CN110161245A - 一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒,其包括TAP蛋白检测试剂和SF蛋白检测试剂,所述TAP蛋白检测试剂为凝集素,SF蛋白检测试剂包括第一试剂和第二试剂。本发明还涉及联合检测评估肿瘤康复状况的检测方法。上述试剂盒是肿瘤康复状态联合检测试剂盒,将用于帮助肿瘤患者掌握和了解经治疗后的肿瘤康复状态,并决定是否需要患者精准选择靶向药物治疗或免疫治疗;与常规检测手段相比,本发明通过进行两种标志物的联合检测,可同时了解肿瘤治疗相关的全景,为医生及患者提供肿瘤康复的状况评估,提供下一步治疗的一站式解决方案,从而惠及更多肿瘤患者。
Description
技术领域
本发明涉及肿瘤康复检测技术领域,尤其涉及一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒及其检测方法。
背景技术
肿瘤是威胁人类健康的第三大疾病。肿瘤的发生率随着医学技术的进步、人们防癌意识的增强呈现逐年下降的趋势,而部分癌种的死亡率仍然居高不下。肿瘤治疗方法包括:免疫治疗、手术治疗、放化疗、靶向治疗等。且目前肿瘤的预后(肿瘤康复状况)也日益受到人们的关注。
血清肿瘤标志物的检测是肿瘤诊断的常用方法之一,对于恶性肿瘤的诊断、疗效的观察、病情进展的判断和复发的监测等皆有一定的临床应用价值,其标志物包括甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、血清铁蛋白(SF)、肿瘤抗原153(CA153)、糖类抗原50(CA50)等,但目前一般仅通过单一指标的检测,其具有一定的阳性检出率,但存在误诊的可能性。
肿瘤发生发展过程为多个病理过程的系统反应,目前有文献报道在一些肿瘤中,由多个分子组成的组合标志物有着比单个分子以及临床病理指数更好的预后效果。因此,设计有效的组合标志物对于评估癌症的预后风险和康复状况具有重要的意义。
发明内容
为了克服现有技术中的缺陷,本发明提供一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒及其检测方法,该试剂盒是肿瘤康复状态联合检测试剂盒,将用于帮助肿瘤患者掌握和了解经治疗后的肿瘤康复状态,并决定是否需要患者精准选择靶向药物治疗或免疫治疗。
异常糖链糖蛋白(Tumor abnormal protein,TAP)主要由糖基化不完全或新的糖基转移酶被激活而产生新的糖基化引起,大量研究表明异常糖链糖蛋白的产生与肿瘤关系密切,如恶性肿瘤患者甲胎蛋白、转铁蛋白、碱性磷酸酶、r-谷氨酰转移酶、人绒毛膜促性腺激素、T抗原、a1抗胰蛋白酶及前列腺酸性磷酸酶等糖链结构发生改变,达到一定程度后,这类物质向血液排放,并较多地存在于外周血液。
血清铁蛋白(serum ferritin,SF)是去铁蛋白和铁核心Fe3+形成的复合物,是铁的贮存形式,其是判断机体是否缺铁或铁负荷过多的有效指标,SF在肝内合成并储存,肝细胞炎症反应可使SF合成增加,肝细胞变性坏死可使SF释入血中,SF上升程度与肝细胞受损轻重呈平行关系,但在严重低蛋白血症、缺铁性贫血可明显降低。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
本发明的第一个目的是提供一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒,其包括TAP检测试剂和SF检测试剂。
为了进一步优化上述联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒,本发明采取的技术措施还包括:
进一步地,所述TAP检测试剂为凝集素,所述凝集素选自植物凝集素、蜗牛凝集素中的至少一种。
进一步地,所述植物凝集素包括双孢子蘑菇凝集素、曼陀罗植物凝集素、菠萝蜜凝集素、黑色菜豆凝集素、田旋花凝集素、金雀儿凝集素、斑豆凝集素、怀槐凝集素、何首乌凝集素、荆豆凝集素中的至少一种。
进一步地,所述蜗牛凝集素为蜗牛凝集素HPA和/或HAA。
进一步地,所述SF检测试剂包括第一试剂和第二试剂;其中,所述第一试剂的组分为:缓冲液:8~60mM,电解质:120~150mM,封闭剂:1.5~2wt%,表面活性剂:0.08-0.2wt%,防腐剂:0.02-0.2wt%,促凝剂:0.1-0.5wt%;所述第二试剂的组分为:8~60mM,电解质:120~150mM,封闭剂:1.5~2wt%;金属螯合剂:8-15mM,表面活性剂:0.08-0.2wt%,防腐剂:0.02-0.2wt%,保护剂:5~8wt%,标记铁蛋白单克隆抗体的纳米胶乳微粒:0.2-1.0wt%。标记铁蛋白单克隆抗体的纳米胶乳微粒采用本领域的常规技术手段制备。
进一步地,所述肿瘤包括急性白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、肺癌、胃癌、食道癌、结肠癌、妇科恶性肿瘤、肝癌。
进一步地,所述肿瘤为肝癌。
本发明的第二个目的是提供一种联合检测评估肿瘤康复状况的检测方法,其包括:
采用TAP检测试剂检测TAP蛋白:取指端末梢血样本,推制成厚薄均匀的血片,自然干燥,将TAP检测试剂滴加在血片上,等血片上凝聚助剂自然干燥形成圆形斑点,将标本置于TAP集成阅片仪下,寻找特异形态的凝聚物;
采用SF检测试剂检测SF蛋白:取血清样本与第一试剂混匀,孵育,加入第二试剂混匀,读取第一吸光度值,再孵育预定时间后读取第二吸光度值,计算第二吸光度值与第一吸光度的差值,以待测吸光度差值在定标曲线上求得相应的铁蛋白含量。
与现有技术相比,本发明采用上述技术方案具有以下有益效果:
与常规检测手段相比,本发明通过进行两种标志物的联合检测,可同时了解肿瘤治疗相关的全景,为医生及患者提供肿瘤康复的状况评估,提供下一步治疗的一站式解决方案,从而惠及更多肿瘤患者。
