿蛇葡萄叶的提取物和合欢花的提取物并在室温下溶解在HYDROLITE 5中作为预混物1。随后添加甘油和去离子水以形成75℃的相A。混合Montanov L和FINSOLV TN以形成75℃的相B。在持续混合下向相A中非常缓慢地添加相B。持续混合15分钟直至形成均匀的乳液。以高速在持续混合下向该乳液中添加ARISTOFLEX以获得厚、光滑和均匀的制剂。将混合物冷却至32℃并在32℃下添加预混物1以形成均匀的混合物。

实施例15

使用表13所示梯度制备本发明所述皮肤护理组合物。

表13

如下文所述制备表13中显示的组合物。通过向干净的玻璃烧杯中添加FINSOLV TN来制备油相。开始搅动并将容器加热至55-60℃。当油相达到55℃或更高时，添加Brij 72和Brij 721。当油相达到55-60℃时，将其维持于该温度下并混合15分钟(或直至均匀)。随后将温度维持于55-60℃并搅拌。通过向干净的玻璃烧杯中添加水和Pemulen TR-1来制备水相。开始搅动并将容器加热至55-60℃。添加EDTA二钠。在55-60℃下，将各成分搅拌15分钟或直至均匀。随后将温度维持于55-60℃并搅拌。在增加的搅拌下向水相中添加油相，随后高速混合10-20分钟。在50℃或更低时，添加道康宁9041硅酮。在40℃或更低时，添加Phenonip XB。随后将各相混合10分钟或直至均匀。添加氢氧化钠(目标pH为6.0)。随后将组合物混合10分钟或直至均匀。称量显齿蛇葡萄叶的提取物和合欢花的提取物并溶解在甘油中并添加至混合物。混合直至均匀。随后添加适量水并将组合物混合10分钟。

虽然以参考特定实施方式描述了本发明，但显然可进行许多变化、修改和变更而不背离本文所公开的发明理念。因此，只要落在所附权利要求书的精神和宽范围之内，本发明就包含所有这些替代方式、改良方式和变化方式。

Claims

1.一种组合物，其包含显齿蛇葡萄提取物、合欢提取物和美容学上可接受的局部运载体。

2.如权利要求1所述的组合物，所述提取物是使用极性溶剂制备的极性提取物，所述极性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙二醇、水及其混合物。

3.如权利要求1所述的组合物，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:10至10:1。

4.如权利要求2所述的组合物，其中，显齿蛇葡萄的所述极性提取物是叶提取物。

5.如权利要求2所述的组合物，其中，合欢的所述极性提取物是花提取物。

6.如权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含选自下组的材料：表面活性剂、螯合剂、润肤剂、湿润剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂，以及其中两种或多种的组合。

7.如权利要求1所述的组合物，所述组合物是以下形式的皮肤护理组合物：液剂、霜剂、精华液、凝胶、膏条、喷雾、油膏、液体洗涤剂、皂条、洗发露、护发素、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃须膏、水凝胶、成膜产品、拭子浸液、面膜浸液，以及其中两种或多种的组合。

8.如权利要求2所述的组合物，其中，显齿蛇葡萄极性提取物是用乙醇萃取制备的。

9.如权利要求2所述的组合物，其中，合欢极性提取物是用乙醇萃取制备的。

10.如权利要求2所述的组合物，所述组合物包含约0.01％至约2％的显齿蛇葡萄极性提取物。

11.如权利要求2所述的组合物，所述组合物包含约0.01％至约2％的合欢极性提取物。

12.如权利要求3所述的组合物，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:7至7:1。

13.如权利要求12所述的组合物，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:5至5:1。

14.如权利要求13所述的组合物，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:1。

15.如权利要求1所述的组合物，所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的组合的总含量为所述组合物的约0.0005重量％至约30重量％。

