CN108761088A - 用于糖链异常蛋白分离检测的组合物、试剂盒以及方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明用于糖链异常蛋白分离检测的组合物、试剂盒以及方法和用途。通过本发明的方法可以指示糖链异常蛋白引发的肿瘤以及其他相关疾病的诊断情况,具有极高的灵敏度,方法快速简便而且自动化。

Description

用于糖链异常蛋白分离检测的组合物、试剂盒以及方法和 用途
技术领域
本发明涉及用于糖链异常疾病标志物蛋白(以下简称:糖链异常蛋白)分离检测的组合物、试剂盒以及方法和应用,属于医疗器械及体外诊断领域。
背景技术
糖蛋白是由一个或多个寡糖链与蛋白质的多肽骨架共价相连构成的结合蛋白。糖蛋白是由蛋白质糖基化修饰形成的,糖链随着新合成肽链的延长与肽链的特定位点结合,促使肽链折叠、聚合成具有正确空间构象的糖蛋白。
糖链异常蛋白主要由糖基化不完全,或糖基转移酶活性变化形成的,糖链异常蛋白有多种表现形式:特定结构糖链表达量的差异、不完整糖链结构的出现、糖前体的解聚及新糖链的出现等,糖基化生物合成状态比蛋白质的改变能更有效地提示疾病状态。
大量研究表明糖链异常蛋白与恶性肿瘤的发生、发展、转移及预后存在密切关系,如恶性肿瘤患者的糖链异常蛋白相对应的糖链蛋白、转铁蛋白、碱性磷酸酶、r-谷氨酰转移酶、人绒毛膜促性腺激素、T抗原、a1抗胰蛋白酶、前列腺酸性磷酸酶等糖链结构发生改变,达到一定程度后,向血液排放,并较多地存在于外周血液。因此,糖链异常蛋白检测使肿瘤在发生早期即可作出诊断,并为疾病进展的动态监测提供可能。
糖链异常蛋白检测在肿瘤及相关疾病的诊断中有着重要意义:
1、肿瘤辅助诊断、疗效评估和复发转移监测,提高肿瘤诊断准确率。
2、临床病人和体检人群的肿瘤筛查,降低肿瘤漏检、早期发现肿瘤。
3、慢性病症和异常体征的肿瘤风险评估,早期预警肿瘤风险、积极诊治、避免发展成中晚期肿瘤、拯救生命。
糖链异常蛋白检测主要流程包括:糖链异常蛋白的分离与富集、检测分析等。糖链异常蛋白的分离与富集原理是基于糖链异常蛋白的识别及肽链理化性质的不同。主要富集方法有:
1、凝集素亲和法、酰肼化学反应法及硼酸法等是基于某些物质对糖链异常蛋白的特异识别不同来分离、富集糖链异常蛋白的方法。
2、电泳法及亲水作用法是基于糖链理化性质的不同实现糖链异常蛋白的分离、富集。
糖链异常蛋白检测方法有质谱分析法、核磁共振波谱法(NMR)等:
1、质谱分析法:采用液相色谱-电喷雾质谱结合蛋白酶解和糖苷酶解的方法为糖蛋白的分析提供了快速、灵敏的检测手段,能获得相关糖链的结构信息;质谱法价格昂贵且检测后相应的数据处理尚需继续完善,限制了应用。
2、核磁共振波谱法(NMR)是利用原子核对射频辐射的吸收不同,从而对各种物质成分、结构进行定性分析的方法,是能提供糖链结构方面的信息,但NMR对样品要求非常高限制了的临床应用
3、基于凝集法的凝集素亲和原理的糖链异常蛋白检测系统已广泛应用于临床,但该系统存在诸多不足。正如中国专利CN207067147U公开的一种糖链异常蛋白TAP检测装置所记载的,其为定性检测,不能有效提示肿瘤负荷与检测结果间的关系,且存在假阳性。
而关于糖链异常蛋白的操作简便、高特异性、高灵敏度的自动化检测相关方法未见有公开记载。
因此,针对上述问题和技术不足,发明一种高特异性、高灵敏度的糖链异常蛋白分离和检测的方法,对肿瘤及相关疾病的早诊、早治是必须的,且有着重要的应用价值和社会效益。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足,本发明在深入研究的基础上,发现首先通过特异性的分离磁珠对样本中糖链异常蛋白进行精准分离,然后通过包被对应抗体的检测磁珠对样本中糖链异常蛋白进行检测,可以得到糖链异常蛋白的准确含量。优选地,进一步通过采用同样方法检测的样本中相同项目的糖链蛋白含量,通过计算得到糖链异常蛋白的比率。具体地,本发明包括以下内容。
本发明的第一方面,提供用于糖链异常蛋白分离检测的组合物,其至少两种磁珠,所述磁珠中的至少一种磁珠用于分离糖链异常蛋白,为糖链异常蛋白分离磁珠;至少一种磁珠用于检测糖链异常蛋白,为糖链异常蛋白检测磁珠。
在某些实施方式中,所述糖链异常蛋白分离磁珠和糖链异常蛋白检测磁珠的粒径不同,优选糖链异常蛋白分离磁珠粒径与糖链异常蛋白检测磁珠粒径比值大于1。
在某些实施方式中,所述糖链异常蛋白分离磁珠经高分子材料包埋处理,形成复合包埋磁珠,所述高分子材料是硅化物、聚苯乙烯、葡聚糖、琼脂糖、树脂、环氧树脂、牛血清白蛋白、生物素、纤维素的任意一种。
在某些实施方式中,所述复合包埋磁珠包括上述两种以上高分子材料的复合物。
在某些实施方式中,所述复合包埋磁珠与凝集素偶联形成磁珠-凝集素偶联复合物,用于样本中糖链异常蛋白的准确、高效分离。
在某些实施方式中,所述凝集素包括植物凝集素、蜗牛凝集素HPA和欧洲花园蜗牛凝集素HAA。
在某些实施方式中,所述植物凝集素包括:小扁豆凝集素(LCA)、刀豆凝集素、橘果孢粉凝集素、花生凝集素(PNA)、豌豆凝集素、麦胚素(WGA)等。
