CN109116022A - 一种用于检测脂蛋白磷脂酶a2的试剂盒 - Google Patents

一种用于检测脂蛋白磷脂酶a2的试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，属于生物检测技术领域，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2，试剂R1包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、无机盐5～50g/L、促聚剂1～20g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R2包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、稳定剂10～160g/L、表面活性剂10～200g/L、封闭剂5～50g/L、包被抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.04～0.20g/L、防腐剂0.05～2g/L；稳定剂至少为甘油、蔗糖、海藻糖、乙二胺四乙酸二钠中的一种。本发明试剂盒具有灵敏度高、精密度高、试剂稳定等优点。

Description

一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒。
背景技术
脂蛋白磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2)又称为血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)，是磷脂酶超家族中独特的一组，具有明显的底物选择性和不需要Ca2+维持其活性的特点，其受生理变异很小，基本不受体位改变和日常活动的影响。Lp-PLA2由血管内膜中的巨噬细胞、T细胞和肥大细胞分泌，并受炎性介质的调节。Lp-PLA2可水解氧化低密度脂蛋白ox-LDL中的氧化磷脂，生成脂类促炎物质(如溶血卵磷脂和氧化游离脂肪酸)，进而产生多种致动脉粥样硬化(如内皮细胞死亡、内皮功能异常，刺激粘附因子和细胞因子的产生)。因此，Lp-PLA2具有很强的促炎症和促动脉粥样化的作用，是一种新的血管炎症高特异性标志物，是冠心病和缺血性卒中的独立危险因素。
目前现有技术中，Lp-PLA2的检测方法包括酶活力测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫分析试纸条检测和胶乳免疫比浊法等。在酶活力测定中，其是根据酶促反应原理，测定血清中Lp-PLA2的活力，该方法易受底物浓度、反应温度、pH、时间等多种因素的干扰；在酶联免疫吸附测定中，其检测灵敏度高但操作过程略显复杂，测定时间较长，影响因素多，且不适合急诊样本的检测；在免疫分析试纸条测定中，其主要采用胶体金免疫层析法或荧光免疫层析法的原理，操作简单、方便快捷，但灵敏度较低，准确性低易出现漏检情况，且自动化程度不高且不利于大批量临床检测。
随着检测技术的快速发展，Lp-PLA2已实现了全自动化检测，Lp-PLA2检测试剂盒被开发并得到广泛的应用。现有以胶乳免疫比浊法制备的试剂盒存在一些不足：稳定性较差、灵敏度差。因此，有必要设计出一种新型的检测试剂盒，该试剂盒检测的稳定性较好、灵敏度高。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，其具有稳定性较好、灵敏度高的优点。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，其包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、无机盐5～50g/L、促聚剂1～20g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；所述试剂R2包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、稳定剂10～160g/L、表面活性剂10～200g/L、封闭剂5～50g/L、包被抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.04～0.20g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度；所述稳定剂至少为甘油、蔗糖、海藻糖、乙二胺四乙酸二钠中的一种。
在本发明的试剂R2中加入稳定剂，当稳定剂为甘油、蔗糖、海藻糖或乙二胺四乙酸二钠时，可以提高样本检测的稳定性和灵敏度；适量的稳定剂可以在取得较好的效果前提下减少稳定剂的用量。试剂R1中添加适量的促聚剂，避免了因聚合物过多造成的非特异性反应和因聚合物太少导致的灵敏度过低，合适的聚合物用量有利于提高灵敏度和特异性。试剂R2中添加适量的表面活性剂，有效提高了检测的精密度。
作为上述技术方案的改进，所述稳定剂为海藻糖和乙二胺四乙酸二钠的混合物。本发明试剂盒以海藻糖和乙二胺四乙酸二钠的混合物作为稳定剂，相对于单一剂型的稳定剂而言，更能增加试剂的稳定性，延长试剂盒的使用时间。
作为上述技术方案的改进，在试剂R1中，所述缓冲液至少为MES-NaOH缓冲液(MES，吗啉乙磺酸)、MOPS-NaOH缓冲液(MOPS，3-(N-吗啉基)、HEPPS-NaOH缓冲液(HEPPS，4-羟乙基哌嗪乙磺酸)、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液中的一种，所述无机盐至少为氯化钠、氯化钾、氯化铵、硫酸钠、硫酸钾、硫酸铵中的一种，所述促聚剂至少为聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇12000中的一种，所述防腐剂至少为叠氮钠、Proclin-300、硫柳汞中的一种；