16.如权利要求1所述的组合物，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

17.如权利要求16所述的组合物，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％。

18.如权利要求1所述的组合物，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

19.如权利要求1所述的组合物，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％。

20.一种改善皮肤屏障功能的方法，所述方法包括对所述皮肤施用包含显齿蛇葡萄提取物、合欢提取物和局部运载体的组合物。

21.如权利要求20所述的方法，所述提取物是使用极性溶剂制备的极性提取物，所述极性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙二醇、水及其混合物。

22.如权利要求20所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:10至10:1。

23.如权利要求21所述的方法，其中，显齿蛇葡萄极性提取物是叶提取物。

24.如权利要求21所述的方法，其中，合欢极性提取物是花提取物。

25.如权利要求20所述的方法，所述组合物还包含选自下组的材料：表面活性剂、螯合剂、润肤剂、湿润剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂，以及其中两种或多种的组合。

26.如权利要求20所述的方法，所述组合物是以下形式的皮肤护理组合物：液剂、霜剂、精华液、凝胶、膏条、喷雾、油膏、液体洗涤剂、皂条、洗发露、护发素、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃须膏、水凝胶、成膜产品、拭子浸液、面膜浸液，以及其中两种或多种的组合。

27.如权利要求21所述的方法，其中，显齿蛇葡萄极性提取物是用乙醇萃取制备的。

28.如权利要求21所述的方法，其中，合欢极性提取物是用乙醇萃取制备的。

29.如权利要求21所述的方法，所述组合物包含约0.01％至约2％的显齿蛇葡萄极性提取物。

30.如权利要求21所述的方法，所述组合物包含约0.01％至约2％的合欢极性提取物。

31.如权利要求22所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:7至7:1。

32.如权利要求31所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:5至5:1。

33.如权利要求32所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:1。

34.如权利要求20所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的组合的总含量为所述组合物的约0.0005重量％至约30重量％。

35.如权利要求20所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

36.如权利要求35所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％。

37.如权利要求20所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

38.如权利要求20所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％。

39.一种使皮肤保湿的方法，所述方法包括对所述皮肤施用包含显齿蛇葡萄极性提取物、合欢极性提取物和局部运载体的组合物。

40.如权利要求39所述的方法，所述提取物是使用极性溶剂制备的极性提取物，所述极性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙二醇、水及其混合物。

41.如权利要求39所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:10至10:1。

42.如权利要求40所述的组合物，所述显齿蛇葡萄极性提取物是叶提取物。

43.如权利要求40所述的方法，所述合欢极性提取物是花提取物。

44.如权利要求39所述的方法，所述组合物还包含选自下组的材料：表面活性剂、螯合剂、润肤剂、湿润剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂，以及其中两种或多种的组合。

45.如权利要求39所述的方法，所述组合物是以下形式的皮肤护理组合物：液剂、霜剂、精华液、凝胶、膏条、喷雾、油膏、液体洗涤剂、皂条、洗发露、护发素、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃须膏、水凝胶、成膜产品、拭子浸液、面膜浸液，以及其中两种或多种的组合。

46.如权利要求40所述的方法，所述显齿蛇葡萄极性提取物是用乙醇萃取制备的。

47.如权利要求40所述的方法，所述合欢极性提取物是用乙醇萃取制备的。

48.如权利要求40所述的方法，所述组合物包含约0.01％至约2％的所述显齿蛇葡萄极性提取物。

49.如权利要求40所述的方法，所述组合物包含约0.01％至约2％的所述合欢极性提取物。

50.如权利要求41所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:7至7:1。

51.如权利要求50所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:5至5:1。

52.如权利要求51所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:1。

53.如权利要求39所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的组合的总含量为所述组合物的约0.0005重量％至约30重量％。

54.如权利要求39所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

55.如权利要求54所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％。

56.如权利要求39所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

57.如权利要求39所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％。

58.一种减少皮肤炎症的方法，所述皮肤正需要减少炎症，所述方法包括对皮肤施用包含显齿蛇葡萄提取物、合欢提取物和局部运载体的局部组合物。

59.如权利要求58所述的方法，所述提取物是使用极性溶剂制备的极性提取物，所述极性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙二醇、水及其混合物。

