CN106018816A - 一种测定降钙素原的试剂盒 - Google Patents
一种测定降钙素原的试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106018816A CN106018816A CN201610359610.XA CN201610359610A CN106018816A CN 106018816 A CN106018816 A CN 106018816A CN 201610359610 A CN201610359610 A CN 201610359610A CN 106018816 A CN106018816 A CN 106018816A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- procalcitonin
- reagent
- mmol
- human
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
Abstract
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定降钙素原的试剂盒。本发明的目的在于解决现有技术中定降钙素原检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明所采用双试剂，先将含有抗人类风湿因子抗体的试剂R1与样本相混合，使得样本中的类风湿因子抗原与试剂R1中的抗人类风湿因子抗体结合形成抗原抗体复合物，以达到将类风湿因子抗原清除的目的；再将含有乳胶包被抗人降钙素原抗体的试剂R2与上述样本混合，降钙素原抗原发生特异性结合，形成不溶性的聚苯乙烯微球‑抗原‑聚苯乙烯微球颗粒复合物乳浊液，产生一定的浊度，在一定波长下进行浊度测定，即可测得样本中被检测降钙素原的含量。本发明具有准确度高、无污染、操作方便等优点。
Description
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定降钙素原的试剂盒。
背景技术
降钙素原（PCT）是一种蛋白质，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时它在血浆中的水平升高。自身免疫、过敏和病毒感染时PCT不会升高。局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症不会导致其升高。细菌内毒素在诱导过程中担任了至关重要的作用。
PCT反映了全身炎症反应的活跃程度。影响PCT水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。PCT水平的升高出现在严重休克、全身性炎症反应综合征和多器官功能紊乱综合征，即使没有细菌感染或细菌性病灶。但是，在这些病例中PCT水平通常低于那些有细菌性病灶的患者。从肠道释放细胞因子或细菌移位可能引起诱导。
PCT 来自定位于第11号染色体上( 11p15, 4)的单拷贝基因, 该基因由2800个碱基对组成, 含6个外显子和5个内含子。转录后在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网内翻译成降钙素原前体, 包括N 端84个氨基酸、活性降钙素和降钙蛋白三部分。降钙素原前体在内源多肽酶作用下剪掉nPro-CT 端单一序列, 生成116 氨基酸的PCT, 分子量约为13kD, PCT和降钙素具有一个相同的32个氨基酸的序列。PCT是无激素活性的降钙素前肽物质。正常代谢时,甲状腺C 细胞分泌并产生有激素活性的降钙素。PCT 在健康个体中的浓度非常低( <0.1ng /ml ), 并且在活体内外都是非常稳定的蛋白, 半衰期大约20~ 24h。
PCT 在内毒素等细胞因子诱导下, 2~ 3h 开始增加, LPS 后2h血浆中可检测到,6 ~ 8h 体内浓度快速升高, 12~ 48h到达峰值, 2~ 3d后恢复正常。随后有研究表明, PCT是由细菌内毒素、TNF-α、IL-6等因素作用于肝、脾、肾、肺的神经内分泌细胞或特殊细胞而产生。动物实验证明, PCT可能是一种次级炎症因子,本身不直接参与启动脓毒血症反应,但可放大并加重脓毒血症病理过程。
目前检测降钙素原的方法有很多，主要有放射免疫法、化学发光、胶体金法。放射免疫法会产生放射性物质，造成放射性环境污染；化学发光成品较高，且需要检测的仪器较为昂贵；胶体金法检测速度快，但只能定性或者半定量，检测结果不精确。
发明内容
本发明针对上述问题公开了一种测定降钙素原的试剂盒，克服了成本高、有污染、以及测定准确度低的问题。
本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：一种测定降钙素原的试剂盒，该试剂盒由试剂R1和试剂R2双液体组分组成，所述的试剂R1为加有抗人类风湿因子抗体、无机盐离子、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和加速剂的缓冲液；
作为优选，所述的试剂R2为加有乳胶包被抗人降钙素原抗体、无机盐离子、稳定剂 、防腐剂的缓冲液。所述的缓冲液为Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种组合而成。所述的无机盐离子为氯化钠、氯化钾、硫酸钾中的一种或多种组合而成。所述的加速剂为聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。所述的稳定剂为牛血清白蛋白、甘油、蔗糖、海藻糖、EDTA中的一种或多种组合而成。
