CN105137089A

CN105137089A - 一种血清铁蛋白含量检测试剂盒

Info

Publication number: CN105137089A
Application number: CN201510540475.4A
Authority: CN
Inventors: 陈媛; 许琴; 陈思思; 方蓉; 张闻; 周海滨; 王建飞
Original assignee: NINGBO RUI BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: NINGBO RUI BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2015-08-28
Filing date: 2015-08-28
Publication date: 2015-12-09
Anticipated expiration: 2035-08-28
Also published as: CN105137089B

Abstract

本发明涉及一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，具有准确度高、抗干扰能力强等特点。其包括试剂R1、试剂R2和铁蛋白标准品；试剂R1的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，促凝剂：0.5-5wt％；试剂R2的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，金属螯合剂：3-10mM，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，保护剂：3-10wt％，铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒：0.05-0.5wt％。

Description

一种血清铁蛋白含量检测试剂盒

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，尤其涉及一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，属于医学检测技术领域。

背景技术

血清铁蛋白(serumferritsn，SF)简称铁蛋白，是广泛存在于生物机体内的一种贮存铁的可溶组织蛋白，由一个蛋白质外壳和一个铁核心构成。SF的铁核心具有强大的结合铁和贮存铁的能力，以维持机体铁的供应和血红蛋白的相对稳定。

研究表明，血清铁蛋白的含量与机体储存铁是成一定比例的，lug/L的血清铁蛋白对应于8-l0mg或每公斤体重120ug储存铁。血清铁蛋白作为一个生物标志物在医学检验中最常应用于评价体内储存铁的状况及诊断缺铁性贫血。不同的检测方法确定的正常参考值都有所差别，通常成年男性血清铁蛋白的正常参考值都在30-300ng/mL左右，成年女性血清铁蛋白的正常参考值在10-160ng/mL左右，血清铁蛋白水平在妊娠期及急性贫血时降低。临床上血清铁蛋白的检测能甄别出缺铁的早期阶段，从而能尽早地采取调整膳食结构或补充铁剂等措施，预防缺铁性贫血的发生。

肝脏是合成和储存铁蛋白的主要场所，当肝脏发生炎症，其代谢就发生障碍，铁蛋白随之发生变化。一般肝炎急性期、慢性肝炎活动期、肝硬化活动期，血清铁蛋白显著增高。而且肝细胞损伤越严重，其含量越高。国内报道肝癌患者阳性率高达90％。肝癌患者治疗有效者血清铁蛋白下降，而恶化和再发者升高，持续增高则予后不良，故血清铁蛋白测定可作为疗效监测手段之一。血清铁蛋白还是一个非特异性的肿瘤标志物，如患肝癌、肺癌、胰癌、白血病等时，癌细胞合成的铁蛋白增加，均能使血清铁蛋白升高。

目前，定量检测SF的方法主要有放射免疫分析法、酶联免疫分析法、时间分辨焚光免疫分析法、胶体金法和化学发光免疫分析法。每种检测方法都有各自的优势，但在检测准确度、耗时、安全性、检测价格及操作等方面又存在一定局限性，限制了以上检测方法的广泛应用。

发明内容

本发明目的是为了提供一种准确度高、重复性好、抗干扰能力强、线性范围宽的血清铁蛋白含量检测试剂盒。

本发明的上述目的可通过下列技术方案来实现：一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，试剂盒包括试剂R1、试剂R2和铁蛋白标准品；

试剂R1的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，促凝剂：0.5-5wt％；

试剂R2的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，金属螯合剂：3-10mM，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，保护剂：3-10wt％，铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒：0.05-0.5wt％。

本发明中试剂R1是以5-50mM的缓冲液为母液，向母液中加入电解质、封闭剂、表面活性剂、防腐剂和促凝剂配制而成。

本发明中试剂R2是以5-50mM的缓冲液为母液，向母液中加入电解质、封闭剂、金属螯合剂、表面活性剂、防腐剂、保护剂和铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒配制而成。

在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，铁蛋白标准品为用标准品稀释液稀释至100-1000ng/mL的。

在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，标准品稀释液的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，BSA：0.5-3wt％，金属螯合剂：3-10mM，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，保护剂：3-10wt％。本发明中标准品稀释液是以5-50mM的缓冲液为母液，向母液中加入电解质、BSA、金属螯合剂、表面活性剂、防腐剂和保护剂配制而成。