在试剂R2中，所述缓冲液至少为MES-NaOH缓冲液、MOPS-NaOH缓冲液、HEPPS-NaOH缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液中的一种，所述表面活性剂至少为曲拉通X-100、吐温20、司盘40中的一种，所述封闭剂至少为牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白中的一种，所述防腐剂至少为叠氮钠、Proclin-300、硫柳汞中的一种。
作为上述技术方案的改进，所述包被抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是由聚苯乙烯胶乳微球进行制备，所述聚苯乙烯胶乳微球的粒径是相同的，聚苯乙烯胶乳微球的粒径为80～200nm。
作为上述技术方案的进一步改进，所述包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是通过以下方法进行制备：
S1)取聚苯乙烯胶乳微球溶液，用磷酸盐缓冲液稀释；
S2)加入N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯胶乳微球，搅拌均匀后孵育；
S3)再加入磷酸盐缓冲液，室温下搅拌；
S4)加入抗脂蛋白磷脂酶A2抗体后，进行孵育；抗脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.001～0.2；
S5)加入终止液终止反应，室温下搅拌后保存备用；所述终止液是含有质量体积浓度为20％BSA的磷酸盐缓冲液。
作为上述技术方案的更进一步改进，聚苯乙烯胶乳微球的粒径为120nm，聚苯乙烯胶乳微球溶液中聚苯乙烯胶乳微球的质量百分数为10％，所述抗脂蛋白磷脂酶A2抗体为鼠抗人脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体，抗脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.15。
现有胶乳免疫比浊法，采用化学偶联法将特异性抗体结合于多种粒径组合的复合胶乳上，虽可兼顾检测灵敏度和线性范围，但胶乳试剂制备操作繁琐，易导致复合胶乳重复性差、稳定性差等；且胶乳试剂制备过程中，多采用超声波处理技术及离心与重悬，操作繁琐，制备时间较长，试剂均一性和稳定性较难控制。
鉴于此，本发明采用化学交联法将特异性抗体结合于单一粒径的胶乳颗粒表面，避免了多种粒径组合的复合胶乳的重复性差及操作繁琐，同时兼顾了检测灵敏度和线性范围，通过特定的制备方法以及添加多种表面活性剂、稳定剂、促聚剂等优化反应体系，无需多次超声、离心和重悬即可获得稳定的胶乳试剂。活化后的聚苯乙烯胶乳微球表面的羧基与鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体序列中的氨基进行化学交联，而形成交联有Lp-PLA2抗体的聚苯乙烯胶乳微球颗粒。当样本中的Lp-PLA2与聚苯乙烯胶乳颗粒表面的Lp-PLA2抗体反应时，在促聚剂的作用下，聚苯乙烯胶乳微球颗粒迅速聚集产生一定的浊度，放大了检测信号，显著提高了测定试剂的灵敏度，可适用于各类全自动生化分析仪进行分析。本发明试剂盒在具备稳定性的前提下，还具有以下优点：检测时间短、灵敏度高、特异性强、精密度好、成本较低，可以实现对Lp-PLA2的准确检测。
作为上述技术方案的改进，所述试剂R1由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L；所述试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、海藻糖100g/L、乙二胺四乙酸二钠5g/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-3000.5g/L。
作为上述技术方案的改进，所述试剂R1由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L；所述试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、海藻糖150g/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-300 0.5g/L。
作为上述技术方案的改进，所述试剂R1由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L；所述试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、乙二胺四乙酸二钠10g/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-300 0.5g/L。
本发明试剂盒的检测方法，包括如下步骤：分离血清样品，向血清样品中加入试剂R1，混匀，孵育3～5min；再加入试剂R2，混匀孵育90s后，于540～600nm波长下检测吸光度值A1，3.5min后，于540～600nm波长下检测吸光度值A2，通过血清标准品数据计算脂蛋白磷脂酶A2的含量。