作为优选方案，所述的防腐剂为苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种组合而成。所述的表面活性剂为吐温系列、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯月桂醚系列中的一种或多种组合而成。
作为优选方案，所述的乳胶包被抗人降钙素原抗体含有功能部位的完整抗体或抗体片段，或为兔抗人多克隆抗体或羊抗人多克隆抗体，或为兔抗人单克隆抗体或羊抗人单克隆抗体； 所述的乳胶包被抗人降钙素原抗体的粒径在40~500nm之间。
作为优选方案，所述的试剂盒中彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，它们包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
Tris缓冲液 30~130 mmol/L
氯化钠 100~300 mmol/L
聚乙二醇-6000 10~40 g/L
EDTA 10~70 mmol/L
吐温-80 0.5~1.5 mL/L
叠氮钠 0.4~0.9 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~1.8 g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
Tris缓冲液 50~150 mmol/L
牛血清白蛋白 14~56 g/L
氯化钠 40~180 mmol/L
叠氮钠 0.4~0.9 g/L
乳胶包被抗人降钙素原单克隆抗体 2~6 g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选方案，所述的试剂盒的的制备和使用方法包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好R1试剂：
Tris缓冲液 30~130 mmol/L
氯化钠 100~300 mmol/L
聚乙二醇-6000 10~40 g/L
EDTA 10~70 mmol/L
吐温-80 0.5~1.5 mL/L
叠氮钠 0.4~0.9 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~1.8 g/L
其溶剂为纯化水。
（b）按照下列组分含量配制好R2试剂：
Tris缓冲液 50~150 mmol/L
牛血清白蛋白 14~56 g/L
氯化钠 40~180 mmol/L
叠氮钠 0.4~0.9 g/L
乳胶包被抗人降钙素原单克隆抗体 2~6 g/L
其溶剂为纯化水。
（c）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应，进一步优选的，试剂R1与试剂R2的体积比为3 ：1，待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1：10到1：50之间。
（d）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（e）根据吸光度变化值计算出样本中的降钙素原的值。
作为优选方案，所述的乳胶包被抗人降钙素原抗体的配制方法如下:
（a）将粒径为80nm的胶乳颗粒，用50 mmol/L的MES缓冲液稀释胶乳颗粒到4.0 g/L，每mL溶液中加入EDAC 1.0 mg，室温反应2小时，在离心机内20000 rpm转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散；
（b）将步骤（a）的产物在离心机内20000 rpm转速下离心30分钟，弃上清，将沉淀悬浮于50mmol/L的MES缓冲液中，使得胶乳颗粒最终浓度为4g/L，超声分散，边搅拌边加入等体积的含抗人降钙素原抗体的MES稀释液，混合搅拌，室温反应2小时，胶乳颗粒最终浓度为4.0 g/L。
（c）将步骤（b）的产物在离心机内20000 rpm转速离心30分钟，弃上清，沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中,胶乳颗粒最终浓度为4.0 g/L,然后超声分散，加入BSA，4℃封闭过夜；离心去上清，用步骤（b）制得的分散液溶解胶乳颗粒，使胶乳颗粒终浓度为4.0 g/L，超声分散后制得乳胶包被抗人降钙素原抗体。
本发明所采用的胶乳增强免疫比浊法的反应原理是：先将含有抗人类风湿因子抗体的试剂R1与样本相混合，在37℃下孵育5分钟，使得样本中的类风湿因子抗原与试剂R1中的抗人类风湿因子抗体结合形成抗原抗体复合物，并凝集成大颗粒，以达到将类风湿因子抗原清除的目的。同时试剂R1中所含的EDTA与样本中的金属离子螯合，除去金属离子的干扰；再将含有乳胶包被抗人降钙素原抗体的试剂R2与上述中去除过类风湿因子和金属离子的样本中相应的降钙素原抗原发生特异性结合，在加速剂作用下形成不溶性的聚苯乙烯微球-抗原-聚苯乙烯微球颗粒复合物乳浊液，产生一定的浊度，其浊度高低与样本中的降钙素原抗原浓度成正比关系，在一定波长下进行浊度测定，即可测得样本中被检测降钙素原的含量。
样本中降钙素原（PCT）的活性（ng/mL）= CS ×（ng/mL）
式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS校准液中PCT的浓度
与现有技术相比，本发明具有检测灵敏度更高，检测准确性更好，不产生环境污染物等优点，另外检测也比较方便。
附图说明：
图1为使用实施例1中试剂盒与化学发光法的检测结果对比。
图2为使用实施例2中试剂盒与化学发光法的检测结果对比。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
Tris缓冲液 80 mmol/L
