CN114859048A - 一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,包括:第一试剂,包括:缓冲液、表面活性剂、盐、防腐剂、抗干扰物质;第二试剂,包括:纳米微球标记的CHI3L1多克隆抗体或纳米微球标记的两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体混合物。本发明解决了现有CHI3L1检测方法操作复杂的技术问题,实现了操作简便的技术效果。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域,具体而言,涉及一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒。
背景技术
壳多糖酶3样蛋白1(Chitinase-3-like protein 1)(CHI3L1)是糖基水解酶家族18中的一员,糖基水解酶家族18包括几丁质酶和几丁质酶相关蛋白(CLPs)。CHI3L1是一种凝集素,结合几丁质和肝素,但它没有几丁质酶活性。因为其分子量(40kDa)和其三个n端氨基酸的一个字母编码而被命名为YKL-40,也被称为人软骨糖蛋白-39。
CHI3L1功能性研究表明其可参与炎症紊乱、细胞迁移、组织重塑、肿瘤发生和纤维化过程。研究发现,高水平的CHI3L1可增加患者发生肝纤维化的风险,可能与CHI3L1引起细胞因子改变、导致炎症紊乱及激活固有免疫应答,进而促进纤维化发展。另外,CHI3L1可由HSC分泌,其血清浓度与由HSC和成纤维细胞所分泌的细胞外基质相关,因此,CHI3L1血清浓度在一定程度上可以反映肝纤维化的程度。国内外多项研究发现在酒精性肝病及非酒精性脂肪肝患者中血清CHI3L1水平较正常对照组升高,并与肝纤维化程度呈正相关,肝硬化患者中水平最高。Saitou等发现CHI3L1诊断明显肝纤维化、严重肝纤维化及早期肝硬化的受试者工作特征曲线下面积可分别达0.792、0.914、0.936,提示CHI3L1是一个潜在的诊断性能较好的血清学标记物。
目前CHI3L1检测方法有ELISA法、化学发光免疫分析法等,以上检测方法均采用双抗体夹心法原理,其中第一抗体(固定抗体、包被抗体)固定在酶标板、磁微粒等固相载体上,第二抗体(检测抗体、标记抗体)用于标记酶、发光物质等,其操作方法是样本先行与第一抗体结合,然后清洗去除多余的样本,再加入第二抗体形成三明治复合物,然后进行酶催化或发光反应。
存在的问题是:上述CHI3L1检测方法试剂成分多(3种或以上),操作复杂。
发明内容
本发明解决了现有CHI3L1检测方法操作复杂的技术问题,实现了检测过程操作简便的技术效果。
为解决上述问题,本发明提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,包括:第一试剂,包括:缓冲液、表面活性剂、盐、防腐剂、抗干扰物质;第二试剂,包括:纳米微球标记的CHI3L1多克隆抗体或纳米微球标记的两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体混合物。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:本发明提供的CHI3L1试剂盒,将两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体混合成混合抗体,或采用多克隆抗体作为一种试剂,解决了两种抗体分别单独作为一种试剂组分的问题,减少了试剂成分,进而配置更加简单,操作更简便。并且,采用均相分析法,节省了清洗步骤,不需要中间清洗步骤,操作人员在操作时只需将待检测品与第一试剂和第二试剂进行混合后检测即可,操作更加简便快捷。
分析方法如下:将待检测品加入第一试剂中,待检测品被第一试剂稀释,然后加入第二试剂,第二试剂中纳米微球标记的CHI3L1抗体与待检测品中的CHI3L1特异性结合形成抗原抗体复合物,进一步地,纳米微球聚合成复合物。复合物的大小及数量影响光的散射,复合物的量与待检测品中的CHI3L1浓度水平呈正相关关系,通过检测复合物对光的散射或透光率可对待检测品中的CHI3L1进行定量分析,操作简单快捷。