在某些实施方式中,所述糖链异常蛋白分离、检测组合物还包括分离洗脱液、分离清洗液,用于提高糖链异常蛋白的分离方法的稳定性,提高分离效率和灵敏度,降低分离过程中的非特异性吸附。
在某些实施方式中,所述糖链异常蛋白检测磁珠表面经羧基、羟基、氨基任意一种生物活性基团处理,对应形成羧基磁珠、羟基磁珠或氨基磁珠。
在某些实施方式中,所述羧基磁珠、羟基磁珠或氨基磁珠与糖链异常蛋白对应的糖链蛋白的抗糖链蛋白抗体结合,形成磁珠-抗体复合物,用于检测经分离磁珠分离后的糖链异常蛋白。
在某些实施方式中,所述糖链异常蛋白分离、检测组合物还包括检测清洗液、酶标记抗体、底物液;所述检测清洗液用于糖链异常蛋白检测过程中的清洗,提高结合效率、降低非特异性吸附、提高检测的灵敏度;所述酶标记抗体包括酶标记的抗糖链异常蛋白对应的糖链蛋白的抗糖链蛋白抗体,抗体缓冲液,用于在检测过程中与分离磁珠分离的糖链异常蛋白、检测磁珠-抗体复合物形成夹心复合物,然后与底物液进行显色或发光反应,准确测定糖链异常蛋白含量。
本发明的第二方面,提供用于糖链异常蛋白分离、检测的试剂盒,其包括本发明第一方面所述的组合物。使用所述试剂盒检测,在检测结束后获得样本中糖链异常蛋白的定量检测结果。优选地,糖链异常蛋白分离磁珠包含于糖链异常蛋白分离组合物中,糖链异常蛋白检测磁珠包含于糖链异常蛋白检测组合物。
在某些实施方案中,本发明的试剂盒除了包括本发明第一方面所述的组合物之外,还进一步包括糖链异常蛋白对应糖链蛋白的检测组合物。使用所述试剂盒检测,在检测结束后,同时获得样本中的糖链异常蛋白的定量检测结果、糖链异常蛋白对应糖链蛋白的定量检测结果、糖链异常蛋白比率共计三种检测结果。
优选地,糖链异常蛋白分离磁珠包含于糖链异常蛋白分离组合物中,至少一种糖链异常蛋白检测磁珠包含于糖链异常蛋白检测组合物中,至少一种糖链异常蛋白检测磁珠还包含于糖链异常蛋白对应糖链蛋白检测组合物中。
进一步优选地,糖链异常蛋白检测组合物和糖链异常蛋白对应糖链蛋白检测组合物为相同的组合物。
本发明的第三方面,提供糖链异常蛋白检测方法,其包括使用本发明第一方面所述的组合物,或本发明第二方面所述的试剂盒的步骤。优选地,糖链异常蛋白检测组合物、糖链异常蛋白对应糖链蛋白检测组合物的制备、使用和组合的方法相同,确保糖链异常蛋白检测和糖链异常蛋白对应的糖链蛋白检测过程中背景相同,保证糖链异常蛋白检测比率的准确性;在某些实施方式中,所述糖链异常蛋白检测比率=糖链异常蛋白的定量检测结果/糖链异常蛋白对应糖链蛋白的定量检测结果。
本发明的第四方面,提供本发明第一方面所述的组合物、第二方面所述的试剂盒在生物检测中的用途。优选地,用于糖链异常蛋白分离检测的用途,其用于分离、检测选自甲胎蛋白、转铁蛋白、碱性磷酸酶、r-谷氨酰转移酶、人绒毛膜促性腺激素、T抗原、a1抗胰蛋白酶、前列腺酸性磷酸酶、高尔基体蛋白73、免疫球蛋白IgA和IgG、酸性糖蛋白等蛋白质中的至少一种蛋白质因糖链异常形成的糖链异常蛋白,和/或糖链异常蛋白比率的用途。
有益效果:
与现有技术相比,本发明对糖链异常蛋白的分离、检测采用粒径不同大小的磁珠,利用磁珠粒径大小不同形成的磁珠的表面积、磁吸附效果不同,提高糖链异常蛋白的分离效率和精准度;同时使用相同的方法检测分离后的糖链异常蛋白和相同来源样本中的糖链异常蛋白对应的糖链蛋白的含量,确保了糖链异常蛋白比率计算的准确性;同时本发明只需要加入样本等简单操作,在检测结束后,同时获取样本中糖链异常蛋白相对应的糖链蛋白、糖链异常蛋白、糖链异常蛋白比率三种检测结果,且试剂空白检测限和线性范围明显高于现有技术。总之,本发明方法简便,检测快捷,结果准确,灵敏度高,且自动化,为糖链蛋白异常引起的肿瘤相关疾病的早诊、预防、诊断、治疗提供有效支持。
附图说明
图1为:糖链异常蛋白比率的线性范围在5%-100%的线性图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式,该详细说明不应认为是对本发明的限制,而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式,并非用于限制本发明。另外,对于本发明中的数值范围,应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明,否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料,但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入,用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时,以本说明书的内容为准。
本发明的第一方面,提供一种糖链异常蛋白分离、检测的组合物,其包括至少两种磁珠:至少一种磁珠用于分离糖链异常蛋白(本文有时称作第一磁珠),至少一种磁珠用于检测糖链异常蛋白(本文有时称作第二磁珠)。优选地,除了上述两种磁珠外,还包括用于检测糖链异常蛋白对应的糖链蛋白的磁珠(本文有时称作第三磁珠)。
