CN104714026B - 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用 - Google Patents

一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104714026B
CN104714026B CN201510002936.2A CN201510002936A CN104714026B CN 104714026 B CN104714026 B CN 104714026B CN 201510002936 A CN201510002936 A CN 201510002936A CN 104714026 B CN104714026 B CN 104714026B
Authority
CN
China
Prior art keywords
alpha
fetoprotein
separation
detection
magnetic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510002936.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104714026A (zh
Inventor
李伯安
罗海峰
林长青
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Hot King Biotechnology Ltd By Share Ltd
Original Assignee
Beijing Hot King Biotechnology Ltd By Share Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Hot King Biotechnology Ltd By Share Ltd filed Critical Beijing Hot King Biotechnology Ltd By Share Ltd
Priority to CN201510002936.2A priority Critical patent/CN104714026B/zh
Publication of CN104714026A publication Critical patent/CN104714026A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104714026B publication Critical patent/CN104714026B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4715—Pregnancy proteins, e.g. placenta proteins, alpha-feto-protein, pregnancy specific beta glycoprotein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/065—Preparation using different phases to separate parts of sample

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物，包括分离试剂和检测试剂，以及甲胎蛋白异质体的分离检测系统和应用，同时还涉及了一种甲胎蛋白异质体的分离检测试剂盒，通过本发明提供的一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用，可以提示早期原发性肝癌，具有极高的灵敏度，方法快速简便而且自动化。

