CN105911293A - 一种测定免疫球蛋白a的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定免疫球蛋白A的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分：试剂R1：缓冲液、无机盐离子、促凝剂、防腐剂、抗人类风湿因子抗体，试剂R2：缓冲液、稳定剂、防腐剂、胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的免疫球蛋白A的浓度。本发明具有检测准确度高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定免疫球蛋白A的试剂盒及其制备方法。
背景技术
免疫球蛋白分为五类，即免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、免疫球蛋白D和免疫球蛋白A,其主要作用是与抗原抗体免疫反应，生成抗原-抗体复合物，从而阻断病原体对机体的危害，使病原体失去致病作用,另一方面，免疫球蛋白有时也有致病作用,临床上的过敏症状如花粉引起的支气管痉挛，青霉素导致全身过敏反应，皮肤荨麻疹（俗称风疹块）等,免疫球蛋白制剂能增强人体抗病毒的能力，可作药用,如注射人血清或人胎盘中提取的丙种球蛋白制剂可防治麻疹、传染性肝炎等传染病。
免疫球蛋白A在正常人血清中的含量仅次于免疫球蛋白G，占血清免疫球蛋白含量的10～20%，从结构来看，免疫球蛋白A有单体、双体、三体及多聚体之分，按其免疫功能又分为血清型及分泌型两种，血清型免疫球蛋白A存在于血清中，其含量占总免疫球蛋白A的85%左右，血清型免疫球蛋白A虽有免疫球蛋白G和免疫球蛋白M的某些功能，但在血清中并不显示重要的免疫功能，分泌型免疫球蛋白A存在于分泌液中，如唾液、泪液、初乳、鼻和支气管分泌液、胃肠液、尿液、汗液等，分泌型免疫球蛋白A是机体粘膜局部抗感染免疫的主要抗体，故又称粘膜局部抗体，免疫球蛋白A不能通过胎盘，新生儿血清中无免疫球蛋白A抗体，但可从母乳中获得分泌型免疫球蛋白A，新生儿出生4～6个月后，血中可出现免疫球蛋白A，以后逐渐升高，到青少年期达到高峰。
临床上免疫球蛋白A升高常见的有：免疫球蛋白A型多发性骨髓瘤,系统性红斑狼疮，结节病，类风湿性关节炎，白塞氏综合征，门静脉性肝硬化，某些感染性疾病，湿疹，血小板减少症，Wiskott-Aldrich综合征，慢支缓解期等，分泌型免疫球蛋白A介于500～2500mg/L则病情重，病程长者<500mg/L，脐带血免疫球蛋白A升高：风疹，单纯疱疹，弓形体病，巨细胞病毒，柯萨奇病毒，革兰氏阴性杆菌宫内感染等。
临床上免疫球蛋白A降低：遗传性毛细血管扩张症，非IgA型多发性骨髓瘤，重链病，轻链病，吸收不良综合征，原发性无丙种球蛋白血症，继发性蛋白血症，继发性无丙种球蛋白血症，继发性免疫缺陷病，反复呼吸道感染，输血反应，自身免疫性疾病，肾病综合征，慢性淋巴细胞白血病，霍奇金病，遗传性胸腺发育不全，丙种球蛋白异常血症Ⅲ型，丙种球蛋白异常血症Ⅰ型，丙种球蛋白异常血症Ⅱ型等。
目前临床上使用较为广泛的免疫球蛋白A的检测方法为酶联免疫吸附法和高效液相色谱法，酶联免疫吸附法操作过程复杂，耗时长，且对操作人员有较高的专业技术要求高，而且检测不准确。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术操作复杂、测定准确度低的缺陷，而提供一种测定免疫球蛋白A的试剂盒及其制备方法。
本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种测定免疫球蛋白A的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 30~230 mmol/L
无机盐离子 150~500 mmol/L
促凝剂 10~45 g/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~0.8g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 80~200 mmol/L
稳定剂 15~35 g/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 1~8g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定免疫球蛋白A的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 130 mmol/L
无机盐离子 200 mmol/L
促凝剂 25g/L
防腐剂 0.7 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.5 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 140 mmol/L
稳定剂 20 g/L
防腐剂 0.7 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 8g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、MOPSO缓冲、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钠、氯化钾、硫酸钾中的一种或多种的组合，所述的促凝剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用叠氮钠、Proclin-300、苯酚中的一种或多种的组合。
作为优选，所述的试剂R1中，所述的抗人类风湿因子抗体是含有功能部位的完整抗体或抗体片段。
作为优选，所述的试剂R1中，所述的抗人类风湿因子抗体采用兔抗人多克隆抗体、羊抗人多克隆抗体、兔抗人单克隆抗体、羊抗人单克隆抗体中的一种。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、MOPSO缓冲、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用蔗糖、甘油、牛血清白蛋白中的一种或几种组合而成，所述的防腐剂采用叠氮钠、Proclin-300、苯酚中的一种或多种的组合。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体的制备方法为：先用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为80-120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，在20-37℃的条件下反应1小时，反应完成后加入猝灭剂，使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，然后将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，然后在超声分散仪上进行超声分散，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-2%时为止，然后边搅拌边加入抗人免疫球蛋白A抗体，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为0.5%-2.0%时为止，最后加入牛血清白蛋白，直至溶液中的牛血清白蛋白的浓度为15g/L为止，然后在4℃的条件下封闭8小时，即可制备得到胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体。
作为优选，所述的猝灭剂为2，2’-硫代双镍、2-甲基-1,3-丁二烯、反-1,3-戊二烯中的一种。
作为优选，所述的抗人免疫球蛋白A抗体为含有能与人免疫球蛋白A特异性结合的Fab功能部位的完整抗体或抗体片段。
作为优选，本发明还公开了上述测定免疫球蛋白A的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 30~230 mmol/L
无机盐离子 150~500 mmol/L