本发明的第一磁珠为用于分离糖链异常蛋白的磁珠。优选地,第一磁珠包括磁性核、保护壳和活性基团。优选地,第一磁珠的磁性核由顺磁性物质制成,例如铁氧化物等。保护壳优选为高分子层。还优选地,保护壳材料的实例包括但不限于硅化物、聚苯乙烯、葡聚糖、琼脂糖、树脂、环氧树脂、牛血清白蛋白、生物素和纤维素。本发明可使用上述物质中的一种或多种。优选两种以上。例如,硅化物和聚苯乙烯等。本发明中硅化物包括二氧化硅和TEOS等。活性基团为适于与糖链异常蛋白结合的基团,优选地,活性基团为凝集素。优选地,凝集素的实例包括但不限于植物凝集素、蜗牛凝集素HPA和欧洲花园蜗牛凝集素HAA。还优选地,植物凝集素的实例包括但不限于小扁豆凝集素(LCA)、刀豆凝集素、橘果孢粉凝集素、花生凝集素(PNA)、豌豆凝集素、麦胚素(WGA)等。本发明可使用上述物质中的一种或多种的组合。
在某些实施方式中,所述第一磁珠和第二磁珠的粒径、和/或平均粒径不同,优选第一磁珠和第二磁珠的粒径、和/或平均粒径比值大于1。优选地,第一磁珠和第二磁珠的粒径、和/或平均粒径比为1:2-1:200,优选1:10-1:100,更优选1:10-1:50。第一磁珠的粒径、和/或平均粒径一般为1μm-1000μm,优选10μm-500μm,更优选20μm-300μm。上述粒径、和/或平均粒径范围非常有利于糖链异常蛋白的分离,如果直径过小或过大,均不利于分离,原因可能在于粒径、和/或平均粒径过小磁性颗粒容易聚集,从而影响分离效果,另一方面,当直径过大时磁珠上活性基团的数量变少,同样不利于分离。
优选地,第二磁珠的粒径、和/或平均粒径一般为0.01μm-100μm,优选0.1μm-50μm,更优选0.1μm-20μm;粒径、和/或平均粒径过大或过小均不利于检测,且第一磁珠和第二磁珠的粒径、和/或平均粒径不同,且磁珠处理方式不同,如:第一磁珠经高分子材料包埋处理、第二磁珠经表面活性集团处理,对样本中糖链异常蛋白的分离、和检测的不同处理具有不同意义,能大幅提高检测的灵敏度和线性范围。
在某些实施方式中,本发明的糖链异常蛋白分离、检测组合物还包括分离洗脱液、分离清洗液,用于提高糖链异常蛋白的分离方法的稳定性,提高分离效率和灵敏度,降低分离过程中的非特异性吸附。
本发明第一方面的糖链异常蛋白分离、检测的组合物还包括用于检测糖链异常蛋白对应的糖链蛋白的磁珠。优选地,用于糖链异常蛋白检测的磁珠与用于检测糖链异常蛋白对应糖链蛋白的磁珠相同,即第二磁珠与第三磁珠相同。
本发明的第二方面,提供糖链异常蛋白分离、检测的试剂盒,其包括本发明第一方面的组合物。
本发明的第三方面,提供糖链异常蛋白分离、检测方法。在某些实施方案中,首先通过特异性的分离磁珠对样本中糖链异常蛋白的精准分离,然后通过包被糖链异常蛋白对应糖链蛋白的抗糖链蛋白抗体的检测磁珠对样本中糖链异常蛋白进行检测,得到糖链异常蛋白的准确含量,通过采用同样的检测方法检测的样本中糖链异常蛋白对应的糖链蛋白含量,通过计算得到糖链异常蛋白的比率。
本发明的第四方面,提供本发明第一方面的组合物和第二方面的试剂盒的用途。优选地在生物检测中的用途。生物检测的实例包括检测选自甲胎蛋白、转铁蛋白、碱性磷酸酶、r-谷氨酰转移酶、人绒毛膜促性腺激素、T抗原、a1抗胰蛋白酶、前列腺酸性磷酸酶、高尔基体蛋白73、免疫球蛋白IgA和IgG、酸性糖蛋白等蛋白质中的至少一种的蛋白质因糖链异常形成的糖链异常蛋白,和/或糖链异常蛋白比率的检测。
实施例1
本实施例为糖链异常蛋白分离组合物的示例性制备方法,为说明本发明,以下实施例采用硅化物包埋的糖链异常蛋白分离磁珠和小扁豆凝集素(LCA)进行说明。
1、磁珠-凝集素偶联复合物制备(粒径20μm-300μm)
硅化物包埋的分离磁珠和小扁豆凝集素(LCA)均为商品化的原料,可以通过sigma等知名原辅材料供应公司购买,或通过文献公开的方法制备。
硅化物包埋的分离磁珠和小扁豆凝集素(LCA)通过以下步骤形成磁珠-凝集素偶联复合物:
(1)将硅化物包埋的分离磁珠用磁性分离架分离,然后用纯化水或1mM的HCl溶液洗涤,去除残留溶液;
(2)取适量LCA,溶于LCA偶联缓冲液中,LCA与偶联缓冲液比例为1:2-1:5,偶联缓冲液为0.1mmol/LNaHCO3,0.5mol/LNaCl,pH 7-9。
(3)取硅化物包埋的分离磁珠(g)与LCA(mg)比例为:1:1-1:5的硅化物包埋的分离磁珠,加入(2)中的溶液中,室温颠倒混匀2h以上。
(4)用适量偶联缓冲液洗去未偶联的LCA。经测定洗涤液中的LCA含量,计算硅化物包埋的分离磁珠与LCA偶联率不低于98%。
(5)在(4)中加入0.2mol/L甘氨酸缓冲液或BSA缓冲液,室温室温颠倒混匀2h以上。
(6)依次用适量的0.1mol/L醋酸缓冲液(pH 4,含0.5mol/L NaCl)和0.1mol/LTris缓冲液(pH 8,含0.5mol/LNaCl)洗涤3次,再以适量的含0.1%BSA和0.1mmol/L CaCl2的PBS(PBS-BSA)和纯化水各洗涤1次,4℃暂存备用。