Description

一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用
技术领域
本发明涉及一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统、方法及应用，同时还涉及了一种甲胎蛋白异质体的分离检测试剂盒，属于医疗器械及体外诊断领域。
背景技术
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界范围内第四位常见的恶性肿瘤，每年大约有250000名患者死于肝细胞癌，肝细胞癌的发病机制至今仍未清楚，其在临床上恶性度较高，死亡率在消化道恶性肿瘤中排第三位，所以早期发现、早期治疗是提高患者生存率的关键，而大多数患者就诊时已届中晚期，失去了最佳治疗时机，危险因素包括由乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒导致的慢性肝炎和肝硬化。要得到有效治疗，筛查和普查的临床效率依赖于早期诊断。HCC是肿瘤病因学中的重要类型，肝硬化、病毒性肝炎、化学致癌物及环境因素等所造成的慢性肝脏损害都可诱发HCC。HCC恶性度高，容易复发及转移，预后差，而且早期诊断较困难，易于延误最佳治疗期。
甲胎蛋白(alphafetoprotein，AFP)是一种糖蛋白，检测血液中的AFP含量是目前诊断肝癌最常见的手段。AFP在哺乳动物胚胎期由肝脏实质细胞和卵黄囊细胞合成，来源于内胚层的胃肠道粘膜细胞也可少量合成。正常情况下，AFP主要存在于胎儿循环中，随着胎儿发育成熟，AFP合成逐渐减少。出生时脐血中AFP浓度可达10～100mg/L，出生后一年降至正常成人水平。如果新生儿AFP明显升高提示新生儿肝炎、先天性胆道闭锁或有能分泌AFP的胚胎性恶性肿瘤。AFP作为早期肝癌诊断指标的缺点是在肝病和肝硬化疾病中也有相当的比例存在阳性结果，AFP轻度增高(20～200ng/ml)见于相当数量的慢性肝病患者，在肝硬化患者中11.7-44％AFP阳性。因此在分辨良性肝病和恶性肝肿瘤时，AFP作为早期肝癌筛查指标的价值大为降低。
AFP异质体许多糖链的结构尚未完全明了。目前认为，通常所说的AFP异质体实际是指与LCA结合的A FP-L3，1999年第四届全国肝癌学术会议将其列为原发性肝癌临床诊断标准的肝癌标记物之一。2011年中国肝癌诊疗规范将AFP-L3列为肝癌诊断特异性指标；多年来，AFP-L3被公认为是比单纯的AFP甲胎蛋白更为特异的原发性肝癌指标。
AFP-L3是唯一由患者肝脏中癌细胞生成的蛋白。在加拿大和美国的一项多中心、前瞻性、双盲、长期临床试验中，对该检测方法进行了研究。结果显示AFP-L3％升高(15％以上)的患者，在接下来的21个月中，发生肝细胞癌的危险增加7倍之多。根据已有的肝细胞癌肿瘤学实践指南，这些患者肝细胞癌发生率极端增高。
AFP异质体检测的临床意义：
1)鉴别肝癌与良性肝病。原发性肝癌患者AFP常升高，但许多良性肝脏疾病也可有AFP升高，单凭AFP结果有时很难区分良、恶性病变。此时AFP异质体检测就具有良好的临床意义，尤其对于AFP在30～400ng/ml之间者具有较好的价值。Yozhiaki对361例肝硬化进行了前瞻性研究，在53例AFP在30ug/L以上的患者中，2年以后21例发展为肝癌，确诊肝癌时39％的患者AFP在400ug/L以下。对比研究开始时肝细胞肝癌(HCC)组与非HCC组AFP测定值，未发现差异有显著性，研究发现病变时AFP异质体的类型有所不同，对HCC诊断LCA阳性率87.12％假阳性率21.5％，ConA阳性率89.17％，假阳性率17.15％。目前的研究结果把AFP-L3含量大于15％作为肝癌的阳性指标。
2)肝癌术后的监测。肝癌切除术后，血清AFP含量随之下降，其下降速度取决于体内残留AFP量及半衰期，一般2月内转阴，转阴时AFP异质体随之消失。如果AFP明显下降但不转阴，异质体变化不明显，则提示手术不彻底，可能还存在边缘残留、血管癌栓、卫星结节或转移等。如果异质体下降至25％以下，AFP和异质体浓度相对恒定，则可能是患者有肝炎或肝硬化所致。
3)胚胎异常发育及胎儿先天性疾患。正常妊娠期母体血清中AFP与胚胎中AFP处于平衡状态，一旦胎儿畸形或胎盘屏障发生异常，可导致胎儿血清渗入羊水中或羊水渗入母体血清，造成母体羊水或血清AFP急剧升高。但仅仅测定AFP总量有一定的局限性。实验表明神经管缺损、无脑儿或脊柱裂等。儿童肝母细胞瘤、胆道闭锁、性腺肿瘤、恶性畸胎瘤等可有AFP和/或AFP异质体的阳性。
目前用于AFP异质体的检测方法有植物凝集素亲和层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、亲和印迹法、亲和交叉免疫电泳法，这些方法均可以直接分离出AFP-L3蛋白并且进行定量估算，依据最终检测方法可以分为：
考马斯亮兰法：电泳后的标本直接用考马斯亮兰染色，洗脱后观察峰带。方法简单，但干扰因素多，灵敏度约1000ug/L。
酶标法：用过氧化物酶标记的抗体与电泳后的标本一起温育、漂洗后用二氨基联苯胺显色，检测灵敏度可提高至50ug/L。
金银染色法：将电泳后的标本直接与金黄色葡萄球菌蛋白A2胶金温育，再用银显色液显色，得到的峰带清晰，灵敏度可达32ug/L。
放射自显影法：是我国迄今为止最常用的检测方法，灵敏度达31ug/L。其原理是将标本在含凝集素的凝胶中进行分离电泳，后在添加含125IAFP、抗AFP抗体的凝胶中进行二次电泳，电泳结束后将凝胶烘干，覆盖X线胶片爆光，冲洗成像。整个实验过程操作复杂，长期以来，国内只有少数临床实验室能够测定AFP异质体，少数城市能满足临床测定AFP异质体的要求，并且没有国产试剂供应。