在本发明的一个实例中,试剂盒还包括校准物质,校准物质包括浓度范围在0-1000ng/mL的重组人CHI3L1蛋白溶液或干粉。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:校准物质是用于体外诊断仪器或检测系统的测量标准物质,是实现体外诊断试剂临床检测及监督检验结果准确一致的主要工具,也是保证量值传递的实物计量标准。校准物质是指定用来校准检测系统的,是考虑到它具有基质效应的情况下,人为赋予校准品的校准值。因此,通过检测浓度范围在0-1000ng/mL的重组人CHI3L1蛋白溶液或干粉,并获得校准曲线,则能够判断本发明提供的CHI3L1试剂盒对血清中的CHI3L1的检测是否准确,进一步提高了试剂盒检测的准确性。
在本发明的一个实例中,第一试剂还包括大分子有机物,大分子有机物为葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:上述大分子有机物用于提高待检测物中抗原与第二试剂中抗体反应速率,进而提高检测速度。
在本发明的一个实例中,抗干扰物质包括抗类风湿因子抗体。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:由于患者体内存在的类风湿因子会显著干扰免疫检测,因此,添加抗类风湿因子抗体,抗类风湿因子抗体能够消除待检测品中的干扰物质,使得检测结构更加准确。
在本发明的一个实例中,抗类风湿因子抗体包括羊抗人IgM抗体和鼠IgG抗体。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:羊抗人IgM抗体和鼠IgG抗体价格实惠,容易获得。
在本发明的一个实例中,CHI3L1多克隆抗体通过CHI3L1抗原表位肽Ⅰ的氨基酸链片段I Cys-Cys-Cys-Thr-Cys-Thr-Cys-Ala-Cys-Cys-Ala和CHI3L1抗原表位肽Ⅱ的氨基酸链片段ⅡAla-Thr-Gln-Cys-Cys-Ala-Thr-Cys-Ala-Ala混合作为免疫原制备而成。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:CHI3L1多克隆抗体通过两种CHI3L1抗原混合后作为免疫原制成,容易得到,解决了两种抗体分别单独作为一种试剂组分的问题,减少了试剂成分,配置更加简单。
在本发明的一个实例中,单克隆抗体混合物包括:CHI3L1单克隆抗体I,CHI3L1单克隆抗体I通过CHI3L1抗原表位肽Ⅰ的氨基酸链片段ICys-Cys-Cys-Thr-Cys-Thr-Cys-Ala-Cys-Cys-Ala作为免疫原制备而成;CHI3L1单克隆抗体Ⅱ,CHI3L1单克隆抗体Ⅱ通过CHI3L1抗原表位肽Ⅱ的氨基酸链片段ⅡAla-Thr-Gln-Cys-Cys-Ala-Thr-Cys-Ala-Ala作为免疫原制备而成。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:单克隆抗体混合物通过混合两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体得到,容易得到,解决了两种抗体分别单独作为一种试剂组分的问题,减少了试剂成分,配置更加简单。
在本发明的一个实例中,纳米微球包括聚苯乙烯微球和胶体金微球。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:聚苯乙烯微球和胶体金微球具有良好的吸附性能,且比表面积大,能够包被更多的抗原抗体复合物。
在本发明的一个实例中,第二试剂还包括缓冲液,蛋白,糖或甘油,防腐剂。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:缓冲液,蛋白,糖或甘油,起到稳定抗体的作用,防腐剂能够延长抗体的储存时间。
在本发明的一个实例中,纳米微球的粒径为200-300nm。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:纳米微球包被有抗原抗体复合物,通过检测复合物对光的散射或透光率可对样本中CHI3L1进行定量分析,选用粒径范围为200-300nm的纳米微球,改善试剂的灵敏度和提高线性范围,检测效果更佳。
附图说明
图1为本发明实施例提供的一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒的校准物质的校准曲线图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂,下面对本发明的具体实施例做详细的说明。