2、分离洗脱液制备
分离洗脱液为TRIS缓冲液,0.1-1M的蔗糖、葡聚糖或D-甘露糖苷;或0.02M PBS(pH7.0),5M D-甘露糖苷。
3、分离清洗液制备
分离清洗液为TRIS缓冲液,pH值6.0-9.0,
实施例2
本实施例为糖链异常蛋白检测组合物的示例性制备方法。本实施例采用羧基磁珠、糖链蛋白选择甲胎蛋白(AFP)、糖链异常蛋白选择甲胎蛋白异质体(AFP-L3)进行说明。
1、磁珠-抗体复合物制备(粒径0.1μm-20μm)
所述磁珠-抗体复合物由羧基磁珠与抗AFP抗体1结合,形成磁珠-抗体复合物,用于检测经分离磁珠分离的AFP-L3。制备过程如下:
将羧基磁珠混匀后加磁场去掉上清,用包被缓冲液清洗磁珠一次,然后加入活化剂EDC至10-50mg/ml,常温震荡反应0.5-2h,然后去上清,加入包被缓冲液及适量抗糖链异常蛋白相对应的糖链蛋白抗体1,常温震荡1-5h,反应结束后加入封闭液并震荡,最后加清洗液,清洗完成后加入保存液过夜保存即可。
包被缓冲液:为0.1mol/L的pH5.0-8.0的MES缓冲液;
抗AFP抗体1使用浓度为10-100μg/mg羧基磁珠;
封闭液为:50mM Tris、1-5%BSA、1‰Proclin300、pH 7-9;
包被保存液为:磷酸氢二钠2.9g、磷酸二氢钾0.2g、氯化钠0.80%、BSA 1-5%、Proclin3001‰、pH 7-9。
2、酶标记抗体制备
AFP酶标记抗体包括酶标记的抗AFP抗体2,抗体缓冲液,用于在检测过程中经分离磁珠分离的AFP-L3、检测磁珠-抗体复合物形成夹心复合物,然后与底物液进行显色或发光反应,准确测定AFP-L3含量。以碱性磷酸酶(ALP)标记为例进行说明,制备如下:
碱性磷酸酶(ALP)标记工艺为:取抗AFP抗体2质量比为5:1-1:1的ALP,加入与ALP溶液等体积、等浓度的NaIO4(10-20mg/ml,现配),4℃避光反应0.5-1.5h,然后加入与ALP溶液等体积的乙二醇溶液,室温静置避光反应0.5-1.5h。加入抗AFP抗体2,再加入混合液1/20体积的CBS标记抗体缓冲液(0.05mol/L,pH9.6)置4℃避光透析过夜,最后加入硫酸铵溶液,反应1-5小时,离心,弃去上清,沉淀用0.01mol/L的PBS溶解后置4℃避光透析过夜,透析完后加等体积甘油混匀,-20℃保存。用含有1-10%BSA或牛血清的稀释缓冲液配置成使用浓度即可。
3、底物液
底物液用于在检测过程中与分离磁珠分离的AFP-L3、检测磁珠-抗体复合物形成夹心复合物进行显色或发光反应,准确测定糖链异常蛋白含量。
底物液主要来源于直接购买的商品化底物液。
实施例3
本实施例为糖链蛋白检测组合物的示例性制备方法,本实施例采用羧基磁珠、糖链蛋白选择甲胎蛋白(AFP)进行说明。
为保证糖链蛋白、糖链异常蛋白检测过程中的背景相同,并保证糖链异常蛋白比率的准确性,糖链蛋白检测组合物的示例性制备方法与实施例2中的糖链异常蛋白的检测组合物的示例性制备方法相同,制备过程中应用的原辅材料相同,详细说明如下:
1、磁珠-抗体复合物制备(粒径0.1μm-20μm)
所述磁珠-抗体复合物由羧基磁珠与抗AFP抗体1结合,形成磁珠-抗体复合物,用于检测样本中的糖链蛋白的含量。制备过程如下:
将羧基磁珠混匀后加磁场去掉上清,用包被缓冲液清洗磁珠一次,然后加入活化剂EDC至10-50mg/ml,常温震荡反应0.5-2h,然后去上清,加入包被缓冲液及适量抗糖链异常蛋白相对应的糖链蛋白抗体1,常温震荡1-5h,反应结束后加入封闭液并震荡,最后加清洗液,清洗完成后加入保存液过夜保存即可。
包被缓冲液:为0.1mol/L的pH5.0-8.0的MES缓冲液;
抗AFP抗体1使用浓度为10-100μg/mg羧基磁珠;
封闭液为:50mM Tris、1-5%BSA、1‰Proclin300、pH 7-9;
包被保存液为:磷酸氢二钠2.9g、磷酸二氢钾0.2g、氯化钠0.80%、BSA 1-5%、Proclin3001‰、pH 7-9。
2、酶标记抗体制备
AFP酶标记抗体包括酶标记的抗AFP抗体2,抗体缓冲液,用于在检测过程中经分离磁珠分离的AFP-L3、检测磁珠-抗体复合物形成夹心复合物,然后与底物液进行显色或发光反应,准确测定AFP-L3含量。以碱性磷酸酶(ALP)标记为例进行说明,制备如下:
碱性磷酸酶(ALP)标记工艺为:取抗AFP抗体2质量比为5:1-1:1的ALP,加入与ALP溶液等体积、等浓度的NaIO4(10-20mg/ml,现配),4℃避光反应0.5-1.5h,然后加入与ALP溶液等体积的乙二醇溶液,室温静置避光反应0.5-1.5h。加入抗AFP抗体2,再加入混合液1/20体积的CBS标记抗体缓冲液(0.05mol/L,pH9.6)置4℃避光透析过夜,最后加入硫酸铵溶液,反应1-5小时,离心,弃去上清,沉淀用0.01mol/L的PBS溶解后置4℃避光透析过夜,透析完后加等体积甘油混匀,-20℃保存。用含有1-10%BSA或牛血清的稀释缓冲液配置成使用浓度即可。