另外目前国内主要采用离心管分离方法，该方法采用琼脂糖偶联LCA，采用离心方法分离AFP-L3，然后再用AFP试剂进行检测。离心管分离方法是目前国内唯一获得药监局批准适用于AFP-L3％检测的方法。
现有方法对甲胎蛋白异质体占比测定中，手工操作程序多，步骤繁琐，需要配套设备多，耗时长，且不能实现自动化，因此，无法实现高通量的样本检测，并且受到人工操作影响较大，最终会引起检测结果的偏差。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统、方法及应用，通过检测血液样本中甲胎蛋白异质体含量与甲胎蛋白含量，得到甲胎蛋白异质体占比。
本发明提供的一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物，包括分离试剂和检测试剂，所述分离试剂包括偶联凝集素的磁性颗粒和洗脱液，所述偶联凝集素的磁性颗粒用于与待检测样品中的AFP-L3特异性结合；所述检测试剂包括包被甲胎蛋白抗体的磁性颗粒、标记酶的抗甲胎蛋白抗体。
本发明还提供了上述分离检测组合物优选技术方案。
作为优选，所述分离试剂还包括保护液，用于增加分离试剂的稳定性及提高分离效率。
作为优选，所述检测试剂还包括缓冲液，用于增加检测试剂的稳定性、提高检测灵敏度以及检测特异性。
作为优选，所述分离试剂和/或检测试剂还包括清洗液，用于提高结合效率、降低非特异性吸附、提高分离和检测的灵敏度。
作为优选，所述偶联凝集素的磁性颗粒中凝集素包括小扁豆凝集素和/或刀豆凝集素。
作为优选，所述偶联凝集素的磁性颗粒中磁性颗粒表面覆盖的高分子成分包括硅化物、多聚糖、蛋白、纤维素或树脂。
作为优选，所述组合物以卡式或条式提供。
本发明进一步提供了一种甲胎蛋白异质体的分离检测试剂盒，包括上述分离检测组合物。
本发明又进一步提供了一种甲胎蛋白异质体的分离检测系统，包括：
磁分离模块，用于自液体中分离磁颗粒，磁分离模块配合分离试剂和检测试剂使用；
检测模块，用于检测甲胎蛋白异质体和甲胎蛋白含量；
数据处理模块，用于计算甲胎蛋白异质体相对于甲胎蛋白比值，和
任一种的上述分离检测组合物或上述试剂盒。
所述磁分离模块与所述分离检测组合物中的分离试剂相配合，用于完成对甲胎蛋白异质体的分离；
所述检测模块与所述分离检测组合物中的检测试剂相配合，用于完成对甲胎蛋白异质体的含量和甲胎蛋白含量的检测。
本发明还提供了上述分离检测系统的优选技术方案。
作为优选，
当选择测定甲胎蛋白含量时，所述磁分离模块不与分离试剂相配合，所述检测装置检测待检测样品中甲胎蛋白的含量，
当选择测定甲胎蛋白异质体含量时，所述磁分离模块分离待检测样品中甲胎蛋白异质体，所述检测模块检测待检测样品中甲胎蛋白异质体的含量；
当选择测定甲胎蛋白异质体占比时，所述磁分离模块分离待检测样品中甲胎蛋白异质体，所述检测模块检测待检测样品中甲胎蛋白异质体的含量和甲胎蛋白的含量，所述数据处理模块计算甲胎蛋白异质体占比，即甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在总甲胎蛋白(AFP)中的占比(AFP-L3％)。
本发明最后提供了一种上述分离检测组合物或上述分离检测系统在分离检测甲胎蛋白异质体中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：操作者只需要加入样本等简单操作，在30分钟内就可以完成检测；同时该方法可以直接通过检测而定量计算出血样标本中所含的甲胎蛋白和甲胎蛋白异质体的含量，并同时获得AFP-L3％；方法简便，检测快捷，结果准确，灵敏度高，且自动化，为肝癌的预防、诊断、治疗提供了支持。
附图说明
图1是本发明的甲胎蛋白异质体的分离检测组合物以卡式提供示意图，
其中，1-样本孔，2-装有偶联凝集素的磁性颗粒的试剂槽，3-装有洗脱液的试剂槽，4-装有包被甲胎蛋白单抗的磁性颗粒的试剂槽，5-装有标记酶的抗甲胎蛋白抗体的试剂槽，6-反应孔，7-试剂卡；
图2是本发明的甲胎蛋白异质体的分离检测系统的示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
本发明提供的甲胎蛋白异质体的分离检测组合物，包括分离试剂和检测试剂，用于检测甲胎蛋白异质体占比。
分离试剂包括偶联凝集素的磁性颗粒和洗脱液，偶联凝集素的磁性颗粒用于与待检测样品中的AFP-L3特异性结合；检测试剂包括包被甲胎蛋白单抗的磁性颗粒、标记酶的抗甲胎蛋白抗体。上述试剂的主要组分及制备方法如下：
偶联凝集素的磁性颗粒：
其中，
凝集素采用小扁豆凝集素(LCA)、刀豆凝集素或小扁豆凝集素和刀豆凝集素。
磁性颗粒采用活化的包裹有环氧树脂的磁性颗粒和Sigma公司的LCA。
凝集素与磁性颗粒采用以下步骤偶联：
(1)称取2mgLCA，溶于7.5mL偶联缓冲液(0.1mmol/L NaHCO3，pH 8.3，0.5mol/LNaCl)，与经洗涤的1.5g磁性颗粒合并，以带塞的10mL试管上下颠倒混匀(室温，2h)；
(2)以10mL偶联缓冲液洗去未偶联的LCA。经测定洗涤液中的LCA I含量，计得偶联率为98％；
(3)用0.2mol/L甘氨酸封闭剩余活化基因；
(4)依次用10mL 0.1mol/L醋酸缓冲液(pH 4，含0.5mol/L NaCl)和0.1mol/LTris缓冲液(pH 8，含0.5mol/LNaCl)洗涤3次，再以含0.1％BSA和0.1mmol/LCaCl2的PBS(PBS-BSA)洗涤1次，4℃暂存备用。
上述包裹有环氧树脂的磁性颗粒还可以采用包裹有硅化钛、聚苯乙烯、葡聚糖、琼脂糖、磺胺树脂、牛血清白蛋白、生物素等材料的磁性颗粒替代。