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案,而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1
本实施例为一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒,其包括TAP检测试剂和SF检测试剂;所述TAP蛋白检测试剂为黑色菜豆凝集素和蜗牛凝集素HPA;SF蛋白检测试剂包括第一试剂和第二试剂;所述第一试剂的组分为:PB缓冲液:20mM,NaCl:130mM,BSA:1.5wt%,吐温-20:0.15wt%,叠氮钠:0.15wt%,PEG6000:0.3wt%;pH为7.5;所述第二试剂的组分为:PB缓冲液:20mM,NaCl:130mM,BSA:1.5wt%,EDTA:10mM,吐温-20:0.15wt%,叠氮钠:0.15wt%,蔗糖:7wt%,标记铁蛋白单克隆抗体的纳米胶乳微粒0.2wt%;pH为7.5。该试剂盒尤其适应于肝癌的康复状况的检测。
实施例2
本实施例为实施例1所述的试剂盒的检测方法,其步骤如下:
选取原发性肝癌的诊断标准确诊为肝癌患者50例:男30例,女20例,年龄25-70岁,平均54岁。所有患者均采用手术切除治疗,术前未经化疗。收集所有患者术前、术后1周、术后1个月指端末梢血,进行TAP含量测定;收集所有患者术前、术后1周、术后1个月血清样本,进行SF含量测定。选择良性肝脏疾病患者50例,男28例,女22例,平均年龄52岁。选择50例健康人员作为对照组,男27例,女23例,平均年龄55岁,排除器质性疾病,患者肝、肾功能正常。
TAP的检测:取各组研究对象指端末梢血,推制成厚薄均匀的血片3张,自然干燥。将TAP检测试剂充分摇匀,用滴管垂直滴加在血片上,每张3滴;等血片上凝聚助剂自然干燥形成圆形“斑点”,将标本置于TAP集成阅片仪下,寻找特异形态的凝聚物。TAP正常/无明显凝聚物:面积0~121μm2;TAP异常/凝聚物较小:面积121~225μm2;TAP异常/凝聚物较大:面积>225μm2;
SF的检测:血清样本(标准品或临床样本)与第一试剂混匀,于37℃孵育3-5分钟后,加入第二试剂混匀,37℃孵育30秒后读取第一吸光度值A1,再孵育5分钟后读取第二吸光度值A2,计算ΔA=A2-A1。以铁蛋白标准品浓度为X轴,以各浓度标准品测得的ΔA为Y轴绘制标准曲线,以待测样本ΔA在定标曲线上求得相应的铁蛋白含量。
根据上述检测,其结果显示TAP在原发性肝癌患者中的表达水平明显高于肝脏良性病变组与健康对照组。TAP单独检测的阳性率及敏感度均高于SF的检测,其与SF联合检测可以提高肝癌的诊断率,敏感性可达91.7%,阳性率达到82.3%,且与TAP、SF单独检测比较均具有显著差异。同时,肝癌患者手术后1周复查TAP水平较术前差别不大,而手术后1个月TAP值较术前显著降低,且末梢血TAP水平的动态变化与患者的无复发生存率显著相关。因此,TAP和SF可作为肝癌诊断及康复情况的联合检测指标。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述,但其只作为范例,本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言,任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此,在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改,都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (6)
1.一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒,其特征在于,包括TAP检测试剂和SF检测试剂。
2.根据权利要求1所述的一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒,其特征在于,所述TAP检测试剂为凝集素,所述凝集素选自植物凝集素、蜗牛凝集素中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒,其特征在于,所述SF检测试剂包括第一试剂和第二试剂;其中,所述第一试剂的组分为:缓冲液:8~60mM,电解质:120~150mM,封闭剂:1.5~2wt%,表面活性剂:0.08-0.2wt%,防腐剂:0.02-0.2wt%,促凝剂:0.1-0.5wt%;所述第二试剂的组分为:8~60mM,电解质:120~150mM,封闭剂:1.5~2wt%;金属螯合剂:8-15mM,表面活性剂:0.08-0.2wt%,防腐剂:0.02-0.2wt%,保护剂:5~8wt%,标记铁蛋白单克隆抗体的纳米胶乳微粒:0.2-1.0wt%。
4.根据权利要求1所述的一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒,其特征在于,所述肿瘤包括急性白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、肺癌、胃癌、食道癌、结肠癌、妇科恶性肿瘤、肝癌。
5.根据权利要求4所述的一种联合检测评估肿瘤康复状况试剂盒,其特征在于,所述肿瘤为肝癌。
6.一种联合检测评估肿瘤康复状况的检测方法,其特征在于,包括:
采用TAP检测试剂检测TAP蛋白:取指端末梢血样本,推制成厚薄均匀的血片,自然干燥,将TAP检测试剂滴加在血片上,等血片上凝聚助剂自然干燥形成圆形斑点,将标本置于TAP集成阅片仪下,寻找特异形态的凝聚物;
采用SF检测试剂检测SF蛋白:取血清样本与第一试剂混匀,孵育,加入第二试剂混匀,读取第一吸光度值,再孵育预定时间后读取第二吸光度值,计算第二吸光度值与第一吸光度的差值,以待测吸光度差值在定标曲线上求得相应的铁蛋白含量。
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