在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，标准品稀释液的pH为7-8。

在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，试剂R1和试剂R2的pH均为7-8。

作为优选，试剂R1、试剂R2和标准品稀释剂中的缓冲液均为醋酸-醋酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或2-吗啉乙磺酸缓冲液中的一种。进一步优选为磷酸盐缓冲液。

作为优选，试剂R1、试剂R2和标准品稀释剂中的电解质均为氯化钠、氯化钙中的一种。进一步优选为氯化钠。

作为优选，试剂R1、试剂R2的封闭剂均为BSA、酪蛋白、明胶、马血清、与偶联抗体不同来源的IgG中的一种。

作为优选，试剂R1、试剂R2和标准品稀释剂中的表明活性剂均为TritonX-100、吐温-20或布里杰-35中的一种。进一步优选为吐温-20。

作为优选，试剂R1、试剂R2和标准品稀释剂中的防腐剂均为叠氮钠或proclin系列中的一种。

作为优选，试剂R1中的促凝剂为PEG2000、PEG4000、PEG6000、PEG8000、硫酸葡聚糖钠中的一种。进一步优选为PEG6000。

作为优选，试剂R2和标准品稀释剂中的金属螯合剂均为EDTA。

作为优选，试剂R2和标准品稀释剂中的保护剂均为葡萄糖、蔗糖、海藻糖中的一种。

在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒通过将两株配对的铁蛋白单克隆抗体分别经过酶切、纯化后获得的F(ab’)₂片段与纳米胶乳微粒偶联后得到。

在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，纳米胶乳微粒的粒径为50-300nm。进一步优选为200nm。

在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，纳米胶乳微粒为表面带有羧基功能基团的聚苯乙烯胶乳微粒。

本发明采用化学交联方法，将具有高特异性、高亲和力的铁蛋白抗体偶联至聚苯乙烯胶乳微粒表面的羧基官能团上，当此微球与含有待测样本混合时，在合适的反应条件下，抗体与样本中抗原特异结合，形成抗原-抗体-胶乳微粒复合物，在短时间内迅速聚集在一起，改变反应液的散光或透光性能，并且在一定范围内，反应液吸光度值变化与待测样本中的抗原含量成正比关系，利用标准品绘制标准曲线，便可根据样本吸光度值变化测定待测物含量。

利用IgG抗体制备免疫比浊试剂的一个限制是易于受到测试样品类风湿因子引起的干扰。类风湿因子(RF)是抗人IgG分子Fc片段上抗原决定族的特异性抗体。大多动物来源的IgG类抗体，Fc段与人IgG的Fc段具有较高的同源性，能被RF识别并结合，所以在待测物质为阴性、RF阳性的检测样本中，免疫检测试剂有可能被RF捕获产生信号，从而导致假阳性结果。胃蛋白酶能酶切作用于IgG抗体连接两重链的二硫键靠C端处，使IgG抗体裂解成F(ab’)₂片段和Fc片段。F(ab’)₂片段由两个Fab’片段通过二硫键连接，保留了抗体的结合点。经过proteinG亲和纯化获得的F(ab’)₂片段与IgG相比，F(ab’)₂的特点是去掉了Fc段包括其被类风湿因子识别的位点，因此用F(ab’)₂片段制备的胶乳增强免疫比浊试剂就不会受到类风湿因子的干扰，提高检测的准确度与特异性。

与现有技术相比，本发明利用胶乳增强免疫比浊法研制的血清铁蛋白含量检测试剂盒具有准确度高、重复性好、抗干扰能力强、线性范围宽等特点，并能在多种全自动生化分析仪、特种蛋白分析仪上使用，更利于SF检测试剂盒在临床上的推广应用。

附图说明

图1为本发明实施例1血清铁蛋白含量检测试剂盒的定标曲线；

图2为本发明实施例1血清铁蛋白含量检测试剂盒的线性范围曲线；

图3为本发明实施例1血清铁蛋白含量检测试剂盒和对比例1试剂盒的相关性曲线。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例并结合附图说明，对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。

应用本发明试剂盒测定血清铁蛋白含量的测试条件为：采用日立7060全自动生化分析仪，设置检测波长为570nm/700nm，样本：试剂R1：试剂R2＝1:40:80，校准类型为非线性，校准方法为五点定位。

测试方法为：样本(标准品或临床样本)与试剂R1混匀，于37℃孵育3-5分钟后，加入试剂R2混匀，37℃孵育30秒后读取吸光度值A1，再孵育5分钟后读取吸光度值A2，计算ΔA＝A2-A1。以铁蛋白标准品浓度为X轴，以各浓度标准品测得的ΔA为Y轴绘制标准曲线，以待测样本ΔA在定标曲线上求得相应的铁蛋白含量。