AFP-L3洗脱液：
0.02M PBS(pH7.0)，5MD-甘露糖苷，
或20mmTris-Hcl，NaCL 150mm，ph7.4缓冲液，其中含有500mmα-甲基-D-甘露糖苷，0.1％，Proclin 300。
包被甲胎蛋白抗体的磁性颗粒：
其中，
甲胎蛋白抗体采用抗甲胎蛋白抗体1(anti-AFP-1)，其制备方法如下：
(1)磁性颗粒的活化
a.吸取磁性颗粒50ml(10％W/V)；
b.等体积50mM MES洗涤磁性颗粒；
c.用等体积100mM MES重悬磁性颗粒；
d.加入活化试剂EDC，终浓度0.04g/ml；
e.室温震荡活化1h
(2)抗甲胎蛋白抗体1(anti-AFP-1)与磁性颗粒的包被
a.活化结束，加磁场弃去上清液；
b.10倍体积50mM MES洗涤活化后磁性颗粒；
c.加入0.2mg抗体
d.室温震荡反应3h；
(3)抗甲胎蛋白抗体1(anti-AFP-1)与磁性颗粒包被的终止
a.反应结束，加磁场弃去上清液；
b.加入10倍体包被终止液；
c.常温震荡反应3h
(4)抗甲胎蛋白抗体1(anti-AFP-1)磁性颗粒的清洗保存
a.反应结束，加磁场弃去上清液；
b.加入10倍体包被清洗液，重复清洗四次；
c.10倍体积磁珠保存液保存抗甲胎蛋白抗体1(anti-AFP-1)磁性颗粒
标记酶的抗甲胎蛋白抗体：
采用偶联过氧化物酶(HRP)的抗甲胎蛋白抗体2(anti-AFP-2)，制备方法如下：
(1)酶的氧化(全过程避光)：
a.称取HRP 5mg，加ddH2O 250μl溶解；
b.称取NaIO45mg，加ddH2O 250μl溶解，配制成20mg/mL的浓度；
c.往HRP溶液中逐滴加入NaIO4溶液，边加边搅拌；
d.将混合好的溶液置于4℃，静置30分钟；
e.取5ml乙二醇溶于25μl ddH2O中，逐滴加入上述混合溶液中，边加边搅拌；
f.室温静置30分钟；
g.酶氧化过程完成，HRP终浓度为10mg/ml。
(2)抗甲胎蛋白抗体2(anti-AFP-2)的准备及标记(避光)：
a.调整抗体浓度到5mg/ml左右(蛋白浓度过低则用PEG20000浓缩)，用pH9.5左右的50mmol/L CB(1mol/L NaHCO3与1mol/L Na2CO3按10∶1的比例混合，使用前以蒸馏水稀释20倍)透析去甘油或杂质(如Tris)，4℃下透析过夜，其中换液3次；
b.将抗甲胎蛋白抗体2(anti-AFP-2)与HRP按1∶4混合，于50mmol/L pH9.5CB中透析6小时以上，前两个小时换液一次；
c用新鲜配置的1mg NaBH4溶液终止反应。摇匀，4℃静置2小时，每半小时摇一次，NaBH4溶液加入的量要合适；
d.用pH7.2的10mM PBS(预配置0.01mol/L的Na2HPO4和NaH2PO4储备液，根据需要的pH值混匀二者成PBS缓冲液)透析过夜。换液一次即可。
(3)纯化HRP酶标抗甲胎蛋白抗体2(anti-AFP-2)
a.完成标记的单克隆抗体溶液中逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加入边搅拌，直至饱和硫酸铵浓度降低至1/3；
b.4℃静置1小时；
c.8000rpm离心10分钟，将上清移至新管中，沉淀用等体积PBS重新悬浮；
d.重复以上操作，将饱和硫酸铵浓度提高到40％，分别收集上清和沉淀；
e.重复以上操作，将饱和硫酸铵浓度提高到50％，分别收集上清和沉淀；
f.重复以上操作，将饱和硫酸铵浓度提高到60％，分别收集上清和沉淀；
g.收集分离的各个组分，SDS-PAGE鉴定纯度；
h.提纯的HRP-单克隆抗体对PBS透析过夜；
i.超滤管离心浓缩纯化的HRP-单克隆抗体，获得克分子比接近1∶8的HRP酶标抗甲胎蛋白抗体2(anti-AFP-2)。
(4)分装：用含10％胎牛血清的缓冲液稀释由步骤3)获得的HRP酶标抗甲胎蛋白抗体2(anti-AFP-2)至合适的工作浓度，按6ml/瓶分装，贮存于4℃。
应用本实施例记载的分离检测组合物进行AFP含量检测：
采用Roche公司的AFP检测试剂盒(电化学发光法)作为对照组，比较AFP含量检测结果的准确性。AFP含量的cutoff值为20μg/L，高于20μg/L为阳性结果，低于20μg/L为阴性结果。检测结果如表1所示：
表1
检测结果表明：检测的452份样本中，本实施例的灵敏度、特异性达到100％。
应用本实施例记载的分离检测组合物进行AFP-L3％检测：
采用北京热景生物公司生产的甲胎蛋白异质体分离管配合Roche公司的AFP检测试剂盒(电化学发光法)作为对照组，比较AFP-L3％检测结果的准确性。AFP-L3％的cutoff值为10％。检测结果如表2所示：
表2：
与对照组相比较：107份对照组检测为AFP-L3％阳性的样本本实施例检测也为AFP-L3％阳性；172份对照组检测为AFP-L3％阴性的样本，本实施例检测有169份为阴性，其中3份样本经过临床诊断对照，发现患者为早期原发性肝癌患者。检测结果表明：本实施记载的分离检测组合物比对照组的检测性能更加灵敏。原因应是AFP-L3蛋白分离效率提高，可以更加准确检测样本中的AFP-L3％。
实施例2
本发明提供的甲胎蛋白异质体的分离检测组合物，根据实施例1的提供的甲胎蛋白异质体的分离检测组合物，分离试剂还可以包括保护液。检测试剂还可以包括缓冲液。
分离试剂和检测试剂分别可以包括清洗液。
上述试剂的主要组分情况如下：
保护液：0.02M PBS，0.5％BSA，pH7.4，0.1M D-甘露糖苷，
缓冲液：0.02M PBS，10％小牛血清，0.1％proclin-300，