【实施例一】
本发明提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,包括:第一试剂,包括:缓冲液、表面活性剂、盐、防腐剂、抗干扰物质;第二试剂,包括:纳米微球标记的CHI3L1多克隆抗体或纳米微球标记的两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体混合物。
具体的,第一试剂还包括蛋白。缓冲液为磷酸盐缓冲液或4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES);表面活性剂为聚乙二醇或吐温20;盐为氯化钠;防腐剂为叠氮化钠;蛋白为牛血清白蛋白(BSA)。
具体的,抗干扰物质包括抗类风湿因子抗体。由于患者体内存在的类风湿因子会显著干扰免疫检测,因此,添加抗类风湿因子抗体,抗类风湿因子抗体能够消除待检测品中的干扰物质,使得检测结构更加准确。
进一步的,分析方法如下:将待检测品加入第一试剂中,待检测品被第一试剂稀释,然后加入第二试剂,第二试剂中纳米微球标记的CHI3L1抗体与待检测品中的CHI3L1特异性结合形成抗原抗体复合物,进一步地,纳米微球聚合成复合物。复合物的的大小及数量影响光的散射,复合物的量与待检测品中的CHI3L1浓度水平呈正相关关系,通过检测复合物对光的散射或透光率可对待检测品中的CHI3L1进行定量分析,操作简单快捷。采用均相分析法,节省了清洗步骤,不需要中间清洗步骤,操作人员在操作时只需将待检测品与第一试剂和第二试剂进行混合后检测即可,操作更加简便快捷。
进一步的,抗类风湿因子抗体包括羊抗人IgM抗体和鼠IgG抗体。羊抗人IgM抗体和鼠IgG抗体价格实惠,容易获得。
进一步的,试剂盒还包括校准物质,校准物质包括浓度范围在0-1000ng/mL的重组人CHI3L1蛋白溶液或干粉。
具体的,校准物质是用于体外诊断仪器或检测系统的测量标准物质,是实现体外诊断试剂临床检测及监督检验结果准确一致的主要工具,也是保证量值传递的实物计量标准。校准物质是指定用来校准检测系统的,是考虑到它具有基质效应的情况下,人为赋予校准品的校准值。因此,通过检测浓度范围在0-1000ng/mL的重组人CHI3L1蛋白溶液或干粉,并获得校准曲线,则能够判断本发明提供的CHI3L1试剂盒对血清中的CHI3L1的检测是否准确,进一步提高了试剂盒检测的准确性。
进一步的,校准物质还包括磷酸盐缓冲液,氯化钠,牛血清白蛋白(BSA),甘氨酸和叠氮化钠。
进一步的,将检测样本或校准物质加入第一试剂中,检测样本或校准物质被稀释,然后加入第二试剂,三者混合,第二试剂中纳米微球标记的CHI3L1抗体与检测样本或校准物质中的CHI3L1特异性结合形成抗原抗体复合物,进一步地,纳米微球聚合成复合物。复合物的的大小及数量影响光的散射。复合物的量与样本或校准物质中CHI3L1浓度水平呈正相关关系,通过检测复合物对光的散射或透光率可对检测样本或校准物质的CHI3L1进行定量分析,操作简单快捷。
进一步的,本发明提供的试剂盒采用全自动生化分析仪进行检测,分析速度更快,提高了检测速度。
进一步的,第一试剂还包括大分子有机物,大分子有机物为葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
具体的,该大分子有机物用于提高待检测物中抗原与第二试剂中抗体反应速率,进而提高检测速度。
进一步的,CHI3L1多克隆抗体通过CHI3L1抗原表位肽Ⅰ的氨基酸链片段I Cys-Cys-Cys-Thr-Cys-Thr-Cys-Ala-Cys-Cys-Ala和CHI3L1抗原表位肽Ⅱ的氨基酸链片段ⅡAla-Thr-Gln-Cys-Cys-Ala-Thr-Cys-Ala-Ala混合作为免疫原制备而成。
具体的,CHI3L1多克隆抗体通过两种CHI3L1抗原混合后作为免疫原制成,容易得到,解决了两种抗体分别单独作为一种试剂组分的问题,减少了试剂成分,配置更加简单。
进一步的,单克隆抗体混合物包括:CHI3L1单克隆抗体I,CHI3L1单克隆抗体I通过CHI3L1抗原表位肽Ⅰ的氨基酸链片段ICys-Cys-Cys-Thr-Cys-Thr-Cys-Ala-Cys-Cys-Ala作为免疫原制备而成;CHI3L1单克隆抗体Ⅱ,CHI3L1单克隆抗体Ⅱ通过CHI3L1抗原表位肽Ⅱ的氨基酸链片段ⅡAla-Thr-Gln-Cys-Cys-Ala-Thr-Cys-Ala-Ala作为免疫原制备而成。