实施例1：

本实施例血清铁蛋白含量检测试剂盒主要由试剂R1、试剂R2和铁蛋白校准品组成，

其中，试剂R1的组分为：PB缓冲液：10mM、NaCl：150mM、BSA：1wt％、吐温-20：0.1wt％、叠氮钠：0.1wt％、PEG6000：1wt％；pH为7.4；

试剂R2的组分为：PB缓冲液：10mM、NaCl：150mM、BSA：1wt％、EDTA：5mM、吐温-20：0.1wt％、叠氮钠：0.1wt％、蔗糖：5wt％、铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒：0.1wt％；pH为7.4；

铁蛋白标准品用标准品稀释液稀释进行梯度稀释至100、200、500、1000ng/mL，校准品稀释液的组分为：PB缓冲液：10mM、NaCl：150mM、BSA：1wt％、EDTA：5mM、吐温-20：0.1wt％、叠氮钠：0.1wt％、海藻糖：5wt％；pH为7.4。

其中，试剂R2中的铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒的制备过程为：

选取两株配对的铁蛋白单克隆抗体各100mg分别用0.2M的pH为4.5的醋酸钠缓冲液透析24h，以抗体：胃蛋白酶＝100:1的比例加入胃蛋白酶，于37℃水浴酶切24h，调节反应液pH值到7.0后，用proteinG亲和层析柱进行纯化，收集穿过液，即酶切纯化的铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段。

用50mM的pH6.0的MES缓冲液将表面带有羧基功能基团、直径为200nm的聚苯乙烯微粒稀释至终浓度为1％，加入50mM的EDAC，混合均匀，室温震荡反应20分钟。离心弃上清液，聚苯乙烯微粒用50mM的pH6.0的MES缓冲液清洗两次，然后将聚苯乙烯微粒重悬于50mM的pH6.0的MES缓冲液至终浓度为2％，最后超声进行分散。

将两株铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段均用50mM的pH为6.0的MES缓冲液稀释至2mg/mL，然后等体积混合均匀，再与超声分散后的聚苯乙烯微粒等体积混合，于室温下反应2小时。然后18000rpm离心30min弃上清液，再用pH为7.4的含0.5wt％BSA、0.1wt％吐温-20的50mMTris缓冲液重悬微粒，室温封闭反应1小时。再离心弃上清液，用同一缓冲液清洗微粒3次，得到铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒。

对比例1：

市售常规血清铁蛋白含量检测试剂盒。

将实施例1的试剂盒在本发明的测试条件下，采用本发明的测试方法进行性能测试。以铁蛋白标准品浓度为X轴，以各浓度标准品测得的ΔA为Y轴绘制定标曲线，见图1，以待测样本ΔA在定标曲线上求得相应的铁蛋白含量。

将本发明试剂盒进行灵敏度检测，测定空白液和4个不同铁蛋白浓度含量样品的ΔA，每个样品测10次，计算平均值和标准偏差(SD)，以样本吸光度-3SD大于空白吸光度+3SD的样本浓度作为铁蛋白检测试剂盒的最低检测灵敏度，结果见表1。

表1：本发明试剂盒的灵敏度测试结果

从表1可知，本发明检测试剂盒的灵敏度为5ng/mL。

将本发明试剂盒进行准确度检测，用实施例1试剂盒检测不同公司来源的含有铁蛋白的质控品，检测结果如表2所示。

表2：本发明试剂盒的准确度检测结果

从表2可知，铁蛋白含量检测值均在质控品的靶值范围内，且与靶值偏差均不超过10％，说明本发明试剂盒具有较好的检测准确度。

将本发明试剂盒进行精密度检测，用实施例1的试剂盒分别检测铁蛋白低值、中值和高值血清样本，每个样本重复测定20次，计算变异系数(CV)，检测结果如表3所示。

表3：本发明试剂盒精密度检测结果

测定次数	低值(ng/mL)	中值(ng/mL)	高值(ng/mL)
				1	80	333	839
2	79	323	840
				3	75	320	844
4	82	322	829
				5	77	326	851
6	82	330	846
				7	81	319	850

8	85	312	820
				9	80	329	837
10	78	317	819
				平均值(ng/mL)	79.9	323.1	837.5
SD	2.846	6.471	11.462
				CV	3.56％	2.00％	1.37％