分离试剂清洗液：20mM Tris-HCl，0.5MD-甘露糖苷，
检测试剂清洗液：PBS pH7.4配制的1％吐温20溶液。
上述D-甘露糖苷可以采用岩藻糖、果糖、蔗糖、海藻糖等糖类物质替代。
实施例3
本发明提供的甲胎蛋白异质体的分离检测系统，用于检测甲胎蛋白异质体占比，如图2所示，
包括用于分离甲胎蛋白异质体的磁分离模块，用于检测甲胎蛋白异质体含量和甲胎蛋白含量的检测模块，用于计算甲胎蛋白异质体相对于甲胎蛋白比值的数据处理模块和试剂卡。检测分离系统还可以包括取样模块，数据处理模块还可以包括光信号读取装置。
试剂卡包括实施例1记载的分离检测组合物，分离检测组合物预分装于试剂卡上的多个试剂槽中，用于进行反应，每种试剂有至少一个试剂槽。试剂卡包括样本孔、分离试剂槽、检测试剂槽和反应孔，本实施例的试剂卡，如图1所示，组成如下：
a.样本孔；b.预分装偶联凝集素的磁性颗粒的试剂槽；c.装有洗脱液的试剂槽；d.预分装包被抗甲胎蛋白抗体1(anti-AFP-1)的磁性颗粒的试剂槽；e.预分装标记酶的抗甲胎蛋白抗体(anti-AFP-2)的试剂槽；f.反应孔。
磁分离模块与分离检测组合物中的分离试剂相配合，用于完成对甲胎蛋白异质体的分离；
分离模块、检测模块与检测试剂相配合，用于完成对甲胎蛋白异质体含量和甲胎蛋白含量的检测。所述甲胎蛋白异质体含量和甲胎蛋白含量的检测可采用磁颗粒化学发光试剂。
所述检测模块可以仅用于检测甲胎蛋白含量。
所述数据处理模块可以显示甲胎蛋白含量数据，甲胎蛋白异质体含量数据以及甲胎蛋白异质体占比数据。
采用本实施例中记载的方法对待测样本进行检测，检测结果如表3所示：
表3
实验结果表明，本发明对于原发性肝癌的检测阳性率达到92％，对于健康人的特异性达到100％，对于肝硬化以及肝炎的特异性分别达到95％和97％，对于其他癌症的特异性达到了0％。
实施例4
根据实施例3提供的甲胎蛋白异质体的分离检测系统，还包括检测设定模块，检测设定模块包括甲胎蛋白含量测定单元、甲胎蛋白异质体含量测定单元和甲胎蛋白异质体占比测定单元，
当选择甲胎蛋白含量测定单元时，所述磁分离模块不参加处理待检测样品，所述检测装置检测待检测样品中甲胎蛋白的含量，
当选择甲胎蛋白异质体含量测定单元时，所述磁分离模块分离待检测样品中甲胎蛋白异质体，所述检测模块检测待检测样品中甲胎蛋白异质体的含量；
当选择甲胎蛋白异质体占比测定单元时，所述磁分离模块分离待检测样品中甲胎蛋白异质体，所述检测模块检测待检测样品中甲胎蛋白异质体的含量和甲胎蛋白的含量，所述数据处理模块计算甲胎蛋白异质体占比。
实施例5
根据实施例3或4提供的甲胎蛋白异质体的分离检测系统，采用实施例2记载的分离检测组合物替代实施例1记载的分离检测组合物。
实施例6
本发明提供的甲胎蛋白异质体的分离检测方法，采用上述分离检测系统，用于检测甲胎蛋白异质体占比，包括如下步骤，
(1)加样：
将无溶血的血清、血浆或者全血的样本加入到分离检测系统，或加入到上述试剂卡提供的样本孔；
(2)分离甲胎蛋白异质体：
系统将样本加入到装有偶联凝集素的磁性颗粒的试剂槽中，混匀；
磁分离模块富集磁性颗粒，弃去液体；
将富集得到的磁性颗粒加入到装有洗脱液的试剂槽中，混匀，通过磁分离模块富集磁颗粒，得到甲胎蛋白异质体洗脱液；
(3)反应孵育：
将甲胎蛋白异质体洗脱液加入到装有包被甲胎蛋白单抗的磁性颗粒的试剂槽中，同时加入预装在其他试剂槽中的标记酶的抗甲胎蛋白抗体，孵育。
(4)富集：磁分离模块富集磁性颗粒，弃去液体；
(5)显色：将富集得到的磁性颗粒加入预装在其他试剂槽中的显色剂，通过数据处理模块得到甲胎蛋白异质体的浓度；
(6)与(2)同时，系统将样本加入到装有包被甲胎蛋白单抗的磁性颗粒的试剂槽中，重复步骤(3)至(5)得到甲胎蛋白的浓度；
(7)通过数据处理模块得到甲胎蛋白异质体占比。
实施例7
根据实施例6提供的甲胎蛋白异质体的分离检测方法，仅包括步骤(1)和(6)，可以直接测得甲胎蛋白的浓度。
实施例8
本发明提供的甲胎蛋白异质体的分离检测方法，采用上述分离检测系统，用于检测甲胎蛋白异质体占比，包括如下步骤，
(1)加样：
将无溶血的血清、血浆或者全血的样本加入到分离检测系统，或加入到上述试剂卡提供的样本孔；
(2)分离甲胎蛋白异质体：
系统将样本加入到装有偶联凝集素的磁性颗粒的试剂槽中，混匀；
磁分离模块富集磁性颗粒，弃去液体；
将富集得到的磁性颗粒加入到装有清洗液的试剂槽中，混匀；
将清洗后的磁性颗粒加入到装有洗脱液的试剂槽中，混匀，通过磁分离模块富集磁颗粒，得到甲胎蛋白异质体洗脱液；
(3)反应孵育：
将甲胎蛋白异质体洗脱液加入到装有包被甲胎蛋白单抗的磁性颗粒的试剂槽中，同时加入预装在其他试剂槽中的标记酶的抗甲胎蛋白抗体，孵育。
(4)富集：磁分离模块富集磁性颗粒，弃去液体；
(5)清洗：将富集得到的磁性颗粒加入到装有清洗液的试剂槽中，混匀，重复步骤(4)；
(6)显色：将富集得到的磁性颗粒加入预装在其他试剂槽中的显色剂，通过数据处理模块得到甲胎蛋白异质体的浓度；
(7)与(2)同时，系统将样本加入到装有包被甲胎蛋白单抗的磁性颗粒的试剂槽中，重复步骤(3)至(6)测得到甲胎蛋白的浓度；
(8)通过数据处理模块得到甲胎蛋白异质体占比。
数据处理模块对甲胎蛋白异质体占比的逻辑算法：通过样本编号判断，仪器会对于同样一份样本的甲胎蛋白浓度和甲胎蛋白异质体浓度进行调取，后计算AFP-L3在AFP中的占比，从而计算出AFP-L3含量，即AFP-L3％。
上述说明示出并描述了本发明的优选实施例，如前所述，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (3)