本发明的有益效果在于：本发明提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，本试剂盒采用胶乳免疫比浊法进行脂蛋白磷脂酶A2的测定；在包被抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒的制备过程中，用化学偶联法将特异性抗体结合于单一粒径的胶乳颗粒表面，通过特定的制备方法和优化反应体系，无需多次离心和重悬，无需超声波处理，即可获得稳定的聚苯乙烯胶乳颗粒溶液，同时兼顾了检测灵敏度和线性范围，显著提高了测定试剂的灵敏度和稳定性；在本发明的试剂R2中加入稳定剂，当稳定剂为甘油、蔗糖、海藻糖或乙二胺四乙酸二钠时，可以提高样本检测的稳定性和灵敏度，尤其是稳定剂为海藻糖和乙二胺四乙酸二钠的混合物，相对于单一剂型的稳定剂而言，更能增加试剂的稳定性，延长试剂盒的使用时间；适量的稳定剂可以在取得较好的效果前提下减少稳定剂的用量；在试剂R1中，添加适量的促聚剂，避免了因聚合物过多造成的非特异性反应和因聚合物太少导致的灵敏度过低，合适的聚合物用量有利于提高灵敏度和特异性；在试剂R2中，添加适量的表面活性剂，有效提高了检测的精密度。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2；磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、海藻糖100g/L、乙二胺四乙酸二钠5g/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-300 0.5g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度。
上述包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是通过以下方法进行制备：
S1)取2mL聚苯乙烯胶乳微球溶液，用磷酸盐缓冲液稀释至4mL；聚苯乙烯胶乳微球的粒径为120nm，聚苯乙烯胶乳微球溶液中聚苯乙烯胶乳微球的质量百分数为10％；
S2)加入4mL 2.5g/L N-羟基丁二酰亚胺和4mL 2g/L 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯胶乳微球，搅拌均匀后37℃孵育20min；
S3)再加入4mL磷酸盐缓冲液，室温下搅拌10min；
S4)加入抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体后，37℃孵育4h；抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.15，抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体为鼠抗人脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体；
S5)加入4mL终止液终止反应，室温下搅拌1h即可；终止液是含有质量体积浓度为20％BSA的磷酸盐缓冲液。
实施例2
本实施例提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2；所述试剂R1由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；所述试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、海藻糖150g/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-300 0.5g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度。
上述包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是通过以下方法进行制备：
S1)取2mL聚苯乙烯胶乳微球溶液，用磷酸盐缓冲液稀释至4mL；聚苯乙烯胶乳微球的粒径为120nm，聚苯乙烯胶乳微球溶液中聚苯乙烯胶乳微球的质量百分数为10％；
S2)加入4mL 2.5g/L N-羟基丁二酰亚胺和4mL 2g/L 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯胶乳微球，搅拌均匀后37℃孵育20min；
S3)再加入4mL磷酸盐缓冲液，室温下搅拌10min；
S4)加入抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体后，37℃孵育4h；抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.15，抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体为鼠抗人脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体；
S5)加入4mL终止液终止反应，室温下搅拌1h即可；终止液是含有质量体积浓度为20％BSA的磷酸盐缓冲液。
实施例3
本实施例提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2；所述试剂R1由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；所述试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、乙二胺四乙酸二钠10g/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-3000.5g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度。