从表3中可知，低、中、高值血清样本的CV值均在5％之内，说明本发明试剂盒精密度较好。

将本发明试剂盒进行线性范围检测，取一份铁蛋白高值血清样本(铁蛋白含量1214ng/mL)，用生理盐水梯度稀释，用实施例1的试剂盒检测样本中铁蛋白含量，结果见表4。然后以铁蛋白含量理论值为横坐标，检测值为纵坐标做回归分析得到图2。

表4：本发明试剂盒线性范围检测结果

稀释梯度	理论值(ng/mL)	检测值(ng/mL)	回收率
				1	1215	1215	100％
0.9	1094	1112	102％
				0.8	972	946	97％
0.7	851	835	98％
				0.6	729	750	103％
0.5	608	624	103％
				0.4	486	459	94％
0.3	365	345	95％
				0.2	243	256	105％
0.1	122	129	106％
				0	0	0.2

从表4和图2中铁蛋白梯度稀释的理论含量分析检测结果，发现线性各点检测回收率均在90％-110％范围内，R²＝0.9980，所以本试剂盒线性检测范围达1200ng/mL以上，说明本发明试剂盒线性较好。

将本发明试剂盒进行相关性分析，分别用本发明实施例1中的试剂盒和对比例1的试剂盒，按各自的参数，同时检测50份临床人血清样本(包含正常和异常样本)中铁蛋白含量，以对比例1试剂盒的铁蛋白含量检测值为横坐标，以本发明实施例1试剂盒的铁蛋白含量检测值为纵坐标，做回归分析，检测结果见图3，回归方程为Y＝1.0470X-10.648，相关系数R＝0.997。该结果表明，本发明试剂盒同对比例1试剂盒对于临床样本检测的相关性较好，具有很好的准确度。本发明制备的试剂盒可以替代市售常规试剂盒。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R1的pH还可以为7、7.1、7.2、7.3、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R1中的缓冲液还可以为醋酸-醋酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液；浓度还可以为5mM、8mM、12mM、15mM、18mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R1中的电解质还可以为氯化钙；浓度还可以为100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R1中的封闭剂还可以为酪蛋白、明胶、马血清、与偶联抗体不同来源的IgG；用量还可以为0.5wt％、0.8wt％、0.9wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、1.5wt％、1.8wt％、2wt％、2.1wt％、2.2wt％、2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.8wt％、2.9wt％、3wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R1中的表明活性剂还可以为TritonX-100、布里杰-35；用量还可以为0.05wt％、0.08wt％、0.09wt％、0.11wt％、0.12wt％、0.13wt％、0.15wt％、0.18wt％、0.2wt％、0.25wt％、0.3wt％、0.35wt％、0.4wt％、0.45wt％、0.5wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R1中的防腐剂还可以为proclin系列；用量还可以为0.05wt％、0.08wt％、0.09wt％、0.11wt％、0.12wt％、0.13wt％、0.15wt％、0.18wt％、0.2wt％、0.25wt％、0.3wt％、0.35wt％、0.4wt％、0.45wt％、0.5wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R1中的促凝剂还可以为PEG2000、PEG4000、PEG8000、硫酸葡聚糖钠；用量还可以为0.5wt％、0.8wt％、0.9wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、1.5wt％、1.8wt％、2wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％、5wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R2的pH还可以为7、7.1、7.2、7.3、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R2中的缓冲液还可以为醋酸-醋酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液；浓度还可以为5mM、8mM、12mM、15mM、18mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R2中的电解质还可以为氯化钙；浓度还可以为100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R2中的封闭剂还可以为酪蛋白、明胶、马血清、与偶联抗体不同来源的IgG；用量还可以为0.5wt％、0.8wt％、0.9wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、1.5wt％、1.8wt％、2wt％、2.1wt％、2.2wt％、2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.8wt％、2.9wt％、3wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R2中的金属螯合剂的浓度还可以为3mM、4mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R2中的表明活性剂还可以为TritonX-100、布里杰-35；用量还可以为0.05wt％、0.08wt％、0.09wt％、0.11wt％、0.12wt％、0.13wt％、0.15wt％、0.18wt％、0.2wt％、0.25wt％、0.3wt％、0.35wt％、0.4wt％、0.45wt％、0.5wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R2中的防腐剂还可以为proclin系列；用量还可以为0.05wt％、0.08wt％、0.09wt％、0.11wt％、0.12wt％、0.13wt％、0.15wt％、0.18wt％、0.2wt％、0.25wt％、0.3wt％、0.35wt％、0.4wt％、0.45wt％、0.5wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R2中的保护剂还可以为葡萄糖、海藻糖；用量还可以为3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％、4.8wt％、5.1wt％、5.2wt％、5.3wt％、5.5wt％、5.8wt％、6wt％、6.5wt％、7wt％、7.5wt％、8wt％、8.5wt％、9wt％、9.5wt％、10wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，试剂R2中铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒的用量还可以为0.05wt％、0.08wt％、0.09wt％、0.11wt％、0.12wt％、0.13wt％、0.15wt％、0.18wt％、0.2wt％、0.25wt％、0.3wt％、0.35wt％、0.4wt％、0.45wt％、0.5wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，标准品稀释液的pH还可以为7、7.1、7.2、7.3、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，标准品稀释剂中的缓冲液还可以为醋酸-醋酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液；浓度还可以为5mM、8mM、12mM、15mM、18mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，标准品稀释剂中的电解质还可以为氯化钙；浓度还可以为100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，标准品稀释剂中的BSA的用量还可以为0.5wt％、0.8wt％、0.9wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、1.5wt％、1.8wt％、2wt％、2.1wt％、2.2wt％、2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.8wt％、2.9wt％、3wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，标准品稀释剂中的金属螯合剂的浓度还可以为3mM、4mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，标准品稀释剂中的表明活性剂还可以为TritonX-100、布里杰-35；用量还可以为0.05wt％、0.08wt％、0.09wt％、0.11wt％、0.12wt％、0.13wt％、0.15wt％、0.18wt％、0.2wt％、0.25wt％、0.3wt％、0.35wt％、0.4wt％、0.45wt％、0.5wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，标准品稀释剂中的防腐剂还可以为proclin系列；用量还可以为0.05wt％、0.08wt％、0.09wt％、0.11wt％、0.12wt％、0.13wt％、0.15wt％、0.18wt％、0.2wt％、0.25wt％、0.3wt％、0.35wt％、0.4wt％、0.45wt％、0.5wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，标准品稀释剂中的保护剂还可以为葡萄糖、蔗糖；用量还可以为3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％、4.8wt％、5.1wt％、5.2wt％、5.3wt％、5.5wt％、5.8wt％、6wt％、6.5wt％、7wt％、7.5wt％、8wt％、8.5wt％、9wt％、9.5wt％、10wt％。