1.一种甲胎蛋白异质体的分离检测系统，包括：
磁分离模块，用于自液体中分离偶联凝集素的磁性颗粒；
检测模块，用于检测甲胎蛋白异质体和甲胎蛋白含量；
数据处理模块，用于计算甲胎蛋白异质体相对于甲胎蛋白比值，和
包含分离试剂和检测试剂的分离检测组合物，其中；
所述分离试剂包括偶联凝集素的磁性颗粒和洗脱液，所述偶联凝集素的磁性颗粒用于与待检测样品中的AFP-L3特异性结合，其为表面覆盖有环氧树脂的磁性颗粒，其中所述凝集素为小扁豆凝集素；
所述检测试剂包括包被甲胎蛋白抗体的磁性颗粒、标记酶的抗甲胎蛋白抗体；
所述组合物以卡式提供，包括样本孔、装有所述偶联凝集素的磁性颗粒的试剂槽、装有所述洗脱液的试剂槽、装有所述包被甲胎蛋白单抗的磁性颗粒的试剂槽、装有所述标记酶的抗甲胎蛋白抗体的试剂槽和反应孔；
所述磁分离模块与所述分离检测组合物中的分离试剂相配合，用于完成对甲胎蛋白异质体的分离；
所述检测模块与所述分离检测组合物中的检测试剂相配合，用于完成对甲胎蛋白异质体的含量和甲胎蛋白含量的检测。
2.根据权利要求1所述的分离检测系统，其特征在于，
当选择测定甲胎蛋白含量时，所述磁分离模块不与分离试剂相配合，所述检测装置检测待检测样品中甲胎蛋白的含量；
当选择测定甲胎蛋白异质体含量时，所述磁分离模块分离待检测样品中甲胎蛋白异质体，所述检测模块检测待检测样品中甲胎蛋白异质体的含量；
当选择测定甲胎蛋白异质体占比时，所述磁分离模块分离待检测样品中甲胎蛋白异质体，所述检测模块检测待检测样品中甲胎蛋白异质体的含量和甲胎蛋白的含量，所述数据处理模块计算甲胎蛋白异质体占比。
3.根据权利要求1所述的分离检测系统，其特征在于，
所述分离试剂还包括保护液，所述保护液包含0.02M PBS、0.5％BSA和0.1MD-甘露糖苷，且pH为7.4。
CN201510002936.2A 2014-12-31 2015-01-06 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用 Active CN104714026B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510002936.2A CN104714026B (zh) 2014-12-31 2015-01-06 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2014108413977 2014-12-31
CN201410841397 2014-12-31
CN201510002936.2A CN104714026B (zh) 2014-12-31 2015-01-06 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104714026A CN104714026A (zh) 2015-06-17
CN104714026B true CN104714026B (zh) 2018-08-21