上述包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是通过以下方法进行制备：
S1)取2mL聚苯乙烯胶乳微球溶液，用磷酸盐缓冲液稀释至4mL；聚苯乙烯胶乳微球的粒径为120nm，聚苯乙烯胶乳微球溶液中聚苯乙烯胶乳微球的质量百分数为10％；
S2)加入4mL 2.5g/L N-羟基丁二酰亚胺和4mL 2g/L 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯胶乳微球，搅拌均匀后37℃孵育20min；
S3)再加入4mL磷酸盐缓冲液，室温下搅拌10min；
S4)加入抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体后，37℃孵育4h；抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.15，抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体为鼠抗人脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体；
S5)加入4mL终止液终止反应，室温下搅拌1h即可；终止液是含有质量体积浓度为20％BSA的磷酸盐缓冲液。
实施例4
本实施例提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2；所述试剂R1由以下浓度的组分构成：MOPS-NaOH缓冲液50mmoL/L、氯化钾5g/L、聚乙二醇6000 1g/L、Proclin-300 0.05g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；试剂R2由以下浓度的组分构成：MOPS-NaOH缓冲液300mmoL/L、甘油160g/L、司盘40 200g/L、卵清蛋白50g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.20g/L、硫柳汞2g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度。
上述包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是通过以下方法进行制备：
S1)取2mL聚苯乙烯胶乳微球溶液，用磷酸盐缓冲液稀释至4mL；聚苯乙烯胶乳微球的粒径为80nm，聚苯乙烯胶乳微球溶液中聚苯乙烯胶乳微球的质量百分数为10％；
S2)加入4mL 2.5g/L N-羟基丁二酰亚胺和4mL 2g/L 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯胶乳微球，搅拌均匀后37℃孵育20min；
S3)再加入4mL磷酸盐缓冲液，室温下搅拌10min；
S4)加入抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体后，37℃孵育4h；抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.001，抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体为鼠抗人脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体；
S5)加入4mL终止液终止反应，室温下搅拌1h即可；终止液是含有质量体积浓度为20％BSA的磷酸盐缓冲液。
实施例5
本实施例提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2；试剂R1包含以下浓度的组分：缓冲液300mmoL/L、无机盐50g/L、促聚剂20g/L、防腐剂2g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；试剂R2包含以下浓度的组分：缓冲液50mmoL/L、稳定剂30g/L、表面活性剂10g/L、封闭剂5g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.04g/L、防腐剂0.05g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度。
在试剂R1中，缓冲液为Tris-HCl缓冲液和磷酸盐缓冲液的混合液，无机盐为硫酸钠和硫酸钾的混合物，促聚剂为聚乙二醇6000和聚乙二醇8000的混合物，防腐剂为叠氮钠和Proclin-300的混合物；
在试剂R2中，缓冲液为Tris-HCl缓冲液和磷酸盐缓冲液的混合液，稳定剂为蔗糖，表面活性剂为曲拉通X-100和吐温20的混合物，封闭剂为酪蛋白，防腐剂为叠氮钠。
上述包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是通过以下方法进行制备：
S1)取2mL聚苯乙烯胶乳微球溶液，用磷酸盐缓冲液稀释至4mL；聚苯乙烯胶乳微球的粒径为200nm，聚苯乙烯胶乳微球溶液中聚苯乙烯胶乳微球的质量百分数为10％；
S2)加入4mL 2.5g/L N-羟基丁二酰亚胺和4mL 2g/L 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯胶乳微球，搅拌均匀后37℃孵育20min；
S3)再加入4mL磷酸盐缓冲液，室温下搅拌10min；