具体的,单克隆抗体混合物通过混合两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体得到,容易得到,解决了两种抗体分别单独作为一种试剂组分的问题,减少了试剂成分,配置更加简单。
进一步的,纳米微球包括聚苯乙烯微球和胶体金微球。
具体的,聚苯乙烯微球和胶体金微球具有良好的吸附性能,且比表面积大,能够包被更多的抗原抗体复合物。
进一步的,第二试剂还包括缓冲液,蛋白,糖或甘油,防腐剂。
具体的,缓冲液,蛋白,糖或甘油,防腐剂能够延长抗体的储存时间。缓冲液为4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES),蛋白为牛血清白蛋白(BSA),糖为蔗糖,防腐剂为叠氮化钠。
进一步的,纳米微球的粒径为200-300nm。
具体的,纳米微球包被有抗原抗体复合物,通过检测复合物对光的散射或透光率可对样本中CHI3L1进行定量分析,选用粒径范围为200-300nm的纳米微球,改善试剂的灵敏度和提高线性范围,检测效果更佳。
【实施例二】
本发明提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒的校准物质,其原料组分及用量如下:
校准物质1:50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、20g/L BSA、20g/L甘氨酸、1g/L叠氮化钠;
校准物质2:50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、20g/L BSA、20g/L甘氨酸、1g/L叠氮化钠,62.5μg/L重组CHI3L1蛋白;
校准物质3:50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、20g/L BSA、20g/L甘氨酸、1g/L叠氮化钠,125μg/L重组CHI3L1蛋白;
校准物质4:50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、20g/L BSA、20g/L甘氨酸、1g/L叠氮化钠,250μg/L重组CHI3L1蛋白;
校准物质5:50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、20g/L BSA、20g/L甘氨酸、1g/L叠氮化钠,500μg/L重组CHI3L1蛋白;
校准物质6:50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、20g/L BSA、20g/L甘氨酸、1g/L叠氮化钠,1000μg/L重组CHI3L1蛋白。
【实施例三】
本实施例提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,包括:
第一试剂:100mmol/L HEPES(pH7.4)、2.0g/L聚乙二醇6000、2.0g/L BSA、50.0g/氯化钠、1g/L羊抗人IgM抗体、1g/L叠氮化钠;
第二试剂:20mmol/L HEPES(pH7.4)、2.5g/L聚苯乙烯微球标记的羊抗CHI3L1多克隆抗体、2.0g/L BSA、100g/L蔗糖、1g/L叠氮化钠。
具体的,聚苯乙烯微球的粒径为200nm。
在一个具体实施方式中,试剂盒采用全自动生化分析仪检测。将实施例二提供的校准物质1-6分别加入第一试剂后,37℃孵育5min,读测第1点样本A1,再分别加入第二试剂,37℃孵育3-5min,读测第2点样本A2,校准物质A=A2-A1;分析参数为:主波长570nm或600nm、副波长800nm,校准物质8μl,R1:180μl,R2:60μl。
在另一个具体实施方式中,试剂盒采用全自动生化分析仪检测,检测样本为血清。将检测样本加入第一试剂后,37℃孵育5min,读测第1点样本A1,再加入第二试剂,37℃孵育3-5min,读测第2点样本A2,检测样本A=A4-A3;分析参数为:主波长570nm或600nm、副波长800nm,检测样本8μl,R1:180μl,R2:60μl。
【实施例四】