Family

ID=53413534

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510002936.2A Active CN104714026B (zh) 2014-12-31 2015-01-06 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用

Country Status (6)

Country Link
US (1) US10329335B2 (zh)
EP (1) EP3242133B1 (zh)
JP (1) JP6655622B2 (zh)
CN (1) CN104714026B (zh)
PT (1) PT3242133T (zh)
WO (1) WO2016107576A1 (zh)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104714026B (zh) 2014-12-31 2018-08-21 北京热景生物技术股份有限公司 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用
CN105785043B (zh) * 2016-04-06 2018-02-02 上海良润生物医药科技有限公司 用于定量检测afp‑l3%的试剂盒
CN106198998A (zh) * 2016-06-30 2016-12-07 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 人甲胎蛋白异质体3化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN105974132A (zh) * 2016-07-04 2016-09-28 福建广生堂药业股份有限公司 一种甲胎蛋白异质体的检测方法、检测试剂和检测试剂盒
CN106248959B (zh) * 2016-07-21 2019-01-25 首都医科大学附属北京佑安医院 一种检测血清岩藻糖蛋白的免疫渗滤方法及免疫渗滤装置
CN108333361A (zh) * 2017-01-19 2018-07-27 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 桥连有抗体的磁性微球复合制剂及其制备方法与应用
CN108333343A (zh) * 2017-01-19 2018-07-27 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 免疫磁性复合物、其制备方法、包括其的抗原捕获剂、试剂盒、系统及应用
CN108196063B (zh) * 2017-12-26 2020-11-24 陈复华 一种功能磁球主导的免疫荧光试纸条定量检测甲胎蛋白变异体（afp-l3）的试剂盒
CN108627653B (zh) * 2018-06-28 2021-01-05 热景（廊坊）生物技术有限公司 用于甲胎蛋白异质体分离检测的组合物和试剂盒
CN108761088B (zh) * 2018-06-28 2021-01-05 北京热景生物技术股份有限公司 用于糖链异常蛋白分离检测的组合物、试剂盒以及方法和用途
CN109187983B (zh) * 2018-08-10 2021-10-26 杭州市妇产科医院 中孕期母血清甲胎蛋白异质体l2和l3筛查胎儿开放性神经管畸形的方法
CN110007023B (zh) * 2019-04-15 2021-08-13 陕西科技大学 鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法及其与蛋白大分子相互作用的分析方法
CN110320370B (zh) * 2019-07-31 2023-06-09 万东山 肝癌肿瘤标志物afp、甲胎蛋白异质体、gp73抗原同步免疫检测试剂盒、方法及应用
CN111253491B (zh) * 2020-01-19 2022-03-25 北京尧景基因技术有限公司 一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-磁性载体偶联复合物
CN113433318A (zh) * 2021-06-29 2021-09-24 山东中鸿特检生物科技有限公司 一种检测甲胎蛋白异质体afp-l3含量的试剂盒及其检测方法和应用
CN114324340B (zh) * 2022-01-20 2023-08-15 青岛市妇女儿童医院 一种医用血液甲胎蛋白检测装置

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3010509B2 (ja) * 1990-03-30 2000-02-21 富士レビオ株式会社 免疫測定用容器、免疫測定方法及び免疫測定装置
JP2001318101A (ja) * 2000-05-08 2001-11-16 Arkray Inc カートリッジ
KR100483684B1 (ko) * 2003-01-29 2005-04-18 (주)바이오넥스 핵산 또는 다양한 생물학적 물질을 분리 및 정제하기 위한키트와, 이러한 키트를 이용하여 생물학적 물질의 분리또는 정제 작업을 자동화하기 위한 시스템
JPWO2006132074A1 (ja) * 2005-06-07 2009-01-08 アークレイ株式会社 液体交換方法、それを用いた成分抽出方法、複合容器および自動分析装置
CN1773286A (zh) * 2005-10-09 2006-05-17 北京微龙阵列生物技术有限公司 凝集素竞争法肝癌甲胎蛋白异质体afp－l3定量检测试剂盒
WO2007079499A2 (en) * 2006-01-04 2007-07-12 Nytor, Inc. Trusted host platform
KR100754409B1 (ko) * 2006-08-30 2007-08-31 삼성전자주식회사 원심력을 이용한 자성비드 팩킹 유닛, 이를 구비한미세유동 장치 및 상기 미세유동 장치를 이용한 면역학적검정 방법
CN100588942C (zh) * 2006-09-13 2010-02-10 北京热景生物技术有限公司 检测肝癌甲胎蛋白异质体的预装离心柱及含有该离心柱的试剂盒
JP5109001B2 (ja) * 2007-02-27 2012-12-26 株式会社Ｊ−オイルミルズ α１，６フコース糖鎖の検出および分別方法
CN101377490B (zh) * 2007-08-30 2012-07-04 北京科美生物技术有限公司 用于检测疾病相关标志物的磁微粒分离化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
KR100905300B1 (ko) 2007-10-01 2009-07-02 한국생명공학연구원 캐스케이드 효소면역측정법
US8187538B2 (en) * 2008-01-17 2012-05-29 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Diluent wells produced in card format for immunodiagnostic testing
CA2716950C (en) * 2008-02-29 2017-07-04 Northwestern University Barriers for facilitating biological reactions
JP2010085229A (ja) * 2008-09-30 2010-04-15 Wako Pure Chem Ind Ltd 肝細胞癌分析のためのデータを得るための方法、装置及びプログラム
JP2010256132A (ja) * 2009-04-23 2010-11-11 Okayama Univ 糖尿病性腎症の進行度の検出方法及び糖尿病性腎症の進行度の診断キット並びに糖尿病性腎症の進行度の指標となる物質及びその選別方法
US9796761B2 (en) * 2009-07-14 2017-10-24 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Glycan markers as measure of disease state of hepatic diseases
JP5691161B2 (ja) * 2009-11-19 2015-04-01 Jnc株式会社 タンパク質の精製方法
JP5292267B2 (ja) * 2009-12-16 2013-09-18 株式会社日立ハイテクノロジーズ 試料処理装置、試料処理方法及びこれらに使用する反応容器
CN101713779B (zh) * 2009-12-22 2013-04-10 陕西北美基因股份有限公司 一种用亲和素/链亲和素磁性复合微粒对生物分子进行免疫学检测的方法
CN102147415A (zh) * 2010-12-30 2011-08-10 上海市肿瘤研究所 一种快速磁分离法主导的肝癌甲胎蛋白变异体检测试剂盒
CN102360014A (zh) * 2011-08-16 2012-02-22 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 甲胎蛋白(afp)定量测定试剂盒及其检测方法
JP6074676B2 (ja) * 2011-08-19 2017-02-08 公立大学法人横浜市立大学 組織因子経路阻害因子２（ｔｆｐｉ２）測定による卵巣明細胞腺癌の検査方法および検査薬
JP3171942U (ja) * 2011-09-13 2011-11-24 パワーサプライ株式会社 イムノクロマト用キット
US20140235494A1 (en) * 2011-09-21 2014-08-21 The Universify of North Carolina at Chapel Hill Methods, Kits and Computer Program Products using Hepatocellular Carcinoma (HCC) Biomarkers
CN102664739A (zh) * 2012-04-26 2012-09-12 杜丽萍 一种基于安全证书的pki实现方法
CN102879567B (zh) * 2012-09-29 2014-11-05 同昕生物技术（北京）有限公司 用于肝癌诊断的甲胎蛋白异质体分离试剂盒及其组成试剂与应用
CN103383374A (zh) 2013-04-28 2013-11-06 中国人民解放军南京军区福州总医院 用于检测肝癌血清特征蛋白的指纹图谱模型及其制备方法
CN103808923A (zh) * 2013-11-25 2014-05-21 珠海迪尔生物工程有限公司 一种可移动式磁分离荧光免疫检测分析方法及装置
CN103997502A (zh) * 2014-06-05 2014-08-20 浪潮电子信息产业股份有限公司 一种基于云计算数据中心安全增强模型的设计方法
CN104714026B (zh) 2014-12-31 2018-08-21 北京热景生物技术股份有限公司 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用
CN204422547U (zh) 2014-12-31 2015-06-24 北京热景生物技术有限公司 一种甲胎蛋白异质体的分离检测试剂盒及装置