S4)加入抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体后，37℃孵育4h；抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.2，抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体为鼠抗人脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体；
S5)加入4mL终止液终止反应，室温下搅拌1h即可；终止液是含有质量体积浓度为20％BSA的磷酸盐缓冲液。
实施例6
本实施例提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2；试剂R1包含以下浓度的组分：缓冲液160mmoL/L、无机盐24.5g/L、促聚剂10.1g/L、防腐剂1.2g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；试剂R2包含以下浓度的组分：缓冲液127mmoL/L、稳定剂88.5g/L、表面活性剂120g/L、封闭剂24.5g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.16g/L、防腐剂1.05g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度。
在试剂R1中，缓冲液为MES-NaOH缓冲液和甘氨酸-NaOH缓冲液的混合液，无机盐为氯化铵和硫酸铵的混合物，促聚剂为聚乙二醇6000，防腐剂为硫柳汞；
在试剂R2中，缓冲液为MES-NaOH缓冲液和甘氨酸-NaOH缓冲液的混合液，稳定剂为蔗糖和海藻糖的混合物，表面活性剂为曲拉通X-100和司盘40的混合物，封闭剂为酪蛋白和卵清蛋白的混合物，防腐剂为叠氮钠和硫柳汞的混合物。
上述包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是通过以下方法进行制备：
S1)取2mL聚苯乙烯胶乳微球溶液，用磷酸盐缓冲液稀释至4mL；聚苯乙烯胶乳微球的粒径为200nm，聚苯乙烯胶乳微球溶液中聚苯乙烯胶乳微球的质量百分数为10％；
S2)加入4mL 2.5g/L N-羟基丁二酰亚胺和4mL 2g/L 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯胶乳微球，搅拌均匀后37℃孵育20min；
S3)再加入4mL磷酸盐缓冲液，室温下搅拌10min；
S4)加入抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体后，37℃孵育4h；抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.2，抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体为鼠抗人脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体；
S5)加入4mL终止液终止反应，室温下搅拌1h即可；终止液是含有质量体积浓度为20％BSA的磷酸盐缓冲液。
对比例1
本对比例1提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2；所述试剂R1由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；所述试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-300 0.5g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度。
上述包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是通过以下方法进行制备：
S1)取2mL聚苯乙烯胶乳微球溶液，用磷酸盐缓冲液稀释至4mL；聚苯乙烯胶乳微球的粒径为120nm，聚苯乙烯胶乳微球溶液中聚苯乙烯胶乳微球的质量百分数为10％；
S2)加入4mL 2.5g/L N-羟基丁二酰亚胺和4mL 2g/L 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯胶乳微球，搅拌均匀后37℃孵育20min；
S3)再加入4mL磷酸盐缓冲液，室温下搅拌10min；
S4)加入抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体后，37℃孵育4h；抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.15，抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体为鼠抗人脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体；
S5)加入4mL终止液终止反应，室温下搅拌1h即可；终止液是含有质量体积浓度为20％BSA的磷酸盐缓冲液。
试剂盒的准确度分析
试验仪器：日立7170全自动生化分析仪；
检测样本：40例随机血清样本和一份LP-PLA2血清样本(靶值为415.26ng/mL)；
市场试剂盒：国家食品药品监督管理局已批准上市的某厂家脂蛋白磷脂酶A2(LP-PLA2)检测试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)(包括试剂R1和试剂R2，但成分与本发明不同，以下简称为市场试剂)；
