CN108373494A - 一种防止重组蛋白质降解的保护技术 - Google Patents

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李学斌
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Abstract

本发明涉及蛋白质分离保存技术领域，可以有效防止液态保存的重组蛋白降解，可以更好的维持蛋白的生物学活性。包括如下原料：蒸馏水、蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、氯化钠、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、甘油、Tween‑20、聚乙二醇。

Description

一种防止重组蛋白质降解的保护技术
技术领域
本发明涉及蛋白质分离保存技术领域。
技术背景
蛋白质保存的方式选择取决于蛋白质本身的特性和储存条件两个方面，蛋白质受空气，温度，水分，光线，样品的pH，时间，以及蛋白质本身的性质改变等多方面的影响。因此蛋白质的保存方式也有多种，按照样品存在的方式可分为液态和固态两种。
对于需要长期保存且短时间不用的蛋白可以保存在-70度，对于经常需要使用的蛋白，一般将蛋白放在-20度保存，为了避免蛋白反复冻融，一般的做法是在蛋白中加入一定量的甘油，但仅仅加入甘油，可以避免蛋白反复冻融，但不能有效的防止蛋白降解。保存的方式不当，会使蛋白在存储期内失去生物学活性造成事与愿违的窘况。因此为了防止蛋白降解，要在蛋白中加入一定量的保护剂，可以更好的维持蛋白的生物学活性。
保护剂的成分比较多，加入的量不同对蛋白的影响也不一样，多数蛋白质要求较为疏水的环境才能保存，通过加入某些物质来降低溶液的极性这类稳定剂是一类低分子量弱极性的有机化合物。它们的主要作用是影响水的黏性和表面张力，然后使溶液有序，可保护蛋白质以免变性失活。而对于浓度低于50ug/ml的蛋白质，此时，多亚基的蛋白质和辅助因子容易解离，而且容易吸附到容器的面物理丢失会变的非常明显。这种情况下，需要在缓冲液中加入一些非离子型污剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种蛋白保护技术，防止液态保存的重组蛋白降解。
本发明的目的是这样实现的：一种防止重组蛋白质降解的保护技术，包括如下原料：蒸馏水、蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、氯化钠、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、甘油、Tween-20、聚乙二醇。
作为优选方案，除蒸馏水以外其他原料的重量配比如下：蔗糖5－10g/50ml、牛血清白蛋白0.25－0.5g/50ml、甘氨酸0.5g/50ml、聚乙二醇（5000）0.5－7.5g/50ml、氯化钠5.85g/50ml、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g/50ml、甘油50%（体积分数）、Tween-20 0.02%（体积分数）。
作为进一步优选方案，除蒸馏水以外其他原料的重量配比如下：蔗糖5g/50ml、牛血清白蛋白0.5g/50ml、甘氨酸0.5g/50ml、聚乙二醇（5000）0.5g/50ml、氯化钠5.85g/50ml、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g/50ml、甘油50%（体积分数）、Tween-20 0.02%（体积分数）。
与现有的技术相比，本发明的有益效果在于：有效防止蛋白降解，较好的维持蛋白生物学活性。
下面通过实验进一步阐述本发明的有益效果，通过实施例进一步阐述本发明。
附图说明
图1为实验数据统计图。
具体实施方式：
实施例1：
一种防止重组蛋白质降解的保护技术，除蒸馏水以外其他原料的重量配比如下：蔗糖10g/50ml、牛血清白蛋白0.25g/50ml、甘氨酸0.5g/50ml、聚乙二醇（5000）0.5g/50ml、氯化钠5.85g/50ml、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g/50ml、甘油50%（体积分数）、Tween-20 0.02%（体积分数）；
其制备过程，包括以下步骤：
称取蔗糖10g、牛血清白蛋白0.25g、甘氨酸0.5g、聚乙二醇（5000）0.5g、氯化钠5.85g、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g加入到25ml蒸馏水中，室温搅拌待其溶解均匀然后再向拌匀后的混合液中其中加入甘油25ml、Tween-20 10ul,继续搅拌均匀。
实施例2：