促凝剂 10~45 g/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~0.8 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 80~200 mmol/L
稳定剂 15~35 g/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 1~8g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的免疫球蛋白A的浓度。
作为优选，步骤（b）中，所述的试剂R1和试剂R2的体积比为3:1。
作为优选，步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1:5到1：150之间。
本发明的检测原理是：本发明主要采用抗原抗体反应的原理。血清样本中免疫球蛋白A抗原与吸附在聚苯乙烯微球上的抗人免疫球蛋白A抗体产生抗原抗体反应的凝集反应，形成抗原抗体复合物，其浊度的变化通过测定特定波长的吸光度值，即可得出免疫球蛋白A的含量。
样本中免疫球蛋白A的活性（mg/L）=CS×（mg/L）
式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS校准液中免疫球蛋白A的浓度。
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：本发明主要通过在试剂R1中添加了抗人类风湿因子抗体，在样本和试剂R1孵育的时候特异性的去除了人类风湿因子的干扰，从而有效的提高了本试剂盒的测定的准确度，而且本发明操作比较简单，适宜于广泛推广使用。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
Tris缓冲液 130 mmol/L
氯化钠 200 mmol/L
聚乙二醇-2000 25g/L
叠氮钠 0.7 g/L
羊抗人多克隆抗体 0.5g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MES缓冲液 140 mmol/L
牛血清白蛋白 20 g/L
苯酚 0.7 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 8g/L
其溶剂为纯化水。
实施例2
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
MES缓冲液 30mmol/L
氯化钾 500 mmol/L
聚乙烯吡咯烷酮 10g/L
苯酚 0.9 g/L
兔抗人单克隆抗体 0.2 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 200 mmol/L
甘油 15 g/L
叠氮钠 0.6 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 1g/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体的制备：先用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为100nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为3%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，在26℃的条件下反应1小时，反应完成后加入2，2’-硫代双镍，使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，然后将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，然后在超声分散仪上进行超声分散，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为2%时为止，然后边搅拌边加入抗人免疫球蛋白A抗体，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为1%时为止，最后加入牛血清白蛋白，直至溶液中的牛血清白蛋白的浓度为15g/L为止，然后在4℃的条件下封闭8小时，即可制备得到胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
Tris缓冲液 130 mmol/L
氯化钠 200 mmol/L
聚乙二醇-2000 25g/L
叠氮钠 0.7 g/L
羊抗人多克隆抗体 0.5 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MES缓冲液 140 mmol/L
牛血清白蛋白 20 g/L
苯酚 0.7 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 8g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长340nm，副波长700nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d)反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取225μl试剂R1与3μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入75μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d)根据样本中免疫球蛋白A的活性（mg/L）= CS × （mg/L）计算出样本中的免疫球蛋白A的浓度。
实施例4
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体的制备：先用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为3%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，在20℃的条件下反应1小时，反应完成后加入2-甲基-1,3-丁二烯，使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，然后将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，然后在超声分散仪上进行超声分散，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为2%时为止，然后边搅拌边加入抗人免疫球蛋白A抗体，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为1.0%时为止，最后加入牛血清白蛋白，直至溶液中的牛血清白蛋白的浓度为15g/L为止，然后在4℃的条件下封闭8小时，即可制备得到胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
MES缓冲液 30mmol/L
氯化钾 500 mmol/L
聚乙烯吡咯烷酮 10g/L
苯酚 0.9 g/L
兔抗人单克隆抗体 0.2 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 200 mmol/L
甘油 15 g/L
叠氮钠 0.6 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 1g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长340nm，副波长700nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d)反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取225μl试剂R1与3μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入75μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d)根据样本中免疫球蛋白A的活性（mg/L）= CS × （mg/L）计算出样本中的免疫球蛋白A的浓度。