采用实施例1、2、3的试剂盒和市场试剂盒按各自的检测方法分别同时定标后同时测定40例血清样品和1份LP-PLA2血清样本，结果如表1和表2所示。
表1 不同检测试剂测定40例随机血清样品的结果(单位：ng/mL)
表2 LP-PLA2血清样本检测结果(单位：ng/mL)
如表1和表2所示，采用本发明实施例1、2、3试剂盒进行检测，根据检测结果，计算出的R2值分别为0.9992、0.9916、0.9897，计算出的相对偏差分别为0.27％、1.29％、1.22％，这表明本发明检测试剂盒测定时线性关系良好，具有较高准确度(符合度)，相对偏差低于市场试剂盒，且实施例1试剂盒的检测效果更好。
试剂盒的灵敏度分析
试验仪器：日立7170全自动生化分析仪；
检测样本：1份纯化水、1份浓度为30ng/mL的LP-PLA2低值样本；
采用实施例1试剂盒和市场试剂盒同时定标同时对每份待测样本重复检测20次，记录吸光度数值，计算平均值和标准偏差(SD)；水的吸光度平均值加上2SD作为最低检出限对应的吸光度值，由于吸光度与浓度的关系基本为线性关系，可以通过和30ng/mL样本的吸光度平均值比较计算出最低检测限的浓度，即灵敏度；检测结果见表3，其中，灵敏度＝(水吸光度差值平均值+2SD)×样本浓度/样本吸光度差值平均值。
表3 灵敏度分析结果(单位：ng/mL)
如表3所示，本发明实施例试剂盒1的灵敏度为0.50ng/mL，市场试剂盒的灵敏度为1.00ng/mL；这表明本发明试剂盒具有较高的灵敏度。
试剂盒的精密度分析
试验仪器：日立7170全自动生化分析仪；
检测样本：1份临床血清样本(127.21ng/mL，低值样本)、1份Lp-PLA2血清样本(241.57ng/mL，高值样本)；
采用实施例1试剂盒和市场试剂盒对每份待测样本重复检测10次，检测结果见表4。
表4 精密度分析结果(单位：ng/mL)
如表4所示，实施例1试剂盒检测结果的精密度：低值样本时的CV为0.95，高值样本时的CV为0.51，均小于等于10％；另外，与市场试剂盒相比，低值样本的CV相对偏差为-5.0％，高值样本CV的相对偏差为-3.8％，本发明实施例1试剂盒具有较高的精密度。
线性分析
试验仪器：日立7170全自动生化分析仪；
检测样本：高Lp-PLA2血清样本(800ng/mL)；
将高Lp-PLA2血清样本(800ng/mL)用校准品稀释液稀释成6个不同浓度，分别为28ng/mL、182.4ng/mL、336.8ng/mL、491.2ng/mL、645.6ng/mL、800ng/mL，采用实施例1试剂盒对上述样品的每个浓度进行检测，每个浓度检测三次，计算相关系数R2值，结果见表5。
表5 线性分析结果(单位：ng/mL)
如表5所示，根据检测结果得到的回归方程为y＝1.004x+1.863，相关系数R2为0.999，表明实施例1试剂盒在30～800ng/mL范围内具有良好的线性度。
稳定性分析
试验仪器：日立7170全自动生化分析仪；
检测样本：40例随机血清样本；
对本发明实施例1、2、3和对照例1的试剂盒检进行37℃加速破坏性实验，以考察其组分的稳定性，结果如表6所示。
表6 稳定性检测结果(单位：ng/mL)
37℃加速破坏性实验：指把试剂装在瓶子里并密封保存，放在37℃水浴箱里面，进行加速破坏性实验，37℃破坏性实验1周的时间相当于在温度为2～8℃下保存1年；平均下降幅度＝(未加速时的均值－加速1周的均值)/未加速时的均值。
如表6所示，未加速时，实施例1、2、3和对照例1的40例样品检测结果平均值分别为157.18ng/mL、156.02ng/mL、155.98ng/mL、153.37ng/mL，四者检测结果无明显差异；经37℃加速破坏性实验1周后，实施例1、2、3和对照例1的40例样品检测结果平均值分别为153.82ng/mL、135.49ng/mL、127.94ng/mL、77.97ng/mL；由此可得出，1)对比例1试剂盒经破坏性实验1周后，样品检测结果均显著下降，平均下降幅度达到了49.16％；2)由于实施例2试剂盒含有一定量的稳定剂海藻糖，经破坏性实验1周后，样品检测结果平均下降幅度为13.15％；3)实施例3试剂盒由于含量一定量的稳定剂乙二胺四乙酸二钠，经破坏性实验1周后的样品检测结果平均下降幅度为18.00％；4)实施例1试剂盒由于同时含有适量的海藻糖和乙二胺四乙酸二钠作为稳定剂，经破坏性实验1周后的样品检测结果并未发生明显变化，平均下降幅度仅为2.14％，属于合理范围。以上结果表明，本发明实施例1、2和3的试剂盒严格限定各种组分种类和含量，具有较好的稳定性，尤其是实施例1试剂盒中添加适量的海藻糖和乙二胺四乙酸二钠，能更好的增强试剂的稳定性。
以上准确度分析、灵敏度分析、精确度分析、线性分析和稳定分析时，采用本发明实施例1～3中试剂盒进行测定，本发明其他试剂盒也可以取得类似于实施例1～3试剂盒的技术效果：线性关系良好，较高的准确度、灵敏度和精密度，稳定性较好。
综上所述：本发明用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，采用化学偶联法将特异性抗体结合于单一粒径的胶乳颗粒表面，标本与胶乳试剂在缓冲液中混合，标本中的Lp-PLA2与胶乳颗粒表面的抗体结合，与相邻的胶乳颗粒彼此交联，通过特定的制备方法和优化反应体系显著提高了测定试剂的灵敏度和稳定性，具有灵敏度高、精密度高、试剂稳定等特点。