氯化钠 200 mmol/L
聚乙二醇-6000 25 g/L
EDTA 40 mmol/L
吐温-80 1.0 mL/L
叠氮钠 0.7g/L
抗人类风湿因子抗体 1.0 g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
Tris缓冲液 100 mmol/L
牛血清白蛋白 35 g/L
氯化钠 110 mmol/L
叠氮钠 0.65 g/L
乳胶包被抗人降钙素原单克隆抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
实施例2
试剂R1：
MES缓冲液 80 mmol/L
氯化钠 200 mmol/L
聚乙二醇-8000 25 g/L
EDTA 40 mmol/L
吐温-80 1.0 mL/L
叠氮钠 0.7g/L
抗人类风湿因子抗体 1.0 g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
MES缓冲液 100 mmol/L
牛血清白蛋白 35 g/L
氯化钠 110 mmol/L
叠氮钠 0.65 g/L
乳胶包被抗人降钙素原单克隆抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
试剂盒的制备和使用方法
1、乳胶包被抗人降钙素原单克隆抗体的制备：
（a）将粒径为80nm的胶乳颗粒，用50 mmol/L的MES缓冲液稀释胶乳颗粒到4.0 g/L，每mL溶液中加入EDAC 1.0 mg，室温反应2小时，在离心机内20000 rpm转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散；
（b）将步骤（a）的产物在离心机内20000 rpm转速下离心30分钟，弃上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，使得胶乳颗粒最终浓度为4g/L，超声分散，边搅拌边加入等体积的含抗人降钙素原抗体的MES稀释液，混合搅拌，室温反应2小时，胶乳颗粒最终浓度为4.0g/L。
（c）将步骤（b）的产物在离心机内20000 rpm转速离心30分钟，弃上清，沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中,胶乳颗粒最终浓度为4.0 g/L,然后超声分散，加入BSA，4℃封闭过夜；离心去上清，用步骤（b）制得的分散液溶解胶乳颗粒，使胶乳颗粒终浓度为4.0 g/L，超声分散后制得乳胶包被抗人降钙素原抗体。
2、按照下列组分含量配制好试剂：
（a）按照下列组分含量配制好R1试剂：
Tris缓冲液 80 mmol/L
氯化钠 200 mmol/L
聚乙二醇-6000 25 g/L
EDTA 40 mmol/L
吐温-80 1.0 mL/L
叠氮钠 0.7g/L
抗人类风湿因子抗体 1.0 g/L
其溶剂为纯化水。
（b）按照下列组分含量配制好R2试剂：
Tris缓冲液 100 mmol/L
牛血清白蛋白 35 g/L
氯化钠 110 mmol/L
叠氮钠 0.65 g/L
乳胶包被抗人降钙素原单克隆抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长600nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取224μl试剂R1与4μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入56μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d) 样本中类样本中降钙素原（PCT）的活性（ng/mL）= CS × （ng/mL）计算出样本中的降钙素原的活度。
实施例4
试剂盒的制备和使用方法
1、将粒径为80nm的胶乳颗粒，用50 mmol/L的MES缓冲液稀释胶乳颗粒到4.0 g/L，每mL溶液中加入EDAC 1.0 mg，室温反应2小时，在离心机内20000 rpm转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散；然后在离心机内20000 rpm转速下离心30分钟，弃上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，使得胶乳颗粒最终浓度为4g/L，超声分散，边搅拌边加入等体积的含抗人降钙素原抗体的MES稀释液，混合搅拌，室温反应2小时，胶乳颗粒最终浓度为4.0 g/L制得分散溶液。然后在离心机内20000 rpm转速离心30分钟，弃上清，沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中,胶乳颗粒最终浓度为4.0 g/L,然后超声分散，加入BSA，4℃封闭过夜。离心去上清，用制得的分散液溶解胶乳颗粒，使胶乳颗粒终浓度为4.0 g/L，再次超声分散后制得乳胶包被抗人降钙素原抗体。
2、按照下列组分含量配制好试剂：
（a）按照下列组分含量配制好R1试剂：
MES缓冲液 80 mmol/L
氯化钠 200 mmol/L
聚乙二醇-8000 25 g/L
EDTA 40 mmol/L
吐温-80 1.0 mL/L
叠氮钠 0.7g/L
抗人类风湿因子抗体 1.0 g/L
其溶剂为纯化水。
（b）按照下列组分含量配制好R2试剂：
试剂R2：
MES缓冲液 100 mmol/L
牛血清白蛋白 35 g/L
氯化钠 110 mmol/L
叠氮钠 0.65 g/L
乳胶包被抗人降钙素原单克隆抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长600nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取224μl试剂R1与4μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入56μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d) 样本中类样本中降钙素原（PCT）的活性（ng/mL）= CS × （ng/mL）计算出样本中的降钙素原的活度。
参照附图1，附图1为用实施例1所制得的一种测定降钙素原的试剂盒多次测定不同样本中降钙素原的测定结果，以及在同等条件下与化学发光法测定结果的对比分析。从相关性实验结果可见，本试剂盒与化学发光检测结果相关性很好，相关方程 y=1.0457 x+0.0265，R2=0.9922，从结果可以看出本试剂盒结果准确性可靠，相关性良好，可以应用于降钙素原（PCT）的检测。
参照附图2，附图2为用实施例2所制得的一种测定降钙素原的试剂盒多次测定不同样本中降钙素原的测定结果，以及在同等条件下与化学发光法测定结果的对比分析。从相关性实验结果可见，本试剂盒与化学发光检测结果相关性很好，相关方程 y=0.7381x+0.06，R2=0.9933，从结果可以看出本试剂盒结果准确性可靠，相关性良好，可以应用于降钙素原（PCT）的检测。
Claims (9)
1.一种测定降钙素原的试剂盒，该试剂盒由试剂R1和试剂R2双液体组分组成，其特征在于：所述的试剂R1为加有抗人类风湿因子抗体、无机盐离子、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和加速剂的缓冲液；所述的试剂R2为加有乳胶包被抗人降钙素原抗体、无机盐离子、稳定剂、防腐剂的缓冲液。
2.如权利要求1所述的一种测定降钙素原的试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液为Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种组合而成；所述的无机盐离子为氯化钠、氯化钾、硫酸钾中的一种或多种组合而成；所述的加速剂为聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种；所述的稳定剂为牛血清白蛋白、甘油、蔗糖、海藻糖、EDTA中的一种或多种组合而成。
3.如权利要求1所述的一种测定降钙素原的试剂盒，其特征在于：所述的防腐剂为苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种组合而成；所述的表面活性剂为吐温系列、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯月桂醚系列中的一种或多种组合而成。
4.如权利要求1所述的一种测定降钙素原的试剂盒，其特征在于：所述的乳胶包被抗人降钙素原抗体含有功能部位的完整抗体或抗体片段，或为兔抗人多克隆抗体或羊抗人多克隆抗体，或为兔抗人单克隆抗体或羊抗人单克隆抗体；所述的乳胶包被抗人降钙素原抗体的粒径在40~500nm之间。
5.根据权利要求1所述的一种测定降钙素原的试剂盒，其特征在于：所述的彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
Tris缓冲液 30~130 mmol/L
氯化钠 100~300 mmol/L
聚乙二醇-6000 10~40 g/L
EDTA 10~70 mmol/L
吐温-80 0.5~1.5 mL/L
叠氮钠 0.4~0.9 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~1.8 g/L
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
Tris缓冲液 50~150 mmol/L
牛血清白蛋白 14~56 g/L
氯化钠 40~180 mmol/L
叠氮钠 0.4~0.9 g/L
乳胶包被抗人降钙素原单克隆抗体 2~6 g/L
其溶剂为纯化水。
6.根据权利要求9所述的一种测定降钙素原的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒的的制备和使用方法包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好R1试剂：
Tris缓冲液 30~130 mmol/L
氯化钠 100~300 mmol/L
聚乙二醇-6000 10~40 g/L
EDTA 10~70 mmol/L
吐温-80 0.5~1.5 mL/L
叠氮钠 0.4~0.9 g/L
抗人类风湿因子抗体 0.2~1.8 g/L
其溶剂为纯化水；
（b）按照下列组分含量配制好R2试剂：
Tris缓冲液 50~150 mmol/L
牛血清白蛋白 14~56 g/L
氯化钠 40~180 mmol/L
叠氮钠 0.4~0.9 g/L
乳胶包被抗人降钙素原单克隆抗体 2~6 g/L
其溶剂为纯化水；
（c）将待测样本与试剂R1混合，使其充分反应；
（d）将步骤（c）的混合产物中加入试剂R2；
（e）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（f）根据吸光度变化值计算出样本中的降钙素原的值。
7.根据权利要求6所述的一种测定降钙素原的试剂盒的制备和使用方法，其特征在于：步骤（c）中所述的试剂R1与试剂R2的体积比为3 ：1。
8.根据权利要求6所述的一种测定降钙素原的试剂盒的制备和使用方法，其特征在于：步骤（c）中所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1：10到1：50之间。