表1为实施例1所制得的测定免疫球蛋白A的试剂盒以及实施例2所制得的测定免疫球蛋白A的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的免疫球蛋白A的浓度为 1.57 （g/L），测定结果见表1：
表1
由表1可知，本发明所制得的测定免疫球蛋白A的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表2为实施例1所制得的测定免疫球蛋白A的试剂盒以及实施例2所制得的测定免疫球蛋白A的试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的免疫球蛋白A的浓度为1.85 g/L，测定结果见表2：
表2
| 第1次（g/L） | 第2次（g/L） | 第3次（g/L） | 均值（g/L） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 1.85 | 1.80 | 1.84 | 1.83 | 1.08 |
| 实施例2 | 1.88 | 1.88 | 1.87 | 1.88 | 3.53 |
由表2可知，本发明所制得的测定免疫球蛋白A的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表3为实施例3所制得的测定免疫球蛋白A的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定以及实施例4所制得的测定免疫球蛋白A的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定，对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下：
表3
由表3可知本发明所制得的测定免疫球蛋白A的试剂盒的精密度比较好，而且由表3可知，实施例3为最优的选择。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (10)
1.一种测定免疫球蛋白A的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 30~230 mmol/L
无机盐离子 150~500 mmol/L
促凝剂 10~45 g/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~0.8 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 80~200 mmol/L
稳定剂 15~35 g/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 1~8g/L
其溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的一种测定免疫球蛋白A的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 130 mmol/L
无机盐离子 200 mmol/L
促凝剂 25g/L
防腐剂 0.7 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.5 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 140 mmol/L
稳定剂 20 g/L
防腐剂 0.7 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 8 g/L
其溶剂为纯化水。
3.根据权利要求1或2所述的一种测定免疫球蛋白A的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、MOPSO缓冲、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钠、氯化钾、硫酸钾中的一种或多种的组合，所述的促凝剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用叠氮钠、Proclin-300、苯酚中的一种或多种的组合，所述的抗人类风湿因子抗体采用兔抗人多克隆抗体、羊抗人多克隆抗体、兔抗人单克隆抗体、羊抗人单克隆抗体中的一种。
4.根据权利要求1或2所述的一种测定免疫球蛋白A的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、MOPSO缓冲、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用蔗糖、甘油、牛血清白蛋白中的一种或几种组合而成，所述的防腐剂采用叠氮钠、Proclin-300、苯酚中的一种或多种的组合。
5.根据权利要求1或2所述的一种测定免疫球蛋白A的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体的制备方法为：先用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为80-120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，在20-37℃的条件下反应1小时，反应完成后加入猝灭剂，使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，然后将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，然后在超声分散仪上进行超声分散，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-2%时为止，然后边搅拌边加入抗人免疫球蛋白A抗体，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为0.5%-2.0%时为止，最后加入牛血清白蛋白，直至溶液中的牛血清白蛋白的浓度为15g/L为止，然后在4℃的条件下封闭8小时，即可制备得到胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体。
6.根据权利要求5所述的一种测定免疫球蛋白A的试剂盒，其特征在于：所述的猝灭剂为2，2’-硫代双镍、2-甲基-1,3-丁二烯、反-1,3-戊二烯中的一种。
7.根据权利要求5所述的一种测定免疫球蛋白A的试剂盒，其特征在于：所述的抗人免疫球蛋白A抗体为含有能与人免疫球蛋白A特异性结合的Fab功能部位的完整抗体或抗体片段。
8.根据权利要求1或2所述的一种测定免疫球蛋白A的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 30~230 mmol/L
无机盐离子 150~500 mmol/L
促凝剂 10~45 g/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~0.8 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 80~200 mmol/L
稳定剂 15~35 g/L
防腐剂 0.6~0.9 g/L
胶乳包被抗人免疫球蛋白A抗体 1~8g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的免疫球蛋白A的浓度。
9.根据权利要求8所述的一种测定免疫球蛋白A的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的试剂R1和试剂R2的体积比为3:1。
10.根据权利要求8所述的一种测定免疫球蛋白A的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1:5到1：150之间。
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