最后所应当说明的是，以上实施例用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者同等替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，其特征在于，包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、无机盐5～50g/L、促聚剂1～20g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；所述试剂R2包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、稳定剂10～160g/L、表面活性剂10～200g/L、封闭剂5～50g/L、包被抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.04～0.20g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度；所述稳定剂至少为甘油、蔗糖、海藻糖、乙二胺四乙酸二钠中的一种。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为海藻糖和乙二胺四乙酸二钠的混合物。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，在试剂R1中，所述缓冲液至少为MES-NaOH缓冲液、MOPS-NaOH缓冲液、HEPPS-NaOH缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液中的一种，所述无机盐至少为氯化钠、氯化钾、氯化铵、硫酸钠、硫酸钾、硫酸铵中的一种，所述促聚剂至少为聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇12000中的一种，所述防腐剂至少为叠氮钠、Proclin-300、硫柳汞中的一种；
在试剂R2中，所述缓冲液至少为MES-NaOH缓冲液、MOPS-NaOH缓冲液、HEPPS-NaOH缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液中的一种，所述表面活性剂至少为曲拉通X-100、吐温20、司盘40中的一种，所述封闭剂至少为牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白中的一种，所述防腐剂至少为叠氮钠、Proclin-300、硫柳汞中的一种。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述包被抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是由聚苯乙烯胶乳微球进行制备，所述聚苯乙烯胶乳微球的粒径是相同的，聚苯乙烯胶乳微球的粒径为80～200nm。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述包被抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒是通过以下方法进行制备：
S1)取聚苯乙烯胶乳微球溶液，用磷酸盐缓冲液稀释；
S2)加入N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯胶乳微球，搅拌均匀后孵育；
S3)再加入磷酸盐缓冲液，室温下搅拌；
S4)加入抗脂蛋白磷脂酶A2抗体后，进行孵育；抗脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.001～0.2；
S5)加入终止液终止反应，室温下搅拌后保存备用；所述终止液是含有质量体积浓度为20％BSA的磷酸盐缓冲液。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，聚苯乙烯胶乳微球的粒径为120nm，聚苯乙烯胶乳微球溶液中聚苯乙烯胶乳微球的质量百分数为10％，所述抗脂蛋白磷脂酶A2抗体为鼠抗人脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体，抗脂蛋白磷脂酶A2抗体与聚苯乙烯胶乳微球的质量比为0.15。
7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L；所述试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、海藻糖100g/L、乙二胺四乙酸二钠5g/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-300 0.5g/L。
8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L；所述试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、海藻糖150g/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-300 0.5g/L。
9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、氯化钠35g/L、聚乙二醇12000 8g/L、叠氮钠0.5g/L；所述试剂R2由以下浓度的组分构成：磷酸盐缓冲液125mmoL/L、乙二胺四乙酸二钠10g/L、吐温20 120g/L、牛血清蛋白20g/L、包被抗人脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.12g/L、Proclin-300 0.5g/L。
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111323583A (zh) * 2020-03-09 2020-06-23 安徽大千生物工程有限公司 一种基于重组单链抗体的lp-pla2胶乳增强比浊法测定试剂盒及其制备使用方法