一种防止重组蛋白质降解的保护技术，除蒸馏水以外其他原料的重量配比如下：蔗糖5g/50ml、牛血清白蛋白0.5g/50ml、甘氨酸0.5g/50ml、聚乙二醇（5000）0.5g/50ml、氯化钠5.85g/50ml、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g/50ml、甘油50%（体积分数）、Tween-20 0.02%（体积分数）；
其制备过程，包括以下步骤：
称取蔗糖5g、牛血清白蛋白0.5g、甘氨酸0.5g、聚乙二醇（5000）0.5g、氯化钠5.85g、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g加入到25ml蒸馏水中，室温搅拌待其溶解均匀然后再向拌匀后的混合液中其中加入甘油25ml、Tween-20 10ul,继续搅拌均匀。
对比例1：
一种防止重组蛋白质降解的保护技术，除蒸馏水以外其他原料的重量配比如下：蔗糖5g/50ml、牛血清白蛋白0.5g/50ml、氯化钠5.85g/50ml、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g/50ml、甘油50%（体积分数）；
其制备过程，包括以下步骤：
称取蔗糖5g、牛血清白蛋白0.5g、氯化钠5.85g、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g加入到25ml蒸馏水中，室温搅拌待其溶解均匀然后再向拌匀后的混合液中其中加入甘油25ml继续搅拌均匀。
对比例2：
一种防止重组蛋白质降解的保护技术，除蒸馏水以外其他原料的重量配比如下：蔗糖5g/50ml、牛血清白蛋白0.5g/50ml、氯化钠5.85g/50ml、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g/50ml、甘氨酸0.5g/50ml、聚乙二醇（5000）0.5g/50ml、甘油50%（体积分数）；
其制备过程，包括以下步骤：
称取蔗糖5g、牛血清白蛋白0.5g、氯化钠5.85g、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g、甘氨酸0.5g、聚乙二醇（5000）0.5g加入到25ml蒸馏水中，室温搅拌待其溶解均匀然后再向拌匀后的混合液中其中加入甘油25ml继续搅拌均匀。
实验对象：
选取放置一段时间出现降解的蛋白为实验对象，蛋白个数为10-20个。
实验方法：
1.取刚纯化的蛋白利用ELISA试剂盒测定蛋白的含量，记录其在450nm处的吸光值，取适量的蛋白加入4倍体积的蛋白保护剂，放置在-20度一段时间后利用ELISA试剂盒测定蛋白的含量，比较在450nm处的吸光值；
2.空白对照组：20个蛋白加入等体积的甘油；
3.对比例组：20个蛋白加入对比例的保护剂；
4.实施例组：20个蛋白加入实施例的保护剂；
5.对每组实验对象分别在一个月，三个月，六个月进行结果检测。
实验判定标准：
每一种蛋白利用同等的比例浓度分别在刚纯化时，放置一个月，放置三个月，放置六个月的时间段采用相同的ELISA试剂盒进行蛋白含量的定量检测，记录其在450nm处的吸光值，比较四组数据的吸光值，以最初纯化的蛋白测定的数据为标准值，若后三组数据与其相同，则表示蛋白活性完好，若数据降低，则表示蛋白活性降低；
实验数据统计附图说明，见说明书附图1。
由实验可得，本蛋白保护技术可以有效的防止蛋白降解，维持蛋白的生物学活性。

Claims (3)

1.一种防止重组蛋白质降解的保护技术，其特征在于：包括如下原料：蒸馏水、蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、氯化钠、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、甘油、Tween-20、聚乙二醇。
2.根据权利要求1所述的一种防止重组蛋白质降解的保护技术，其特征在于：除蒸馏水以外其他原料的重量配比如下：蔗糖5－10g/50ml、牛血清白蛋白0.25－0.5g/50ml、甘氨酸0.5g/50ml、聚乙二醇（5000）0.5－7.5g/50ml、氯化钠5.85g/50ml、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g/50ml、甘油50%（体积分数）、Tween-20 0.02%（体积分数）。
3.根据权利2所述的一种防止重组蛋白质降解的保护技术，其特征在于：除蒸馏水以外其他原料的重量配比如下：蔗糖5g/50ml、牛血清白蛋白0.5g/50ml、甘氨酸0.5g/50ml、聚乙二醇（5000）0.5g/50ml、氯化钠5.85g/50ml、三羟甲基氨基甲烷（Tris）0.9g/50ml、甘油50%（体积分数）、Tween-20 0.02%（体积分数）。
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