3、底物液
底物液用于在检测过程中与样本中的糖链蛋白、检测磁珠-抗体复合物形成夹心复合物进行显色或发光反应,准确测定糖链蛋白含量。
底物液主要来源于直接购买的商品化底物液。
实施例4
本实施例为试剂盒例,其包括试剂盒1和试剂盒2。其中试验盒1包括实施例1和实施例2的组合物,用于糖链异常蛋白的定量检测。试剂盒2包括实施例1、实施例2和实施例3的组合物,用于糖链异常蛋白的定量检测、糖链蛋白的定量检测和糖链异常蛋白比率的检测。
此外,本实施例的试剂盒1和2还分别包括定标液,或者定标液和质控品的组合物。
定标液制备:
定标液缓冲液配制:含10-50%牛血清溶液。
将商品化的糖链异常蛋白相对应的糖链蛋白纯品加入到定标缓冲液中,稀释到适宜浓度即可,如50ng/mL、500ng/mL。
由于冻干品相对液体定标液稳定,上述定标液可按照相关程序制备成冻干品保存。
实施例5
本实施例提供本发明的试剂盒的使用方法,即本发明的检测方法,以糖链异常蛋白中的甲胎蛋白异质体(AFP-L3)试剂盒为例,说明其使用步骤:
1、AFP-L3分离步骤:
按照标准分离程序:100μl分离磁珠,50μl样本,37℃孵育20min,200μl清洗液清洗1次,200μl洗脱液洗脱1次,使用磁分离架进行分离。
2、AFP-L3和AFP检测步骤:
在对应试管底部加50μl定标液/样本/分离后的AFP-L3,50μl包被抗体,50μl标记抗体,用塑料薄膜覆盖试管,混匀器轻轻震荡管架后,置37℃恒温培养箱中孵育10min;将试管放置在磁力分离架上,吸附磁珠,进行固液分离;然后加入380μl清洗液至每个试管中,置混匀器上轻轻震荡混匀,清洗3遍;加入底物液150μl至试管中混匀,迅速用准备好的发光检测仪进行检测。
3、试剂盒自动化检测步骤:
上述1、2检测步骤可用手工实现,也可以匹配北京热景生物技术股份有限公司的MQ60系列、C2000系列全自动化学发光免疫分析仪使用,进行自动化检测。自动化检测仅需将定标液/样本加入样本孔中,自动反应后,即可获得AFP、AFP-L3、AFP-L3比率(AFP-L3%)三种检测结果。
实施例6
本实施例提供本发明的试剂盒的使用方法和性能评估方法,即本发明的检测方法和利用本发明的试剂盒进行性能评估的方法,以AFP、AFP-L3为例,并采用北京热景生物技术股份有限公司的MQ60系列全自动化学发光免疫分析仪进行全自动检测、分析和进一步说明。以实施例4中的试剂盒2为例,说明其使用步骤:
所述试剂盒性能分析如下,AFP-L3分离、检测试剂盒的灵敏度明显提高和线性范围扩大对肿瘤的早诊早治的进一步研究,提高早诊率有着重要临床意义和社会意义。
1、最低检测限
以三批不同批次的检测试剂盒同时检测20次校准品稀释液样本或者零背景值的样本,计算平均值(Mean)和标准差(SD),由拟合方程Mean+2×SD计算出RLU值,并计算其浓度值。
表1最低检测限实验结果
由上述三批试剂检测结果分析,空白检测限的最低检测结果平均为0.0785ng/ml,小于0.1ng/ml,最低检测限检测结果符合实验预期。因此,将检测试剂盒的最低空白检出限定义不大于0.1ng/ml。
2、线性范围
(1)糖链异常蛋白浓度线性范围测定
选择浓度为(1500±150)ng/mL的分离后的AFP-L3样本和AFP样本,稀释成为0.3ng/mL到1300ng/mL范围内的至少7个稀释浓度,在MQ60系列全自动化学发光免疫分析仪上检测,将每一浓度的样本重复检测3次,计算平均值,并计算线性相关系数r≥0.9900。
表2线性测定范围实验结果
由表中计算出剂量-反应曲线的线性来看,在0.3-1200ng/mL和0.6-1200ng/mL范围内相关系数为0.9999;在0.3-1300ng/mL和0.6-1300ng/mL范围内相关系数小于0.9900;考虑到0.3ng/mL的检测结果CV值大于15%,因此将本试剂盒AFP线性范围规定在0.6-1200ng/mL。
(2)糖链异常蛋白比率的线性范围测定
选择AFP-L3%检测为5%的阴性样本以及AFP-L3%为100%的纯品,分别配置成比值为:2.5%、5%、10%、20%、40%、80%、100%纯品等多种浓度,按照说明书要求,在MQ60上检测,将每一浓度的样本重复检测3次,计算平均值,并计算实际检测AFP-L3%与理论AFP-L3%线性相关系数r≥0.9900。
表3AFP-L3%测定范围实验结果
由表3中计算出实际检测AFP-L3%-理论AFP-L3%线性来看,在5%-50%和5%-100%范围内相关系数大于0.9900;将本试剂盒AFP-L3%线性范围规定在5%-100%。参见图1。
3、精密度
(1)批内精密度
用同一批试剂盒测定AFP-L3%为15%和30%的精密度样本,平行测定10次,计算测定结果的平均浓度(Mean)与标准差(SD),批内精密度(CV)=SD/Mean×100%,应不高于10.0%。