Also Published As

Publication number Publication date
EP3242133A4 (en) 2017-11-08
JP6655622B2 (ja) 2020-02-26
CN104714026A (zh) 2015-06-17
US10329335B2 (en) 2019-06-25
PT3242133T (pt) 2020-06-19
WO2016107576A1 (zh) 2016-07-07
EP3242133B1 (en) 2020-03-18
US20180009863A1 (en) 2018-01-11
EP3242133A1 (en) 2017-11-08
JP2018502297A (ja) 2018-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104714026B (zh) 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用
Ruoslahti et al. Studies of carcino‐fetal proteins. III. Development of a radioimmunoassay for α‐fetoprotein. Demonstration of α‐fetoprotein in serum of healthy human adults
CN100588942C (zh) 检测肝癌甲胎蛋白异质体的预装离心柱及含有该离心柱的试剂盒
CN204422547U (zh) 一种甲胎蛋白异质体的分离检测试剂盒及装置
CN107543932A (zh) 一种降钙素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法
CN108761088A (zh) 用于糖链异常蛋白分离检测的组合物、试剂盒以及方法和用途
CN103364558A (zh) 一种人肿瘤标志物癌胚抗原（cea）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN104034892A (zh) 一种肿瘤标志物afp磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
Alpert Alpha-I-Fetoprotein: Serologic Marker of Hu-man Hepatoma and Embryonal Carcinoma¹2
CN105785043A (zh) 用于定量检测afp-l3%的试剂盒
CN110221084A (zh) 一种快速检测he4和ca125的纳米硒试剂盒
CS566490A3 (en) Determination of appendicitis by determining concentration of delta hydroxyhippuric acid in urine
CN114414802A (zh) 一种基于肝癌四项联合检测的早期诊断试剂盒及应用
CN108627653B (zh) 用于甲胎蛋白异质体分离检测的组合物和试剂盒
SK374392A3 (en) Method of determination of concentration of different matters
CN106366197A (zh) 一种HER2、EGFR、EpCAM、MUC1多重抗体免疫磁珠及其制备方法
CN110850085A (zh) 异常凝血酶原化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN110244040A (zh) 一种游离雌三醇（fE3）检测试剂盒及其制备方法与应用
CN105891509B (zh) 用于定量检测甲胎蛋白异质体的侧向层析系统
CN106526165A (zh) 磷脂酰肌醇蛋白聚糖定量测定试剂盒及其检测方法
JPS63315953A (ja) 血中または体液中の微量物質含有量の測定法
CN113583085B (zh) 一种血清中巯亚硝基化蛋白的富集方法
JPH04203967A (ja) 微量成分の迅速測定方法
JPH0232030A (ja) 肝癌診断薬
CN112326967A (zh) 一种同时检测甲胎蛋白和癌胚抗原的试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Address after: 102600 Daxing District, Zhongguancun science and Technology Park Daxing biomedical industry base, Fu Street, No. 9, building 9, No.

Applicant after: Beijing hot King biotechnology Limited by Share Ltd

Address before: 102600 Beijing Daxing bio pharmaceutical industry base, 9 Fu Tian street, No. 9

Applicant before: Beijing Hotgen Biotechnology Co., Ltd.

COR Change of bibliographic data
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant