CN106093425A - 一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒：试剂R1：缓冲液、无机盐离子、加速剂、表面活性剂、稳定剂、螯合剂、杀菌剂、抗氧化剂、防腐剂、抗免疫球蛋白G抗体，试剂R2：缓冲液、无机盐离子、稳定剂、助悬剂、表面活性剂、抗氧化剂、杀菌剂、防腐剂、胶乳包被抗AKA抗体，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的抗角蛋白抗体的浓度。本发明具有准确度高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒及其制备方法。
背景技术
抗角蛋白抗体（AKA），1979年Young等发现RA血清中有一种能与鼠食管角质层反应的抗体，并对RA具有特异性，命名为AKA。
抗角蛋白抗体（AKA）与类风湿因子在诊断类风湿(RA)时具有显著的相关性，抗角蛋白抗体（AKA）是判断类风湿预后的一种标志性抗体，特别是高浓度的抗角蛋白抗体（AKA）的类风湿患者，常提示预后不佳，同时抗角蛋白抗体（AKA）可出现在诊断未确诊的关节炎病人中，但随后确诊为类风湿患者，因此抗角蛋白抗体对类风湿患者早期诊断亦有一定的价值。
目前检测抗角蛋白抗体（AKA）的方法主要为间接免疫荧光分析法，但此法检测复杂，对结果的判读需要专业人士进行，且会造成荧光剂的污染,而且市场上的一些其它的方法也存在准确度不准的缺陷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术存在污染以及测定准确度低的缺陷，而提供一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒及其制备方法。
本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 15~185 mmol/L
无机盐离子 150~450 mmol/L
加速剂 5~25 g/L
表面活性剂 0.5~3.0 mL/L
稳定剂 15~25 g/L
螯合剂 28~62 mmol/L
杀菌剂 0.1~3 g/L
抗氧化剂 1~24 g/L
防腐剂 1~9 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 0.2~2.2 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50~150 mmol/L
无机盐离子 35~165 mmol/L
稳定剂 6~20 g/L
助悬剂 5~45 mmol/L
表面活性剂 0.5~3.0 mL/L
抗氧化剂 1~24g/L
杀菌剂 1~24g/L
防腐剂 0.1~0.9 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 1~8 g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 100 mmol/L
无机盐离子 250 mmol/L
加速剂 10 g/L
表面活性剂 2.0 mL/L
稳定剂 20 g/L
螯合剂 45 mmol/L
杀菌剂 1.5 g/L
抗氧化剂 15 g/L
防腐剂 5 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 1.0 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 100 mmol/L
无机盐离子 100 mmol/L
稳定剂 13 g/L
助悬剂 25 mmol/L
表面活性剂 2.0 mL/L
抗氧化剂 15g/L
杀菌剂 15g/L
防腐剂 0.5 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，所述的试剂 R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钠、氯化钾、氯化镁中的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用吐温-80、聚氧乙烯苯基醚中的一种，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或多种的组合，所述的螯合剂采用乙二胺四乙酸、双硫腙、酒石酸钾钠、8-羟基喹啉中的一种或多种的组合，所述的杀菌剂采用青霉素、链霉素、庆大霉素、四环素、土霉素中的一种或多种的组合，所述的抗氧化剂采用苯多酚、二丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钠、氯化钾、氯化镁中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或者多种的组合，所述的助悬剂采用阿拉伯胶、海藻酸钠、胶体二氧化硅、甘油中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用吐温-80、聚氧乙烯苯基醚中的一种，所述的抗氧化剂采用苯多酚、二丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一种或多种的组合，所述的杀菌剂采用青霉素、链霉素、庆大霉素、四环素、土霉素中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合。
作为优选，所述的胶乳包被抗AKA抗体的制备方法为：用60 mmol/L的甘氨酸缓冲液将粒径为40-500nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg 的1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在20℃-37℃的条件下反应6小时，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，然后将沉淀悬浮于60 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，超声分散，再使用离心机，在15000rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于60 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最终质量浓度为3%，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含8㎎/ml的抗抗角蛋白抗体的甘氨酸缓冲液，混合搅拌，在20℃-37℃的条件下反应2小时，使得聚苯乙烯微球最终质量浓度为1.5%，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，超声分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的浓度为15g/L，在4℃的条件下封闭8-16小时，即可制备得到胶乳包被抗AKA抗体。
作为优选，所述的抗抗角蛋白抗体为含有能与人抗角蛋白抗体特异性结合的Fab功能部位的单克隆完整抗体或抗体片段。
作为优选，本发明还公开了上述测定抗角蛋白抗体的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 15~185 mmol/L
无机盐离子 150~450 mmol/L
加速剂 5~25 g/L
表面活性剂 0.5~3.0 mL/L
稳定剂 15~25 g/L
螯合剂 28~62 mmol/L
杀菌剂 0.1~3 g/L
抗氧化剂 1~24 g/L
防腐剂 1~9 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 0.2~2.2 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50~150 mmol/L
无机盐离子 35~165 mmol/L
稳定剂 6~20 g/L
助悬剂 5~45 mmol/L
表面活性剂 0.5~3.0 mL/L
抗氧化剂 1~24g/L
杀菌剂 1~24g/L
防腐剂 0.1~0.9 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 1~8 g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的抗角蛋白抗体的浓度。
作为优选，步骤（b）中，所述的试剂R1与试剂R2的体积比为3:1。
作为优选，步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1:5到1:60之间。
本发明的检测原理是：先将含有抗免疫球蛋白G抗体的试剂R1与样本相混合，在37℃下孵育5分钟，使得样本中的免疫球蛋白G与试剂R1中的抗免疫球蛋白G抗体结合形成抗原抗体复合物，并凝集成大颗粒，以达到将有交叉反应的免疫球蛋白G清除的目的，再将含有包被了高特异性的抗AKA抗体的聚苯乙烯微球的缓冲液即试剂R2与上述中去除过免疫球蛋白G的样本中相应的抗角蛋白抗体发生特异性结合，在促凝剂作用下形成不溶性的聚苯乙烯微球-抗原-聚苯乙烯微球颗粒复合物乳浊液，产生一定的浊度，其浊度高低与样本中的抗角蛋白抗体抗原浓度成正比关系，在一定波长下进行浊度测定，即可测得样本中被检测抗角蛋白抗体的含量。
样本中抗角蛋白抗体（AKA）的活性（U/mL）= CS×（U/mL）
式中：ΔAT/min以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS/min以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS校准液中AKA的浓度。
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：本发明在试剂R1和试剂R2中添加了新型稳定剂海藻糖，在和抑菌剂青霉素，抗氧化剂丁基羟基茴香醚的协同作用下，大大提高了试剂中其它成分的稳定性，使得试剂整体的稳定性大大提升，试剂R1中添加了金属离子螯合剂，在样本的孵育中去除了金属离子的干扰，且添加了抗免疫球蛋白G抗体，在加速剂的作用下，可特异性的去除类风湿因子一类的免疫球蛋白G类抗体的干扰，使得结果更加准确，而且本发明所制得试剂盒无污染，操作方便。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
Tris缓冲液 100 mmol/L
氯化钠 250 mmol/L
聚乙二醇-2000 10 g/L
吐温-80 2.0 mL/L
海藻糖 20 g/L
乙二胺四乙酸 45 mmol/L
庆大霉素 1.5 g/L
二丁基羟基甲苯 15 g/L
苯甲酸钠 5 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 1.0 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 100 mmol/L
氯化钠 100 mmol/L
海藻糖 13 g/L
海藻酸钠 25 mmol/L
聚氧乙烯苯基醚 2.0 mL/L
二丁基羟基甲苯 15g/L
庆大霉素 15g/L
苯甲酸钠 0.5 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
实施例2
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
MES缓冲液 185 mmol/L
氯化镁 150 mmol/L
聚乙二醇-8000 25 g/L
聚氧乙烯苯基醚 3.0 mL/L
牛血清白蛋白 15 g/L
乙二胺四乙酸 28 mmol/L
链霉素 3 g/L
二丁基羟基甲苯 1 g/L
苯甲酸钠 9 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 0.2 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MES缓冲液 150 mmol/L
氯化钠 165 mmol/L
牛血清白蛋白 6 g/L
海藻酸钠 45 mmol/L
吐温-80 0.5 mL/L
丁基羟基茴香醚 24g/L
庆大霉素 24g/L
苯甲酸钠 0.1 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 1g/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗AKA抗体的制备：用60 mmol/L的甘氨酸缓冲液将粒径为120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg 的1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在28℃的条件下反应6小时，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，然后将沉淀悬浮于60 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，超声分散，再使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于60 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最终质量浓度为3%，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含8㎎/ml的抗抗角蛋白抗体的甘氨酸缓冲液，混合搅拌，在28℃的条件下反应2小时，使得聚苯乙烯微球最终质量浓度为1.5%，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，超声分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的浓度为15g/L，在4℃的条件下封闭10小时，即可制备得到胶乳包被抗AKA抗体；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
Tris缓冲液 100 mmol/L
氯化钠 250 mmol/L
聚乙二醇-2000 10 g/L
吐温-80 2.0 mL/L
海藻糖 20 g/L
乙二胺四乙酸 45 mmol/L
庆大霉素 1.5 g/L
二丁基羟基甲苯 15 g/L
苯甲酸钠 5 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 1.0 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 100 mmol/L
氯化钠 100 mmol/L
海藻糖 13 g/L
海藻酸钠 25 mmol/L
聚氧乙烯苯基醚 2.0 mL/L
二丁基羟基甲苯 15g/L
庆大霉素 15g/L
苯甲酸钠 0.5 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 4g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长546nm，副波长800nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取210μl试剂R1与5μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入70μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d) 根据样本中抗角蛋白抗体（AKA）的活性（U/mL）= CS × （U/mL）计算出样本中的抗角蛋白抗体的浓度。
实施例4
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗AKA抗体的制备：用60 mmol/L的甘氨酸缓冲液将粒径为100nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg 的1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在28℃的条件下反应6小时，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，然后将沉淀悬浮于60 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，超声分散，再使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于60 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最终质量浓度为3%，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含8㎎/ml的抗抗角蛋白抗体的甘氨酸缓冲液，混合搅拌，在28℃的条件下反应2小时，使得聚苯乙烯微球最终质量浓度为1.5%，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，超声分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的浓度为15g/L，在4℃的条件下封闭10小时，即可制备得到胶乳包被抗AKA抗体；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
MES缓冲液 185 mmol/L
氯化镁 150 mmol/L
聚乙二醇-8000 25 g/L
聚氧乙烯苯基醚 3.0 mL/L
牛血清白蛋白 15 g/L
乙二胺四乙酸 28 mmol/L
链霉素 3 g/L
二丁基羟基甲苯 1 g/L
苯甲酸钠 9 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 0.2 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MES缓冲液 150 mmol/L
氯化钠 165 mmol/L
牛血清白蛋白 6 g/L
海藻酸钠 45 mmol/L
吐温-80 0.5 mL/L
丁基羟基茴香醚 24g/L
庆大霉素 24g/L
苯甲酸钠 0.1 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 1g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长546nm，副波长800nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取210μl试剂R1与5μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入70μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d) 根据样本中抗角蛋白抗体（AKA）的活性（U/mL）= CS × （U/mL）计算出样本中的抗角蛋白抗体的浓度。
表1为实施例1所制得的测定抗角蛋白抗体的试剂盒以及实施例2所制得的测定抗角蛋白抗体的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的抗角蛋白抗体的浓度为 48 U/mL，测定结果见表1：
表1
| 第1次（U/mL） | 第2次（U/mL） | 第3次（U/mL） | 均值（U/mL） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 46 | 48 | 49 | 47.7 | 0.63 |
| 实施例2 | 45 | 48 | 46 | 46.3 | 3.54 |
由表1可知，本发明所制得的测定抗角蛋白抗体的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表2为实施例1所制得的测定抗角蛋白抗体的试剂盒以及实施例2所制得的测定抗角蛋白抗体的试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的抗角蛋白抗体的浓度为76 U/mL，测定结果见表2：
表2
| 第1次（U/mL） | 第2次（U/mL） | 第3次（U/mL） | 均值（U/mL） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 77 | 74 | 74 | 75.0 | 1.32 |
| 实施例2 | 76 | 72 | 76 | 74.7 | 1.71 |
由表2可知，本发明所制得的测定抗角蛋白抗体的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表3为实施例3所制得的测定抗角蛋白抗体的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定以及实施例4所制得的测定抗角蛋白抗体的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定，对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下：
表3
由表3可知本发明所制得的测定抗角蛋白抗体的试剂盒的精密度比较好，而且由表1可知，实施例3为最优的选择。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (9)
1.一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 15~185 mmol/L
无机盐离子 150~450 mmol/L
加速剂 5~25 g/L
表面活性剂 0.5~3.0 mL/L
稳定剂 15~25 g/L
螯合剂 28~62 mmol/L
杀菌剂 0.1~3 g/L
抗氧化剂 1~24 g/L
防腐剂 1~9 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 0.2~2.2 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50~150 mmol/L
无机盐离子 35~165 mmol/L
稳定剂 6~20 g/L
助悬剂 5~45 mmol/L
表面活性剂 0.5~3.0 mL/L
抗氧化剂 1~24g/L
杀菌剂 1~24g/L
防腐剂 0.1~0.9 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 1~8 g/L
其溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 100 mmol/L
无机盐离子 250 mmol/L
加速剂 10 g/L
表面活性剂 2.0 mL/L
稳定剂 20 g/L
螯合剂 45 mmol/L
杀菌剂 1.5 g/L
抗氧化剂 15 g/L
防腐剂 5 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 1.0 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 100 mmol/L
无机盐离子 100 mmol/L
稳定剂 13 g/L
助悬剂 25 mmol/L
表面活性剂 2.0 mL/L
抗氧化剂 15g/L
杀菌剂 15g/L
防腐剂 0.5 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 4g/L
其溶剂为纯化水。
3.根据权利要求1或2所述的一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钠、氯化钾、氯化镁中的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用吐温-80、聚氧乙烯苯基醚中的一种，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或多种的组合，所述的螯合剂采用乙二胺四乙酸、双硫腙、酒石酸钾钠、8-羟基喹啉中的一种或多种的组合，所述的杀菌剂采用青霉素、链霉素、庆大霉素、四环素、土霉素中的一种或多种的组合，所述的抗氧化剂采用苯多酚、二丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合。
4.根据权利要求1或2所述的一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钠、氯化钾、氯化镁中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或者多种的组合，所述的助悬剂采用阿拉伯胶、海藻酸钠、胶体二氧化硅、甘油中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用吐温-80、聚氧乙烯苯基醚中的一种，所述的抗氧化剂采用苯多酚、二丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一种或多种的组合，所述的杀菌剂采用青霉素、链霉素、庆大霉素、四环素、土霉素中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合。
5.根据权利要求1或2所述的一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：所述的胶乳包被抗AKA抗体的制备方法为：用60 mmol/L的甘氨酸缓冲液将粒径为40-500nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg 的1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在20℃-37℃的条件下反应6小时，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，然后将沉淀悬浮于60mmol/L的甘氨酸缓冲液中，超声分散，再使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于60 mmol/L的甘氨酸缓冲液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最终质量浓度为3%，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含8㎎/ml的抗抗角蛋白抗体的甘氨酸缓冲液，混合搅拌，在20℃-37℃的条件下反应2小时，使得聚苯乙烯微球最终质量浓度为1.5%，使用离心机，在15000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50mmol/L的甘氨酸缓冲液中，超声分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的浓度为15g/L，在4℃的条件下封闭8-16小时，即可制备得到胶乳包被抗AKA抗体。
6.根据权利要求5所述的一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：所述的抗抗角蛋白抗体为含有能与人抗角蛋白抗体特异性结合的Fab功能部位的单克隆完整抗体或抗体片段。
7.根据权利要求1或2所述的一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 15~185 mmol/L
无机盐离子 150~450 mmol/L
加速剂 5~25 g/L
表面活性剂 0.5~3.0 mL/L
稳定剂 15~25 g/L
螯合剂 28~62 mmol/L
杀菌剂 0.1~3 g/L
抗氧化剂 1~24 g/L
防腐剂 1~9 g/L
抗免疫球蛋白G抗体 0.2~2.2 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 50~150 mmol/L
无机盐离子 35~165 mmol/L
稳定剂 6~20 g/L
助悬剂 5~45 mmol/L
表面活性剂 0.5~3.0 mL/L
抗氧化剂 1~24g/L
杀菌剂 1~24g/L
防腐剂 0.1~0.9 g/L
胶乳包被抗AKA抗体 1~8 g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的抗角蛋白抗体的浓度。
8.根据权利要求7所述的一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的试剂R1与试剂R2的体积比为3:1。
9.根据权利要求7所述的一种测定抗角蛋白抗体的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1:5到1:60之间。
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