表4批内精密实验结果
从上表数据可知,用同一批试剂盒测定同一份精密度样本,批内精密度都小于10%,表明试剂盒的均一性良好,结果具有重复性。
(2)批间精密度
用三批试剂盒分别AFP-L3%在(15±1.5%)和(30%±3%)水平的AFP-L3%样本,平行测定10次,计算测定结果的平均浓度(Mean)与标准差(SD),批间精密度(CV)=SD/Mean×100%,CV应不大于15.0%。
表5批间精密度实验结果
从上表数据可知,用三批试剂盒测定同一份精密度样本,批间精密度小于10.0%,表明不同批次的试剂盒之间变异很小,测量结果具有重复性。
4、分析特异性
分析特异性是为了检测血液中其它物质对试剂盒测量的干扰。在人血液中容易对AFP的测量造成干扰的物质有人血清白蛋白(HSA)、CEA;用高浓度的HAS(2×106ng/mL)、CEA等物质加入AFP-L3%低浓度(5%左右)样本中进行实验,结果表明,试剂盒与这些物质的交叉反应很低,不会对AFP-L3%的测量造成干扰。干扰物质检测结果如下:
表6干扰物质的交叉反应数据
综上所述,高浓度的HAS、CEA等物质对本试剂盒无干扰。
实施例7
采用本实施例1-4中记载的方法和试剂盒对收集的待测血液样本进行检测,所有收集的待测样本临床诊断背景清晰,检测结果如下表所示:
表7临床样本测试结果
实验结果表明,本发明对于原发性肝癌的检测阳性率达到93.1%,对于健康人的特异性达到100%,对于肝癌高危人群中的肝硬化以及肝炎的特异性分别达到94.7%和97.2%,对于其他癌症的特异性达到了0%。
比较例
比较例以糖链异常蛋白中的甲胎蛋白异质体(AFP-L3)检测为例:
依据上海良润生物医药科技有限公司的专利CN 105785043 A3公开记载,该专利公开了用于定量检测AFP-L3%的试剂盒,其中甲胎蛋白和甲胎蛋白异质体检测使用相同的磁珠,大小均为0.1-10μm,该试剂的最低检测限:AFP最低检测限不大于1.5ng/mL。AFP-L3最低检测限不大于0.8ng/mL;.线性:AFP试剂盒2ng/mL-500ng/mL区间内,其线性相关系数(r)应不低于0.990,AFP-L3试剂盒1ng/mL-250ng/mL区间内,其线性相关系数(r)应不低于0.990,未记载AFP-L3比率的检出情况和线性情况。
依据本发明专利实施例1-7的记载,使用不同的甲胎蛋白异质体分离磁珠和甲胎蛋白异质体检测磁珠,且分离磁珠粒径/检测磁珠大于1,本发明最低检出限,即空白检测限的最低检测结果平均为0.0785ng/ml,不大于0.1ng/ml;在0.3-1200ng/mL和0.6-1200ng/mL范围内相关系数为0.9999;考虑到0.3ng/mL的检测结果CV值大于15%,因此将本试剂盒AFP线性范围规定在0.6-1200ng/mL,其线性相关系数不低于0.990;AFP-L3比率的5%-100%范围内线性相关系数为0.9988,不低于0.9900。
由此可见,以糖链异常蛋白中的甲胎蛋白异质体(AFP-L3)检测为例,本发明实现的AFP-L3、AFP-L3%的灵敏度及线性范围远高于对比专利记载的专利数据,达成的发明效果也明显优于对比专利。
上述说明示出并描述了本发明的示例性的实施例,如前所述,应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述发明构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围,则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (17)

1.一种用于糖链异常蛋白分离、检测的组合物,其包含两种以上的磁珠,其中至少一种磁珠为糖链异常蛋白分离磁珠,其用于分离糖链异常蛋白;至少一种磁珠为糖链异常蛋白检测磁珠,其用于检测糖链异常蛋白。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中所述糖链异常蛋白分离磁珠和所述糖链异常蛋白检测磁珠位于不同的溶液中,且具有不同的粒径、和/或平均粒径。
3.根据权利要求2所述的组合物,其中所述糖链异常蛋白分离磁珠的粒径与所述糖链异常蛋白检测磁珠的粒径、和/或平均粒径的比值大于1。
4.根据权利要求1所述的组合物,其中所述糖链异常蛋白分离磁珠经高分子材料包埋处理形成复合包埋磁珠,且所述高分子材料选自由硅化物、硅化物、聚苯乙烯、葡聚糖、琼脂糖、树脂、牛血清白蛋白、生物素、纤维素组成的组的中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的组合物,其中所述高分子材料为选自由硅化物、硅化物、聚苯乙烯、葡聚糖、琼脂糖、树脂、牛血清白蛋白、生物素、纤维素组成的组的中的至少两种。
6.根据权利要求4所述的组合物,其中所述复合包埋磁珠与凝集素偶联形成磁珠-凝集素偶联复合物,用于样本中糖链异常蛋白的分离。
7.根据权利要求6所述的组合物,其中所述凝集素包括选自由植物凝集素、蜗牛凝集素HPA和欧洲花园蜗牛凝集素HAA组成的组中的至少一种。
8.根据权利要求7所述的组合物,其中所述植物凝集素选自小扁豆凝集素LCA、刀豆凝集素、橘果孢粉凝集素、花生凝集素PNA、豌豆凝集素和麦胚素WGA组成的组。
9.根据权利要求1所述的组合物,其中所述糖链异常蛋白检测磁珠的表面经选自由羧基、羟基和氨基组成的组中的至少一种生物活性基团处理,从而形成羧基磁珠、羟基磁珠或氨基磁珠;所述羧基磁珠、羟基磁珠或氨基磁珠用于与糖链异常蛋白对应糖链蛋白的糖链蛋白抗体结合,形成磁珠-抗体复合物。
10.根据权利要求1所述的组合物,其还包括选自分离洗脱液、分离清洗液、检测清洗液、酶标记抗体和底物液组成的组中的至少一种。
11.一种糖链异常蛋白的分离、检测试剂盒,其用于获得样本中糖链异常蛋白的定量检测结果,其中所述试剂盒包括根据权利要求1-10任一项所述的组合物。
12.一种糖链异常蛋白比率的分离、检测试剂盒,其用于同时获得样本中的糖链异常蛋白的定量检测结果、糖链异常蛋白对应糖链蛋白的定量检测结果、糖链异常蛋白比率共计三种检测结果,其中所述试剂盒包括根据权利要求1-10任一项所述的组合物,和糖链异常蛋白对应糖链蛋白的检测组合物。
13.根据权利要求12所述分离、检测试剂盒,其中糖链异常蛋白分离磁珠包含于糖链异常蛋白分离组合物中,至少一种糖链异常蛋白检测磁珠包含于糖链异常蛋白检测组合物中,至少一种糖链异常蛋白检测磁珠包含于糖链异常蛋白对应糖链蛋白检测组合物中。
14.根据权利要求13所述分离、检测试剂盒,其中所述糖链异常蛋白检测组合物和糖链异常蛋白对应糖链蛋白检测组合物为相同的组合物。
15.一种用于糖链异常蛋白分离检测的方法,其包括使用根据权利要求1-10任一项所述的组合物的步骤,或包括使用根据权利要求11或12-14所述的试剂盒的步骤。
16.根据权利要求1-10任一项所述的组合物,或包括使用根据权利要求11或12-14所述的试剂盒在检测中的用途。
17.根据权利要求16所述的用途,其用于分离、检测选自甲胎蛋白、转铁蛋白、碱性磷酸酶、r-谷氨酰转移酶、人绒毛膜促性腺激素、T抗原、a1抗胰蛋白酶、前列腺酸性磷酸酶、高尔基体蛋白73、免疫球蛋白IgA和IgG、酸性糖蛋白中的至少一种蛋白质因糖链异常形成的糖链异常蛋白,和/或糖链异常蛋白比率的检测用途。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110045125A (zh) * 2019-04-03 2019-07-23 中国医学科学院北京协和医院 一种用于诊断腹膜后纤维化的生物标志物及其用途
CN110161245A (zh) * 2019-06-21 2019-08-23 上海中优精准医疗科技股份有限公司 一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒及其检测方法
CN111253491A (zh) * 2020-01-19 2020-06-09 北京热景生物技术股份有限公司 一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-磁性载体偶联复合物
CN111381044A (zh) * 2018-12-30 2020-07-07 糖谱(北京)科技有限公司 一种适合质谱检测的糖链结构异常蛋白的前处理组合物、前处理方法及应用
CN112129948A (zh) * 2020-08-16 2020-12-25 浙江瑞生医疗科技有限公司 异常糖链糖蛋白检测试剂及其制备方法
WO2021143577A1 (zh) * 2020-01-19 2021-07-22 北京热景生物技术股份有限公司 一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-大分子载体偶联复合物
CN113655035A (zh) * 2021-08-12 2021-11-16 深圳上泰生物工程有限公司 一种糖缺失性转铁蛋白分离方法及检测方法与试剂盒

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994022013A1 (en) * 1993-03-22 1994-09-29 Zynaxis, Inc. Immunoassay for determination of cells
EP2339343A1 (en) * 2009-12-08 2011-06-29 JNC Corporation Magnetic particles and method for producing thereof
CN102147415A (zh) * 2010-12-30 2011-08-10 上海市肿瘤研究所 一种快速磁分离法主导的肝癌甲胎蛋白变异体检测试剂盒
CN103645325A (zh) * 2013-12-12 2014-03-19 复旦大学 一种抗体辅助的凝集素液相悬浮芯片多重检测糖蛋白糖链结构的方法
CN104714026A (zh) * 2014-12-31 2015-06-17 北京热景生物技术有限公司 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用
CN204422547U (zh) * 2014-12-31 2015-06-24 北京热景生物技术有限公司 一种甲胎蛋白异质体的分离检测试剂盒及装置
CN204594781U (zh) * 2015-03-30 2015-08-26 北京热景生物技术有限公司 一种磁性颗粒分离转移装置及应用其的分析装置
CN105785043A (zh) * 2016-04-06 2016-07-20 上海良润生物医药科技有限公司 用于定量检测afp-l3%的试剂盒

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994022013A1 (en) * 1993-03-22 1994-09-29 Zynaxis, Inc. Immunoassay for determination of cells
EP2339343A1 (en) * 2009-12-08 2011-06-29 JNC Corporation Magnetic particles and method for producing thereof
CN102147415A (zh) * 2010-12-30 2011-08-10 上海市肿瘤研究所 一种快速磁分离法主导的肝癌甲胎蛋白变异体检测试剂盒
CN103645325A (zh) * 2013-12-12 2014-03-19 复旦大学 一种抗体辅助的凝集素液相悬浮芯片多重检测糖蛋白糖链结构的方法
CN104714026A (zh) * 2014-12-31 2015-06-17 北京热景生物技术有限公司 一种甲胎蛋白异质体的分离检测组合物、系统及其应用
CN204422547U (zh) * 2014-12-31 2015-06-24 北京热景生物技术有限公司 一种甲胎蛋白异质体的分离检测试剂盒及装置
CN204594781U (zh) * 2015-03-30 2015-08-26 北京热景生物技术有限公司 一种磁性颗粒分离转移装置及应用其的分析装置
CN105785043A (zh) * 2016-04-06 2016-07-20 上海良润生物医药科技有限公司 用于定量检测afp-l3%的试剂盒

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111381044A (zh) * 2018-12-30 2020-07-07 糖谱(北京)科技有限公司 一种适合质谱检测的糖链结构异常蛋白的前处理组合物、前处理方法及应用
CN111381044B (zh) * 2018-12-30 2021-09-07 北京舜景生物医药技术有限公司 一种适合质谱检测的糖链结构异常蛋白的前处理组合物、前处理方法及应用
CN110045125A (zh) * 2019-04-03 2019-07-23 中国医学科学院北京协和医院 一种用于诊断腹膜后纤维化的生物标志物及其用途
CN110045125B (zh) * 2019-04-03 2022-08-09 中国医学科学院北京协和医院 一种用于诊断腹膜后纤维化的生物标志物及其用途
CN110161245A (zh) * 2019-06-21 2019-08-23 上海中优精准医疗科技股份有限公司 一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒及其检测方法
CN111253491A (zh) * 2020-01-19 2020-06-09 北京热景生物技术股份有限公司 一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-磁性载体偶联复合物
WO2021143577A1 (zh) * 2020-01-19 2021-07-22 北京热景生物技术股份有限公司 一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-大分子载体偶联复合物
CN111253491B (zh) * 2020-01-19 2022-03-25 北京尧景基因技术有限公司 一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-磁性载体偶联复合物
CN112129948A (zh) * 2020-08-16 2020-12-25 浙江瑞生医疗科技有限公司 异常糖链糖蛋白检测试剂及其制备方法
CN113655035A (zh) * 2021-08-12 2021-11-16 深圳上泰生物工程有限公司 一种糖缺失性转铁蛋白分离方法及检测方法与试剂盒

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