本实施例提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,包括:
第一试剂:100mmol/L HEPES(pH7.4)、1.5g/L聚乙二醇6000、2.0g/L BSA、40.0g/氯化钠、0.5g/L鼠IgG、1g/L叠氮化钠;
第二试剂:20mmol/L HEPES(pH7.8)、1.5g/L聚苯乙烯微球标记的鼠抗CHI3L1单克隆抗体Ⅰ和Ⅱ的单克隆抗体混合物、2.0g/L BSA、100g/L蔗糖、1g/L叠氮化钠。
其中,鼠抗CHI3L1单克隆抗体Ⅰ和Ⅱ1比1混合。聚苯乙烯微球的粒径为300nm。
在一个具体实施方式中,试剂盒采用全自动生化分析仪检测。将实施例二提供的校准物质1-6分别加入第一试剂后,37℃孵育5min,读测第1点样本A1,再分别加入第二试剂,37℃孵育3-5min,读测第2点样本A2,校准物质A=样本A2-样本A1;分析参数为:主波长570nm或600nm、副波长800nm,校准物质8μl,R1:180μl,R2:60μl。
在另一个具体实施方式中,试剂盒采用全自动生化分析仪检测,检测样本为血清。将检测样本加入第一试剂后,37℃孵育5min,读测第1点样本A3,再加入第二试剂,37℃孵育3-5min,读测第2点样本A4,检测样本A=A4-A3;分析参数为:主波长570nm或600nm、副波长800nm,检测样本8μl,R1:180μl,R2:60μl。
【实施例五】
本实施例提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,包括:
第一试剂:100mmol/L HEPES(pH7.4)、1.2g/L聚乙二醇6000、2.0g/L BSA、30.0g/氯化钠、1g/L鼠IgG、1g/L叠氮化钠;
第二试剂:20mmol/L HEPES(pH7.4)、1.0g/L聚苯乙烯微球标记的鼠抗CHI3L1单克隆抗体Ⅰ和Ⅱ的单克隆抗体混合物、2.0g/L BSA、100g/L甘油、1g/L叠氮化钠。
其中,鼠抗CHI3L1单克隆抗体Ⅰ和Ⅱ2比1混合。聚苯乙烯微球的粒径为200nm。
在一个具体实施方式中,试剂盒采用全自动生化分析仪检测。将实施例二提供的校准物质1-6分别加入第一试剂后,37℃孵育5min,读测第1点样本A1,再分别加入第二试剂,37℃孵育3-5min,读测第2点样本A2,校准物质A=样本A2-样本A1;分析参数为:主波长570nm或600nm、副波长800nm,校准物质8μl,R1:180μl,R2:60μl。
在另一个具体实施方式中,试剂盒采用全自动生化分析仪检测,检测样本为血清。将检测样本加入第一试剂后,37℃孵育5min,读测第1点样本A3,再加入第二试剂,37℃孵育3-5min,读测第2点样本A4,检测样本A=A4-A3;分析参数为:主波长570nm或600nm、副波长800nm,检测样本8μl,R1:180μl,R2:60μl。
【实施例六】
本实施例提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,包括:
第一试剂:100mmol/L HEPES(pH7.4)、1.5g/L聚乙二醇6000、2.0g/L BSA、1g/L吐温20、30.0g/氯化钠、0.5g/L鼠IgG、1g/L叠氮化钠;
第二试剂:20mmol/L HEPES(pH7.4)、0.5g/L聚苯乙烯微球(300nm)标记的鼠抗CHI3L1单克隆抗体Ⅰ、0.5g/L聚苯乙烯微球(200nm)标记的鼠抗CHI3L1单克隆抗体Ⅱ、2.0g/L BSA、100g/L甘油、1g/L叠氮化钠。
在一个具体实施方式中,试剂盒采用全自动生化分析仪检测。将实施例二提供的校准物质1-6分别加入第一试剂后,37℃孵育5min,读测第1点样本A1,再分别加入第二试剂,37℃孵育3-5min,读测第2点样本A2,校准物质A=A2-A1;分析参数为:主波长570nm或600nm、副波长800nm,校准物质8μl,R1:180μl,R2:60μl。
在另一个具体实施方式中,试剂盒采用全自动生化分析仪检测,检测样本为血清。将检测样本加入第一试剂后,37℃孵育5min,读测第1点样本A3,再加入第二试剂,37℃孵育3-5min,读测第2点样本A4,检测样本A=A4-A3;分析参数为:主波长570nm或600nm、副波长800nm,检测样本8μl,R1:180μl,R2:60μl。