CN111337692A (zh) * 2020-03-25 2020-06-26 江西乐成生物医疗有限公司 一种脂联素测定试剂及制备方法
CN111398586A (zh) * 2020-03-07 2020-07-10 苏州德沃生物技术有限公司 单试剂Lp-PLA2胶乳增强免疫比浊测定试剂盒
CN111398606A (zh) * 2020-03-31 2020-07-10 深圳市锦瑞生物科技有限公司 一种试剂盒以及检测系统
CN111948383A (zh) * 2019-05-23 2020-11-17 裴广华 一种用于elisa试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂
CN111999501A (zh) * 2020-08-20 2020-11-27 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定人血清脂蛋白磷脂酶a2试剂盒及其制备和使用方法
CN112198319A (zh) * 2020-10-23 2021-01-08 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种稳定性增强的人免疫球蛋白g4试剂盒
CN113740541A (zh) * 2021-09-22 2021-12-03 长春晨裕伽康生物科技有限公司 一种α2巨球蛋白快速检测试剂盒及检测方法
CN114295567A (zh) * 2021-12-30 2022-04-08 青岛汉唐生物科技有限公司 一种磷脂酶a2检测试剂盒及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103033629A (zh) * 2012-12-12 2013-04-10 元升生物科技（上海）有限公司 一种脂蛋白磷脂酶a2的测定试剂及试剂的制备方法
CN105137089A (zh) * 2015-08-28 2015-12-09 宁波瑞源生物科技有限公司 一种血清铁蛋白含量检测试剂盒
CN106124439A (zh) * 2016-08-31 2016-11-16 潍坊市康华生物技术有限公司 一种消除乳糜干扰的甘胆酸的检测试剂盒

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103033629A (zh) * 2012-12-12 2013-04-10 元升生物科技（上海）有限公司 一种脂蛋白磷脂酶a2的测定试剂及试剂的制备方法
CN105137089A (zh) * 2015-08-28 2015-12-09 宁波瑞源生物科技有限公司 一种血清铁蛋白含量检测试剂盒
CN106124439A (zh) * 2016-08-31 2016-11-16 潍坊市康华生物技术有限公司 一种消除乳糜干扰的甘胆酸的检测试剂盒

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111948383A (zh) * 2019-05-23 2020-11-17 裴广华 一种用于elisa试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂
CN111948383B (zh) * 2019-05-23 2023-10-13 合肥善本生物科技有限公司 一种用于elisa试剂盒的含蔗糖的生物制品稳定剂
CN111398586A (zh) * 2020-03-07 2020-07-10 苏州德沃生物技术有限公司 单试剂Lp-PLA2胶乳增强免疫比浊测定试剂盒
CN111323583A (zh) * 2020-03-09 2020-06-23 安徽大千生物工程有限公司 一种基于重组单链抗体的lp-pla2胶乳增强比浊法测定试剂盒及其制备使用方法
CN111337692A (zh) * 2020-03-25 2020-06-26 江西乐成生物医疗有限公司 一种脂联素测定试剂及制备方法
CN111337692B (zh) * 2020-03-25 2023-10-03 江西乐成生物医疗有限公司 一种脂联素测定试剂及制备方法
CN111398606A (zh) * 2020-03-31 2020-07-10 深圳市锦瑞生物科技有限公司 一种试剂盒以及检测系统
CN111999501A (zh) * 2020-08-20 2020-11-27 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定人血清脂蛋白磷脂酶a2试剂盒及其制备和使用方法
CN112198319A (zh) * 2020-10-23 2021-01-08 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种稳定性增强的人免疫球蛋白g4试剂盒
CN113740541A (zh) * 2021-09-22 2021-12-03 长春晨裕伽康生物科技有限公司 一种α2巨球蛋白快速检测试剂盒及检测方法
CN114295567A (zh) * 2021-12-30 2022-04-08 青岛汉唐生物科技有限公司 一种磷脂酶a2检测试剂盒及其制备方法
CN114295567B (zh) * 2021-12-30 2024-01-16 青岛汉唐生物科技有限公司 一种磷脂酶a2检测试剂盒及其制备方法

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