60.如权利要求58所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:10至10:1。

61.如权利要求59所述的组合物，其中，显齿蛇葡萄极性提取物是叶提取物。

62.如权利要求59所述的方法，其中，合欢极性提取物是花提取物。

63.如权利要求58所述的方法，所述组合物还包含选自下组的材料：表面活性剂、螯合剂、润肤剂、湿润剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂，以及其中两种或多种的组合。

64.如权利要求58所述的方法，所述组合物是以下形式的皮肤护理组合物：液剂、霜剂、精华液、凝胶、膏条、喷雾、油膏、液体洗涤剂、皂条、洗发露、护发素、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃须膏、水凝胶、成膜产品、拭子浸液、面膜浸液，以及其中两种或多种的组合。

65.如权利要求59所述的方法，其中，显齿蛇葡萄极性提取物是用乙醇萃取制备的。

66.如权利要求59所述的方法，其中，合欢极性提取物是用乙醇萃取制备的。

67.如权利要求59所述的方法，所述组合物包含约0.01％至约2％的显齿蛇葡萄极性提取物。

68.如权利要求59所述的方法，所述组合物包含约0.01％至约2％的所述合欢极性提取物。

69.如权利要求60所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:7至7:1。

70.如权利要求69所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:5至5:1。

71.如权利要求70所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:1。

72.如权利要求58所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的组合的总含量为所述组合物的约0.0005重量％至约30重量％。

73.如权利要求58所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

74.如权利要求73所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％。

75.如权利要求58所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

76.如权利要求58所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％。

77.一种减少皮肤衰老迹象的方法，所述方法包括向显示衰老迹象的皮肤施用有效量的包含显齿蛇葡萄提取物、合欢提取物和局部运载体的局部组合物。

78.如权利要求77所述的方法，所述改善衰老迹象选自改善所述皮肤的紧实度、改善所述皮肤的肌理、改善所述皮肤中皱纹的外观、处理所述皮肤中的外来侵害，以及其中两种或多种的组合。

79.如权利要求77所述的方法，所述提取物是使用极性溶剂制备的极性提取物，所述极性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙二醇、水及其混合物。

80.如权利要求77所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:10至10:1。

81.如权利要求79所述的组合物，其中，显齿蛇葡萄极性提取物是叶提取物。

82.如权利要求79所述的方法，其中，合欢极性提取物是花提取物。

83.如权利要求77所述的方法，所述组合物还包含选自下组的材料：表面活性剂、螯合剂、润肤剂、湿润剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂，以及其中两种或多种的组合。

84.如权利要求77所述的方法，所述组合物是以下形式的皮肤护理组合物：液剂、霜剂、精华液、凝胶、膏条、喷雾、油膏、液体洗涤剂、皂条、洗发露、护发素、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃须膏、水凝胶、成膜产品、拭子浸液、面膜浸液，以及其中两种或多种的组合。

85.如权利要求79所述的方法，其中，显齿蛇葡萄极性提取物是用乙醇萃取制备的。

86.如权利要求79所述的方法，其中，合欢极性提取物是用乙醇萃取制备的。

87.如权利要求79所述的方法，所述组合物包含约0.01％至约2％的显齿蛇葡萄极性提取物。

88.如权利要求79所述的方法，所述组合物包含约0.01％至约2％的合欢极性提取物。

89.如权利要求79所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:7至7:1。

90.如权利要求89所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:5至5:1。

91.如权利要求90所述的方法，所述组合物中所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的重量比为1:1。

92.如权利要求77所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物和所述合欢提取物的组合的总含量为所述组合物的约0.0005重量％至约30重量％。

93.如权利要求77所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

94.如权利要求93所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.01重量％至约5重量％。

95.如权利要求77所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.001重量％至约10重量％。

96.如权利要求77所述的方法，所述显齿蛇葡萄提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％，且所述合欢提取物的含量为所述组合物的约0.1重量％至约5重量％。