【实施例七】
将实施例3-6试剂盒用全自动生化分析仪检测,并制作校准曲线,以校准物质浓度为X轴,以相对应校准物质的A2-A1为Y轴,做曲线图,见图1。校准曲线能够用于判断本发明提供的CHI3L1试剂盒对血清中的CHI3L1的检测是否准确。
【实施例八】
收集222例肝组织活检阴性和126例肝组织活检阳性患者的血清,以验证试剂盒的检测准确效果。用实施例5提供的第一试剂和第二试剂进行测试,以超过80ng/ml作为阳性诊断值,结果见表1,表1为本发明提供的CHI3L1试剂盒的检测结果与肝组织活检肝纤维化临床一致率统计表。
表1
由表1可知,Y=108/(18+108)*100%,即阳性符合率为85.71%;X=196/(196+26)*100%,即阴性符合率为88.29%;Z=(196+108)/(196+18+26+108)*100%,即总一致率为87.36%,表明本发明提供的试剂盒的检测准确率佳,适用于CHI3L1检测。
虽然本发明披露如上,但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员,在不脱离本发明的精神和范围内,均可作各种更动与修改,因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。
Claims (10)
1.一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,包括:
第一试剂,包括:缓冲液、表面活性剂、盐、防腐剂、抗干扰物质;
第二试剂,包括:纳米微球标记的CHI3L1多克隆抗体或纳米微球标记的两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体混合物。
2.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,还包括校准物质,所述校准物质包括浓度范围在0-1000ng/mL的重组人CHI3L1蛋白溶液或干粉。
3.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,所述第一试剂还包括大分子有机物,所述大分子有机物为葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,所述抗干扰物质包括抗类风湿因子抗体。
5.根据权利要求4所述的壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,所述抗类风湿因子抗体包括羊抗人IgM抗体和鼠IgG抗体。
6.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,所述CHI3L1多克隆抗体通过CHI3L1抗原表位肽Ⅰ的氨基酸链片段ICys-Cys-Cys-Thr-Cys-Thr-Cys-Ala-Cys-Cys-Ala和CHI3L1抗原表位肽Ⅱ的氨基酸链片段Ⅱ Ala-Thr-Gln-Cys-Cys-Ala-Thr-Cys-Ala-Ala混合作为免疫原制备而成。
7.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,所述单克隆抗体混合物包括:
CHI3L1单克隆抗体I,所述CHI3L1单克隆抗体I通过CHI3L1抗原表位肽Ⅰ的氨基酸链片段I Cys-Cys-Cys-Thr-Cys-Thr-Cys-Ala-Cys-Cys-Ala作为免疫原制备而成;
CHI3L1单克隆抗体Ⅱ,所述CHI3L1单克隆抗体Ⅱ通过CHI3L1抗原表位肽Ⅱ的氨基酸链片段Ⅱ Ala-Thr-Gln-Cys-Cys-Ala-Thr-Cys-Ala-Ala作为免疫原制备而成。
8.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,所述纳米微球包括聚苯乙烯微球和胶体金微球。
9.根据权利要求1所述的壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,所述第二试剂还包括缓冲液,蛋白,糖或甘油,防腐剂。
10.根据权利要求7所述的壳多糖酶3样蛋白1试剂盒,其特征在于,所述纳米微球的粒径为200-300nm。
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