9.根据权利要求1所述的一种测定降钙素原的试剂盒，其特征在于：所述的乳胶包被抗人降钙素原抗体的配制方法如下:
（a）将粒径为80nm的胶乳颗粒，用50 mmol/L的MES缓冲液稀释胶乳颗粒到4.0 g/L，每mL溶液中加入EDAC 1.0 mg，室温反应2小时，在离心机内20000 rpm转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散；
（b）将步骤（a）的产物在离心机内20000 rpm转速下离心30分钟，弃上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，使得胶乳颗粒最终浓度为4g/L，超声分散，边搅拌边加入等体积的含抗人降钙素原抗体的MES稀释液，混合搅拌，室温反应2小时，胶乳颗粒最终浓度为4.0g/L，
（c）将步骤（b）的产物在离心机内20000 rpm转速离心30分钟，弃上清，沉淀悬浮于50mmol/L的MES缓冲液中,胶乳颗粒最终浓度为4.0 g/L,然后超声分散，加入BSA，4℃封闭过夜；离心去上清，用步骤（b）制得的分散液溶解胶乳颗粒，使胶乳颗粒终浓度为4.0 g/L，超声分散后制得乳胶包被抗人降钙素原抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610359610.XA CN106018816A (zh) | 2016-05-27 | 2016-05-27 | 一种测定降钙素原的试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610359610.XA CN106018816A (zh) | 2016-05-27 | 2016-05-27 | 一种测定降钙素原的试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106018816A true CN106018816A (zh) | 2016-10-12 |
Family
ID=57094808
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610359610.XA Pending CN106018816A (zh) | 2016-05-27 | 2016-05-27 | 一种测定降钙素原的试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106018816A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107907692A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-04-13 | 山东诺安爱迪尔生物工程有限公司 | 一种降钙素原免疫比浊法检测试剂盒 |
| CN107918009A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-04-17 | 山东诺安爱迪尔生物工程有限公司 | 一种稳定的降钙素原检测试剂盒 |
| CN109725160A (zh) * | 2018-12-30 | 2019-05-07 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种降钙素原（pct）检测试剂盒 |
| CN111693708A (zh) * | 2019-03-11 | 2020-09-22 | 程明 | 一种降钙素原测定试剂盒及其测定方法 |
| CN114859048A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-08-05 | 美康生物科技股份有限公司 | 一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1110970A1 (de) * | 1999-12-22 | 2001-06-27 | Dade Behring Marburg GmbH | Gegen Procalcitonin gerichtete Antikörper, ihre Herstellung und Verwendung |
| CN103018464A (zh) * | 2012-12-12 | 2013-04-03 | 元升生物科技（上海）有限公司 | 一种测定降钙素原的试剂及该试剂的制备方法 |
| CN104483475A (zh) * | 2014-12-22 | 2015-04-01 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 纤维结合蛋白检测试剂盒 |
-
2016
- 2016-05-27 CN CN201610359610.XA patent/CN106018816A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1110970A1 (de) * | 1999-12-22 | 2001-06-27 | Dade Behring Marburg GmbH | Gegen Procalcitonin gerichtete Antikörper, ihre Herstellung und Verwendung |
| CN103018464A (zh) * | 2012-12-12 | 2013-04-03 | 元升生物科技（上海）有限公司 | 一种测定降钙素原的试剂及该试剂的制备方法 |
| CN104483475A (zh) * | 2014-12-22 | 2015-04-01 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 纤维结合蛋白检测试剂盒 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107907692A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-04-13 | 山东诺安爱迪尔生物工程有限公司 | 一种降钙素原免疫比浊法检测试剂盒 |
| CN107918009A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-04-17 | 山东诺安爱迪尔生物工程有限公司 | 一种稳定的降钙素原检测试剂盒 |
| CN109725160A (zh) * | 2018-12-30 | 2019-05-07 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种降钙素原（pct）检测试剂盒 |
| CN111693708A (zh) * | 2019-03-11 | 2020-09-22 | 程明 | 一种降钙素原测定试剂盒及其测定方法 |
| CN114859048A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-08-05 | 美康生物科技股份有限公司 | 一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106018816A (zh) | 一种测定降钙素原的试剂盒 | |
| CN105137089B (zh) | 一种血清铁蛋白含量检测试剂盒 | |
| Muthana et al. | Competition between serum IgG, IgM, and IgA anti-glycan antibodies | |
| WO2019148753A1 (zh) | 一种thsd7a抗体的检测试纸条及检测方法 | |
| CN111337691B (zh) | 一种灵敏、稳定的血清降钙素原测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| EP2357475B1 (en) | Method for measuring cystatin c in human body fluid | |
| CN107942069A (zh) | 一种ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN109633172A (zh) | 基于乳胶增强免疫比浊法的人尿液免疫球蛋白g检测试剂盒 | |
| CN107860929A (zh) | 一种血清淀粉样蛋白a的免疫比浊检测试剂和方法 | |
| CN111239421A (zh) | 一种定量检测脂联素adpn的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备与应用方法 | |
| CN106018299A (zh) | 一种测定血清淀粉样蛋白a的试剂盒及其制备方法 | |
| CN105067815A (zh) | 一种测定人血清中胃蛋白酶原i/ii含量的试剂盒 | |
| CN105223365A (zh) | Gp73胶乳增强免疫比浊法体外定量测定诊断试剂盒 | |
| CN105699665A (zh) | 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测试剂盒 | |
| Nakai et al. | Increased serum C‐reactive protein and decreased urinary aquaporin 2 levels are predictive of the efficacy of tolvaptan in patients with liver cirrhosis | |
| CN106771247A (zh) | 一种β2‑微球蛋白的诊断试剂盒 | |
| CN106053840A (zh) | 一种测定α1‑微球蛋白的试剂盒及其制备方法 | |
| CN112763725B (zh) | 一种胶乳比浊法测定c反蛋白检测试剂的制备及应用 | |
| CN106093425A (zh) | 一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒及其制备方法 | |
| JP4669929B2 (ja) | 試料の前処理方法及びこれを利用する免疫学的測定方法 | |
| CN106841596B (zh) | 一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒及其应用方法 | |
| JPS6327658B2 (zh) | ||
| JP6743322B2 (ja) | 生体試料中の（１→３）−β−Ｄ−グルカンの免疫学的分析方法、（１→３）−β−Ｄ−グルカン分析用キット、及び（１→３）−β−Ｄ−グルカンの免疫学的分析方法に使用するための生体試料用アルカリ前処理液 | |
| JPH04248465A (ja) | 結合可能なアナライトを測定するための免疫沈降法、およびこの方法を実施するための試薬 | |
| CN112285359A (zh) | 一种涎液化糖链抗原测定试剂盒及其检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20161012 |