在上述血清铁蛋白含量检测试剂盒的实施方案及其替换方案中，纳米胶乳微粒的粒径还可以为50nm、80nm、100nm、120nm、130nm、140nm、150nm、160nm、170nm、180nm、190nm、210nm、220nm、230nm、240nm、250nm、280nm、300nm。

鉴于本发明实施例众多，各实施例实验数据庞大众多，不适合于此处逐一列举说明，但是各实施例所需要验证的内容和得到的最终结论均接近，故而此处不对各个实施例的验证内容进行逐一说明，仅以实施例1作为代表说明本发明申请优异之处。

本处实施例对本发明要求保护的技术范围中点值未穷尽之处，同样都在本发明要求保护的范围内。

本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。

尽管对本发明已作出了详细的说明并引证了一些具体实施例，但是对本领域熟练技术人员来说，只要不离开本发明的精神和范围可作各种变化或修正是显然的。

Claims

1.一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和铁蛋白标准品；

所述试剂R1的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，促凝剂：0.5-5wt％；

所述试剂R2的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，金属螯合剂：3-10mM，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，保护剂：3-10wt％，铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒：0.05-0.5wt％。

2.根据权利要求1所述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述铁蛋白标准品为用标准品稀释液稀释至100-1000ng/mL的。

3.根据权利要求2所述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述标准品稀释液的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，BSA：0.5-3wt％，金属螯合剂：3-10mM，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，保护剂：3-10wt％。

4.根据权利要求3所述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述标准品稀释液的pH为7-8。

5.根据权利要求1所述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的pH均为7-8。

6.根据权利要求1所述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述铁蛋白单克隆抗体F(ab’)₂片段致敏的纳米胶乳微粒通过将两株配对的铁蛋白单克隆抗体分别经过酶切、纯化后获得的F(ab’)₂片段与纳米胶乳微粒偶联后得到。

7.根据权利要求6所述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述纳米胶乳微粒的粒径为50-300nm。

8.根据权利要求6或7所述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述纳米胶乳微粒为表面带有羧基功能基团的聚苯乙烯胶乳微粒。